BIOQUÍMICA

BIOQUÍMICA

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ÍNDICE
1. Enzimología
-Tema 1: Estructura y función de las enzimas. Catálisis enzimática: pág 4
-Tema 2: Cinética enzimática: pág 24
-Tema 3: Regulación de la actividad enzimática: pág 34
2. Bioenergética y producción de energía en los seres vivos
-Tema 4: Bioenergética y reacciones redox: pág 45
-Tema 5: Cadena de transporte electrónico y fosforilación oxidativa: pág 64
3. Metabolismo celular:
-Tema 6: Introducción al metabolismo: pág 87
- Metabolismo glucídico
-Tema 7: Digestión de glúcidos: pág 93
-Tema 8: Glucólisis: pág 100
-Tema 9: Fermentaciones: pág 114
- Metabolismo lipídico
- Metabolismo nitrogenado
4. Biología Molecular: Replicación, Transcripción y Traducción

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1. ENZIMOLOGÍA

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 Tema 1: Estructura y función de las enzimas. Catálisis enzimática.
BIOQUÍMICA

TEMA 1: ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LAS ENZIMAS.

CATÁLISIS ENZIMÁTICA. ESTRUCTURA
1. INTRODUCCIÓN
La enzimología es la parte de la Bioquímica que estudia la estructura, función y regulación de las
enzimas, con el objetivo de conocer su mecanismo de acción.
-En el siglo XVIII se descubren los catalizadores biológicos: digestión de la carne por secreciones
del estómago
-En 1850 Louis Pasteur manifiesta la fermentación del azúcar a alcohol por la levadura:
“fermentos”
-En 1897 Eduard Buchner aporta que las moléculas que intervenían en la fermentación también
funcionaban separadas de las células vivas
-Kühne dio el nombre de “enzimas” (del griego “enzymos”).
-Haldane: primer tratado sobre enzimas (Enzymes)
-Desde las últimas décadas del siglo XX: miles de enzimas purificadas. Se conoce su estructura
y mecanismo de acción.

1.1. CONCEPTO DE ENZIMA

Una enzima es una biomolécula, proteína o RNA, que cataliza una reacción química específica
de forma muy selectiva y eficiente, aumentando la velocidad de la reacción sin afectar a su
equilibrio, y no se consume durante ella.
• Las enzimas dirigen todos los sucesos metabólicos.
• Las enzimas actúan en condiciones suaves de pH y temperatura.
• APLICACIONES DE LAS ENZIMAS
• IMPLICACIONES EN ENFERMEDADES (Bioquímica Clínica)
Son dianas de un gran número de fármacos.
• APLICACIONES INDUSTRIALES
-Procesado de alimentos
-Elaboración de cervezas y zumos
-Industria láctea y de almidón
-Industria del papel y en la fabricación de detergentes biológicos
• EN ESTUDIOS DE BIOLOGÍA MOLECULAR y EN BIOTECNOLOGÍA

2. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS

• Nombre tradicional:
-Sustrato + -asa Ej: ureasa.
-Tipo de reacción + -asa Ej: lactato deshidrogenasa.
-Sustrato + reacción + -asa Ej: péptido hidrolasa.
• Nombre sistemático: por la EC (Comisión de Enzimas) (IUBMB): ECxxxx (6 tipos de
enzimas)
1ª x: Clase de enzima: oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas, ligasas
2ª x: subclase
3ª x: subsubclase
4ª x: nº de orden
Ej: EC1.1.1.27: lactato deshidrogenasa/L-lactato NAD+ oxidorreductasa

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1. Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxidación-reducción (transferencia de electrones).

Los electrones que son eliminados del compuesto A, que se oxida, son aceptados por el
oxidante, que se va a reducir. Muchas veces el oxidante es el oxígeno (el oxígeno es el aceptor
y se reduce a agua o a peróxido de H).
Ej: lactato deshidrogenasa
2. Transferasas: transferencia de un grupo químico, conteniendo C-, N- o P-, de un sustrato a
otro. Las quinasas son enzimas muy importantes en muchos procesos biológicos, catalizan la
transferencia de un fosfato desde un nucleósido trifostafo (ATP, GTP) a otra molécula. Ej:
hexoquinasa, conversión de la alfa-D-glucosa a alfa-D-glucosa-P (con ATP que pasa a AMP).
3. Hidrolasas: catalizan la ruptura hidrolítica (por adición de agua) de algún enlace del sustrato.
Su reacción es irreversible. Suele ser un enlace éster o un enlace amida (peptídico).

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 Tema 1: Estructura y función de las enzimas. Catálisis enzimática.
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4. Liasas: ruptura reversible no hidrolítica de enlaces C-C (ej: aldolasas). Otras enzimas forman y
rompen enlaces. Otras enzimas forman y rompen enlaces C-5 y ciertos enlaces C-N, o liberan
CO2 (descarboxilación).
5. Isomerasas: reacciones de isomerización (cambios geométricos o estructurales dentro de la
molécula).
6. Ligasas (sintetasas): formación de enlaces covalentes (C-C, C-O, C-S, C-N), entre dos sustratos,
en reacciones acopladas a la hidrólisis de ATP. Requiere energía de la hidrólisis de ATP. Ej:
piruvato carboxilasa.

3. CARACTERÍSTICAS DE LAS ENZIMAS

-La mayor parte son proteínas. Existen algunos RNAs con capacidad catalítica: ribozimas.

-Eficiencia: aceleran las reacciones químicas (factor de 105-1017 ). Número de recambio = Kcat
(número de moléculas de sustrato convertidas en moléculas de producto por segundo).

-Especificidad de enlace, de grupo (reconocen grupos con características estructurales

concretas), de sustrato (reconocen únicamente a un sustrato por una precisa organización
estructural de los grupos funcionales de la enzima que interactúan con el sustrato),
estereoespecificidad (el más alto grado, sólo reconocen a un isómero del sustrato), de acción
(un mismo compuesto puede ser sustrato de varias enzimas, ej: glucosa-6-P, depende del centro
catalítico) o función: afinidad de la enzima por el sustrato, discrimina entre un sustrato y una
molécula competitiva. Proviene de la formación de múltiples interacciones débiles entre la
enzima y el sustrato específico.
-Son susceptibles de regulación, la actividad enzimática puede regularse (aumentarse o
reducirse) de forma que la velocidad de formación del producto responda a las necesidades de
la célula.
-Localización dentro de la célula: pueden estar en orgánulos específicos dentro de la célula, para
aislamiento. Localización intracelular de algunas vías bioquímicas importantes; TCA, ácido
tracarboxílico, HMP, vía de hexosa monofoafato o vía de pentosas fosfato; está en mitocondrias,
citosol, núcleo, lisosomas.
-No alteran el equilibrio químico de la reacción.
-Disminuyen las energías de activación.
-No catalizan reacciones no espontáneas.
-Permanecen químicamente invariables al final de la catálisis.
-Muestran cinéticas de saturación

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4. COFACTORES: IONES METÁLICOS Y COENZIMAS

Algunas enzimas necesitan una porción no proteica para desempeñar su función: si es un catión
metálico se denomina cofactor; y si es una molécula orgánica, coenzima. La porción proteica se
denomina apoenzima, y la enzima completa, holoenzima.

4.1 IONES INORGÁNICOS

Una tercera parte de las enzimas necesitan iones. Elementos inorgánicos que actúan como
cofactores enzimáticos: iones Cu2+, Fe2+ o Fe3+, K+, Mg2+, Mn2+, Mo, Ni2+, Se2+, Zn2+, Ca2+.
Hay iones catalíticos, estructurales, o varían su función entre las dos.

Modos de participación de los iones metálicos en la catálisis enzimática:

-Grupo puente en la unión de sustrato y enzima: formando complejos de coordinación.

-Como centro catalítico primario: actuando como aceptor o donador de electrones (catálisis
ácido-básica) o promoviendo catálisis covalente al actuar como agente electrofílico.
-Como agente estabilizante de la proteína enzimática.

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4.2 COENZIMAS

Es un cofactor orgánico requerido para la acción de ciertas enzimas. Funciona como aceptor o
donador de grupos funcionales pequeños (acetilo, metilo, carboxilo, etc.), protones y/o
electrones desde o hacia sustratos, y no se consume en la reacción.

A) CARACTERÍSTICAS DE LOS COENZIMAS

-Responsables de la catálisis enzimática, no de la especificidad de la enzima.
-Generalmente, termoestables.
-Bajo peso molecular.
-Estructuralmente distintos de los sustratos sobre los que actúan.
-La mayoría son derivados de vitaminas hidrosolubles.
-Su unión a la porción proteica puede ser covalente o no.

B) COENZIMAS QUE INTERVIENEN EN OXIDORREDUCCIONES BIOLÓGICAS

a) Coenzimas procedentes de la niacina (vit. B3): NAD+ y NADP+
NAD+: Nicotinamida adenina dinucleótido
NADP+: Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato

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b) Coenzimas procedentes de la riboflavina (vit. B2): FMN y FAD

FMN: Flavín mononucleótido
FAD: Flavín adenín dinucleótido

C) COENZIMAS QUE INTERVIENEN EN TRANSFERENCIA DE GRUPOS DISTINTOS A RESTOS

MONOCARBONADOS
• Pirofosfato de Tiamina (TPP)
-Forma coenzimática de la vitamina B1 (tiamina).
-Participa en la acción de α-Cetoácido deshidrogenasas y Transcetolasas (Ruta de pentosas
fosfato).
-Forma grupo prostético, a través del pirofosfato de la cadena, uniéndose a la proteína.
-Afecta a la síntesis de ATP.
-Se encuentra en el cerebro y los músculos.
-Su deficiencia provoca la enfermedad del Beri-Beri.

• ÁCIDO LIPÓLICO
-Es liposoluble
-Está unido por un enlace amida a un residuo de Lys, de E2
-Interviene en reacciones de descarboxilación oxidativa,
transportando hidrógeno y un grupo acetilo.

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• Coenzima A
-Procede de la vitamina B5 (ácido pantoténico).
-Participa en la biosíntesis de ácidos grasos y transferencia de grupos acilo.

D) COENZIMA FUNDAMENTAL EN EL METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS: PIRIDOXAL FOSFATO

(PLP)
El PLP y la piridoxamina fosfato son las formas activas de la vitamina B6.
El piridoxal fosfato (PLP) se une al enzima por medio de una base de Schiff (aldimina interna)
con un residuo Lys del sitio activo. La especificidad de la reacción la aporta el entorno
proteico (tipo de apoenzima).
• Interviene en el metabolismo de aminoácidos:

• Participa también:
-En el metabolismo energético: en glucogenolisis y gluconeogénesis
-En la formación de hemoglobina y de glóbulos rojos.
-Transaminación: transformación en el carbono α de los aminoácidos facilitada por el
piridoxal fosfato.

E) COENZIMAS QUE PARTICIPAN EN EL METABOLISMO DE RADICALES MONOCARBONADOS

• BIOTINA (Vit H, Vit B8)
La bioticina (biocitina) es la forma coenzimática de la biotina. Se forma por la unión covalente
de la biotina a un residuo de Lys de la proteína enzimática. Es una coenzima de transferencia
de CO2. Su grupo prostético es de carboxilasas:

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• TETRAHIDROFOLATO (TFH, FH4)

Es una coenzima del ácido fólico. Se destruye fácilmente por calor y su deficiencia puede ser
importante en el embarazo. Se encuentra:
-Abundante en hojas verdes de vegetales (espinacas) y en granos de cereales.
-En animales: en el hígado.
Se forma a partir del ac.fólico por reducción del núcleo pteridínico (en posiciones 5,6,7 y 8).
Transporta restos monocarbonados (metilo CH3, formilo CHO, forminino -CH=CH,
hidroximetilo CH2OH, …).
Participa en la síntesis de purinas y timina, necesarias para la síntesis de ácidos nucleicos
(RNA y DNA) y está implicada, junto con la Vit. B12, en la división celular.

• Coenzima B12
Las formas coenzimáticas de la vitamina B12 (cobalamina) son:
-Metilcobalamina
-Desoxiadenosil-cobalamina
La cobalamina se sintetiza únicamente por microorganismos, no se
encuentra en vegetales, pero sí está presente en tejidos animales
(hígado); obtenida de forma exógena. EL déficit de cobalamina provoca
anemia perniciosa, por pérdida del factor intrínseco.

Funciones del Coenzima B12:

-Transferencia de grupos metilo: en metabolismo de aminoácidos.

-Redistribución de átomos de carbono, en:

-Metabolismo de aminoácidos ramificados.
-Metabolismo de ácidos grasos de número impar.

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5. MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS. SITIO ACTIVO Y CATÁLISIS ENZIMÁTICA

La catálisis enzimática de las reacciones es esencial para los sistemas vivos. En condiciones
biológicas, las reacciones no catalizadas tienden a ser lentas. La mayoría de las moléculas
biológicas son muy estables en las condiciones de pH neutro, temperatura suave y ambiente
acuoso presentes en el interior de las células.

Además, muchos procesos químicos comunes son desfavorables o poco probables en el

ambiente celular, tales como la formación transitoria de intermediarios cargados inestables o la
colisión de dos o más moléculas con la orientación precisa requerida para la reacción. En pocas
palabras, las reacciones necesarias para digerir los alimentos, enviar señales nerviosas o
contraer el músculo no se dan a una velocidad útil sin catálisis.

Un enzima soluciona estos problemas al proporcionar un ambiente específico dentro del cual
una reacción determinada puede transcurrir a mayor velocidad.

Las enzimas tienen una estructura tridimensional característica llamada centro activo, que les
sirve para realizar su función, con un entorno químico adecuado que permite la interacción entre
la enzima y el sustrato mediante la formación de un complejo binario denominado complejo
enzima-sustrato. Se forma por el plegamiento de la proteína. Dentro del centro activo hay
residuos de unión (unión sustrato-enzima) y residuos catalíticos (transformación química del
sustrato). Una vez que el sustrato adecuado interacciona con el centro activo, se van a producir
modificaciones que lo convierten en un estado de transición, que se transformará en el producto
final de la reacción.

Los enzimas alteran las velocidades de reacción, pero no los equilibrios. Se puede escribir una
reacción enzimática sencilla como:

donde E, S y P representan el enzima, el sustrato y el producto, respectivamente. ES y EP son

complejos transitorios del enzima con el sustrato y con el producto, respectivamente.

5.1 ENERGÍA LIBRE DE GIBBS

Diagrama del curso de una reacción exergónica.

Aunque la reacción es favorable (el sustrato
tiene mayor energía libre de Gibbs que el
producto), para que se inicie debe formarse un
estado transitorio inestable de mayor energía
libre de Gibbs que el estado basal en el que se
encuentra el sustrato. Esa barrera energética se
denomina energía de activación.

ΔG0: Variación de energía libre estándar

ΔG´0: Variación de energía libre estándar bioquímica (a pH 7,0)

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En una reacción química espontánea (exergónica), la energía basal del sustrato es mayor que la
del producto, por lo que el ΔG tiene un valor negativo. La presencia de una enzima no va a variar
esta situación energética, que seguirá definida por sus parámetros termodinámicos. Si se
observa la siguiente reacción;

la enzima aparece en ambos lados de la reacción por lo que no se modifica el valor de la energía
libre de Gibbs del sistema, que continúa siendo:

y en el equilibrio, la [P]/[S], será constante y vendrá definida por la Keq.

Por tanto, se puede concluir que las enzimas no alteran el equilibrio entre productos y sustratos,
pero, al acelerar la velocidad de reacción, consiguen que se alcance de forma más rápida este
equilibrio.

De esta forma, si existe suficiente cantidad de

sustrato [S], se podrán conseguir mayores
concentraciones de producto [P] por unidad de
tiempo en presencia de una enzima que en su
ausencia.

5.2 ENERGÍA DE ACTIVACIÓN Y EL ESTADO DE TRANSICIÓN

Como ya se ha indicado, para que se produzca la transformación del sustrato en producto hay
que pasar por una situación intermedia que supone la distorsión de enlaces y la orientación de
grupos funcionales que lleva a la formación de un estado molecular transitorio: el estado de
transición, que se encuentra en un nivel energético superior al estado del que parte, el sustrato
o estado basal.

Esto implica que, aunque la reacción sea espontánea, se tiene que superar esta barrera
energética (∆G++), que se conoce como energía de activación. La catálisis enzimática se consigue
rebajando esta barrera mediante la ventaja energética que supone la creación del complejo
enzima-sustrato.

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5.3 LA VELOCIDAD ESTÁ RELACIONADA CON EL ESTADO DE TRANSICIÓN

En el gráfico de coordenada (o curso de la reacción) se

representan las variaciones energéticas de la misma
reacción en presencia y ausencia de enzima. Se observa que
el catalizador disminuye la energía de activación. La vía por
la que un sistema pasa de un estado inicial a uno final no
altera la espontaneidad de la reacción (ΔG es una función de
estado) pero, como veremos a continuación, sí tiene una
gran influencia sobre la velocidad a la que se desarrolla.

Las enzimas aceleran las reacciones químicas creando vías

alternativas de menor energía de activación y lo hacen
fundamentalmente por dos mecanismos:

1. La formación de enlaces covalentes o la transferencia de grupos funcionales entre

determinados grupos funcionales de la enzima y del sustrato.

2. La creación de interacciones no covalentes entre la enzima y el sustrato que van

acompañadas de una liberación de energía libre (ΔG-), llamada energía de unión o fijación, que
rebaja la energía de activación.

Ambas situaciones se dan gracias a la formación del complejo binario enzima-sustrato, que,
además, confiere a las enzimas una gran especificidad.

En primer lugar, hay que tener en cuenta que la velocidad de cualquier reacción (S→ P) está
determinada por la concentración de sustrato y una constante, la constante de velocidad (k),
con la que se relacionan mediante la expresión matemática:

V= k [S]

5.4 EQUILIBRIOS Y VELOCIDADES DE REACCIÓN

Los equilibrios de reacción están relacionados con la variación de energía libre estándar de la
reacción (∆G´0).

Las velocidades de reacción están relacionadas con la Energía de activación (∆G±)

-Las enzimas aumentan la velocidad de la reacción disminuyendo la energía de activación.

-La energía de fijación (o de unión) es la principal fuente de energía libre utilizada por los
enzimas para disminuir la energía de activación de las reacciones.

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• Principios fundamentales:

1. La mayor parte del poder catalítico de los enzimas proceden último término de la energía libre
liberada al formarse los múltiples enlaces débiles e interacciones entre una enzima y su sustrato.
Esta energía de fijación contribuye tanto a la especificidad como a la catálisis.

2. Las interacciones débiles son óptimas en el estado de transición de la reacción.

Las interacciones débiles están optimizadas en el estado de transición de la reacción; los sitios
activos de los enzimas no son complementarios3 a los sustratos, sino a los estados de transición
a través de los que pasan los sustratos ser convertidos en productos durante una reacción.

5.5 INTERACCIÓN ENZIMA-SUSTRATO

Para entender cómo se realizan las interacciones en el complejo ES se han postulado varios
modelos.

El primero fue el modelo “llave y cerradura”, propuesto

por Fischer en 1894. Las enzimas son estructuras rígidas y
se acoplan al sustrato de manera complementaria, como
una llave a una cerradura. Este modelo explica muy bien
la especificidad, pero no explica bien cómo se produce la
transformación del sustrato en producto.

El segundo modelo es la enzima complementaria al

estado de transición, por Haldane 1930, Pauling 1946, Jenks 1970.

El verdadero encaje llave-cerradura es entre el estado de transición y la enzima. Para catalizar

una reacción una enzima ha de ser complementaria al estado de transición, no al sustrato, que
es cuando van a tener lugar todas las reacciones posibles entre enzima y sustrato. Las
interacciones entre la enzima y partes no reactivas del sustrato proporcionan buena parte de la
energía necesaria para la catálisis. Las enzimas son mucho más grandes que los sustratos porque
hacen falta muchos grupos funcionales de la enzima para establecer muchos grupos covalentes.
También llamado modelo del encaje inducido.

El primer paso de toda reacción de catálisis enzimática es la formación del complejo de ES. En
este complejo no se forman enlaces covalentes entre los grupos enzimáticos y el sustrato, sino
que las interacciones entre ellos son de tipo físico (electrostáticas, Vander Waals, enlaces de
hidrógeno, hidrófobas). El complejo molecular ES sufre una o varias transformaciones
posteriores, de forma que la reacción pasa por uno o por varios estados de transición, ES‡.

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A) REACCIÓN SIN ENZIMA

Reacción sin catalizar en la que el sustrato pasa por la formación de

un estado de transición inestable. La conversión del sustrato en el
producto sucede a través de un camino de reacción que requiere
una energía de activación muchísimo más alta.

B) ENZIMA COMPLEMENTARIA AL SUSTRATO

En la reacción en la que el centro activo de la

enzima es complementario al sustrato se forma
un complejo ES muy estable que no favorece que
el sustrato se transforme en el estado de
transición, porque se perderían interacciones y
sería energéticamente desfavorable. La
consecuencia es una disminución notable de la
energía de activación.

C) ENZIMA COMPLEMENTARIA AL ESTADO DE TRANSICIÓN

Si la enzima es complementaria al estado de transición, se

forma un primer complejo ES con unas interacciones leves
que se verían mejoradas cuando el sustrato se transforma
al estado de transición. La reacción se ve favorecida y el
estado de transición se convierte en producto; y, al perder
las cargas negativas, pierde afinidad por la enzima, de la
que se disocia. En esta situación, el catalizador une de
manera eficaz al estado de transición, la consecuencia es la
disminución de la energía de activación y la reacción está
optimizada al máximo.

5.6 IMPORTANCIA DE LA ENERGÍA DE FIJACIÓN (O DE UNIÓN) PARA LA CATÁLISIS

ENZIMÁTICA

La energía de fijación contribuye a la especificidad, y es muy importante para la catálisis:

• Por reducción de la entropía (disminuye la libertad de movimiento de las moléculas), pues al

formarse el complejo ES y se mantiene al S en la orientación correcta para reaccionar.

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BIOQUÍMICA Tema 1: Estructura y función de las enzimas. Catálisis enzimática.

• Por desolvatación del sustrato.

