宽边缘病变：多发性硬化快速进展的新型病理与影像生物标志物-CSDN博客

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宽边缘病变：多发性硬化快速进展的新型病理与影像生物标志物

研究背景与目的

多发性硬化（Multiple Sclerosis, MS）作为中枢神经系统最常见的炎症性脱髓鞘疾病，全球影响约 280 万人。当前 MS 治疗虽能减少复发活动，但对疾病进展的影响有限。临床针对进展型 MS 的试验屡屡失败，核心原因在于对疾病进展背后机制的理解不足。

本研究聚焦 MS 疾病进展的关键机制，通过分析荷兰脑库（Netherlands Brain Bank, NBB）中临床特征明确的 MS 尸检队列，筛选出疾病进展极端不同的患者（快速进展型与缓慢进展型），结合组织病理学、空间转录组学及 18kDa 转位蛋白正电子发射断层扫描（TSPO PET）成像技术，旨在发现与 MS 快速进展相关的新型生物标志物，为疾病进展机制解析及临床治疗提供新方向。

研究方法与技术路线

文章配图

图一研究方法与路线

研究队列构建

尸检队列：从 NBB 选取 186 例 MS 患者，严格筛选出 26 例疾病缓慢进展（MSwSP）和 18 例快速进展（MSwRP）患者。两组患者起病年龄相近，但 MSwRP 组达到残疾里程碑（如 EDSS 8）的时间显著更短，年龄调整的 MS 严重程度评分（ARMSS）更高。
TSPO PET 队列：纳入 114 例 MS 患者，基于 TSPO PET 成像特征识别放射性宽边缘病变（rBRLs），分析其与疾病进展的关联。

组织病理学分析

病变分类与量化：对脑和脊髓组织切片进行免疫组化染色（PLP、HLA-DR 等），根据髓样细胞密度和位置将病变分为活动期、混合期和非活动期。采用半定量评分评估髓鞘再生程度（0-3 分），计算皮质病变率。
宽边缘病变（BRL）定义：病变周围存在至少 1mm 宽的巨噬细胞和小胶质细胞边缘，平均边缘宽度达 1761μm（混合病变边缘为 344μm）。通过 Turnbull 染色检测病变边缘铁沉积，铁 rim 覆盖超过病变周长 50% 定义为铁阳性病变。

空间转录组学分析

样本制备与测序：选取 35 个 MS 病变（13 个 BRL、11 个混合病变、11 个活动病变）及相应正常白质（NAWM），使用 NanoString GeoMx DSP 系统对 CD68 + 髓样细胞进行空间转录组分析。通过 PCA 和差异表达基因（DEG）分析，识别 BRL 特异性转录特征。
生物信息学分析：利用 limma 包进行 DEG 分析，clusterProfiler 进行基因集富集分析（GSEA），重点关注先天免疫激活、炎症细胞因子产生、未折叠蛋白反应（UPR）和凋亡相关通路。

TSPO PET 成像与数据分析

成像参数：使用 [¹¹C] PK11195 作为放射性配体，HRRT 扫描仪采集 60 分钟动态 PET 数据，采用 Logan 方法计算分布体积比（DVR）。MRI 序列包括 FLAIR、T2、3D T1、DTI 和 QSM，用于病变定位和特征描述。
rBRL 识别：将病变周围 2-4mm 区域按 2mm 分段，DVR 高于正常白质均值 + 1SD 定义为高活性（HIGH），HIGH-HIGH 模式病变定义为 rBRL。分析 rBRL 比例与 MRI 病变负荷、扩散张量参数（FA、MD）的相关性。

核心研究结果

组织病理学特征与 BRL 的发现

MSwRP 的病理特征：与 MSwSP 相比，MSwRP 患者脑和脊髓病变数量更多，脑干、颈腰椎脊髓病变负荷更高，活动期和混合期病变比例增加，髓鞘再生能力显著降低（MSwSP 组 2-3 级髓鞘再生比例更高），皮质病变率更高。
BRL 的分布与形态：11/17 例 MSwRP 患者存在 BRL，而 MSwSP 组仅 1/26 例。BRL 占患者总病变的 8-68%（中位 27%）。BRL 边缘 CD68+、HLA-DR+、iNOS + 和 CD163 + 细胞密度显著高于混合病变边缘，TSPO + 细胞丰度相似，但抗炎标记 CD206 + 细胞无差异。
铁沉积与炎症激活：11/17 例 BRL 存在铁 rim，铁阳性 BRL 边缘多种炎症细胞（CD68+、HLA-DR + 等）密度更高，TPPP/p25 + 少突胶质细胞数量增加，提示铁沉积可能标记早期病变阶段。

图二组织病理学特征与 BRL 的发现

转录组学揭示 BRL 的分子特征

髓样细胞转录谱差异：PCA 显示 BRL、混合病变和活动病变的 CD68 + 细胞转录谱显著不同。BRL 特异性 DEGs 包括 iNOS、热休克蛋白家族、UPR 相关基因（STIP1、PDCL3）、坏死性凋亡相关基因（CASP1、PDCD5）和迁移相关基因（CCL24、SLAMF8）。
功能富集分析：BRL 髓样细胞富集先天免疫激活、蛋白质周转、促炎细胞因子产生和凋亡通路，而所有病变类型共享适应性免疫功能（抗原呈递、T/B 细胞激活）。GSEA 显示 BRL 髓样细胞富集巨噬细胞和树突状细胞特征，与外周髓样细胞相似。

