COOH-PEG-NHS（羧基-聚乙二醇-活性酯） 的中文使用说明

COOH-PEG-NHS 使用说明

一、基本信息

• 中文名称：羧基-聚乙二醇-NHS酯

• 英文名称：Carboxyl-PEG-NHS

• 分子结构：HOOC-PEG-NHS（分子一端为羧基，另一端为NHS酯）

• 常见分子量：1kDa、2kDa、3.4kDa、5kDa、10kDa 等

• 外观：白色至浅黄色粉末或蜡状固体

• 溶解性：溶于DMSO、DMF、无水乙醇、氯仿等有机溶剂，也可短暂溶于中性缓冲液

• 储存条件：–20°C 冷藏干燥，密封避光保存，防止水解

二、结构与功能特点

COOH-PEG-NHS 是一种末端异功能聚乙二醇衍生物，具有两个不同的反应位点：

1. NHS酯端（N-Hydroxysuccinimide ester）：

   • 对伯胺（–NH₂）具有良好的选择性和反应活性；

   • 可在温和条件下形成稳定的酰胺键；

   • 易水解，需新鲜现用。

2. 羧基端（–COOH）：

   • 可用于与其他官能团（如胺、羟基、氨基酸等）进一步偶联；

   • 可与氨基或通过EDC/NHS体系再次活化连接到载体、蛋白或表面。

3. PEG主链：

   • 提供良好的亲水性与柔性；

   • 可显著降低蛋白吸附、减少免疫原性；

   • 改善药物或生物分子的溶解性和循环时间。

三、典型用途

1. 生物偶联与修饰

COOH-PEG-NHS广泛应用于将PEG修饰到蛋白质、肽、多肽、抗体、核酸及小分子药物上，以增加其稳定性、生物兼容性和半衰期。

• PEGylation：NHS端与蛋白或多肽链上的伯胺反应，实现PEG化修饰；

• 双端偶联：羧基端可再进行EDC活化，与其他功能分子连接；

• 靶向递药：作为桥梁连接药物载体与识别单元（如抗体或糖类）；

• 纳米材料表面修饰：用于纳米粒子、量子点或磁珠表面的PEG修饰。

2. 水凝胶与组织工程

• NHS-PEG-COOH可作为交联剂，引入至天然或合成高分子中；

• 羧基末端用于后续功能基团连接（如巯基、叠氮、荧光探针等）。

四、使用方法

1. 溶液配置

• 使用前请确保产品干燥密封保存；

• 溶解于无水DMSO、DMF或中性PBS缓冲液中；

• 推荐浓度：1–10 mg/mL，需根据目标物的反应位点数量调整比例；

• 避免长时间暴露于水中或pH<6的酸性环境，NHS酯易水解。

2. 反应条件

• *佳pH值：7.0–8.5（碱性促进酰胺键形成）；

• 反应温度：室温至37°C；

• 反应时间：30分钟至2小时，视反应体系和反应物浓度而定；

• 摩尔比建议：COOH-PEG-NHS:胺类 = 1.2~2:1（过量可提高效率）；

反应过程中，可采用Tris或HEPES等非胺类缓冲体系，避免竞争反应。

3. 终止与纯化

• 反应完成后，可加入醇胺等终止剂封闭未反应的NHS酯；

• 通过透析、离心超滤或色谱（如SEC、HPLC）去除游离PEG或副产物。

五、注意事项

• NHS酯易水解，开封后应尽快使用；反应前现配溶液，避免反复冻融；

• 使用过程中应避光、避热，防止分解；

• 使用前建议进行小规模预实验，以确定合适浓度与反应时间；

• NHS端对所有伯胺（包括缓冲液中）都有反应活性，务必选择合适的无胺缓冲液；

• 反应完成后建议立刻纯化，避免交联或副反应影响产物活性。

六、实例应用举例

示例1：蛋白质PEG化

• 将COOH-PEG-NHS溶于PBS缓冲液；

• 加入目标蛋白溶液（如BSA、IgG等），按摩尔比1.5–3:1加入；

• 室温反应1小时；

• 透析去除游离PEG，即得PEG修饰蛋白。

示例2：制备PEG-交联水凝胶

• 将COOH-PEG-NHS与胺类交联剂（如明胶、Lys-多肽）混合；

• 快速搅拌反应，控制凝胶时间；

• 用于三维细胞培养基质或药物控释系统。

七、保存与稳定性

• 建议分装保存，避免反复开封吸潮；

• –20°C冷藏避光可保存12个月；

• 避免与水或潮湿空气接触，长期放置可能NHS酯水解失活；

• 使用前可检测NHS端是否仍具有活性（如TNBS法检测伯胺反应程度）。

• 以上资料由小编zhn提供，仅用于科研