•Ayuda a compensar termodinámicamente la distorsión
de enlaces que debe experimentar el sustrato para
reaccionar.
• Se consigue un alineamiento adecuado de los grupos
funcionales de la enzima con el sustrato, inducido por las
múltiples interacciones débiles con el S: Encaje inducido.

5.7 MECANISMOS CATALÍTICOS ADICIONALES

-Catálisis ácido-base general: transferencias de protones facilitadas por moléculas distintas al

agua. La especifidad sería solo con protones del agua y el sustrato. Muy frecuente.

-Catálisis covalente: se crea un enlace covalente transitorio entre la enzima y el sustrato.

-Catálisis por iones metálicos: los iones metálicos pueden orientar el sustrato de la forma adecuada para
que reaccione, estabilizar cargas en un estado de transición inestable, facilitar reacciones de óxido-
reducción gracias al paso reversible de su estado de oxidación, o cambiar la polaridad de ciertos enlaces
para hacerlos más susceptibles a ciertos reactivos. Ej: los cationes metálicos como cofactores en las
quinasas.

En algunas proteasas la ruptura del enlace peptídico combina dos mecanismos de estabilización
del estado de transición. Se muestran, de forma simplificada, algunas etapas.
(a) El grupo nucleófilo de la Ser pierde un protón, que es aceptado por el grupo imidazol de una
His (catálisis ácido-base general).
(b) Como consecuencia, aumenta la reactividad del nucleófilo de la serina (―O-), que ataca al
grupo carbonilo del enlace peptídico.
(c) Se forma un intermediario inestable con una carga negativa que resulta estabilizada por dos
hidrógenos con carga parcial positiva del enlace peptídico de dos residuos del centro activo. El
péptido queda unido de forma transitoria mediante un enlace covalente al residuo de Ser
(catálisis covalente).
(d) El enlace peptídico se rompe mediante la adición de una molécula de agua, quedando la
enzima en su situación inicial.

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BIOQUÍMICA Tema 1: Estructura y función de las enzimas. Catálisis enzimática.

Los cationes metálicos como cofactores en las quinasas.

La fosforilación de las cadenas laterales de Ser, Thr y Tyr

catalizadas por las quinasas comienza por el ataque del
grupo nucleófilo -OH a un grupo fosfato de un nucleótido
trifosfato. El Mg2+ atrae a los electrones del enlace P =
O haciendo que el P tenga una deficiencia de electrones
y sea más susceptible al ataque por el nucleófilo.

6. ORGANIZACIÓN ESTRUCTURAL DE LAS ENZIMAS

• Enzimas monoméricas: constituidas por una sola cadena peptídica, en la cual se halla el
centro activo. Ej: lisozima, ribonucleasa, papaína, tripsina, carboxipeptidasa A. Pm: 13.000-
35.000 Da
• Enzimas oligoméricas: contienen de 2-60 subunidades asociadas. Ej: fosforilasa quinasa. Pm:
35.000-varios millones de Da
• Protómero: unidad estructural repetitiva, igual o diferente, que integra la proteína
enzimática total (oligómero).
• Oligómero: Conjunto de protómeros, iguales o diferentes, que conforman la proteína
enzimática, de plena actividad.

6.1 PROENZIMAS O ZIMÓGENOS

Algunas enzimas digestivas, sobre todo las de tipo proteolítico, se sintetizan de forma inactiva
en su lugar de síntesis y se van a activar después por un proceso de proteólisis en el sitio de
actuación. Ej: en el páncreas, para no destruirlo estas enzimas se activan en la luz intestinal,
donde van a actuar.

-Activación de zimógenos mediante rotura proteolítica. La enteropeptidasa inicia la activación

de los zimógenos pancreáticos activando la tripsina, la cual activa después los demás zimógenos.
La tripsina convierte los zimógenos (naranja) en enzimas activas (amarillo).

Hay zimógenos como enzimas digestivas, enzimas

que van a participar en la coagulación, hormonas
peptídicas (insulina como proinsulina), algunas
proteínas fibrosas (procolágeno→colágeno).

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6.2 COMPLEJOS MULTIENZIMATICOS Y ENZIMAS MULTIFUNCIONALES

• Complejo multienzimático: asociación física de diferentes enzimas para llevar a cabo

reacciones secuenciales. Si las actividades enzimáticas residen en una única cadena
polipeptídica: enzima multifuncional. El producto de una reacción es sustrato de la siguiente.
Siempre va a haber una enzima que es el factor limitante, y depende de las necesidades de la
célula puede aumentar o disminuir
Ventajas:
-Acelera la transformación del sustrato inicial en producto final: un complejo de 3 enzimas
trabaja más rápido que 3 enzimas por separado.
-Protegen los sustratos de carácter inestable que se forman en las etapas intermedias de la
ruta secuencial.
-Eliminan fenómenos de competencia por el centro activo de la enzima.

Dominio: zonas plegadas de forma independiente con actividad estructural o funcional propias,
todo dentro de la misma cadena.

-Funcionales: poseen una o varias actividades enzimáticas o capacidad funcional de otro tipo
-Estructural: sin tener una actividad enzimática, cooperan en el mantenimiento de la estructura
de la proteína
Las proteínas que tienen más de un dominio funcional se denominan multifuncionales, y a las
enzimas, enzimas multifuncionales. Su origen parece estar en la fusión de los genes.

-Complejo de la ácido graso sintasa. Complejo multienzimático (bacterias) y enzima

multifuncional (vertebrados).

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BIOQUÍMICA

6.3 ISOENZIMAS

Son formas moleculares diferentes de una misma enzima, procedentes de la misma especie, que
catalizan la misma reacción química, pero con características físicas, bioquímicas o
inmunológicas diferentes. Son codificadas por genes diferentes. Se expresan diferencialmente a
lo largo del desarrollo y son específicas de tejido. Difieren unas de otras en: sus características
cinéticas y su modo de regulación, su secuencia de aminoácidos o la distribución subcelular.

La lactato deshidrogenasa:
Piruvato→Lactato, se obtiene
NAD+ por LDH5 (M4).

Lactato→piruvato por la LDH1

(H4), se obtiene NADH+H+.

La cadena H se representa por cuadros y la M por círculos.

Las isoenzimas son importantes en el diagnóstico clínico diferencial.

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7. MEDIDAS DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Se mezcla una concentración conocida de enzima con una concentración de sustrato a
saturación y se observa la transformación, medimos la desaparición de sustrato o la aparición
de producto. El método analítico para medirlo depende de sus características químicas.

En los primeros instantes hay una relación lineal. La recta se va curvando hasta el equilibrio. La
velocidad medida en los primeros instantes se llama velocidad inicial (V0); que es la pendiente.
La velocidad inicial (V0) para cada sustrato se determina a partir de la pendiente de la curva al
comienzo de la reacción (consumo <10% del sustrato), cuando la reacción de formación de ES a
partir de E y P es insignificante.

La concentración de enzima suele ser 10-12-10-8.

Es mejor trabajar en los primeros momentos de la reacción porque esta es lineal. Valorando
velocidad inicial se minimizan factores que pueden complicar los resultados, como:

-Reversibilidad de la reacción
-Inhibición de la enzima por el sustrato
-Inhibición progresiva de la enzima.

Gráficas de progreso para una

Diagrama de desaparición de Curso de una reacción catalizada
serie de reacciones iniciales con
sustrato y aparición de producto con una concentración de enzima
diferentes concentraciones de
en una reacción catalizada. constante.
sustrato.

6.3 UNIDADES PARA EXPRESAR LA ACTIVIDAD CATALÍTICA DE UNA PREPARACIÓN ENZIMÁTICA

22
BIOQUÍMICA

23
BIOQUÍMICA
Tema 2: Cinética enzimática.

TEMA 2: CINÉTICA ENZIMÁTICA

1. CINÉTICA DE REACCIONES CON UN SOLO SUSTRATO. ECUACIÓN DE MICHAELIS-

MENTEN
Uno de los factores clave que afectan la velocidad de una reacción catalizada por un enzima es
la concentración de sustrato presente, [S]. En una reacción típica, el enzima puede estar
presente en concentraciones del orden nanomolar, mientras que [S] puede ser cinco o seis
órdenes de magnitud mayor.

Si sólo se toman datos del inicio de la reacción (a menudo los primeros 60 segundos o menos),
los cambios en [S] se limitan a un pequeño porcentaje y puede considerarse que la
concentración permanece constante. A continuación, puede explorarse el valor de V0 en función
de [S].

El efecto de la variación de [S] sobre V0:

-A concentraciones de sustrato relativamente bajas, V0 aumenta casi linealmente con el

incremento de [S].
-A mayores concentraciones de sustrato, V0 aumenta a incrementos cada vez menores en
respuesta a incrementos de [S].
Finalmente, se alcanza un punto más allá del cual se dan incrementos muy pequeños de V0 a
medida que aumenta [S]. Este punto es la velocidad máxima (Vmax).

Determinación de la velocidad inicial.

La velocidad inicial (V0) para cada sustrato se determina

a partir a partir de la pendiente de la curva al comienzo
de la reacción.

Para cada sustrato hacemos la tangente a cada gráfico y

esta sería el valor de la velocidad inicial.

Se llego a esta ecuación matemática asumiendo una serie de supuesto:

-La concentración de sustrato es mucho mayor que la concentración de enzima.
-La concentración de enzima sustrato no cambia con el tiempo.
-Solamente se miden velocidades iniciales.
-Reacción de 1 solo sustrato. Curso de una reacción catalizada por una
concentración de enzima constante.

La concentración de producto va aumentando de

forma lineal hasta que el sustrato va desapareciendo
en el transcurso del tiempo y la reacción alcanza el
equilibrio. La velocidad inicial (V0) se determina como
la pendiente de la recta en el inicio de la reacción. La
velocidad a cualquier tiempo t se representa como Vt.

24
 BIOQUÍMICA Tema 2: Cinética enzimática.

Diagrama de velocidades iniciales de reacción frente a concentración de sustrato.

En este tipo de gráficas cada velocidad inicial se

representa frente a la [S]. La Vmax sólo se
obtiene como un valor aproximado. La
Km representa la [S] que coincide con la mitad de
la Vmax. Cada punto representado en la gráfica
corresponde a un valor de V0 de la enzima
obtenido en un tubo de ensayo, con una
concentración de enzima constante, y
concentraciones de sustrato crecientes.

1.1 ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN

Cinética Michaelis-Menten: Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad inicial
de una reacción catalizada por una enzima a concentración muy baja y constante.

En un experimento de este tipo [S] >> [E]. La

velocidad máxima (Vmax) se alcanza de forma
asintótica en las enzimas de carácter michaeliano.
La constante de Michaelis (Km) es la
concentración de sustrato que produce la mitad
de la Vmax.

2. CONSTANTES CINÉTICAS: Km, Kcat y Kcat/Km

2.1 Km

La Km equivale a la concentración de sustrato que se requiere para alcanzar la mitad de la

velocidad máxima. También se puede expresar esta equivalencia afirmando que el valor de Km
representa la concentración de sustrato a la cual la mitad de los centros activos de las moléculas
de enzima del ensayo están ocupados por moléculas de sustrato (en el estado estacionario).

• CARACTERÍSTICAS DE LA KM
-Tiene dimensiones de concentración ([S]: M, mM, µM).
-La magnitud de la Km varía considerablemente de una enzima a otra y, para una misma
enzima, difiere según los sustratos.
-Numéricamente expresa la concentración de sustrato a la que la enzima alcanza la mitad de
su velocidad máxima (Vmax).
-No varía con la concentración de enzima.
-La Km puede determinarse en preparados enzimáticos no puros, y desconociendo la cantidad
exacta de enzima.
-La Km de una enzima tiende a ser similar a la concentración del sustrato que es habitual en el
ambiente celular.

25
BIOQUÍMICA
Tema 2: Cinética enzimática.

Dependencia de la velocidad inicial con respecto a la concentración de sustrato.

-Si [S]=Km→

-Si [S]<<Km→

-Si [S]>>Km→

• UTILIDAD DE LA KM
-Permite conocer la afinidad de la enzima por el sustrato (cuando k2<< K-1) o, en todo
caso, averiguar la cantidad necesaria de sustrato que requiere la enzima para alcanzar
su saturación.
-Permite conocer los diferentes comportamientos de las isoenzimas ante un mismo
sustrato.
-Permite conocer el papel regulador del sustrato en la actividad biológica de la enzima.
-Permite averiguar el efecto de diversos moduladores sobre la actividad de la enzima.
-Variaciones de Km pueden ayudar a conocer las interacciones en la formación de ES:
• A menor valor de Km→ mayor afinidad por el sustrato (la formación de ES es mayor
que su descomposición).
• A mayor valor de Km→ menor afinidad por el sustrato.
2.2 Kcat
Kcat es la constante de velocidad de la etapa limitante (la que ocurre más lenta) de la
transformación del sustrato en producto y liberación de enzima libre y producto, en el caso de
que ésta transcurra en más de una etapa.

Al tratarse de una constante de velocidad de primer orden se expresa en unidades recíprocas

de tiempo (min-1, s-1).

26
 Tema 2: Cinética enzimática.
BIOQUÍMICA

2.3 Kcat/Km
Es la constante de especificidad, una medida de la eficiencia catalítica de una enzima.
La proporción entre las constantes cinéticas Kcat y Km se suele utilizar para comparar la
eficiencia catalítica de diferentes enzimas o de una misma enzima sobre distintos sustratos.

Un valor elevado de esta proporción supone una elevada capacidad de transformación de

sustrato en producto (elevado valor de Kcat) y una elevada afinidad aparente de la enzima por
el sustrato (valor bajo de Km). Cuando se cumplen estas dos condiciones se obtendrá la mayor
eficacia ya que no sólo hay una gran afinidad de la enzima por el sustrato, sino que, además, la
enzima muestra un gran poder de transformación del sustrato en producto.

3. CÁLCULO DE LAS CONSTANTES CINÉTICAS. REPRESENTACIÓN DE LINEWEAVER- BURK.

Aunque actualmente existen programas informáticos que permiten obtener datos cinéticos muy
precisos a partir de los datos experimentales representados en curvas hiperbólicas, en algunas
ocasiones resulta útil transformar la ecuación de Michaelis-Menten en una expresión algebraica
que aporte datos numéricos concretos para los parámetros cinéticos (Vmax y Km). Una
transformación habitual consiste en representar los inversos de V0 frente a los inversos de la
concentración del sustrato. Haciendo los inversos en ambos miembros de la ecuación, y
reagrupando, se obtiene:

Esta ecuación, conocida como la ecuación de Lineweaver-Burk, se representa mediante una

recta de pendiente Km/Vmax. El punto de corte de esta recta con el eje X se corresponde con el
valor de - 1/Km y el punto de corte con el eje Y con el valor de 1/Vmax.

Una vez representados los valores obtenidos

experimentalmente, se puede calcular el valor de Vmax que
sólo se podía obtener de forma aproximada en la
representación hiperbólica tradicional. Este tipo de
representación sigue siendo muy útil para representar el
efecto producido por los inhibidores reversibles.

Gráfica de dobles recíprocos o de Lineweaver-Burk.

27
BIOQUÍMICA Tema 2: Cinética enzimática.

4. REACCIONES BISUSTRATO: ORDENADAS, AL AZAR Y PING-PONG

Hasta ahora se han descrito reacciones en las que se transforma un solo sustrato. Pero existen
numerosas reacciones catalizadas por enzimas en las que intervienen dos o más sustratos. En
este tipo de reacciones los sustratos pueden unirse a la enzima de forma simultánea o sucesiva.
Existen dos mecanismos que explican que este comportamiento y que a continuación se
describen:

a) MECANISMO SECUENCIAL

En algunas reacciones en las que intervienen dos sustratos se forma en algún momento un
complejo ternario no covalente ES1S2. Los sustratos pueden fijarse al azar o hacerlo en un orden
específico.

b) MECANISMO DE DOBLE DESPLAZAMIENTO O «PING-PONG»

En estas reacciones no se forma un complejo ternario, sino que el primer sustrato se libera como
producto antes de la unión del segundo sustrato a la enzima que ya ha sido modificada en la
reacción anterior. Las quinasas siguen este tipo de mecanismo. El primer sustrato es el ATP que
se une a la enzima que libera ADP como producto y se queda fosforilada. El segundo sustrato se
une a la proteína fosforilada que le transfiere el grupo fosfato.

• REPRESENTACIÓN DE CLELAND

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BIOQUÍMICA Tema 2: Cinética enzimática.

-Ejemplo de desplazamiento secuencial al azar (según notación de Cleland)

-Ejemplo de desplazamiento secuencial ordenado (según notación de Cleland)

-Ejemplo de doble desplazamiento (ping-pong) sin formación de complejo ternario, (según

notación de Cleland)

5. FACTORES QUE AFECTAN A LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

A) TEMPERATURA

El aumento de la temperatura conduce a un aumento en la velocidad de la reacción, que tiene

un límite cuando se sobrepasa la temperatura de desnaturalización de la enzima, lo que conlleva
una pérdida de su función. Debido a este fenómeno, la
mutación de una enzima que produce una forma
termolábil puede tener consecuencias muy graves, como
en la anemia hemolítica.
Variación de la actividad enzimática con la temperatura.
A la izquierda del valor óptimo (45 °C), la velocidad es
pequeña porque la temperatura es demasiado baja para
proporcionar la energía cinética suficiente que supere la
energía de activación. A la derecha del valor óptimo, la
enzima se desnaturaliza por efecto de la temperatura,
perdiendo su función.

29
BIOQUÍMICA Tema 2: Cinética enzimática.

B) pH

Los cambios en el pH del medio pueden alterar al estado de ionización de las cadenas laterales
de los aminoácidos ácidos y básicos. Estos cambios pueden afectar a la afinidad de la enzima por
el sustrato si se ven alteradas las cargas de los
aminoácidos que el participan en la formación
de interacciones no covalentes entre la
enzima y de transformar el complejo ES.
También se puede alterar la etapa sustrato
para formación del sustrato en producto si se
modifican los residuos catalíticos.

-pH óptimo: pH al cual se consigue la máxima actividad de la enzima, porque la conformación

de la proteína y el estado de ionización de sus grupos funcionales en el centro activo y en el
sustrato son idóneos para que se consiga la formación del complejo ES y su transformación en
producto.

6. INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

6.1 UTILIDAD DE LOS INHIBIDORES

Existen cierto tipo de moléculas, denominadas inhibidores, que ralentizan o detienen las
reacciones enzimáticas. Su estudio aporta información sobre las características del centro activo
de la enzima y los mecanismos de reacción:

-Modulan la actividad enzimática en rutas metabólicas.

-Muchos fármacos tienen naturaleza de inhibidor con utilidad terapéutica.
-Aplicaciones industriales.
Hay dos tipos, inhibidores irreversibles y reversibles. Dentro de estos últimos encontramos la
inhibición competitiva, la inhibición no competitiva y la mixta.
6.2 INHIBIDORES IRREVERSIBLES

Son moléculas que se suelen unir a la enzima mediante enlaces covalentes con los residuos
imprescindibles para la catálisis, impidiendo su función; aunque también pueden unirse
mediante interacciones no covalentes muy estables. Este tipo de inhibidores no tienen un
comportamiento cinético de Michaelis-Menten. Su principal utilidad es la creación de fármacos,
pero también se utilizan para conocer el mecanismo de reacción de las enzimas inhibidas.

Inhibición enzimática irreversible de la enzima COX por aspirina (acetilsalicilato)

Tiene un grupo acetilo que se une a un

residuo de serina de una enzima, la COX, la
cual participa en la formación de las
prostaglandinas a partir del ácido
araquidónico. Las prostaglandinas son unas
moléculas que participan en los procesos de
inflamación. Lo que hace la aspirina es unirse
al centro activo de la COX.

30
 Tema 2: Cinética enzimática.
BIOQUÍMICA

6.3 INHIBIDORES REVERSIBLES

Son moléculas que se unen a la enzima mediante interacciones no covalentes, más o menos
estables, de forma reversible. Para estudiar su efecto sobre la actividad catalítica de la enzima
se realizan ensayos, con las mismas condiciones experimentales, en ausencia (E + S) y presencia
(E + S+ I) de inhibidor. Esto permite comparar los parámetros cinéticos característicos de la
reacción (Vmax y Km) con los obtenidos en presencia de inhibidor (denominados Vmaxi y Kmi).
El inhibidor se puede unir a la enzima en el centro activo formando un complejo EI, que no da
producto o en un lugar específico para el inhibidor.

A) INHIBICIÓN COMPETITIVA

Se caracteriza porque el inhibidor se une al mismo sitio que el sustrato, impidiendo, por tanto,
la formación del complejo ES y la formación de producto. Suele ser una molécula semejante al
sustrato de la reacción de forma ligandos compiten por unirse al centro activo, aunque algunos
tienen una estructura diferente.

Como la unión es reversible, en condiciones en

que la concentración de el sustrato es muy
elevada, y por lo tanto está en exceso en
comparación con la concentración de inhibidor, es
muy poco probable que el inhibidor se una a la
enzima, por lo que la reacción muestra una Vmax
normal (Vmax = Vmaxi). Sin embargo, en
concentraciones de sustrato próximos a la Km, el
inhibidor competirá con el sustrato, por lo que se necesita más sustrato para alcanzar la mitad
de la Vmax y la Km tiene un valor mayor. El incremento de este valor está relacionado con la [I]
y con la Ki y se puede calcular mediante la fórmula:

Gráfico de Vo en función de [S] para una reacción de Michaelis-Menten en presencia de

diferentes concentraciones de un inhibidor competitivo.

31
BIOQUÍMICA Tema 2: Cinética enzimática.

B) INHIBICIÓN NO COMPETITIVA

El inhibidor muestra afinidad tanto por la enzima libre como por ES y la unión se realiza en un
lugar distinto del centro activo. Por tanto, su efecto no se puede evitar aumentando la
concentración de sustrato y produce una disminución de la Vmax ya que el complejo ternario
ESI no genera producto. La Vmaxi disminuye por el efecto del inhibidor de forma que:

Vmaxi=Vmax/α

En este caso, al no unirse el inhibidor al centro activo, la Km no cambia en presencia del

inhibidor, por lo que: Km = Kmi

C) INHIBICIÓN MIXTA

Un inhibidor mixto se fija a un sitio distinto al sustrato, pero se fija tanto a E como a ES. La
ecuación de velocidad que describe a la inhibición mixta es:

Normalmente, un inhibidor mixto afecta tanto a Km como a Vmax. El caso especial en que α=α´,
se define clásicamente como inhibición no competitiva o inhibición mixta pura.

