Instrumentación y laboratorio. Manual de procedimientos básicos

I

MANEJO DE APARATOS E INSTRUMENTAL

1. Microscopio

El microscopio es un instrumento que se utiliza para observar especímenes u objetos que no son visibles a simple vista. Los microscopios pueden ser de luz, electrónicos o de efecto túnel, en caso de requerir fotones, electrones o el efecto cuántico de túnel para formar las imágenes. Actualmente, existe gran variedad de microscopios cuyo uso específico depende del tamaño del objeto a observar, del grado de detalle que se pretende, así como de la naturaleza, estado y preparación del espécimen ( Cuadro 1.1 ).

El microscopio compuesto de campo luminoso o brillante es el más común en los laboratorios de microbiología y está formado básicamente por un soporte mecánico y una parte óptica (Figura 1.1 y Cuadro 1.2).

El poder de resolución o capacidad de distinguir dos objetos cercanos como entidades diferentes depende de la calidad de las lentes. Así, con el mismo aumento total los objetos pueden estar no resueltos (a), parcialmente resueltos (b) o resueltos (c).

Figura 1.1 Poder de resolución de las lentes.

El aumento total (AT) que se puede alcanzar en un microscopio compuesto depende de la combinación del ocular y objetivo que se utilice según la relación: AT = Área del objetivo x Área del ocular. Tanto los aumentos totales como la resolución son muy importantes para el microbiólogo. Una combinación adecuada de ambos permite la mayor calidad de imágenes.

El microscopio compuesto de campo brillante o de luz visible es el que utilizarán los alumnos en este módulo. Como se aprecia en la figura 1.1 y en el cuadro 1.2, consta de tres tipos de lentes: ocular, los objetivos seco débil, seco fuerte e inmersión, y el condensador. Los dos primeros intervienen en la amplificación de la imagen, mientras que el condensador forma parte del sistema de iluminación. Cada objetivo tiene grabada una inscripción. Su significado se explica en el ejemplo siguiente:

40/0.65

160/0.17 +/– 0.01

Donde 40 significa el número de aumentos, la apertura numérica es de 0.65, mientras que 160 mm es la longitud desde el objetivo hasta el ocular y 0.17 +/– 0.01 son los mm de espesor que debe tener el cubreobjetos. En lugar de este último número puede tener la marca / – , que significa que es insensible a fuertes diferencias de espesor del cubreobjetos o la marca / 0 , que indica que no necesita el empleo de cubreobjetos (Figura 1.1). El aumento primario del objeto se produce por el objetivo. Esta imagen se transmite al ocular, donde se lleva a cabo el aumento final. La amplificación total es el producto del aumento de ambas lentes.

Cuadro 1.1 Microscopios útiles en las ciencias biológicas.

Cuadro 1.2 Partes de un microscopio compuesto de campo brillante.

Figura 1.2 Partes del microscopio compuesto de campo brillante.

Cuidados del microscopio

1. Transportar el microscopio en forma vertical, tomándolo del brazo con una mano, y de la base con la otra.

2. Colocar el microscopio cuidadosamente en la mesa. Es conveniente asegurarse de que en dicha mesa no existan aparatos que provoquen vibraciones (vórtex, agitadoras, centrífugas).

3. Limpiar el soporte mecánico del microscopio con una tela que no deje pelusa, y la parte exterior del sistema óptico con papel seda. Si las lentes se encuentran demasiado sucias pueden limpiarse con un hisopo de algodón impregnado con alcohol. JAMÁS LIMPIAR LAS LENTES CON SOLVENTES ORGÁNICOS.

4. Evitar arrastrar, golpear o inclinar el microscopio.

5. NUNCA DEBE LIMPIARSE CON EL DEDO EL ACEITE DEL OBJETIVO DE INMERSIÓN.

Manejo del microscopio

1. Iluminar el campo visual.

a) Conectar y encender la lámpara.

b) Acercar el objetivo a la preparación.

c) Subir el condensador hasta el tope.

d) Abrir o cerrar el diafragma del condensador hasta tener un campo adecuadamente iluminado y con el mayor contraste posible. Recuerde que