文章配图

图三转录组学揭示 BRL 的分子特征

TSPO PET 验证 BRL 与疾病进展的关联

rBRL 的影像学特征：114 例 PET 队列中，39 例（34.2%）存在 rBRL，占总病变的 10.3%。rBRL 比例与 TSPO PET 边缘活动病变比例正相关，与非活动病变比例负相关，且与 MRI T1、T2 病变负荷及 NAWM DVR 显著相关。
临床相关性：rBRL 患者 NAWM 的 FA 值降低、MD 值升高，提示弥漫性白质损伤。未治疗患者中，rBRL 存在与 PET 后疾病进展显著相关，达到 EDSS 里程碑（>4 或 > 6）的比例更高。 natalizumab 治疗 1 年后，rBRL 数量减少，而未治疗组增加。

图四 TSPO PET 验证 BRL 与病灶特征以及疾病进展的关联

技术细节深度解析

免疫组织化学标记与量化方法

抗体组合与染色流程：使用 CD68（巨噬细胞 / 小胶质细胞）、HLA-DR（抗原呈递细胞）、IBA1（泛髓样细胞）、TSPO（炎症细胞 / 星形胶质细胞）、iNOS（促炎表型）、CD163（铁代谢相关）等抗体，采用生物素 - 链霉亲和素法显色，DAB 作为底物。
形态学测量技术：通过 QuPath 软件对 HLA-DR + 边缘进行半自动轮廓绘制，使用 ImageJ 的 Interedge Distance 2.0 宏计算边缘宽度，每个病变至少测量 10 个视野，确保量化准确性。

空间转录组学的关键步骤

ROI 选择与激光捕获：基于 CD68 免疫荧光染色，在 GeoMx DSP 系统中手动圈选 BRL 边缘、混合病变边缘、活动病变中心和 NAWM 区域，每个区域选取 4 个 ROI（660×785μm），确保细胞类型特异性富集。
数据处理与标准化：原始 FASTQ 文件通过 NanoString GeoMx NGS Pipeline 处理，使用 standR 包进行批次效应校正（RUV4 算法，k=5），TMM 方法标准化，limma 包进行 DEG 分析，FDR<0.05 为显著差异。

TSPO PET 的定量分析流程

放射性配体制备：[¹¹C] PK11195 通过亲电取代反应合成，比活度 > 740GBq/μmol，放射化学纯度 > 95%。动态 PET 数据通过 SuperPK 软件处理，采用 Logan 图法计算 DVR，参考区域为小脑皮质。
病变表型分类：将病变分为非活动（核心和边缘活性 voxels<5%）、边缘活动（边缘活性 voxels 比核心高 5% 以上）和整体活动（不符合前两者），结合 T1、T2 MRI 进行病变负荷计算。

讨论与临床意义

BRL 作为疾病进展的病理标志物

本研究首次定义 BRL 为 MS 快速进展的特异性病理特征，其广泛的髓样细胞边缘与先天免疫激活、UPR 和凋亡通路激活密切相关。BRL 中铁沉积与炎症细胞密度的正相关，提示铁介导的氧化应激可能促进病变进展，这与临床观察到的铁 rim 病变与残疾进展的关联一致。

TSPO PET 成像的临床应用价值

rBRL 通过 TSPO PET 实现无创检测，其与 MRI 病变负荷、弥漫性白质损伤及临床进展的相关性，支持其作为 MS 进展的影像生物标志物。 natalizumab 治疗后 rBRL 数量减少，表明 PET 可用于评估靶向髓样细胞治疗的疗效，为临床 trial 患者筛选和疗效监测提供新工具。

对 MS 治疗策略的启示

BRL 的分子特征指向髓样细胞驱动的炎症和 ER 应激通路，为治疗提供新靶点。例如，BTK 抑制剂可调节 UPR 和炎症因子产生，RIPK1 抑制剂可能阻断坏死性凋亡通路，CD40L 阻断剂可抑制髓样细胞 - 淋巴细胞相互作用。这些发现为进展型 MS 的靶向治疗提供了理论基础。

研究局限性与未来方向

尸检队列缺乏纵向数据，无法明确 BRL 的动态演变过程，未来需结合纵向影像学和活检研究。
rBRL 与组织学 BRL 的对应关系仅在单例患者中验证，需更多病例确认影像学与病理的一致性。
遗传分析显示 BRL 患者中 rs10191329 SNP 频率增加，提示遗传易感性与病变形成的关联，需更大样本量验证。

结语

本研究通过多组学整合分析，揭示宽边缘病变（BRL）作为 MS 快速进展的新型病理和影像生物标志物。BRL 的发现不仅深化了我们对 MS 进展机制的理解，也为临床提供了可量化的生物标志物，有望推动进展型 MS 治疗策略的革新。未来结合先进影像技术与分子靶向治疗，有望实现 MS 的精准化管理，为患者带来新的希望。

参考文献

[1] Klotz L, Smolders J, Lehto J, et al. Broad rim lesions are a new pathological and imaging biomarker for rapid disease progression in multiple sclerosis. Nature Medicine, 2025. DOI: 10.1038/s41591-025-03625-7