32
BIOQUÍMICA Tema 2: Cinética enzimática.

33
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

TEMA 3: REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.

En la célula existe la necesidad de coordinar la actuación de muchas enzimas en aquellas vías
que se desarrollan de forma secuencial, es decir, donde el producto de una reacción es el
sustrato de la siguiente. En estos sistemas existen una o varias enzimas que tienen un mayor
efecto sobre la velocidad global del y se denominan enzimas reguladoras. Estas enzimas pueden
cambiar su actividad como respuesta a ciertas modificaciones y suelen ser las que catalizan la
primera de las reacciones de la secuencia, puesto que la regulación de la ruta en las últimas
etapas supondría un gasto innecesario.

1. MODOS DE REGULAR LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

A) CONTROL ALOSTÉRICO (modificaciones no covalentes)

Se realiza mediante la unión reversible, no covalente, de pequeñas moléculas señal a los centros
reguladores de la enzima.

Las proteínas alostéricas tienen una propiedad llamada cooperatividad, la actividad de un centro
catalítico afecta a los de alrededor.

Un ejemplo clásico de proteína

alostérica: aspartato transcarboxilasa
(ATCasa) que cataliza una de las
primeras reacciones de biosíntesis de
dos nucleótidos pirimidínicos, a partir
de Carabamoil- fosfato y aspartato se
forma Carabamoil-aspartato.

B) FORMAS ENZIMÁTICAS MÚLTIPLES (ISOENZIMAS)

Las isoenzimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminoácidos, pero que catalizan la
misma reacción química. Estas enzimas suelen mostrar diferentes parámetros cinéticos, o
propiedades de regulación diferentes.

C) MODIFICACIÓN COVALENTE REVERSIBLE

Unión covalente de un grupo químico, habitualmente un grupo fosforilo, donde el ATP actúa
como donador y estas reacciones están catalizadas por quinasas. La eliminación de los fosforilos
se produce por hidrólisis.

D) ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA

Se generan proteínas inactivas que se activan mediante la unión irreversible, como enzimas
digestivas (pepsina). También se realizan roturas proteolíticas para dar lugar a ligeros cambios
en la actividad.

E) CONTROL DE LA CANTIDAD DE ENZIMA: en situaciones concretas.

34
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

2. ENZIMAS ALOSTÉRICAS
Las enzimas alostéricas se unen de forma reversible no covalente a pequeñas moléculas, que
regulan su actividad. Las enzimas alostéricas están formadas por varias subunidades. La
actividad de algunas enzimas se modula mediante la unión de uno o más ligandos denominados
moduladores, que se unen en otro lugar diferente al centro activo pero que es específico para
cada modulador. Estos ligandos inducen un cambio de conformación que puede aumentar
(moduladores positivos) o disminuir (moduladores negativos) la afinidad de la enzima por el
sustrato. En aquellos casos en que el mismo sustrato tiene un efecto modulador se denominan
interacciones homotrópicas y son casi siempre regulaciones positivas. En las enzimas
homotrópicas, el centro activo y el sitio regulador son el mismo.

Cuando el ligando es una sustancia diferente se dice que es una interacción heterotrópica y en
este caso pueden ser positivas o negativas. Aunque existen algunas excepciones, la mayoría de
las enzimas alostéricas son oligoméricas y están formadas por varias subunidades.

En este tipo de enzimas la unión del modulador a

una de las subunidades produce un cambio de
conformación que se transmite a las otras
subunidades con lo que se consigue un efecto
cooperativo. Existen dos modelos que explican
este efecto. El modelo secuencial propone que,
cuando el ligando se une a la primera subunidad,
se produce un cambio de conformación que se
transmite a las otras subunidades causando un
aumento o una disminución de la afinidad de la
enzima por el sustrato. El modelo concertado
propone que, en ausencia de ligando, existe un
equilibrio entre dos conformaciones de la enzima:
una tensa y una relajada.

Los moduladores negativos tienen más afinidad por la forma tensa; y los positivos y el sustrato,
por la forma relajada. La presencia del modulador desplaza el equilibrio hacia la forma por la
que presenta mayor afinidad, consiguiendo una modulación negativa o positiva dependiendo
del tipo de modulador.

En algunas rutas metabólicas, el producto final de la ruta es la molécula que actúa como
modulador negativo de la enzima que cataliza la primera etapa de la ruta. Este tipo de regulación
se denomina retroinhibición (feedback).

Ej: La ATCasa se inhibe por CTP, la velocidad

disminuye a mayor [CTP]. Es una inhibición
por producto final o retroalimentación.

35
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

La aspartato transcarbamilasa está

formada por 12 cadenas polipeptídicas:

-6 Unidades reguladoras

-6 Unidades catalíticas

La ATCasa presenta dos formas de estructura

cuaternaria:

-Forma T: menos activa

-Forma R: más activa, unida al sustrato.

2.1 PROPIEDADES CINÉTICAS DE LAS ENZIMAS ALOSTÉRICAS

El comportamiento cinético de estas enzimas difiere del comportamiento descrito por

Michaelis-Menten, aunque se saturan cuando la concentración de sustrato es suficientemente
elevada. En los moduladores homotrópicos, en los que la unión de la primera molécula de
sustrato hace que cambie la conformación en todas las subunidades facilitando la incorporación
de las siguientes moléculas de sustrato, hay un descenso en el valor de la Km (aumento de la
afinidad) y el monómero alterado une más fácilmente sustrato y está más saturado que sin que
aumente la concentración de sustrato. Este efecto cooperativo hace que, al representar la [S]
frente a la velocidad inicial, se obtenga una curva sigmoidea, ya que la Km va cambiando a
medida que lo hace la concentración de sustrato.

En esta curva sigmoidea hay un valor de [S] que

coincide con la mitad de la velocidad máxima y se
denomina K0,5. El caso más habitual es que se
modifique el valor de K0,5 sin verse alterada la
Vmax.

36
 BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

Efectos de un modulador positivo y uno negativo

sobre una enzima alostérica heterotrópica.

Se señala cómo, para la misma concentración de

sustrato, el modulador negativo produce un descenso
de la velocidad (respecto a la situación en ausencia de
modulador) mientras que el modulador positivo
provoca un incremento de la velocidad.

K0,5 se altera sin cambio en la Vmax.

• Ejemplo
a) Efecto del ATP en la cinética sigmoidea de la ATCasa. El ATP estabiliza la forma R, desplazándose
la curva hacia la izquierda al facilitar la unión del sustrato.
b) Efecto del CTP en la cinética sigmoidea de la ATCasa. El CTP alarga la fase inicial de la curva
sigmoidea. El CTP estabiliza la forma T. Se requiere más sustrato para alcanzar una velocidad de
reacción determinada.

a) b)

El CTP estabiliza el estado T.

37
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

Las enzimas alostéricas son más sensibles a los cambios en la concentración de sustrato
alrededor de su K0.5 que las enzimas michaelianas con valores similares de Km y Vmax.

Aproximación semicuantitativa de la repercusión que

tienen pequeños cambios en la concentración del
sustrato [S], a partir de determinado valor (de 10 a 20
mM), en la velocidad de la reacción catalizada por una
enzima alostérica (paso del 20 al 95 por 100 del valor
de Vmáx), en comparación con las pequeñas
variaciones producidas por debajo de ese valor (de 0
a 10 mM).

Un caso de modulación menos común en

el que se altera Vmax mientras K0,5 se
mantiene casi constante.

2.2 MODELOS PARA ENZIMAS ALOSTÉRICAS

A) MODELO CONCERTADO

(A) [T]>>[R], lo que significa que L0 es elevado. En

consecuencia, será difícil que S se una a una forma R de la
enzima.
(B) A medida que [S] aumenta, se unirá a uno de los centros
activos de R, atrapando al resto de los centros activos en el
estado R.
(C) A medida que más centros activos se encuentran atrapados
en el estado R, resulta más fácil para S unirse al estado R.
(D) La unión de S a R se hace todavía más fácil a medida que
aumenta el número de enzimas que se encuentran en la forma
R. En una curva que represente la velocidad en función de [S]
se observará que V0 aumenta rápidamente hacia Vmax.

38
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

B) MODELO SECUENCIAL

La unión de un sustrato (S) cambia la conformación de la subunidad a la que se une. Este cambio
conformacional induce cambios en las subunidades vecinas de la enzima alostérica que
aumentan su afinidad hacia el sustrato. K1, K2, etc., son las constantes de velocidad para la unión
del sustrato a los distintos estados de la enzima.

2.3 ECUACIÓN DE HILL

3. MODIFICACIONES COVALENTES
Numerosas enzimas modulan su actividad mediante modificaciones covalentes de su estructura
La modificación covalente de una enzima es también un mecanismo habitual para regular la
actividad de numerosas enzimas. La modificación puede ser reversible o irreversible.

39
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

3.1 FOSFORILACIÓN

La fosforilación es la modificación reversible más frecuente. Algunas enzimas sufren reacciones

de adición de grupos fosforilo, adenililo, uridililo, metilo, … Estas reacciones están catalizadas
por sus correspondientes enzimas específicas que, en el caso de la fosforilación, se denominan
quinasas. La fosforilación se realiza en las cadenas laterales de residuos de Ser, Tyr o Thr.

La adición de un grupo cargado en la

proteína puede afectar tanto a su
conformación como a sus posibles
interacciones con el sustrato. La
modificación es reversible porque los
grupos fosfato pueden eliminarse por la
acción de otras enzimas: las fosfatasas.
Este tipo de modificación en la enzima
puede hacer que la enzima se active o se
inactive, dependiendo de la enzima.

• EL PANORAMA GLOBAL DE FOSFORILACIÓN DE INFECCIÓN POR SARS-COV-2

El agente causante de la pandemia de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), grave

síndrome respiratorio agudo coronavirus 2 (SARS-CoV-2), ha infectado a millones y ha matado
cientos de miles de personas en todo el mundo, destacando la necesidad urgente de desarrollar
terapias antivirales.

Aquí presentamos una encuesta de fosfoproteómica cuantitativa basada en espectrometría de

masas de Infección por SARS-CoV-2 en células Vero E6, revelando un recableado dramático de
la fosforilación en proteínas virales y del huésped. La infección por SARS-CoV-2 promovió la
activación de la caseína quinasa II (CK2) y p38 MAPK, producción de diversas citocinas y parada
de quinasas mitóticas, resultando en la detención del ciclo celular. La infección también estimuló
una marcada inducción de CK2-que contiene protuberancias filopodiales que poseen partículas
virales en ciernes. Ochenta y siete drogas y compuestos se identificaron mapeando perfiles de
fosforilación global para quinasas y vías desreguladas.

Encontramos inhibición farmacológica de las quinasas p38, CK2, CDK, AXL y PIKFYVE para poseen
eficacia antiviral, lo que representa posibles terapias COVID-19.

DESTACAR

• Análisis fosfoproteómico de SARS-CoV-2- las

células infectadas descubren la señalización del
recableado.

• La infección promueve la actividad en cascada

de p38 MAPK del huésped y parada de quinasas
mitóticas.

• La infección estimula los filopodiales que

contienen CK2 protuberancias con virus en
ciernes.

• El análisis de la actividad quinasa identifica un

potente antiviral fármacos y compuestos.

40
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

3.2 ADENILACIÓN

Se trata de añadir un AMP a una enzima determinada.

3.3 ACETILACIÓN

La acetilación es una modificación común que afecta aproximadamente al 80% de las proteínas
solubles en eucariotas, entre las que se encuentran muchos enzimas, y que supone la acetilación
de sus extremos amino terminales. El dador es el acetil-CoA.

3.4 MIRISTOLIZACIÓN:

Se añade un grupo miristol a una enzima, cuyo dador es el miristol-CoA.

3.5 UBIQUITINIZACIÓN:

La ubiquitina se une a las proteínas como una marca que las predestina para su degradación
proteolítica. La ubiquitinación puede tener también una función reguladora. Sumo se encuentra
unida a muchas proteínas nucleares eucarióticas que intervienen en la regulación de la
transcripción, en la estructura de la cromatina y en la reparación del DNA.

La proteólisis dependiente de ubiquitina es importante para regular procesos y para la lisis de

proteínas. Los defectos en los procesos de ubiquitinación van a estar relacionados con diferentes
procesos patológicos, como uncogenes que activan excesivamente el ciclo celular y provocan la
formación de tumores.

41
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

Proceso en tres pasos por el que la ubiquitina se une a una proteína:

1-Se une a una enzima (E1) para activarla;

2-Se transfiere de E1 a E2;

3-La enzima E3, que es una ligasa, cataliza la transferencia de la

ubiquitina a la proteína desde E2.

Se repite el proceso para formar una poliubiquitina, que marca a la

proteína para ser degradada.

Las proteínas ubiquitinadas son degradadas por un gran complejo

denominado proteasoma 26S.

3.6 ADP RIBOSILACIÓN:

Se trata de añadir una ADP-ribosa a una enzima determinada, alterando su función. El dador en
este caso es el NAD y se liberará nicotinamida. Es un proceso muy importante. Por ejemplo, la
toxina del cólera es una enzima que cataliza la ADP-ribosilación de enzimas o proteínas celulares
claves. Esto produce un gran aumento de AMPc y el organismo pierde agua sin parar.

3.7 METILACIÓN:

Se trata de la adición de un grupo metilo a una enzima determinada.

42
BIOQUÍMICA Tema 3: Regulación de la actividad enzimática

• REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA GLUCÓGENO FOSFORILASA MUSCULAR POR

FOSFORILACIÓN

La degradación de glucógeno en el hígado está regulada por variaciones en la fosforilasa a y b.

La regulación de esta enzima muestra cómo afecta la adición de un fosforilo.

En el estado no fosforilado, los aminoácidos se encuentran plegados y tienen interacciones

iónicas con otros aminoácidos. Al llegar el fosforilo, se rompen estas interacciones que
mantenían y la proteína se despliega, es decir, se activa.

Para ser útil como mecanismo regulador efectivo, la fosforilación ha de ser reversible. En
general, los grupos fosforilo se añaden y eliminan mediante enzimas diferentes y, por
consiguiente, los procesos se pueden regular independientemente.

Las células contienen una familia de fosfoproteína fosfatasas que hidrolizan específicamente los
ésteres P-Ser, P-Thr y P-Tyr, liberando Pi. Las fosfoproteínas fosfatasas presentan una
especificidad de sustrato menor que las proteínas quinasas.

43
BIOQUÍMICA

2.BIOENERGÉTICA
Y PRODUCCIÓN
DE ENERGÍA EN
LOS SERES VIVOS

44
 BIOQUÍMICA Tema 4: Bioenergética y reacciones redox

TEMA 4: BIOENERGÉTICA Y REACCIONES REDOX

1. INTRODUCCIÓN AL METABOLISMO
El metabolismo es el conjunto de reacciones químicas catalizadas por enzimas que tienen lugar
en un organismo. Las dos fases del metabolismo son opuestas.

• El catabolismo es una fase degradativa que sirve para quemar las moléculas que se ingieren
como nutrientes, o bien moléculas propias, con objeto de producir energía química, tanto en
forma de nucleótidos trifosfato (ATP, GTP), como en forma de moléculas con poder reductor
(FADH, NADH y NADPH), originando una serie de productos de desecho (a destacar CO2, H2O y
NH4+). De las rutas catabólicas también se obtienen moléculas precursoras o intermediarias a
partir de la degradación de macromoléculas. En general, el catabolismo es convergente; es
decir, a partir de moléculas muy dispares se acaba obteniendo una serie limitada de moléculas
intermediarias o precursoras, así como una serie limitada de moléculas energéticas.
• El anabolismo es una etapa biosintetizadora o creadora, en la cual, a partir de una serie limitada
de moléculas sencillas se sintetizan moléculas más complejas, como ácidos nucleicos, proteínas,
polisacáridos o lípidos. Esta fase sintetizadora suele requerir cantidades importantes de energía,
ya sea en forma de nucleótidos trifosfato (ATP, GTP) o como moléculas con poder reductor
(FADH2, NADH y NADPH) que proceden de las rutas catabólicas. El anabolismo es divergente; a
partir de una serie limitada de moléculas intermediarias o precursoras se genera una gran
cantidad de macromoléculas y de naturaleza muy dispar.

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BIOQUÍMICA Tema 4: Bioenergética y reacciones redox

2. BIOENERGÉTICA
La bioenergética es el estudio, a la luz de los principios termodinámicos, de la naturaleza y
función de las reacciones químicas que comportan las transformaciones de energía que ocurren
en las células, desde un punto de vista cuantitativo.

TÉRMINOS

-Sistema: materia objeto de estudio, que puede ser:

(1) Aislado, sin transferencia de energía ni materia entre sistema y entorno.
(2) Cerrado, sólo transferencia de energía.
(3) Abierto, transferencia de materia y energía.

-Alrededores o entorno: materia fuera del sistema.

-Universo: sistema + entorno.

-Seres vivos: se consideran sistemas abiertos, pero nosotros los estudiaremos como sistemas
cerrados.

2.1 PRIMERA LEY DE LA TERMODINÁMICA. ENTALPÍA.

La primera ley de la termodinámica dice que la energía no se crea ni se destruye, solo se
transforma. Determina que la energía interna de un sistema aumenta cuando se le
transfiere calor o se realiza un trabajo sobre él.

La entalpía es la energía total del sistema, energía interna de un compuesto más los cambios de
presión y volumen de todo el conjunto de moléculas. Es calor contenido de calor interno del
sistema reaccionante a presión constante. Refleja el número y el tipo de enlaces que contiene
una molécula. El incremento de entalpía de un sistema (ΔH) expresa una medida de la cantidad
de energía absorbida o cedida por un sistema termodinámico; es, por lo tanto, la cantidad de
energía que ese sistema puede intercambiar con su entorno. Cuando se produce una reacción
química, y los reactivos son diferentes a los productos, habrá un cambio de contenido calórico
debido a la energía contenida en los enlaces químicos.

Las reacciones podrán ser de dos tipos:

-Endotérmicas, que absorben calor del entorno en donde transcurre la reacción. En este caso,
el contenido calórico es menor en los reactivos que en los productos→ ΔH>0

-Exotérmicas, liberan calor al entorno (ΔH<0). El contenido calórico es mayor en los reactivos
que en los productos.

En cualquier reacción química, la variación de la entalpía (ΔH) de la reacción es igual a la

diferencia entre la suma de las entalpías de formación de los productos y la suma de las entalpías
de formación de los reactivos.

ΔH REACCIÓN = H PRODUCTOS - H REACTIVOS

La energía interna o energía química de un sistema es el calor absorbido por el mismo a volumen
constante, mientras que la entalpía es el calor absorbido a presión constante.

46
 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

Representación de reacciones químicas según el contenido de calor (entalpía) de los reactivos

y de los productos. (a) Proceso exotérmico, con liberación de calor del sistema al entorno, y (b)
proceso endotérmico, donde los reactivos del sistema deben absorber calor del entorno para
convertirse en producto.

La entalpía es una función de estado, por lo que es independiente del mecanismo de reacción
Los cambios de entalpía permiten calcular los cambios de calor en las reacciones, pero no son
indicativos de la espontaneidad de la reacción.

-Endergónico: una reacción en la cual la energía libre de los productos mayor que la energía libre
de los reactivos. Debe añadirse energía a la reacción para que se lleve a cabo un cabo. Cuando
esta energía es energía calorífica, el proceso, además, es endotérmico. (No espontáneo).

-Exergónico: una reacción cual la energía libre de los productos es menor que la energía libre de
los reactivos. Estas reacciones probablemente bioquímicamente espontáneas, favorables ... una
vez que el enzima la impulse adecuadamente. (Espontáneo).

2.2 SEGUNDA LEY DE LA TERMODINÁMICA. ENTROPÍA.

La Segunda Ley de la Termodinámica postula que el universo tiende siempre a aumentar el
desorden.

La entropía o grado de libertad es una función de estado y mide el grado de desorden o de

libertad de un sistema. Los sistemas desordenados tienen, por lo tanto, una entropía elevada.

Establece que, en cualquier sistema espontáneo, la entropía (S) del universo aumenta, o sea,

S (entropía total) > 0, Ssistema+ Sentorno > 0

Para nuestros fines, definimos la entropía como un grado de desorden, y en una reacción
espontánea, el desorden del universo aumenta.

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BIOQUÍMICA Tema 4: Bioenergética y reacciones redox

En una reacción donde se genere orden celular, el aumento de la entropía del entorno y la
disminución que se produce en el sistema, dependerá de la pérdida de calor del sistema y el
aumento de calor (desorden) en el entorno. Es muy importante, por lo tanto, estudiar las
reacciones químicas y conocer sus cambios en el contenido calórico (energía contenida en los
enlaces) de los reactivos y los productos. En las reacciones exotérmicas aumenta la entropía del
entorno, ya que liberan calor al entorno provocando un mayor desorden. Ocurre lo contrario
con las reacciones endotérmicas, puesto que, al absorber calor del entorno, las moléculas del
entorno estarán menos libres.

Los seres vivos, durante el

proceso de combustión de los
alimentos a partir de la energía
química contenida en los
nutrientes, liberan calor, y
gracias al junto de rutas
metabólicas, son capaces de
aprovechar parte de esta
energía al acoplaría a
reacciones que generalmente
orden.

Conexión entre la producción de orden en un sistema biológico y liberación de calor al

entorno. El universo (sistema más entorno) tiende al desorden.

2.3 CRITERIO DE ESPONTANEIDAD: ENERGÍA LIBRE DE GIBBS (G)

La energía libre de Gibbs (G) es una función de estado que representa la energía máxima
disponible del sistema para realizar trabajo, y permite predecir, además, la dirección de la
reacción y su posición en el equilibrio (a “tª” y “p” constantes). Todas las reacciones químicas
tienden a ir en la dirección que da lugar a una disminución de la energía libre del sistema.

G negativo (G<0)  Reacción espontánea ( irreversible) y exergónica, el sistema se provee

de energía como trabajo por sí mismo.

G positivo (G>0)  Reacción no espontánea ( no posible) y endergónica, sólo transcurre

con aporte de energía.

G = 0  Reacción en equilibrio, o sea, reversible, se produce en ambos sentidos a la misma

velocidad.

H > 0  Reacción endotérmica.

H < 0  Reacción exotérmica.
S > 0  Reacción normalmente espontánea ( máximo desorden), aunque sólo si TS>H
cuando la reacción es endotérmica [H (+)]. Si es exotérmica no hay problema.
S = 0  Reacción en equilibrio.

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 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

G es un concepto dinámico. Así, un proceso irreversible libera energía mientras está alejado
del equilibrio, pero alcanzado el equilibrio, ya no hay cambio de energía útil. Por esta razón, los
seres vivos mantienen sus procesos alejados del equilibrio, en el denominado estado
estacionario (y dinámico), que requiere un aporte constante de energía. Cuando la célula no
puede generar energía, inicia su degradación hacia el equilibrio con su entorno.

2.4 ENERGÍA LIBRE DE GIBBS (G) y EQUILIBRIO.

El equilibrio podemos desplazarlo, o sea, podemos forzar la dirección de la reacción cambiando
la concentración de un reactivo. Además, G determina la dirección  G depende de la
[reactivos].

G0 es una constante para cada reacción a una temperatura dada, y representa el cambio de
energía libre estándar.

R = constante de los gases (8,31J/mol.K)

T = temperatura absoluta (C + 273 K)

• En el equilibrio (G = 0) relacionamos G0 con Keq

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 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

G0 es la variación de energía libre en condiciones estándar: 298 K (25 C), 1M de reactivos y
productos (inicio de la reacción), y para los gases, a presiones de 1 atm.

El estado estándar de reacciones con iones hidrógeno es [H+] = 1M, o lo que es igual, pH = 0,
pero en bioquímica, las reacciones suelen transcurrir en soluciones acuosas y a pH=7, donde
tanto el agua (55,5 M) como el pH son básicamente constantes.

Por conveniencia, los bioquímicos definimos un estado estándar diferente, en el que la [H+] =
10-7 M, y la del agua 55,5 M (y en las reacciones donde interviene el Mg2+, la [Mg2+] = 1 mM).
El resto de los componentes de la reacción sí tienen concentración 1 M. (H2O, H+ y Mg2+, no se
incluyen en la ecuación de Keq).

• Constantes físicas basadas en este estado estándar bioquímico (o constantes estándar

transformadas): G´ o y Keq´
Es decir, si una reacción comienza en las condiciones estándar de pH 7, 298 K y 1 M de reactivos
y productos, y va hasta el equilibrio, el G que se produce es G´0.
G´ o sólo es una forma matemática de expresar Keq´:
G´0 = -RT ln Keq´

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 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

En una ruta metabólica, al tener que ser irreversible, el G debe ser negativo no sólo en el
conjunto de la ruta, sino en cada reacción particular. En la ruta metabólica lo importante es
conocer la magnitud de G, y no el signo de G´ o, por lo que necesitamos conocer Keq (fácil) y
las concentraciones de productos y de reactivos (difícil). Conociendo G, diferenciaríamos las
reacciones próximas al equilibrio de las de no-equilibrio, que son las importantes por la
posibilidad de regulación.

Predicción del sentido de una reacción química según la concentración real de los reactivos y
productos (Q es lo importante para saber cómo de cerca está una reacción del equilibrio).

2.5 ACOPLAMIENTO (influencia de una reacción sobre otra)

El acoplamiento es muy importante en el metabolismo celular porque la energía de una reacción
exergónica puede utilizar para llevar a cabo hacia adelante una reacción endergónica, siempre
y cuando compartan un intermediario común; esto es el acoplamiento en serie.
Alternativamente, el ATP u otro compuesto rico en energía puede utilizarse para sobrepasar el
impedimento endergónico. Esto también es acoplamiento de dos reacciones, por ejemplo, una
reacción endergónica acoplada en paralelo la hidrólisis de ATP.

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BIOQUÍMICA

a) En serie o secuencial

Por este principio, una reacción termodinámicamente desfavorable (endergónica), puede ser
impulsada hacia la derecha, acoplándola a una reacción muy exergónica a través de un
intermediario común. Es decir, el producto de la reacción endergónica pasa a ser el sustrato de
una reacción espontánea, o es eficazmente eliminado por una reacción fuertemente exergónica
aguas abajo de la ruta.

La K´eq para una reacción que es la suma de otras, es el producto de los valores de K´eq
individuales.

b) En paralelo

Fisiológicamente, la intervención del ATP

en la fosforilación de la Glc es necesaria
porque las [Glc] intracelulares no pueden
modificarse ( 10-5, 10-4 M) (la [Glc] que
sería necesaria para darse la reacción
directa sería 1,6 M).

3. TERMODINÁMICA DEL PAPEL DEL ATP EN EL METABOLISMO

-Única forma de energía que puede convertirse en cualquier otra de las utilizadas por los seres
vivos.

- ATP: unión química entre anabolismo y catabolismo. Es la moneda energética de la célula viva.
La conversión exergónica del ATP a ADP y Pi, o a AMP y PPi , se acopla a muchas reacciones y
procesos endergónicos.

- La hidrólisis directa del ATP es la fuente de energía en procesos que son impulsados por
cambios de conformación, pero, generalmente, no es la hidrólisis del ATP sino la transferencia
de un grupo fosforilo, pirofosforilo o adenililo del ATP al sustrato o al enzima la que acopla la
energía de rotura del ATP a transformaciones endergónicas de sustratos.

- Vía estas reacciones de transferencia de grupo, el ATP da la energía para: las reacciones
anabólicas, el transporte de moléculas e iones a través de las membranas contra gradiente de
concentración o de potencial eléctrico.

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BIOQUÍMICA
Tema 4: Bioenergética y reacciones redox

- Para mantener su elevado potencial de transferencia de grupo, la [ATP] se mantiene muy por
encima de la concentración de equilibrio mediante reacciones del catabolismo que producen
energía.

El intermediario común en la mayoría de las reacciones no espontáneas que se dan en la célula

va a venir determinado la hidrólisis del ATP. Esto es debido a que la reacción de transferencia
de un fosforilo (- PO,) del ATP es termodinámicamente muy favorable en la por el acoplamiento
de esta reacción a un grupo dirección de hidrólisis del ATP.

El ATP es la molécula que utiliza la célula para transferir energía. Esto se debe a la capacidad de
transferir su grupo fosforilo y a la gran cantidad de energía que se libera al hidrolizarse
(romperse) el enlace fosfoanhídrido. Esta energía es liberada gracias a que el ATP tiene una gran
repulsión de carga en su molécula, haciendo que sea muy inestable, por lo que se tenderá a
liberar esta tensión. Por otra parte, una molécula con enlaces fosfoanhídrido tiene menor
resonancia que sus productos de hidrólisis. La forma estable resonante (por ejemplo, del P.)
refleja el grado de deslocalización de los electrones en la molécula y la gran variedad de formas
que puede adoptar esta molécula, teniendo además un alto grado de libertad o entropía, lo que
hace este estado más favorable. En la célula, además, la forma resonante del fosfato se
acompleja con cationes, lo que provoca aún más un alto grado de estabilización de las cargas.

El ATP va a ser, por lo tanto, la moneda de intercambio energético entre reacciones favorables
y desfavorables. Cuando una reacción no es favorable energéticamente se acoplar a otra muy
favorable, como es la hidrólisis del ATP, haciendo que la suma de ambas libere energía. Si, por
el contrario, se da una reacción de síntesis favorable de ATP, la energía liberada se aprovechará
para este fin y no se desperdiciará sólo en forma de calor (energía «inútil»).

Como ejemplo para ilustrar este concepto, puede considerar el metabolismo de la glucosa, que
consiste en su conversión a glucosa-6-fosfato. La reacción directa es termodinámicamente
desfavorable. No obstante, en las células esta reacción está acoplada a la ruptura exergónica
del ATP.

3.1 G´0 DE LA HIDRÓLISIS DEL ATP

G´0 = -30,5 kJ/mol ( -7,3 kcal/mol) a 37 C y concentración saturante de Mg2+

Pero en la célula, ni las concentraciones de productos y reactivos, ni el pH es estándar, por lo

que G´0 difiere de la energía libre real de hidrólisis del ATP: Gp , el cual, además difiere entre
células o condiciones fisiológicas momentáneas de la célula. Además, el verdadero sustrato no
es el ATP, sino el MgATP2-.

Gp suele ser mucho más negativo que G´0: -50 a -65 kJ/mol

Gp se denomina potencial de fosforilación.

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 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

Concentraciones totales de nucleótidos de adenina, fosfato inorgánico y fosfocreatina en

algunas células

a
Para los eritrocitos, las concentraciones son las del citosol (los eritrocitos humanos carecen de
núcleo y mitocondrias). En los otros tipos de células, los datos son para todo el contenido de la
célula, aunque el citosol y las mitocondrias tienen concentraciones muy diferentes de ADP. PCr
es fosfocreatina.
b
Este valor refleja la concentración total; el valor real del ADP gratuito puede ser mucho menor.

• Mg2+ y ATP

La formación de complejos con Mg2+ protege parcialmente las cargas negativas influyendo en la
conformación de los grupos fosfato del ATP y ADP.

G0 depende del pH

pH 0: -1,25 kJ/mol
pH 7: -30,5 kJ/mol
Además, en la célula, [productos] muy por debajo del equilibrio, la acción de masas favorece la
reacción de hidrólisis.

Fundamento químico de la magnitud del G´0 de la hidrólisis del ATP: mayor estabilidad de los
productos a pH cercano a 7.0.

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 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

1-La hidrólisis, el provocar la separación de cargas elimina la repulsión electrostática entre las
cuatro cargas negativas del ATP.

2- El producto fosfato inorgánico se estabiliza por la formación de un híbrido de resonancia en

el que cada uno de los cuatro enlaces fósforo oxígeno tienen el mismo grado de carácter de
doble enlace mientras que el ion hidrógeno no está asociado de manera permanente con
ninguno de los oxígenos en los fosfatos involucrados de enlaces anhidro o éster tiene lugar
también un cierto grado de estabilización por resonancia, pero son posibles menos formas de
resonancia para el fosfato inorgánico.

3- El producto ADP2 se ioniza

inmediatamente liberando un protón
a un medio con una [H+] muy baja (pH
7). Un cuarto factor no mostrado que
favorece la hidrólisis del ATP es el
mayor grado de solvatación
(hidratación) de los productos de Pi y
ADP en relación al ATP lo que
estabiliza todavía más los productos
con relación a los reactivos.

4. COMPUESTOS DE ALTA ENERGÍA O COMPUESTOS CON FOSFATO RICO EN ENERGÍA

Son los compuestos que proporcionan una gran cantidad de energía libre cuando se hidrolizan.
La energía proporcionada se expresa como cambio de energía libre (ΔG0 o ΔG0´) en condiciones
estándar, siendo este valor elevado en términos absolutos y negativos.

Normalmente, los compuestos que obtienen más de 7,3

kcal/mol de energía, se consideran como compuestos ricos
en energía. Los nucleósidos mono, di y trifosfato, la
fosfocreatina, los ésteres de tiol, los enol fosfatos y los acil
fosfato son algunos ejemplos de compuestos ricos en
energía.

-Potencial de transferencia del grupo fosfato (o fosforilo):

Es la tendencia a perder un Pi, y depende de G´0, y es tanto
mayor cuanto mayor sea el valor absoluto negativo del
compuesto.

• EJEMPLOS:

-Fosfoenolpiruvato

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BIOQUÍMICA

-1,3-bisfosfoglicerato -Fosfocreatina

Cualquier compuesto fosforilado puede sintetizarse acoplando su síntesis a la rotura de otro

compuesto fosforilado con una energía de hidrólisis más negativa.

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 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

• Hidrólisis del ATP en dos pasos. (a) La contribución del ATP a una reacción se muestra a menudo
como un paso único, pero es casi siempre un proceso en dos pasos,

(b) Se muestra aquí la reacción catalizada

por la glutamina sintetasa dependiente
de ATP

(1) Se transfiere un grupo fosforilo desde

el ATP al glutamato, y a continuación

(2) del grupo fosforilo es desplazado por

NH3 y liberado como Pi.

• Reacciones de desplazamiento nucleofílico del ATP.

Cualquiera de los tres átomos de P (α,β o γ) puede servir como diana electrofílica para un ataque
nucleofílico, en este caso por el nucleófilo marcado R-18O: El nucleófilo puede ser un alcohol
(ROH), un grupo carboxilo (RCOO-), o un fosfoanhídrido (un nucleósido mono o difosfato, por
ejemplo).

(a) Cuando el oxígeno del nucleófilo ataca la posición y, se marca el oxígeno enlazante del
producto, lo que indica que el grupo transferido desde el ATP es un fosforilo (—PO2-3), no un
fosfato (—OPO2-3).

(b) El ataque sobre la posición p desplaza AMP y conduce a la transferencia de un grupo

pirofosforilo al nucleófilo.

(c) El ataque sobre la posición α desplaza PPi y transfiere el grupo adenililo al nucleófilo.

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 BIOQUÍMICA
Tema 4: Bioenergética y reacciones redox

5. TRANSFOSFORILACIONES ENTRE NUCLEÓTIDOS

Todos los nucleósidos y desoxinucleósidos trifosfato son energéticamente equivalentes al ATP.

• Mecanismo ping-pong de la nucleósido difosfato quinasa.

El enzima une su primer sustrato (ATP en nuestro ejemplo) y se transfiere un grupo fosforilo a
la cadena lateral de un residuo His. Sale el ADP, que es reemplazado por otro nucleósido (o
desoxinucleósido) difosfato que se convierte en el correspondiente trifosfato por transferencia
del grupo fosforilo desde el residuo de fosfohistidina.

En músculo en contracción se acumula el ADP, y el AMP pasa a ADP y luego a ATP en

mitocondria.

• El polifosfato inorgánico es un dador potencial de grupos fosforilo.

El polifosfato inorgánico (poliP) es un polímero lineal compuesto de muchas decenas o centenas

de residuos Pi unidos a través de enlaces fosfoanhídrido. Este polímero, presente en todos los
organismos, puede acumularse en grandes cantidades en algunas células. Por ejemplo, en la
levadura, la cantidad de PoliP que se acumula en las vacuolas representaría, si se distribuyese
de manera uniforme por toda la célula, una concentración de 200 mM.

6. REACCIONES DE OXIDACIÓN-REDUCCIÓN BIOLÓGICAS

Implican la pérdida de e- por una especie química, que se oxida, y la ganancia de e- por otra, que
se reduce:
+ OXIDACIÓN: pérdide de e-.
+ REDUCCIÓN: ganancia de e-.
+ REDUCTOR: donador de e-.
+ OXIDANTE: aceptor de e-.
El flujo de e- en las reacciones redox es el responsable de todo el trabajo realizado por los seres
vivos.

-Fuerza electromotriz (fem): impulsa el flujo de electrones entre dos especies químicas.

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 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

• OXIDACIÓN BIOLÓGICA
-La oxidación biológica se relaciona con el uso del oxígeno respiratorio por los
organismos vivos.
-La oxidación biológica es el modo principal para regenerar coenzimas reducidos
originados en las rutas metabólicas. El oxígeno actúa come el aceptador final de
electrones en la cadena respiratoria, reduciéndose a conjunto.
-El oxígeno está directamente asociado con las reacciones de oxidación biológica en los
seres vivos.
-La formación de diversos nuevos compuestos y la eliminación de toxinas depende del
oxígeno. El oxígeno es una fuente para la formación de especies reactivas del oxígeno
(ROS). No obstante, el oxígeno es muy tóxico para las células a concentraciones
elevadas. Esta propiedad del oxígeno se puede utilizar en la terapia del cáncer en
combinación con la radiación.

• PRINCIPIOS ELECTROQUÍMICOS

1- Las oxidorreducciones se pueden describir en forma de semirreacciones.

2-Son termodinámicamente irreversibles.

3-Los electrones de enlace de un átomo que comparten con otro “pertenecen” al átomo más
electronegativo.
-En la mayoría de las reacciones biológicas es el carbono.
-Con cada pérdida de electrones, el C sufre una oxidación.

Los electrones se transfieren del dador al aceptor de 4 modos:

-Directamente como e-.

-Como átomos de H (H+ protón y e-).
-Como un ion hidruro (H- con 2 e-).
-Por combinación con el oxígeno.

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 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

• Potencial de reducción
Los potenciales de reducción son una medida de la afinidad por los e-. El potencial de reducción
estándar (en condiciones estándar: pH=7, Tª=25ºC), Eo, es una medida en voltios de esta
afinidad. La semirreacción estándar es:
H+ + e-→ ½ H2 (pH = 0) Eo = 0,00 V
Convención: célula que adquiere e-: Eo positivo

Los e- fluyen desde potenciales redox más electronegativos hacia los más electropositivos.

Los potenciales de reducción estándar permiten el cálculo de la variación de energía libre.

La energía disponible por el flujo espontáneo de e- entre pares redox es proporcional a E según:
G = -n F E o
G´ = -n F E´
0 0

n = nº de e- transferidos en la reacción
F= constante de Faraday: 96472 culombios/mol  23,03 kcal/mol/v
Los potenciales de reducción dependen no solo de las especies químicas, sino de sus actividades:
ΔEo= Eodel aceptor de e- - Eodel donador de e-
7. TRANSPORTADORES DE ELECTRONES
En una ruta catabólica se produce la oxidación de una molécula, como puede ser el caso de la
glucosa, que transfiere sus electrones a una molécula final aceptora de electrones, como el
oxígeno. Sin embargo, este paso no es directo, si no que, hasta alcanzar el destino final, los
electrones contenidos en los enlaces de la glucosa irán pasando de una molécula a otra, de
forma que los carbonos de la glucosa perderán todos los electrones posibles hasta llegar a su
estado de oxidación final (CO2).

En el proceso estos electrones serán captados por moléculas oxidadas que se irán, a su vez,
reduciendo. Muchas de las reacciones de oxidación en las vías catabólicas se darán gracias a las
coenzimas o moléculas transportadoras de electrones, las que serán capaces de aceptar
electrones de las moléculas que se oxidan en las vías catabólicas.

• NAD+ y NADP+

Los principales transportadores de electrones son el NAD+ y el NADP+. Ambos tienen la misma
función: actuar de intercambiador de electrones en un sistema de oxidación-reducción. El
anillo de nicotinamida de la molécula oxidada puede aceptar dos electrones y un protón
pasando a la forma reducida NADH y liberando un H al medio.

60
BIOQUÍMICA
Tema 4: Bioenergética y reacciones redox

El NAD+ y el NADP+ realizan la misma reducción; sin embargo, tienen bien diferenciadas sus
funciones como coenzimas:

-El NAD+ ayuda a catalizar las reacciones implicadas en el catabolismo, aceptando los
electrones de las moléculas que se oxidan.

-Mientras que la forma reducida del NADP+, el NADPH, actúa en las reacciones anabólicas
donando los electrones ricos en energía necesaria para las moléculas que se van a sintetizar.

• FAD y FMN

Otras coenzimas que también desempeñan un importante papel en el metabolismo celular son
el FAD (dinucleótido de flavina y adenina) y el FMN (mononucleótido de flavina). La flavina es
capaz de reducirse de manera reversible, aceptando uno o dos electrones en forma de uno o
dos átomos de hidrógeno (cada átomo consiste en un electrón más un protón) desde un sustrato
reducido.

8. TRANSPORTADOR DE GRUPOS ACETILO (HC3CO-R)

Existen otras muchas coenzimas especializadas en transferir fácilmente grupos funcionales de
un sustrato a otro. Multitud de enzimas utilizan la colaboración de estas coenzimas para catalizar
sus reacciones específicas. Estas coenzimas necesitan activarse para captar el grupo funcional
unido en un enlace rico en energía, de forma que cuando lo libere, se produzca esta cesión de
forma favorable.

La coenzima A (CoA) es un transportador primordial para transferir grupos acetilo (HC3COO-R).

Es importante tener en cuenta que la hidrólisis de ATP es necesario para activar estos
transportadores, ya que la unión del grupo acetilo a la CoA se realiza mediante enlace tioester
(enlace rico en energía) y esta unión sólo es posible gracias a la hidrólisis del ATP. Por lo tanto,
en última instancia, estas moléculas transportadoras de grupos requieren la energía del enlace
fosfoanhidrido para ser activadas y poder así transferir un grupo posteriormente, en una
reacción favorable, a otra molécula.

61
 Tema 4: Bioenergética y reacciones redox
BIOQUÍMICA

Se necesita gasto de ATP para activar al transportador  se necesita la energía del enlace
fosfoanhidrido.

62
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

TEMA 5: CADENA DE TRANSPORTE Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

1. PRODUCCIÓN DE ENERGÍA EN LOS SERES VIVOS

La energía en los seres vivos se obtiene mediante el ATP (adenosín trifosfato).

Aunque son muy diversas las biomoléculas que contienen energía almacenada en sus enlaces,
es el ATP la molécula que interviene en todas las transacciones (intercambios) de energía que
se llevan a cabo en las células; por ella se la califica como "moneda universal de energía".

El ATP está formado por adenina, ribosa y tres grupos fosfatos, contiene enlaces de alta energía
entre los grupos fosfato; al romperse dichos enlaces se libera la energía almacenada.

En la mayoría de las reacciones celulares el ATP se hidroliza a ADP (adenosín difosfato),

rompiéndose un solo enlace y quedando un grupo fosfato libre, que suele transferirse a otra
molécula en lo que se conoce como fosforilación.

El sistema ATP ↔ADP es el sistema universal de intercambio de energía en las células.

La fosforilación oxidativa es la culminación del metabolismo productor de energía en los

organismos aeróbicos. Todos los pasos oxidativos en la degradación de glúcidos, grasas y
aminoácidos convergen en esta etapa final de la respiración celular en la que la energía de la
oxidación impulsa la síntesis de ATP. La fotofosforilación es la forma por la cual los organismos
fotosintéticos capturan la energía de la luz solar, la fuente fundamental de energía en la biosfera,
y la utilizan para sintetizar ATP. La fosforilación oxidativa y la fotofosforilación aportan
conjuntamente la mayor parte del ATP sintetizado por la mayor parte de los organismos la
mayor parte de las veces.

En los eucariotas la oxidación fosforilativa tiene lugar en la mitocondria y la fotofosforilación en

los cloroplastos. En la fosforilación oxidativa se produce la reducción de O2 a H2O gracias a los
electrones cedidos por el NADH y el FADH2 y tiene lugar tanto en la luz como en la oscuridad. En
la fotofosforilación se produce la oxidación de H2O a O2 con NADP+ como aceptor electrónico
fundamental y depende absolutamente de la energía de la luz. A pesar de sus diferencias, estos
dos procesos convertidores de la energía de gran eficiencia transcurren a través de mecanismos
muy similares.

2. TRANSPORTE ELECTRÓNICO
Existen tres aspectos mecánicamente similares entre la fosforilación oxidativa y la
fotofosforilación.

1-En ambos procesos interviene un flujo de electrones a través de una cadena de

transportadores ligados a membrana.
2-La energía libre puesta a disposición por este flujo de electrones “cuesta abajo” (exergónico)
está acoplada al transporte “cuesta arriba” de protones a través de una membrana impermeable
a los protones, conservándose la energía libre de oxidación de los combustibles metabólicos en
forma de potencial electroquímico transmembrana.
3-El flujo transmembrana de protones a favor de su gradiente de concentración mediante
canales proteicos específicos proporciona la energía libre para la síntesis de ATP, catalizada por
un complejo proteico asociado a la membrana (la ATP sintasa) que acopla el flujo de protones a
la fosforilación del ATP.

63
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

• FOSFORILACIÓN A NIVEL DE SUSTRATO

Transferir el grupo fosfato desde un sustrato fosforilado al ADP (o GDP) por una quinasa,
originándose ATP (o GTP). Sólo una fracción de la energía química potencialmente disponible en
la estructura del sustrato es aprovechada.

• FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

Reoxidar determinados nucleótidos reducidos y los e- y/o protones que se obtienen en el

proceso, ir pasándolos por una serie de transportadores de menor a mayor potencial redox. La
energía que se disipa en cada paso se acopla a la fosforilación del ADP dando ATP.

Las reacciones acopladas (rédox) son más eficientes en la liberación paulatina de la energía.

La mitocondria es el sitio en donde se realiza la fosforilación oxidativa en los eucariotas.

Las mitocondrias tienen dos membranas. La membrana mitocondrial externa es
fácilmente permeable a pequeñas moléculas e iones, que se mueven libremente a través
de canales transmembrana compuestos por una familia de proteínas integrales
membrana llamadas porinas.
La membrana interna es impermeable a la mayoría de moléculas pequeñas e iones,
incluido el protón (H+); las únicas especies que cruzan esta membrana lo hacen a través
de transportadores específicos.

64
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

Genera gradientes iónicos.

Compartimentación de funciones metabólicas.

Todas las rutas oxidativas de combustible biológico

menos la glucólisis.

2.1 GRUPOS TRANSPORTADORES DE ELECTRONES

La fosforilación oxidativa empieza con la entrada de electrones por la cadena respiratoria. La

mayor parte de dichos electrones provienen de la acción de deshidrogenasas que captan
electrones de vías catabólicas y los canalizan hacia aceptores universales de electrones:
nucleótidos de nicotinamida (NAD+ o NADP+) o nucleótidos de flavina (FMN o FAD).

Las deshidrogenasas ligadas a nucleótidos de nicotinamida catalizan reacciones reversibles de

los tipos generales siguientes:

(1) NAD Y FLAVOPROTEÍNAS

a) DESHIDROGENASAS LIGADAS A NAD+ O NADP+

Sustrato reducido + NAD+  sustrato oxidado + NADH + H+

Sustrato reducido + NADP+  sustrato oxidado + NADPH + H+

NADPH + NAD+  NADP+ + NADH

Nucleótido de nicotinamida transhidrogenasa.

La mayoría de deshidrogenasas que participan en el catabolismo son específicas para el NAD

como aceptor electrónico. Algunas están localizadas en el citosol y otras en la mitocondria.

65
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

Las deshidrogenasas ligadas al NAD eliminan dos átomos de hidrógeno de sus sustratos, uno es
transferido en forma de ion hidruro (H-) al NAD+ mientras que el otro aparece como H+ en el
medio. El NADH y el NADPH son transportadores electrónicos hidrosolubles que se asocian
reversiblemente con deshidrogenasas. El NADH transporta los electrones que provienen de las
reacciones catabólicas a su punto de entrada en la cadena respiratoria, el complejo de NADH
deshidrogenasa. El NADPH generalmente suministra electrones a reacciones anabólicas.

Las células mantienen reservas separadas de NADH y NADPH con potenciales redox diferentes
punto esto se consigue manteniendo las razones [forma reducida]/[forma oxidada]
relativamente alta para él NADPH y relativamente baja para el NADH. Ni el NAD ni el NADPH
pueden atravesar la membrana interna de la mitocondria, pero los electrones que transportan
pueden ser lanzados a través de ella indirectamente.

El NADPH suele suministrar e- a las reacciones anabólicas y no forma parte de la cadena.

b) LAS FLAVOPROTEÍNAS

Las flavoproteínas contienen un nucleótido de flavina, FMN o FAD, fuertemente unido, a veces
de manera covalente. El nucleótido de flavina oxidado puede aceptar un electrón (dando la
forma de semiquinona) o dos (produciendo FADH2 o FMNH2).

La transferencia electrónica se da gracias a que la flavoproteína tiene un potencial de reducción

mayor que el compuesto oxidado. El potencial de reducción estándar de un nucleótido de
flavina, a diferencia de lo que sucede con el NAD o el NADP, depende de la proteína a la que
está asociado, con lo que varía la estabilidad relativa de las formas oxidadas y reducidas.

Debido a que las flavoproteínas pueden participar en transferencias de uno o de dos electrones,
pueden actuar como intermedios entre reacciones en las que se ceden dos electrones (como
sucede en las deshidrogenaciones) y en aquellas en las que se acepta un solo electrón (como en
la reducción de una quinona a hidroquinona).

66
BIOQUÍMICA
Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

(2) UBIQUINONA (Q O COENZIMA Q)

La ubiquinona (también llamada coenzima Q o Q) es una benzoquinona liposoluble que

contiene una larga cadena lateral isoprenoide que transportan electrones en cadenas
de transferencia electrónica asociadas a membranas. La ubiquinona puede aceptar un
electrón, transformándose en el radical semiquinona (*QH), o dos electrones, formando
ubiquinol (QH2).
Es capaz de actuar como puente entre un dador de dos electrones y un aceptor de un
electrón; debido a que la ubiquinona es al mismo tiempo pequeña e hidrofóbica, puede
difundir libremente dentro de la bicapa lipídica de la membrana mitocondrial interna y
puede hacer de lanzadera de equivalentes de reducción entre otros transportadores
electrónicos de la membrana menos móviles. Además, debido a que transporta tanto
electrones como protones, juega un papel central en el acoplamiento del flujo
electrónico al movimiento de protones.

(3) PROTEÍNAS CON HIERRO: CITOCROMOS Y PROTEÍNAS FERROSULFURADAS

A) CITOCROMOS

Los citocromos son proteínas con una intensa absorción de la luz visible característica, debida a
la presencia del grupo prostético hemo que contiene hierro. Las mitocondrias contienen tres
clases de citocromos: citocromos a, b (proteínas integrales de la MMI) y algún citocromo c
(soluble y periférica de la parte externa de la MMI).

Los cofactores hemo de los citocromos a y b están unidos muy fuertemente (no covalente) a
sus proteínas asociadas; los grupos hemo de los citocromos del tipo c están unidos de forma
covalente a través de residuos Cys. Transportan un único electrón (vía cofactor hemo: Fe3+ 
Fe2+). El Fe central coordinado a los derivados de los anillos de la porfirina. Los citocromos a, b,
o c, difieren por las adiciones en los anillos.

67
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

B) PROTEÍNAS FERROSULFURADAS

En las proteínas ferrosulfuradas, el hierro está presente no en forma de hemo sino en asociación
con átomos de azufre inorgánico o con átomos de azufre de residuos Cys de la proteína (o con
los dos al mismo tiempo). Estos centros ferrosulfurados (Fe-S) van desde estructuras sencillas
con un solo átomo de Fe coordinado a cuatro residuos Cys—SH con centros Fe-S más complejos
con dos o cuatro átomos de Fe.

Las proteínas ferrosulfuradas de Rieske son una variante de las anteriores, en las que un átomo
de Fe está coordinado con dos residuos His en lugar de con dos residuos Cys. Todas las
proteínas ferrosulfuradas participan en transferencias de un electrón en las que se oxida o
reduce uno de los átomos de Fe (Fe3+  Fe2+).

Contienen igual número de Fe que de átomos de sulfuro

68
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

2.2 CADENA TRANSPORTADORA

En la reacción global catalizada por la cadena respiratoria mitocondrial se transportan

electrones desde el NADH, el succinato u otro dador electrónico primario a través de las
flavoproteínas, la ubiquinona, las proteínas ferrosulfuradas y los citocromos y, finalmente, al O2.

En primer lugar, se han determinado experimentalmente los potenciales de reducción estándar

de los transportadores electrónicos individuales. Es de esperar que los transportadores
funcionen en orden de potenciales de reducción crecientes porque los electrones tienden a fluir
espontáneamente desde los transportadores de más bajo hacia los transportadores con E´o más
elevado. El orden de los transportadores deducido según este método es:

NADH→ Q→ citocromo b →citocromo c1 → citocromo c→ citocromo a →citocromo a3→ O2

Los potenciales de reducción estándar dependen de las concentraciones de las formas oxidadas
y reducidas.

69
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

A) LOS TRANSPORTADORES DE e- ACTUAN EN COMPLEJOS MULTIENZIMÁTICOS

Los transportadores de electrones de la cadena respiratoria están organizados en complejos

supramoleculares incrustados en membranas que se pueden separar físicamente.

El tratamiento suave de la membrana mitocondrial interna con detergentes permite la

resolución de cuatro complejos distintos de transportadores electrónicos, siendo cada uno de
ellos capaz de catalizar la transferencia electrónica a través de una porción de la cadena.

Los Complejos I y II catalizan la transferencia de electrones a la ubiquinona a partir de dos

dadores electrónicos diferentes: NADH (Complejo I) y succinato (Complejo II). El Complejo III
transporta electrones desde la ubiquinona reducida al citocromo c, y el Complejo IV completa
la secuencia transfiriendo electrones desde el citocromo c al O2.

electrones → Q (Complejos I y II)

Q → citocromo b → citocromo c1 → citocromo c (Complejo III)

citocromo c → citocromo a → citocromo a3 → O2 (Complejo IV)

• COMPLEJO I: NADH HASTA UBIQUINONA

El Complejo I, también llamado NADH: ubiquinona oxidorreductasa o NADH deshidrogenasa, es

un enzima enorme compuesto por 42 cadenas polipeptídicas diferentes, entre las que se
encuentra una flavoproteína que contiene FMN y como mínimo seis centros ferrosulfurados. La
microscopia electrónica de alta resolución muestra que el Complejo I tiene forma de L, con un
brazo de la L en la membrana y el otro prolongándose hacia la matriz. El Complejo I cataliza dos
procesos simultáneos forzosamente acoplados:

1-La transferencia exergónica hacia la ubiquinona de un ion hidruro del NADH y un protón de la
matriz expresado por:

NADH + H+ + Q → NAD + QH2

2-La transferencia endergónica de cuatro protones de la matriz hacia el espacio

intermembrana.

Por lo tanto, el Complejo I es una bomba de protones impulsada por la energía de la

transferencia electrónica, y la reacción que cataliza es vectorial: mueve los protones desde la
matriz, que se carga
negativamente (con la salida de
los protones) hacia el espacio
intermembrana, que se carga
positivamente.

La reacción global es:

NADH + 5HN+ + Q → NAD+ +

QH2 + 4HP+

N: cara negativa (matriz)

P: cara positiva (espacio
intermembrana)

70
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

• COMPLEJO II: SUCCINATO DESHIDROGENASA A UBIQUINONA

Es el único enzima del ciclo de Krebs unido a membrana. Aunque es más pequeño y sencillo que
el Complejo I, contiene cinco grupos prostéticos de dos tipos y cuatro subunidades proteicas
diferentes. Las subunidades C y D son proteínas integrales de membrana, cada una de ellas con
tres hélices transmembrana.

Contienen un grupo hemo (hemo b) y un sitio de unión para la ubiquinona, que es el aceptor
final de electrones en la reacción catalizada por el Complejo II. Las subunidades A y B se
extienden hacia la matriz; contienen tres centros 2Fe-2S, FAD unido y un sitio de unión para el
sustrato succinato. La ruta de transferencia de electrones desde el sitio de unión del succinato
al FAD, y a continuación a través de los centros Fe-S hasta al sitio de unión de Q.

El hemo b del Complejo II no se encuentra en la ruta directa de

transferencia electrónica; en su lugar podría servir para reducir
la frecuencia con la que los electrones “se pierden” fuera del
sistema, desplazándose del succinato al oxígeno molecular para
producir las especies reactivas de oxígeno (ROS) peróxido de
hidrógeno (H2O2) y el radical superóxido (O2-).

• Ruta de los electrones desde el NADH, succinato, acil graso-CoA y glicerol 3-fosfato a la
ubiquinona

Otros sustratos de las deshidrogenasas mitocondriales también pasan electrones a la cadena

respiratoria a nivel de la ubiquinona, pero no a través del Complejo II. El primer paso en la β-
oxidación de los acil graso-CoA, catalizado por la flavoproteína acil-CoA deshidrogenasa, implica
la transferencia de electrones desde el sustrato al FAD de la deshidrogenasa y a continuación a
la flavoproteína transferidora de electrones (ETF), que, a su vez, pasa sus electrones a la ETF:
ubiquinona oxidorreductasa. Este enzima pasa electrones a la cadena respiratoria al reducir la
ubiquinona.

71
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

El glicerol 3-fosfato, formado tanto a partir del glicerol liberado en la hidrólisis del triacilglicerol
como de la reducción de la dihidroxiacetona fosfato en la glucólisis, es oxidado por la glicerol 3-
fosfato deshidrogenasa. Este enzima es una flavoproteína localizada en la cara externa de la
membrana mitocondrial interna y, al igual que la succinato deshidrogenasa y la acil-CoA
deshidrogenasa, canaliza electrones hacia la cadena respiratoria, reduciendo la ubiquinona.

El efecto de cada uno de estos

enzimas transferidores de
electrones es contribuir a la
reserva de ubiquinona
reducida.

El QH2 formado en todas estas

reacciones es reoxidado por
el complejo III.

• COMPLEJO III: COMPLEJO DEL CITOCROMO bc1 O UBIQUINONA-CITOCROMO C

OXIDORREDUCTASA

El Complejo III acopla la transferencia de electrones desde el ubiquinol (QH2) al citocromo c con
el transporte vectorial de protones de la matriz al espacio intermembrana. El núcleo funcional
de un monómero consta de tres subunidades: el citocromo b con sus dos hemos (bh y bl); la
proteína ferrosulfurada de Rieske con sus dos centros 2Fe-2S, y el citocromo c1.

Se ha propuesto un modelo razonable para el paso de electrones y protones a través del

Complejo III a partir de su estructura y de detallados estudios bioquímicos de las reacciones
redox, el ciclo Q. La ecuación neta de las reacciones redox del ciclo Q es:

QH2 +2 cit c1 (oxidado) + 2HN+→ Q + 2 cit c1 (reducido) + 4HP+

El ciclo Q adapta el cambio entre el transportador de 2 electrones, la ubiquinona, y los

transportadores de 1 electrón, los citocromos, y explica la estequiometría medida de 4 protones
translocados por cada par de electrones que pasan del Complejo III al citocromo c (4 protones
salen del lado N al P por cada 2 e- transferidos). Aunque la vía de los electrones por este
segmento de la cadena respiratoria es complicada, el efecto neto de la transferencia es simple:
QH2 se oxida a Q, al tiempo que se reducen dos moléculas de citocromo c.
Después de que su único hemo acepte un electrón del Complejo III, el citocromo c se desplaza
hacia el Complejo IV para ceder el electrón a un centro de cobre binuclear.

72
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

-CITOCROMO C:

Su grupo hemo acepta 1 e- del complejo III (citocromo bc1) y lo cede a un centro de cobre
binuclear del complejo IV (citocromo oxidase).
Es una hemoproteína soluble del espacio intermembrana. El Fe del hemo
puede ser ferroso (Fe2+, reducido) o férrico (Fe3+, oxidado). Es el segundo
transportador de electrones móvil:
-La ubiquinona se mueve a través de la membrana.
-El cit c se mueve a través del espacio intermembrana.

• COMPLEJO IV: CITOCROMO OXIDASA, CITOCROMO C A O2

En el último paso de la cadena respiratoria, el Complejo IV (citocromo oxidasa), transporta

electrones desde el citocromo c al oxígeno molecular O2, reduciéndolo a H2O. El Complejo IV es
un enzima muy grande (13 subunidades; I, II, III importantes para su función) de la membrana
mitocondrial interna. La comparación de los complejos mitocondrial y bacteriano sugiere que
son esenciales tres subunidades para la función:

• La Subunidad II mitocondrial contiene 2 iones Cu que forman complejo con los grupos -SH de
dos residuos Cys en un centro binuclear que se parece a los centros 2Fe-2S de las proteínas
ferro-sulfuradas.
• La Subunidad I contiene 2 grupos hemo, designados a y a3, y otro ion cobre (CuB). El hemo a3
y el CuB forman un segundo centro binuclear que acepta los electrones del hemo a y los
transfiere al O2 unido al hemo a3.

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 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

La transferencia de electrones a través del complejo IV va del citocromo c al centro CuA, al hemo
a, al centro hemo a3-CuB y finalmente al O2. Ruta electrónica:

Cit c → CuA → hemo a → hemo a3-CuB → O2

Por cada cuatro electrones que pasan a través del complejo, el enzima consume cuatro
“sustrato” de la matriz (lado n), convirtiendo el O2 en 2H2O.

También utiliza la energía de esta reacción

redox para bombear un protón hacia el
espacio intermembrana (lado p) por cada
electrón que pasa, añadiéndose al potencial
electroquímico producido por el transporte
del protón impulsado por el potencial redox a
través de los Complejos I y III. (Bombea 1
protón al lado P por cada e- que pasa).

La reacción global catalizada por el complejo

IV es:

4Citc (reducido) + 8H+N + O2 → 4Citc

(oxidado) + 4H+P + 2 H2O

74
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

• RESPIRASOMA:

Los complejos mitocondriales se pueden asociar formando respirasomas. Cada vez hay más
pruebas de que en la mitocondria los complejos respiratorios se asocian fuertemente entre sí
en la membrana interna y forman respirasomas: combinaciones funcionales de dos o más
complejos de transferencia electrónica.

Por ejemplo, cuando se extrae suavemente el Complejo III de las membranas mitocondriales, se
encuentra asociado con el Complejo I y permanece asociado durante la electroforesis suave. La
cinética del flujo electrónico a través de la serie de complejos respiratorios sería muy diferente
en los dos casos extremos de asociación muy fuerte y de no asociación:
1- Si los complejos estuviesen fuertemente unidos, las transferencias electrónicas tendrían
lugar esencialmente a través de un estado sólido.
2- Si los complejos funcionasen separadamente, los electrones serían transportados entre
ellos por la ubiquinona y el citocromo c.
Las pruebas cinéticas apoyan la transferencia a través de un estado sólido y, por consiguiente,
apoyan el modelo del respirasoma.

La cardiolipina, un lípido abundante en la membrana mitocondrial interna, puede ser de

importancia crítica para la integridad de los respirasomas; su eliminación con detergentes o su
ausencia en ciertos mutantes de levaduras da lugar a una transferencia de electrones
mitocondrial defectuosa y a una pérdida de afinidad entre los complejos respiratorios.

Un supuesto respirasoma compuesto por los compuestos III y IV

2.3 GRADIENTE DE PROTONES Y FUERZA PROTÓN-MOTRIZ

La energía de la transferencia de electrones se conserva eficientemente en un gradiente de

protones. La transferencia de 2 electrones desde el NADH a través de la cadena respiratoria al
oxígeno molecular (O2) se puede describir como:

NADH + H+ + ½ O2 → NAD+ + H2O

El flujo espontáneo de los protones debido al gradiente electroquímico liberará una energía
capaz de producir un trabajo, que, en mitocondrias, cloroplastos y bacterias aeróbicas, será la
síntesis de ATP a partir de ADP y Pi.

Las proteínas en la cadena de transporte crean el gradiente de protones electroquímico por 3

medios:

1.- Transportando protones de modo activo a través de la membrana: Complejo I y Complejo IV.

2.- Eliminando protones químicamente de la matriz: reducción de CoQ y reducción de oxígeno.

75
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

3.- Liberando protones al espacio intermembrana: oxidación de QH2.

La fuerza protón-motriz es la energía almacenada en un gradiente electroquímico y tiene dos

componentes: la energía química potencial debida a la diferencia en concentración de las
especies químicas (H+) entre las dos regiones separadas por la membrana, y la energía eléctrica
potencial que se origina con la separación de cargas cuando un protón atraviesa la membrana
sin un contraión.

La variación en energía libre para la generación de un gradiente electroquímico por una bomba
iónica es:

Cuando los protones fluyen espontáneamente a favor de su gradiente electroquímico, hay

energía disponible para producir trabajo. Permite conservar el 90% de la energía liberada en la
oxidación de un mol de NADH.

• Durante la fosforilación oxidativa se producen especies de oxígeno reactivas

Diversos pasos en la ruta de reducción del oxígeno en la mitocondria tienen el potencial para
producir radicales libres muy reactivos que pueden dañar las células.

-Formación de ROS en mitocondrias durante la fosforilación oxidativa y defensas

mitocondriales:

Cuando la velocidad de entrada de

electrones en la cadena respiratoria y la
velocidad de transferencia de
electrones a través de la cadena no está
ajustada, aumenta la formación de
radical superóxido (O-2) en los
Complejos I y III, a medida que el radical
ubiquinona parcialmente reducido (Q-)
cede un electrón al O2. El superóxido
actúa sobre la aconitasa; una proteína
4Fe-4S, liberando Fe2+. En presencia de
Fe2+, la reacción de Fenton conduce a la
formación del radical hidroxilo (OH)
libre muy reactivo.

76
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

Las reacciones mostradas en azul defienden la célula frente a los efectos lesivos del superóxido.

El glutatión reducido (GSH) cede electrones para la reducción del H2O2 y de residuos Cys
oxidados (—S—S—) en enzimas y otras proteínas, y el GSH se regenera a partir de la forma
oxidada (CSSC) por reducción con NADPH.

La ubiquinona es “porosa” de modo natural y facilita la reducción parcial de dianas que no son
el complejo III. La transferencia de electrones individuales conlleva la formación de radicales
libres.

Un método por el que las células pueden corregir la producción de radicales libres es la lanzadera
del glutatión.
Las especies de oxígeno reactivas, que son potencialmente muy dañinas, producidas en la
mitocondria se inactivan gracias a un conjunto de enzimas protectores, entre los que se cuentan
la superóxido dismutasa y la glutatión peroxidasa.
Las plantas, los hongos y los eucariotas unicelulares tienen la ruta típica de transferencia
electrónica sensible al cianuro y otra de oxidación del NADH resistente al cianuro.
Las mitocondrias de plantas tienen mecanismos alternativos para oxidar el NADH a NAD sin
pasar por los complejos III y IV, disipándose parte de la, energía como calor, que puede ser
beneficioso para la planta.
3. SÍNTESIS DE ATP. FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
3.1 MODELO QUIMIOSMÓTICO

Según el modelo quimiosmótíco, la fuerza protón-motriz impulsa la síntesis de ATP a medida

que los protones fluyen de manera pasiva de vuelta hacia la matriz a través de un poro asociado
a la ATP sintasa. La ecuación de la síntesis de ATP se escribe algunas veces como:

ADP + Pi + nH+P → ATP + H2O + nH+N

Modelo quimiosmótico: las reacciones enzimáticas en las que intervienen, simultáneamente,

una reacción química y un proceso de transporte.

En esta representación de la teoría quimiosmótica aplicada a la mitocondria, los electrones del

NADH y otros sustratos oxidables pasan a través de una cadena de transportadores distribuidos
asimétricamente en la membrana interna. El flujo electrónico está acompañado de transferencia
de protones a través de la membrana, que producen un gradiente químico (ΔpH) y un gradiente
eléctrico (Δψ). La membrana mitocondrial interna es impermeable a los protones; los protones
sólo pueden volver a penetrar en la matriz a través de canales específicos de protones (Fo). La
fuerza protón-motriz que impulsa el retorno de los protones a la matriz proporciona la energía
para la síntesis de ATP catalizada por el complejo F1, asociado con Fo.

77
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

3.2 MECANISMO DE LA SÍNTESIS DE ATP. LA ATP SINTASA.

• La ATP sintasa tiene dos dominios funcionales, F0 y F1

La ATP sintasa mitocondrial es una ATPasa similar en estructura y mecanismo a las ATP sintasas
de cloroplastos y bacterias. Este gran complejo enzimático de la membrana mitocondrial
interna cataliza la formación de ATP a partir de ADP y Pi, acompañado por el flujo de protones
desde el lado p al n de la membrana. La ATP sintasa, también denominada Complejo V, tiene
dos componentes distintos:

-F1, una proteína periférica de membrana que cataliza la síntesis del ATP.
(F1 = primer factor identificado como necesario para la fosforilación oxidativa).

-Fo, que es una proteína integral de membrana con el "poro" protónico transporta protones
desde el espacio intermembrana a la matriz, disipando el gradiente de protones. La energía se
transfiere a F1, para catalizar la fosforilación del ADP. (Fo = sensible a la oligomicina).

• Mecanismo catalítico de F1

Los experimentos de intercambio isotópico con F1 purificado muestran un

hecho notable sobre el mecanismo catalítico del enzima: en la superficie
del enzima, la reacción:

ADP + Pi ↔ATP + H2O

es fácilmente reversible: la energía libre de la síntesis de ATP es cercana

a cero.

Cinéticamente, se ha comprobado que:

ΔGo de síntesis de ATP por ATPsintasa≈0 (en la superficie del enzima)
ΔGo de hidrólisis de ATP libre en solución = -30,5 kJ / mol
El enlace pirofosfato terminal del ATP se rompe y rehace repetidamente
antes de que el Pi abandone la superficie del enzima. Con el Pi libre para
dar tumbos en su sitio de unión, cada hidrólisis inserta al azar enzima de
las cuatro posiciones del Pi. Esta reacción de intercambio se da en
complejos FoF1, sin energía (sin gradiente protónico) y con F1 aislado; el
intercambio no requiere el aporta de energía.

• El gradiente de protones impulsa la liberación del ATP de la superficie del enzima

Aunque la ATP sintasa equilibra el ATP con ADP + Pi, el ATP recién sintetizado no abandona la
superficie del enzima en ausencia de un gradiente de protones. Es el gradiente protónico el que
provoca que el enzima libere el ATP de su superficie. El diagrama de la coordenada de la reacción
del proceso muestra la diferencia entre el mecanismo de la ATP sintasa y el de muchos otros
enzimas que catalizan reacciones endergónicas.

Para que la síntesis de ATP sea continua, el enzima debe ciclarse entre una forma que une ATP
muy fuertemente y una forma que libera el ATP. La base química de estos cambios de forma
reside en la estructura de la ATP sintasa.

78
 BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

• Diagrama de la coordenada de reacción para la ATP sintasa y para un enzima más típico.

En una reacción catalizada por un enzima típico (izquierda), alcanzar el estado de transición (++)
entre sustrato y producto es la principal barrer energética que se ha de superar.

En la reacción catalizada por la ATP sintasa

(derecha), la principal barrera es la
liberación del ATP del enzima, no su
formación. La variación de energía libre
para la formación de ATP a partir de ADP y
Pi en solución acuosa es grande y positiva,
pero en la superficie del enzima la muy
fuerte unión del ATP proporciona
suficiente energía de unión para hacer que
la energía libre del ATP ligado al enzima sea
próxima a la del ADP + Pi, por lo que la
reacción es fácilmente reversible. La
constante de equilibrio es próxima a 1.

La fuerza protón-motriz proporciona la energía libre necesaria para la liberación del ATP.

• Complejo de la ATPsintasa mitocondrial

-ATP sintasoma: asociación de la ATP sintasa y las 2 translocasas.

79
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

F1 cataliza ADP + Pi ↔ATP

La catálisis rotacional es la clave en el mecanismo de unión y cambio de la síntesis de ATP

Se propuso un mecanismo de catálisis rotacional en el que los tres sitios activos situados sobre
F1 alternan en la catálisis de la síntesis de ATP. Una subunidad β determinada empieza en
conformación β-ADP, que une ADP y Pi del medio. A continuación, la subunidad cambia de
conformación, adoptando la forma β-ATP, que une y estabiliza fuertemente el ATP, hecho que
comporta el rápido equilibrio del ADP + Pi con el ATP en la superficie del enzima. Finalmente, la
subunidad cambia hacia la conformación β-vacía, que tiene una afinidad muy baja por el ATP,
por lo que el ATP recién sintetizado se libera de la superficie del enzima.

Cuando esta subunidad vuelve a adoptar la conformación β-ADP, se une ADP + Pi, con lo que se
inicia otra ronda de catálisis.

Los cambios de conformación, esenciales en este mecanismo, están impulsados por el paso de
protones a través de la porción Fo de la ATP sintasa.

Las tres subunidades β interaccionan de tal modo que cuando una adopta la conformación β-
vacía, la vecina de un lado ha de adoptar la conformación β-ADP y la del otro la β-ATP.

Por lo tanto, una rotación completa de la subunidad y provoca que cada subunidad β se cicle a
través de sus tres conformaciones posibles, y en cada rotación se sintetizan y se liberan de la
superficie del enzima 3 moléculas de ATP.

80
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

Modelo de cambio de unión para la ATP sintasa.

El complejo F1, tiene tres sitios

de unión de nucleótidos de
adenina no equivalentes, uno
por cada par de subunidades α y
β. En un momento determinado,
uno de estos sitios está en la
conformación β-ATP (que une
ATP fuertemente), un segundo
está en la conformación β-ADP
(unión débil) y un tercero está en
la conformación β-vacía (unión
muy débil).

La fuerza protón-motriz hace que el eje central subunidad y, mostrada como una flecha verde,
rote y que se ponga en contacto con cada par de subunidades αβ de forma sucesiva. Esto
produce un cambio de conformación cooperativo en el que el sitio β-ATP se convierte en la
conformación β-vacía y el ATP se disocia; el sitio β-ADP se convierte en la conformación β-ATP,
que promueve la condensación del ADP y Pi unidos para formar ATP; y el sitio β-vacío se
convierte en un sitio β-ADP, que une débilmente ADP y Pi que difunden desde el disolvente.

El acoplamiento quimiosmótico permite que las estequiometrías del consumo de O2 y de la

síntesis de ATP no se correspondan con números enteros.

Razón P/O ( P/2 e-): estequiometría que indica la formación de ATP por O2 [ la oxidación del
NADH, FADH2 (succinato)]

Antes de la aceptación general del modelo quimiosmótico para la fosforilación oxidativa se

pensaba que la ecuación para la reacción global tendría la siguiente forma:

xADO + xPi + ½ O2 + H++ NADH → xATP + H2O + NAD+

donde x = P/O (incorporación de Pi al ATP/consumo de oxígeno), y se consideraba que debía ser

un número entero (3,2 para NADH y FADH2, respectivamente).

El modelo quimiosmótico resalta la importancia del número exacto de e- que se van moviendo
en todo el sistema (transporte electrónico + síntesis de ATP).

Valor consenso de protones que se bombean por cada 2 e-: 10 y 6 para el NADH y succinato,
respectivamente. El de protones necesario para impulsar la síntesis de 1 ATP es 4, de los que 1
usa en el transporte de Pi, ATP y ADP a través de la membrana mitocondrial interna.

Razones P/O basada en protones: 2,5 y 1,5 para el NADH y FADH2

NADH: 10/4 = 2,5
FADH2: 6/4 = 1,5

El acoplamiento entre la transferencia electrónica y la síntesis de ATP es recíproco: no hay

síntesis de ATP cuando se inhibe el transporte electrónico y no hay transporte electrónico
cuando se inhibe la ATP sintasa.

81
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

¿Podría sintetizarse ATP si se reemplaza la transferencia electrónica por la producción artificial

de un gradiente de protones? Sí, la fuerza protón-motriz es por sí sola suficiente para impulsar
la síntesis de ATP pueden desacoplarse ambos procesos mediante: fragmentación mitocondrial
y reactivos químicos, como el 2,4-dinitrofenol (DNP), inóforos, …

3.3 PROCESOS DE TRANSPORTE ESENCIALES PARA LA SÍNTESIS DE ATP

La NADH deshidrogenasa de la membrana mitocondrial interna de células animales sólo puede

aceptar electrones del NADH de la matriz. En procariotas, los orgánulos no segregan la
maquinaria, de modo que todos los transportadores electrónicos pueden alimentar fácilmente
la cadena de transporte electrónico.

En (eucariotas) animales, la segregación organular hace que el NADH generado en la glucolisis

citosólica al interior de la mitocondria por sistemas de lanzadera, ya que la NADH
deshidrogenasa (complejo I) de la MMI sólo puede aceptar e- del NADH de la matriz. Estos
sistemas son la lanzadera del malato-aspartato y la lanzadera del glicerol-3-fosfato.

A) LANZADERA DEL MALATO-APARTATO

Esta lanzadera para transportar equivalentes de reducción desde el NADH citosólico a la matriz
mitocondrial se utiliza en hígado, riñón y corazón.
1- El NADH del citosol (espacio intermembrana) pasa dos equivalentes de reducción al
oxalacetato, produciendo malato.
2- El malato atraviesa la membrana
interna por ei transportador de
malato-α-cetoglutarato.
3- En la matriz el malato pasa dos
equivalentes de reducción al NAD+; el
NADH resultante es oxidado por la
cadena respiratoria; el oxalacetato
formado a partir del malato no puede
pasar directamente al citosol.
4- Se transamina primero a aspartato
que
5- puede salir vía el transportador de
glutamato-aspartato.
6- En el citosol se regenera el
oxalacetato, con lo que completa el
ciclo.

82
 Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa
BIOQUÍMICA

B) LANZADERA DEL GLICEROL-3-FOSFATO

Este medio alternativo para transportar equivalentes de reducción desde el citosol a la matriz
mitocondrial actúa en el músculo esquelético y en el cerebro.

En el citosol, la dihidroxiacetona fosfato acepta dos

equivalentes de reducción del NADH en una reacción
catalizada por la glicerol 3-fosfato deshidrogenasa
citosólica.

Un isoenzima de ésta unido a la cara exterior de la

membrana interna transfiere dos equivalentes de
reducción desde el glicerol 3-fosfato del espacio
intermembrana a la ubiquinona.

4. REGULACIÓN DE LA FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

La fosforilación oxidativa sintetiza la mayor parte del ATP que se produce en las células
aeróbicas. La oxidación completa de una molécula de glucosa a CO2 da lugar a la
formación de 30 o 32 ATP.
Aunque no lo desarrollaremos, la fosforilación oxidativa desde el NADH hasta el
citocromo c funciona cerca del equilibrio, mientras que la reacción de la citocromo
oxidasa (último paso) es irreversible → punto potencial de control (disponibilidad del
citocromo c reducido).
La fosforilación oxidativa está regulada genéricamente por las necesidades celulares de
energía, reflejadas en la tasa respiratoria (consumo de O2) de la mitocondria.
1-La tasa respiratoria está limitada por la [ADP] intracelular (sustrato aceptor del Pi):
esta dependencia se llama control por aceptor de la respiración.
Esta limitación puede ser espectacular en algunos tejidos, Razón del control por
aceptor: Vmax consumo O2 con ADP / Vbasal consumo O2 sin ADP = 10
2-Razón de la acción de masas del sistema ATP-ADP: [ATP]/[ADP] [Pi]

Cuando aumenta la velocidad de algunos procesos que requieren energía (ej. síntesis de
proteínas), se produce un aumento en la velocidad de degradación del ATP a ADP y Pi,
disminuyendo el cociente de la acción de masas. Con más ADP disponible para la fosforilación
oxidativa aumenta la velocidad de la respiración, lo que da lugar a la regeneración de ATP.

Suele ser elevado  sistema ATP-ADP casi completamente fosforilado, pero si [ATP] , [ADP] ,
y en conjunto, la razón , lo que aumenta la tasa respiratoria para generar más ATP.

Cuando la razón vuelve a sus valores normales altos, la tasa respiratoria vuelve a disminuir. El
ATP se forma a la misma velocidad en que es requerido por las actividades celulares, de modo
que la razón de masas del sistema ATP-ADP fluctúa poco en la mayor parte de los tejidos.

83
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

No solo está regulada de modo primario por la disponibilidad del sustrato ADP, Pi, (razón
[ATP]/[ADP] [Pi]), sino también por el sustrato NADH (razón [NADH / [NAD+]).

• HIPOXIA

En las células hipóxicas se produce un desequilibrio entre la entrada de electrones procedentes

de la oxidación de combustibles en la matriz mitocondrial y la transferencia de electrones al
oxígeno molecular, lo que da lugar a un incremento en la formación de especies de oxígeno
reactivas. Además del sistema de la glutatión peroxidasa, las células tienen otras dos líneas de
defensa contra las ROS.

Célula hipóxica = cesa transporte de e y bombeo de

protones → desaparece la fuerza protón-motriz

¿Podría la ATPsintasa operar en sentido inverso?

Sí.

¿Cómo se evita? Por el inhibidor proteico de F1 (IF1)

mitocondrial, activo a pH bajo, cuando el
transporte de electrones se detiene.

Fuente principal de obtención de ATP en célula

hipóxica: glucolisis→ formación de ácidos (pirúvico
y láctico) → ↓ pH citosólico y mitocondrial → IF1
tetramérico (inactivo) se dimeriza (activo) y se
asocia a 2 moléculas de ATPsintasa, inhibiéndolas.

Células hipóxicas:  ROS  deben  las defensas

antioxidantes

El factor inducible por la hipoxia (HiF-1) regula U expresión génica para reducir la formación
de ROS.

En condiciones de baja concentración de oxígeno (hipoxia), se sintetiza HIF-1 en mayor cantidad,

que actúa como factor de transcripción que incrementa la síntesis del transportador de glucosa,
enzimas glucolíticos, piruvato deshidrogenasa quinasa (PDH quinasa), lactato deshidrogenasa,
una proteasa que degrada la subunidad C0X4-1 de la citocromo oxidasa y la subunidad COX4-2
de la citocromo oxidasa. Estos cambios contrarrestan la formación de ROS al disminuir el
suministro de NADH y FADH2 y hacer que la citocromo oxidasa del Complejo IV sea más efectiva.

• MITOCONDRIAS Y TERMOGÉNESIS

En el tejido adiposo marrón de los recién nacidos, la transferencia de e- está desacoplada (vía
la proteína termogenina mitocondrial) de la síntesis de
ATP, por lo que la energía de la oxidación de los
combustibles se disipa en forma de calor metabólico, la
oxidación de combustibles no sirve para producir ATP, sino
para generar calor termogenina (UPC1): proteína
desacoplante. Los animales hibernantes usan la
termogenia con el mismo fin.

84
BIOQUÍMICA Tema 5: Cadena de transporte y fosforilación oxidativa

• REGULACIÓN DE LAS RUTAS PRODUCTORAS DE ATP

Las concentraciones relativas de ATP y ADP controlan las

velocidades de trasferencia electrónica y fosforilación oxidativa,
junto a las velocidades del ciclo de Krebs, la oxidación del
piruvato y la glucólisis.

85
BIOQUÍMICA

3.METABOLISMO
CELULAR
METABOLISMO DE
GLÚCIDOS

86
 Tema 6: Introducción al metabolismo.
BIOQUÍMICA

TEMA 6: INTRODUCCIÓN AL METABOLISMO

1. INTRODUCCIÓN
El metabolismo es el conjunto de reacciones químicas, catalizadas por enzimas, que tienen
lugar en un organismo o ser vivo, y en particular en una célula.

Finalidades:

-Obtención energía, para realizar las funciones del organismo, como la realización de trabajo
mecánico (contracción muscular, movimientos celulares) y el transporte activo de iones y
moléculas, etc.

-Obtención de monómeros a partir de la degradación de macromoléculas exógenas que se

ingieren con los nutrientes.

-Síntesis de macromoléculas endógenas (polisacáridos, lípidos, proteínas, ácidos nucleicos, etc.)

partiendo de los monómeros. Este proceso requiere energía.

-Síntesis y degradación de biomoléculas con funciones especializadas, como pueden ser

vitaminas u hormonas.

2. CLASIFICACIÓN DE LOS ORGANISMOS EN FUNCIÓN DE LA FUENTE DE ENERGÍA Y DE

CARBONO QUE UTILIZAN
-Según la fuente de energía:
 Fotótrofos: luz del sol.
 Quimiótrofos: compuestos químicos.
-Quimioórgano: si la obtienen de reacciones químicas orgánicas.
-Quimiolito: si la obtienen de reacciones químicas inorgánica.
-Según la fuente de carbono:
 Autótrofos: CO2
 Heterótrofos: carbono orgánico

87
 Tema 6: Introducción al metabolismo.
BIOQUÍMICA

Relación de los seres vivos con el oxígeno molecular:

•Aerobios o aerobios estrictos: organismos que sólo pueden vivir en presencia de oxígeno.

• Anaerobios o anaerobios estrictos: deben vivir en ausencia total del mismo.

• Anaerobios facultativos: seres vivos son capaces de vivir tanto en ausencia como en presencia
de oxígeno.

3. RUTAS METABÓLICAS: CATABOLISMO Y ANABOLISMO

• El metabolismo consta de reacciones químicas que requieren energía y reacciones que la
liberan. Dichas reacciones químicas están acopladas (son secuenciales); un conjunto de
reacciones constituye una vía o ruta metabólica. Estas reacciones permiten el desarrollo de
procesos vitales como el crecimiento, la diferenciación y la reproducción del ser vivo.

• Las reacciones que componen una ruta metabólica:

-Deben ser específicas.
-El conjunto de reacciones debe ser termodinámicamente favorable, de forma que el balance
global de la ruta transcurra con ∆G < 0.

Rutas metabólicas (fases): las rutas metabólicas son interdependientes.

•Rutas catabólicas o catabolismo: implica las reacciones degradativas y que sirven para
producir energía.

•Rutas anabólicas o anabolismo: implica reacciones sintetizadoras, y requieren energía.

•Rutas anfibólicas: aquellas que, en función de las condiciones energéticas de la célula,

pueden actuar como una ruta catabólica o anabólica.

•Rutas anapleróticas: agrupan reacciones metabólicas destinadas a la síntesis de moléculas

para reponer en una ruta metabólica central (ej: en el ciclo de Krebs).

Estrategia básica del metabolismo:

88
 BIOQUÍMICA Tema 6: Introducción al metabolismo.

• Comparación de las características principales del catabolismo y el anabolismo:

-Catabolismo: Degradativo, Normalmente oxidativo, Genera energía, produce ATP. Los

productos finales e intermediarios actúan como materias primas del anabolismo. Genera
desechos que se excretan al entorno.

-Anabolismo: Sintético, Normalmente reductivo, Utiliza energía, consumen ATP. Los productos
finales actúan como materias primas del catabolismo. Utiliza nutrientes del entorno.

• Funciones del ATP y el NADPH en el metabolismo.

El ATP y el NADPH, generados a través de la

degradación de metabolitos complejos como los
hidratos de carbono, los lípidos y las proteínas, son
fuentes de energía libre para las reacciones
biosintéticas y otras.

4. INTERCONEXIÓN DE LAS RUTAS METABÓLICAS

4. 1 VISIÓN GENERAL DEL CATABOLISMO:

-Etapa I: los polímeros se degradan en monómeros que

son absorbidos por las células y comienzan.

-Etapa II: su degradación a compuestos intermediarios.

-Etapa III: en la mitocondria, se produce la oxidación

completa de las moléculas y la obtención de energía.

Aspectos generales del catabolismo.

Los metabolitos complejos como los hidratos de

carbonos, las proteínas y los lípidos son degradados
primero hasta sus unidades monoméricas, sobre todo
glucosa, aminoácidos, ácidos grasos y glicerol, y luego
hasta el intermediario común, acetil-CoA.

El grupo acetilo es oxidado a CO2 a través del ciclo del

ácido cítrico con reducción concomitante del NAD+ y
FAD a NADH y FADH2.

La reoxidación del NADH y FADH2 por el O2 durante el

transporte de electrones y la fosforilación oxidativa
produce H2O y ATP.

89
 Tema 6: Introducción al metabolismo.
BIOQUÍMICA

4.2 VISIÓN GENERAL DEL ANABOLISMO:

-Etapa I: comienza la síntesis de compuestos

intermediarios.

-Etapa II: se transforman en monómeros.

-Etapa III: polimerizan obteniendo

macromoléculas.

5. REGULACIÓN DEL METSBOLISMO

1. Control de la cantidad de enzima:
- Control de la velocidad de síntesis de la enzima
- Control de la velocidad de degradación de la enzima
Enzimas constitutivas: están siempre en cantidades casi constantes en una determinada célula.
Enzimas inducibles: se sintetizan solamente en respuesta a la presencia de ciertos sustratos.

Es un proceso lento y costoso; supone un enorme esfuerzo energético: para sintetizar la

proteína enzimática y para controlar la síntesis de la enzima a nivel de la transcripción del
DNA.
Esta regulación se realiza a largo plazo.

2. Control de la actividad de la enzima:

-Por mecanismos comunes: concentraciones intracelulares de sustratos y del cofactor, el pH o

la temperatura.

-Por mecanismos específicos:

-Regulación no covalente: interacción del efector con la enzima por enlaces iónicos o de
fuerzas de Van der Waals. Es una regulación a corto plazo y dependiente de la concentración
del efector. Regulación de tipo intrínseco.
Tipos:
-isostérico
-alostérico: retroinhibición (feed-back) y proactivación (feed-forward).
-Regulación covalente: modificación covalente de la enzima; ej: fosforilación. Regulación
más permanente, que depende de la concentración de 2º mensajeros hormonales.
Regulación de tipo extrínseco.

90
BIOQUÍMICA Tema 6: Introducción al metabolismo.

3. Compartimentación celular

Permite un control del metabolismo basado en la distribución espacial y en la existencia de

barreras físicas (membranas), que controlan la disponibilidad de sustratos, cofactores y enzimas
en cada lugar.
• Esto lleva a la especialización a nivel de orgánulos y a nivel tisular.
• La compartimentación mantiene separadas reacciones opuestas.
• Isoenzimas: enzimas con la misma actividad, que están situadas en compartimentos
diferentes y poseen diferente codificación genética.

4. Control hormonal

Las hormonas son moléculas sintetizadas y secretadas por diferentes glándulas endocrinas, y
actúan como mensajeros químicos; estimulan o inhiben rutas metabólicas. Coordinan las
relaciones metabólicas entre distintos tejidos, regulando la modificación covalente reversible
(ej: fosforilacióndesfosforilación) de enzimas clave.

5. Control mediante el estatus energético de la célula

-La carga energética podría tener un valor comprendido entre 0 (todo en forma de AMP) y 1
(todo en forma de ATP). Una carga energética elevada inhibe las rutas catabólicas y estimula
las anabólicas.

-El potencial de fosforilación depende de la concentración de fosfato inorgánico (Pi).

La carga energética regula el metabolismo

91
 Tema 6: Introducción al metabolismo.
BIOQUÍMICA

Localización de algunas de las rutas metabólicas en una célula eucariota

92
 Tema 7: Digestión de glúcidos
BIOQUÍMICA

METABOLISMO DE GLÚCIDOS
TEMA 7: DIGESTIÓN DE GLÚCIDOS
1. INTRODUCCIÓN
El metabolismo de glúcidos es una de las principales rutas del metabolismo celular. Entre los
azúcares utilizados como fuente de energía para la célula, destaca principalmente, la glucosa.

Las principales rutas metabólicas que se van a estudiar están relacionadas estrechamente con
la producción de energía y de poder reductor, ya que la energía que se utiliza normalmente
procede principalmente del metabolismo de los azúcares, sobre todo de la glucosa.

Las principales vías del metabolismo de la glucosa:

•Las rutas relacionadas con el glucógeno, polisacárido de reserva energética a corto plazo en
los animales. Es de gran importancia para mantener un correcto estatus energético en el
organismo, especialmente en músculo e hígado. La glucogenólisis comprende las reacciones de
degradación, mientras que la glucogenogénesis incluye las vías de síntesis a partir de la glucosa.

•Las rutas relacionadas con los monosacáridos. Entre ellas la principal ruta catabólica es la
glucólisis, ruta degradativa de la glucosa que sirve para obtener energía de esta molécula y
también de otros monosacáridos. La gluconeogénesis es la principal ruta anabólica que sintetiza
glucosa a partir de intermediarios metabólicos. La ruta de las pentosas fosfato es la principal
fuente de obtención de poder reductor en forma de NADPH, aunque también es de gran interés
debido a que permite obtener una gran variedad de monosacáridos.

93
 Tema 7: Digestión de glúcidos
BIOQUÍMICA

•Como intermediario metabólico, el piruvato desempeña un papel importante como vía de

entrada en las rutas catabólicas de fermentaciones (láctea y alcoólica) y la descarboxilación
oxidativa del piruvato. También servirá de sustrato para la síntesis de glucosa.

2. CLASIFICACIÓN DE LOS GLÚCIDOS SEGÚN SU DIGESTIÓN

En función de su comportamiento durante el proceso de digestión en organismos superiores,
los hidratos de carbono se pueden dividir en dos grandes grupos:

 No digeribles (Fibra): son polisacáridos complejos que no se pueden digerir porque el

organismo no posee las enzimas necesarias para hidrolizar los enlaces que unen los distintos
monosacáridos. Estimulan la peristalsis intestinal y facilitan el correcto tránsito intestinal.
Ralentizan el vaciamiento gástrico, aumenta su distensión y prolonga la sensación de saciedad
disminución en la absorción de glucosa, lípidos y aminoácidos, que ayuda a regular los niveles
de glucemia y colesterol.
-Celulosa
-Inulina
-Agar
 Digeribles:

-Almidón
-Sacarosa y Lactosa
-Glucógeno

3. ENZIMAS DIGESTIVAS DE GLÚCIDOS Y PRODUCTOS OBTENIDOS

La digestión del almidón, principal hidrato de carbono de la dieta viene determinada por el tipo
de estructura que esté implicada. Así, la estructura amilosa, estructura lineal con enlaces
α(1→4), va a ser digerida por la enzima amilasa. Esta enzima se secreta ya en la saliva (amilasa
salival), iniciando desde la deglución el proceso digestivo del almidón, si bien es la amilasa
pancreática secretada en el intestino la que termina de hidrolizar la mayor parte de la amilosa.
La amilasa rompe los enlaces α(1→4) del almidón, aunque no hidroliza enlaces contiguos, de tal
forma que va rompiendo uno de cada dos o tres enlaces.

Como resultado de esta actividad se obtienen disacáridos y trisacáridos de glucosa: la maltosa

y la maltotriosa, respectivamente.

Esta misma enzima, la amilasa, también ataca parcialmente a la estructura amilopectina del
almidón, estructura ramificada con una estructura central de moléculas de glucosa con enlaces
α(1→4) y puntos de ramificación α(1→6).

Sólo puede hidrolizar enlaces α(1→4) que estén

alejados de los enlaces α(1→6), de tal forma que
la actuación de la amilasa sobre la estructura
amilopectina del almidón origina tres productos
distintos: la maltosa, la maltotriosa (como la
obtenida a partir de la amilosa) y las llamadas
dextrinas límite o α-dextrinas son los fragmentos
restantes del almidón que no han podido ser
hidrolizados por la amilasa debido a la presencia
del enlace α(1→6).

94
 Tema 7: Digestión de glúcidos
BIOQUÍMICA

Estas moléculas de dextrina tienen entre cuatro y nueve moléculas de glucosa unidas enlaces
α(1→4) y presentan un punto de ramificación mediante un enlace α(1→6). Las dextrinas
terminan de ser hidrolizadas por acción de la isomaltasa, enzima que hidroliza el enlace α(1→6),
liberando moléculas de maltosa v maltotriosa. o bien fragmentos de varias glucosas que serán
hidrolizados nuevamente por la amilasa, originando moléculas de maltosa y maltotriosa.
Finalmente, las moléculas de maltosa y maltotriosa se digieren por la maltasa, que hidroliza los
enlaces α(1→4) de disacáridos y trisacáridos, liberando moléculas de glucosa, que serán
incorporadas por transportadores específicos de glucosa hacia el interior de las células
intestinales. Dichos transportadores son el SGLT-1 y el GLUT-2.

(a) Estructura básica de la amilopectina y la amilosa: se indican los productos de degradación

después de la actuación de la amilasa: maltosa, maltotriosa y dextrina límite. La acción posterior
de isomaltasa y maltasa dará moléculas de glucosa.

El glucógeno, al poseer una estructura similar a la amilopectina del almidón, también requiere
la presencia de amilasa y de isomaltasa para hidrolizar los enlaces de α(1→4) y α(1→6)
respectivamente. Se liberan igualmente moléculas de maltosa y maltotriosa que hidrolizadas
por la maltasa rendirán monómeros de glucosa, listos para ser asimilados por las células
intestinales. La hidrólisis de los disacáridos se produce a través de disacaridasas específicas que
liberarán los monosacáridos constituyentes del disacárido. Así, sobre la sacarosa actuará la
sacarasa, que hidroliza el enlace α (1→2) y libera un monosacárido de glucosa y de fructosa: la
glucosa se asimilará en las células del intestino gracias al SGLT-1 y la fructosa a través del GLUT-
5. Sobre la lactosa intervendrá la lactasa, que hidroliza el enlace β(1→4), liberando un
monosacárido de glucosa y otro de galactosa: ambas se absorberán por la acción del SGLT-1.

95
 Tema 7: Digestión de glúcidos
BIOQUÍMICA

3.1 DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS (la celulosa, no digerible, ingresa en el colon y se excreta)

La digestión comienza en la boca al introducir los alimentos

donde la amilasa salival degrada el almidón, la lactasa, la
sacarosa, …

Entonces el bolo alimenticio baja por el esófago hasta llegar

al estómago donde se segregan ácidos. El pH bajo detiene la
acción de la amilasa salival.

La digestión continúa en el intestino. Al llegar el bolo

alimenticio, el páncreas secreta bicarbonato, que neutraliza
el carácter ácido del estómago para que puedan actuar las
enzimas digestivas (secretadas también por el páncreas).

En primer lugar la α-amilasa pancreática hidroliza el almidón

y el glucógeno, que no fueron degradadas por la amilasa
salival. Se obtiene maltosas, maltotriosas y α-dextrinas. Los
procesos digestivos continúan, y al final del duodeno y comienzo del yeyuno superior, donde
empiezan a actuar otras disacaridasas como la isomaltasa que hidroliza el enlace α(1→6) de la
isomaltosa y de α-dextrinas. De aquí se obtienen disacáridos y trisacáridos, por lo que además
actuarán otras disacaridasas: maltasa, lactasa, sacarasa, threalasa, … para obtener los
monómeros correspondientes.

Además de estas enzimas, hay también una exoglucosidasa que hidroliza oligosacáridos por el
extremo no reductor, es decir, va rompiendo las unidades una a una desde el extremo.

Todas estas enzimas se encuentran en el lado luminal (hacia la luz) de las membranas de las
células de la mucosa intestinal. La sacarasa forma un complejo con la isomaltasa denominado
complejo sacarasa-isomaltasa, que se encuentra anclado en la membrana por un segmento
hidrofóbico.

3.2 ENZIMAS DIGESTIVAS DE GLÚCIDOS Y PRODUCTOS OBTENIDOS EN EL INTESTINO

96
 Tema 7: Digestión de glúcidos
BIOQUÍMICA

4. ABSORCIÓN DE LOS MONOSACÁRIDOS POR LAS CÉLULAS DE LA MUCOSA INTESTINAL

4.1 ENZIMAS Y PRODUCTOS IMPLICADOS EN LA DIGESTIÓN DE LOS GLÚCIDOS

El duodeno y la parte superior del yeyuno absorben la mayor parte de los glúcidos de la dieta.
En primer lugar, la glucosa y la galactosa son transportadas al interior de las células de la mucosa
mediante un proceso de transporte activo secundario, que requiere energía, y que necesita una
captación simultánea de iones sodio Na+. La proteína de transporte es el cotransportador 1 de
glucosa dependiente de sodio (SGLT-1).

Un cotransporte o simporte se produce cuando un transportador mueve un ion a favor de su

gradiente de concentración y otra molécula en contra de su gradiente, pero los dos en el mismo
sentido. En este caso, tanto glucosa/galactosa (en contra del gradiente) como sodio (a favor de
gradiente) entran desde el exterior.

Es un transporte activo porque se gasta 1 ATP, ya que en la membrana basolateral hay una
bomba NA+/K+ ATPasa, que bombea Na+ hacia el exterior en contra de su gradiente. Su finalidad
es mantener el gradiente de Na+, hay más Na+ fuera que dentro. Esto permite que en el otro
lado de la membrana esté entrando sodio junto con glucosa.

Sin embargo, la fructosa requiere un transportador independiente de sodio (GLUT-5). Los

monosacáridos que han sido absorbidos por las células intestinales se liberan rápidamente al
torrente sanguíneo a través de GLUT-2. Se dice que es un transportador de grupo pasivo, es
capaz de transportar varias hexosas, que se sitúa en la membrana basal.

Gran parte de la glucosa procedente de la dieta va a ser asimilada por el hígado, que mantiene
los niveles de glucosa en sangre.

La glucosa se almacena en forma de glucógeno, si ingerimos más cantidad de la necesaria esta

se almacena como tejido adiposo graso (triacilglicéridos). Estos triacilgliceroles podrán salir en
forma de VLDL cuando se necesiten.

Si no ingerimos la cantidad suficiente, el glucógeno se degrada para dar lugar a glucosa.

97
 Tema 7: Digestión de glúcidos
BIOQUÍMICA

4.2 TRANSPORTE DE GLUCOSA EN CÉLULAS DEL EPITELIO INTESTINAL

La glucosa se transporta con Na+ a través de la membrana plasmática

apical al interior del enterocito. Se desplaza a través de la célula hasta
la superficie basal, donde pasa a la sangre vía GLUT2, un
transportador pasivo simple de glucosa. La Na+/K+-ATPasa continúa
bombeando Na+ hacia el exterior para mantener el gradiente de Na+
que impulsa la captación de glucosa.

Una alta Km significa que tiene una alta capacidad para transportar glucosa, que hace muy difícil
su saturación aunque la concentración de glucosa se alta. Los tejidos que más glucosa consumen
son el músculo, para el movimiento; y tejido adiposo, como precursora de lípidos. S u
transportador es GLUT-4, dependiente de insulina. Ambos pueden prescindir de utilizarla si las
circunstancias lo requieren; el músculo puede usar ácidos grasos y el tejido adiposo dejaría de
acumular lípidos. Las reservas de glucosa se utilizarían para otros tejidos, como el tejido
nervioso, eritrocitos, el cristalino, la médula adrenal, … que contienen GLUT-1 y GLUT-3. Estos
transportadores van a mantener de la homeostasis de la glucosa.

98
BIOQUÍMICA Tema 7: Digestión de glúcidos

5. DEGRADACIÓN ANÓMALA DE LOS DISACÁRIDOS

Cualquier defecto en la actividad disacaridasa de la mucosa intestinal,
provoca el paso de glúcidos no digeridos al intestino grueso. Como
consecuencia de que sea un material osmóticamente activo, pasa agua
desde las células de la mucosa a las células del intestino (se produce una
deshidratación). Además, se produce una fermentación bacteriana de la
que se obtienen metabolitos ácidos, como el ácido acético o láctico,
grandes volúmenes de CO2 y de gas dihidrógeno (H2).

Este carácter ácido (pH bajo) daña la mucosa intestinal y esto produce
molestias intestinales, hinchazón, diarreas, … Estos daños pueden ser
serios si afectan a la absorción de moléculas esenciales, como las
vitaminas.

El déficit de estas enzimas disacaridasas puede deberse a una carencia genética, que resulta en
una intolerancia a disacáridos; o bien, puede producirse por enfermedades intestinales.

Las intolerancias más típicas son:

-Intolerancia a la lactosa, puede ser hereditaria por déficit de lactasa (poco frecuente) o
intolerancia adquirida como consecuencia por dejar de consumir leche en la edad adulta.

-Carencia del complejo sacarasa-isomaltasa, provoca una intolerancia a la sacarosa, el almidón

y las frutas se tolera mal, ya que no se degradan bien.

El diagnostico de estas patologías puede realizarse mediante pruebas de tolerancia oral, que
consisten en administrar un disacárido y se mide la cantidad de gas dihidrógeno en el aliento.

99
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

TEMA 8: LA GLUCÓLISIS
1. ASPECTOS GENERALES
La glucólisis es una ruta central del metabolismo de los hidratos de carbono, porque la mayoría
de los azúcares confluyen en esta ruta. También se denomina vía o ruta de EMBDEN-
MEYERHOFF, quienes descifraron la ruta en el músculo en 1940. La ruta consta de 10 reacciones,
mediante las cuales 1 molécula de glucosa se convierte en 2 de piruvato:

1 Glc→2 Piruvato

Se habla de glucolisis aerobia cuando en presencia de oxígeno se produce la descarboxilación

oxidativa del piruvato hasta acetil coenzima A, que entrará al ciclo de Krebs. La glucolisis
anaerobia cuando en ausencia de oxigeno el piruvato se reduce a lactato, para reoxidar el NADH
a NAD.

La ruta tiene lugar en el citosol, tanto en procariotas como en eucariotas.

Las funciones de la ruta son:

-Degradar glucosa para obtener ATP.
-Proporcionar metabolitos intermediarios para las reacciones de síntesis: formación de ácidos
grasos, aminoácidos, etc.
Fases de la ruta:
1. Fase preparatoria, que consta de 5 reacciones.
2. Fase de rendimiento energético, donde se produce el ATP.

2. REACCIONES DE LA GLUCÓLISIS
2.1 FASE PREPARATORIA

1. Fosforilación de la glucosa a glucosa-6-fosfato: requiere el gasto de una molécula de ATP y,

en las condiciones fisiológicas, es una reacción irreversible. Esta reacción está catalizada por la
hexoquinasa, si bien en el hígado también la puede realizar la glucoquinasa. Es inhibida la
hexoquinasa por ATP.

Hay 4 hexoquinasas, la IV es la glucoquinasa. Las características de las hexoquinasas I, II y III son:

-Baja especificidad de sustrato: es capaz de fosforilar varias hexosas además de la glucosa.
-Baja Km (0,1-0,2 Mm): elevada afinidad por el sustrato, lo que le permite fosforilar a baja
concentración de sustrato.
-Baja Vmax para la glucosa.
-El producto de la reacción (Glucosa-6-fosfato), cuando se acumula, inhibe la hexoquinasa.

100
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

• Papel de la Glucoquinasa (GK)

En las células del hígado y las células β pancreáticas, la enzima predominante es la Glucoquinasa.
Por lo tanto es la responsable principal de la fosforilación de la glucosa, en estas células actúa
como un sensor de glucosa y va a determinar el umbral para la secreción de insulina.

Características de la enzima:
-Baja especificidad de sustrato: es capaz de fosforilar varias hexosas además de la glucosa.
-Km alta (~10mm): la enzima va a funcionar cuando la concentración de glucosa es elevada. Por
ejemplo después de una comida, numerosas glucosas llegan al hígado y gracias a la hexoquinasa
se evita que pasen a la circulación.
-Vmax alta.
-No sufre una inhibición por Glc-6P: la glucoquinasa es inhibida indirectamente por la fructosa-
6-fosfato y es estimulada por la glucosa. Una proteína reguladora de la glucoquinasa que va a
controlar su actividad mediante unión reversible. Cuando hay fructosa-6-fosfato, la
glucoquinasa se traslada al núcleo y se une a la proteína reguladora que la inactiva. Cuando
aumenta la glucosa, la glucoquinasa vuelve al citosol.

• Objetivo: proporcionar también glucosa 6-fosfato al hígado para fines biosintéticos:

-síntesis de glucógeno
-poder reductor (NADPH)
-síntesis de ácidos grasos
-síntesis de aminoácidos

-Facilita el control de la glucemia plasmática, la glucosa fosforilada no pasa al torrente sanguíneo

y se evita así una hiperglucemia.
-Garantiza que no se pierda la glucosa a través de la vena cava.
-La baja afinidad de la GK hacia la Glucosa, da prioridad al cerebro para el uso de la glucosa en
situaciones de baja glucemia (ayuno).

• Efecto de la concentración de glucosa en la velocidad de fosforilación catalizada por la

hexoquinasa y la glucocinasa.

La hexoquinasa tiene baja Km y baja Vmax.

La glucoquinasa tiene alta Km y alta Vmax.

101
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

2. Conversión de la glucosa-6-fosfato a fructosa-6-fosfato: es una reacción reversible de

isomerización catalizada por la fosfohexosa isomerasa. No está regulada. La formación del
carbonilo facilitará la posterior ruptura de la molécula.

3. Fosforilación de la fructosa-6-fosfato a fructosa-1,6-bisfosfato: requiere el gasto de una

segunda molécula de ATP y, en las condiciones fisiológicas de la célula, en una reacción
irreversible. Está catalizada por la fosfofructoquinasa-1 (PFK-1).

Esta reacción es el punto de control más importante de la glucólisis. Esta enzima es regulada
principalmente de dos formas:

1-Por los niveles de energía del interior de la

célula, ya que la PFK-1 es inhibida alostericamente
por altas concentraciones de ATP.

Para bajas concentraciones de ATP el valor de la K0,5

es bajo, la enzima está trabajando a alta velocidad.
Para alta concentraciones la K0,5 aumenta y la
enzima está trabajando a baja velocidad.
Altos niveles de citrato también inhiben la PFK-1.
Concentraciones elevadas de AMP activan la
enzima.
2-Por la fructosa-2,6-bisfosfato, es el activador
más potente de la PFK-1. La fructosa-2,6-bisfosfato
se forma por la acción de PFK-2, que es una enzima bifuncional. Tiene una actividad quinasa,
mediante la cual convierte la fructosa-6-P en la fructosa-2,6-bisfosfato; y otra fosfatasa, que
realiza la rección contraria.

102
BIOQUÍMICA Tema 8: La glucólisis

La fructosa-2,6-bisfosfato inhibe a la fructosa-1,6-bisfosfatasa, un enzima de la gluconeogénesis.

Por lo tanto, la fructosa-2,6-bisfosfato es un metabolito regulador muy importante, ya que
controla la dos rutas (glucolisis y gluconeogénesis).
Tras una comida rica en glúcidos, se secreta insulina. El glucagón es una hormona que tiene un
efecto contrario a la insulina y se libera en situaciones de ayuno. Cuando aumenta la insulina,
aumenta la fructosa-2,6-bisfosfato que activa la PFK-1 y se actica la glucólisis.

4. Escisión de la fructosa-1,6-bisfosfato en dos triosas fosfato: la dihidroxiacetona fosfato y el

gliceraldehído-3-fosfato. Es una reacción reversible catalizada por la aldolasa. Hay dos clases de
aldolasas; clase I, en animales y plantas, y clase II, en hongos y levaduras. En el humano hay 3
isoenzimas que se nombran con las letras A (músculo), B (hígado, riñón e intestino) y C (cerebro).
La B es capaz de romper la fructosa-1-fosfato.

5. Interconversión de las triosas fosfato: es un equilibrio catalizado por la enzima triosa fosfato
isomerasa. Dicho equilibrio se encuentra desplazado hacia la formación de gliceraldehído-3-
fosfato, puesto que es el compuesto que puede ser metabolizado en los siguientes pasos de la
glucólisis, en la fase de beneficios.

103
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

2.2 FASE DE RENDIMIENTO ENERGÉTICO

6. Oxidación del gliceraldehído-3-fosfato a 1,3-bisfosfoglicerato: en este paso se oxida el grupo

aldehído hasta una forma ácido, lo cual permite obtener una molécula de NADH + H+ por triosa-
P, a la vez que se aprovecha para fijar un grupo fosfato, que desea en la siguiente reacción
obtener energía en forma de un ATP. Esta reacción es reversible y está catalizada por la enzima
gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa. Constituye el primer paso de la fase de beneficios,
paso que se repetirá posteriormente con la molécula de dihidroxiacetona que, por acción de la
triosa fosfato isomerasa, se convertirá en una nueva molécula de gliceraldehído-3-fosfato.

El NADH que se forma, debe reoxidarse a NAD+ para que la glucólisis no se detenga, ya que el
NAD+ es limitado dentro de la célula. Hay dos mecanismos principales para oxidar el NADH:

-La conversión de piruvato a lactato, acoplada a la conversón de NADH a NAD+.

-Oxidación del NADH a través de la cadena respiratoria.
Mecanismo de la Gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa
La gliceraldehido-3-fosfatodeshidrogenasa tiene unido un NAD+ al centro activo. Entra una
molécula de gliceraldehído-3-fosfato (el sustrato) y se forma el complejo E-S.

En eritrocitos parte del 1,3-Bifosfoglicerato se convierte en 2,3-bisfosfoglicerato, que es un

efector alostérico de la hemoglobina. Se une a la hemoglobina y disminuye la afinidad de la
hemoglobina por el oxígeno, facilitando la liberación de O2 hacia los tejidos. Relacionado con
esta reacción, se puede producir un mecanismo envenenamiento por arsénico. El arsénico
compite con el fosfato por ser el sustrato de la reacción, impidiendo que se forme 1,3-
bisfosfoglicerato y por lo tanto, posteriormente no se podrá obtener el ATP.

104
BIOQUÍMICA Tema 8: La glucólisis

7. Primera fosforilación a nivel de sustrato: en esta reacción se produce la síntesis de una

molécula de ATP, gracias a la transferencia de un grupo fosfato desde el 1,3-bisfosfoglicerato
hasta un ADP, liberando ATP y 3-fosfoglicerato. La enzima que cataliza es la fosfoglicerato
quinasa, y reacción es reversible.

8. Conversión del 3-fosfoglicerato a 2-fosfoglicerato: por medio de la fosfoglicerato mutasa, es

una reacción reversible.

La reacción sucede en dos pasos:

3-fosfoglicerato→ 2,3-bisfosfoglicerato→2-fosfoglicerato

9. Deshidratación del 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato: reacción reversible catalizada por

la enolasa. Esta reacción permite la creación de un enlace fosfato de alta energía, que será
aprovechado en el siguiente paso para obtener energía en forma de un nucleótido trifosfato.

Se forma un enolfosfato, una molécula más inestable que el 2-fosfoglicerato, por lo que se eleva
el potencial de transferencia del grupo fosforilo.

105
BIOQUÍMICA Tema 8: La glucólisis

10. Segunda fosforilación a nivel de sustrato: en esta reacción se produce la síntesis de una
molécula de ATP, gracias a la transferencia de un grupo fosfato desde el fosfoenolpiruvato hasta
un ADP, liberando ATP y piruvato, mediante la enzima piruvato quinasa. Esta reacción es
irreversible en condiciones fisiológicas.

Este es el último punto de regulación de la glucolisis.

A) Regulación por proactivación: consiste en que la fructosa 1,6-bisfosfato, activador de la

piruvato quinasa.
B) Regulación por niveles de energía celular: el ATP en concentraciones elevadas inhibe la
piruvato quinasa. También sucede con otros combustibles como la alanina, ácidos
grasos, … Sin embargo, concentraciones elevado de AMP activan la enzima.
C) Regulación por modificación covalente: en el hombre hay 3 isoenzimas de la piruvato
quinasa (M (músculo), A (tejido adiposo), L (hígado)). La isoenzima L es la que sufre
regulación por modificación covalente. Cuando la concentración de glucosa es baja, se
libera glucagón que eleva los niveles de AMP cíclico, que activa la proteína quinasa A
que fosforila a la piruvato quinasa, quedando inactiva.

De esta manera, cuando se inhibe la piruvato quinasa el fosfoenolpiruvato (PEP) se utiliza para
la formación de glucosa en la gluconeogénesis.

106
BIOQUÍMICA Tema 8: La glucólisis

• REACCIONES Y FASES DE LA RUTA GLUCOLÍTICA

• La fase preparativa: implica la transformación y escisión de la glucosa en dos triosas fosfato,

el gliceraldehído-3-fosfato y la dihidroxiacetona fosfato, entre las cuales existen un equilibrio.
En esta fase se produce un gasto energético: dos moléculas de ATP por molécula de glucosa. La
finalidad de esta fase es la de activar y preparar las moléculas de glucosa para su posterior
procesamiento.

• La fase de beneficios o de rendimiento energético: implica la transformación de la molécula

de gliceraldehído-3-fosfato en piruvato, mediante una serie de reacciones que liberan energía.
Se obtienen cuatro moléculas de ATP y dos de NADH + H+ por molécula de glucosa, por lo que
se libera más energía que la gastada en la fase preparatoria, lo que da una ganancia neta de dos
ATP y dos NADH + H+ por molécula de glucosa. La energía que se obtiene de la oxidación del
gliceraldehído-3-fosfato la aprovecha la célula para desempeñar todo tipo de funciones
celulares. Esta fase de rendimiento se produce dos veces por cada molécula de glucosa que se
hidroliza, ya que en cada una de las vueltas se metaboliza una de las dos triosas fosfato en las
que se escindió la glucosa.

107
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

3. RENDIMIENTO ENERGÉTICO DE LA GLUCÓLISIS

En la primera fase se gastan 2 ATP y se obtienen 2 moléculas de
gliceraldehído-3-fosfato. En la segunda fase se generan 2 piruvatos, 4
ATP, 2 NADH, 2H+ y 2H2O.

Por tanto, el resultado global es 2 piruvatos, 2 ATP, 2 NADH, 2H+ y

2H2O.

A pesar de que se han producido 2 moléculas de ATP en la glucolisis,

el piruvato todavía conserva gran parte de la energía que tenía
inicialmente la glucosa. Este se oxida completamente mediante la
descarboxilación oxidativa y el ciclo de Krebs.

4. ENTRADA DE DIFERENTES MONOSACÁRIDOS EN LA RUTA GLUCOLÍTICA

La ruta de la glucólisis no sólo sirve para degradar glucosa, sino que también se utiliza para
degradar otras hexosas que deben fosforilarse antes de entrar en la glucolisis. Destacan la
fructosa, la manosa y la galactosa.

4.1 FRUCTOSA

La fructosa se encuentra en frutas, la miel o se obtiene de la hidrólisis de la sacarosa en el

intestino delgado. La fructosa también puede fosforilarse a fructosa-6-fosfato acción de la
hexoquinasa e incorporarse a la glucólisis. Esto sucede en músculo, riñón y otros tejidos. Sin
embargo, en el hígado la fructosa entra por una vía diferente en la ruta glucolítica mediante
fosforilación en posición 1 catalizada por la fructoquinasa. La acción posterior de una aldolasa
B escinde la fructosa-1-fosfato en dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehído. El gliceraldehído se
fosforila a continuación a gliceraldehído-3-fosfato, obteniéndose de esta forma las dos triosas
fosfato que serán aprovechadas en la ruta glucolítica.

Un déficit de fructoquinasa provoca la fructosuria

esencial, un error congénito benigno. Un déficit de
aldolasa ocasiona intolerancia a la fructosa y
alteraciones hepáticas.

Se han saltado el punto de control más importante, a

nivel de la PFK-1, por esto el metabolismo de fructosa
es más rápido. El excesivo consumo de fructosa
provoca que parte del flujo glucolítico se desvíe a
síntesis de lípidos. No se libera la misma insulina que
con la glucosa y no se suprime el apetito.

108
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

4.2 GALACTOSA

La galactosa es un producto de la hidrólisis de lactosa que se

fosforila por acción de la galactoquinasa, dando lugar a la
galactosa-1-fosfato. La galactosa-1-fosfato se va a convertir en
glucosa-1-fosfato por una serie de reacciones de epimerización
catalizada por la enzima UDP-glucosa: galactosa 1-fosfato
uridintransferasa en las que participa el UDP como un
transportador de hexosas. La glucosa-1-fosfato se convierte en
glucosa-6-fosfato por acción de la fosfoglucomutasa y entrará
en la glucólisis.

Un defecto en cualquiera de las 3 en cualquiera de las 3 enzimas

produce galactosemia, produciendo lesiones en el hígado y el
sistema nervioso central.

4.3 MANOSA

La manosa va a ser activada a través de la

hexoquinasa mediante el gasto de una molécula
de ATP, originando manosa-6-fosfato, que será
isomerizada a fructosa-6-fosfato por la
fosfomanosa isomerasa, entrando ya de esta
forma en la ruta glucolítica.

Entrada de glucógeno, almidón, disacáridos y hexosas de la dieta en la fase preparatoria de la

glucólisis.

109
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

5. REGULACIÓN DE LA GLUCÓLISIS
La glucolisis tiene dos funciones importantes: degradar glúcidos para obtener ATP y generar
metabolitos para reacciones biosintéticas. Por lo que va a estar regulda.

(a) Regulación de la glucólisis. Se indican con flechas a color los tres pasos reguladores.

(b) Regulación hormonal de la

síntesis de fructura-2,6-
bisfosfato, activador de la
PFK-1.

(c) Regulación de la piruvato-

quinasa por la PKA inducida
por glucagón.

En la ruta de la glucólisis existen tres pasos importantes de regulación, correspondientes con los
tres pasos irreversibles y que están catalizados, respectivamente, por la hexoquinasa, la
fosfofructoquinasa-1 (PFK-1) y la piruvato quinasa.

5.1 REGULACIÓN DE LA GLUCOLISIS EN EL MÚSCULO

En el músculo la glucolisis proporciona ATP para la contracción muscular. El control principal de

la glucolisis en el músculo es por la carga energética. Cuando la carga energética es baja (la
relación ATP/AMP) se activa la PFK1 y la glucolisis. Esto sucede durante el ejercicio físico, se
produce un gasto de ATP y disminuye la razón ATP/AMP.

En reposo, elevadas concentraciones de ATP inhiben la PFK1 y la glucolisis.

110
BIOQUÍMICA Tema 8: La glucólisis

La fosfofructosaquinasa-1 es un enzima alostérico que está

formado por 4 subunidades, y además del sitio de unión para el
sustrato, tendrá otros sitios de unión para moléculas reguladoras
(activadores e inhibidores).

ACTIVIDAD PFK-1/CONCENTRACIÓN F6P.

Línea superior: sin inhibidores o activadores.

Línea intermedia: ATP 1 mM + AMP 0,1 mM.
Línea inferior: ATP 1 mM
En concentraciones altas de ATP, la enzima se inhibe
y se ralentiza. En concentraciones bajas de ATP, la
enzima funciona a mayor velocidad. Si se añade ATP
(inhibidor) y AMP (activador), se obtiene una curva
intermedia. (Lo mismo para la piruvato quinasa).

Cuando la PFK-1 está inhibida, se acumula fructosa-6-fosfato y glucosa-6-fosfato, y por tanto se

inhibe también la hexoquinasa. Y la glucosa6-fosfato se desvía a la síntesis de glucógeno.

Cuando la PFK-1 está activa, se produce fructosa-1,6-bisfosfato que activa la piruvato quinasa
por proactivación.

Una disminución grande del pH también inhibe a la PFK-1, por ejemplo cuando el músculo realiza
un ejercicio muy intenso y trabaja de forma anaerobia, porque no le llega suficiente oxígeno. Es
un mecanismo de protección porque un pH ácido puede dañar el tejido muscular.

5.2 REGULACIÓN DE LA GLUCOLISIS EN EL HÍGADO

El hígado tiene una mayor variedad de funciones bioquímicas que el músculo, como mantener
constantes los niveles de glucosa en sangre. Cuando hay mucha glucosa, el hígado la almacena
en forma de glucógeno. Si hay poca glucosa, el hígado degrada glucógeno para liberar glucosa a
la sangre. Además, otra de sus funciones es sintetizar poder reductor NADPH y formar
biomoléculas.

La regulación por carga energética en el caso del hígado es menos importante que en el músculo,
porque en el hígado la [ATP] no varía mucho, se mantiene relativamente constante. El pH
tampoco es un controlador importante.

En el hígado serán importantes aquellas moléculas que indique la presencia de precursores para
reacciones de síntesis. Por ejemplo, el citrato, metabolito del ciclo de Krebs, es un inhibidor de
la PFK-1. Otro compuesto que indica que ha metabolitos es la fructosa-2,6-bisfosfato, que es el
activador más importante de la PFK-1.

111
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

La fructosa 2,6-bisfosfato es una molécula señal que va

a responder a los cambios que haya de glucosa. Se
sintetiza a partir de la fructosa-6-fosfato por la PFK-2.

Es una enzima bifuncional con un dominio quinasa y otro

dominio fosfatasa. El dominio quinasa está fusionado al
dominio fosfatasa. La barra representa la secuencia de
aminoácidos de la enzima.

• Formación y degradación de la β-D-fructosa-2,6-bifosfato (F2,6P)

Las actividades enzimáticas fosfofructoquinasa-2 (PFK-2) y la fructosa bifosfatasa-2 (FBPasa-2)

se producen en diferentes dominios de la misma molécula de proteína. La fosforilación de la
enzima hepática inactiva la PFK-2 (dominio quinasa), mientras que activa la FBPasa-2 (dominio
fosfatasa).

Tras una comida rica en glúcidos, se secreta insulina que llega a la superficie del hepatocito y
desencadena una cascada de señalización. Al final de la cadena se activa una fosfoproteína
fosfatasa que desfosforila a la PFK-2, activando el dominio quinasa. Entonces se fosforila la
fructosa-6-fosfato para convertirla en la fructosa-2,6-bisfosfato, que es un activador de la PFK-1
y por lo tanto, se activa la glucolisis. La fructosa-2,6-bisfosfato inhibe a la fructosa-1,6-
bisfosfatasa, un enzima de la gluconeogénesis.
En situaciones de ayuno se libera
glucagón, desencadenando una cascada
que aumenta el AMPc que activa a una
proteína quinasa A. Esta enzima
fosforila a la PFK-2, se inactiva el
dominio quinasa y se activa el fosfatasa,
convirtiendo la fructosa-2,6-bisfosfato
en la fructosa-6-fosfato y se inhibe la
glucolisis. Se estimula gluconeogénesis.

112
 Tema 8: La glucólisis
BIOQUÍMICA

• Activación de la PKF-1 por la Fructosa-2,6-bisfosfato.

(A) Dependencia de la actividad de la enzima ante el activador alostérico Fructosa-2,6-bisfosfato.

(B) El ATP actúa como un inhibidor alostérico, cuyo efecto se reduce por la presencia de Fructosa
2,6-bisfosfato.

La fructosa-2,6-bisfosfato
disminuye la K0,5, aumenta la
velocidad de la enzima.

El ATP inhibe la actividad de la

PFK-1. Si añadimos fructosa-
2,6-bisfosfato se reduce este
efecto inhibidor del ATP.

• Control de la actividad catalítica de la piruvato quinasa.

La piruvato quinasa se regula mediante efectores alostéricos y modificación covalente.

-A altos niveles de glucosa, se

libera insulina que activa la
glucólisis.

-A bajos niveles de glucosa, el

glucagón activa la
gluconeogénesis.

113
 Tema 9: Fermentaciones
BIOQUÍMICA

TEMA 9: FERMENTACIONES
De la glucólisis se obtiene ATP, Poder reductor en forma de NADH y piruvato.

1. LOS DESTINOS DEL PIRUVATO

El piruvato, que se genera principalmente gracias a la ruta de la glucólisis, es un metabolito
intermedio que va a ser aprovechado por diversas rutas metabólicas, tanto catabólicas como
anabólicas, con la finalidad de aumentar la producción de energía o servir para la síntesis de
diversas moléculas, principalmente aminoácidos.

Entre las rutas catabólicas, destacan principalmente dos:

las fermentaciones (láctica y alcohólica)

y la descarboxilación oxidativa del
piruvato.

Ambas rutas trabajan junto con la

glucólisis para optimizar la utilización de
la glucosa.

2. LAS FERMENTACIONES
Las fermentaciones constituyen una serie de rutas metabólicas que permiten el reciclaje del
NAD+ gastado en la formación NADH + H+ en la ruta glucolítica. Si no se pudiera producir dicho
reciclaje, la glucólisis se vería bloqueada por la falta de NAD+, y con ella se bloquearía la
producción de energía en forma de que se genera en esta ruta catabólica.
-Se genera energía (ATP) sin consumir oxígeno.
-Las fermentaciones permiten el reciclaje del NAD+ que se ha gastado en la formación de NADH
+ H+.
-No hay un cambio neto en el estado de oxidación de los azúcares (misma proporción H:C).
-La regeneración del NAD+ es crucial en procariotas, o en eucariotas que carecen de mitocondrias
o se encuentran en ambientes reducidos de oxígeno (levadura, o el músculo en ejercicio
intenso).
-Las dos fermentaciones incompletas (que no terminan en la producción de CO2) son la
fermentación láctica y la fermentación alcohólica.
En ausencia de O2, y en algunas células, el piruvato se metaboliza hacia compuestos más
reducidos para recuperar el NAD+, necesario para que siga actuando la vía glucolítica;
manteniendo así constante la relación NAD+/NADH citoplasmática.

Las fermentaciones tienen gran importancia industrial. El queso y el yogur se obtiene por
fermentación láctica; el pan, el vino y la cerveza por fermentación alcohólica.

114
 Tema 9: Fermentaciones
BIOQUÍMICA

3. LA FERMENTACIÓN ÁCIDO-LÁCTICA: la reducción del piruvato

El piruvato se reduce a lactato en presencia de NADH + H+, por acción de la lactato
deshidrogenasa:

Piruvato + NADH + H+↔ 2 Lactato + NAD+

Esta reacción permite regenerar la cantidad suficiente de NAD+ para que la glucólisis siga
funcionando, al menos durante un período corto de tiempo en las situaciones en las cuales el
suministro de oxígeno se ve reducido, como en células musculares que se contraen rápidamente
y presentan una demanda energética elevada.

La fermentación láctica tiene una enorme importancia industrial ya que está implicada en la
elaboración de una gran cantidad de productos derivados principalmente de la leche, como
yogures y quesos, con un gran valor comercial.

3.1 LOS ANIMALES GENERAN FERMENTACIÓN ÁCIDO LÁCTICA

-El piruvato se reduce a lactato, es una reacción reversible.

-Durante el ejercicio intenso y no hay suficiente O2, comienza la fermentación láctica y el lactato
se acumula en el músculo, esto se conoce como acidosis por ácido láctico.

-Cuando tiene lugar esta acidosis metabólica, se inicia la hiperventilación para expulsar CO2 y
ayudar a eliminar el ácido.
-La acidificación del musculo previene la fatiga del músculo.
-Requiere un tiempo de recuperación.

La importancia de la glucólisis anaerobia es que la célula puede continuar formando ATP aun
cuando no dispone de oxígeno suficiente para el funcionamiento de la cadena respiratoria. Sin
embargo, cuanto más tiempo opera anaeróbicamente la célula y más lactato acumule, mayor
será su deuda de oxígeno y llegará el momento en el que el sistema deba detenerse para
permitir que la respiración proporcione el oxígeno para metabolizar el lactato.

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 Tema 9: Fermentaciones
BIOQUÍMICA

Para eliminar el lactato:

El lactato se puede transportar al hígado y convertirse a glucosa mediante el ciclo de Cori. El

anabolismo tendrá lugar en el hígado, mientras que el catabolismo se produce en el músculo.

• La fermentación ácido láctica:

El piruvato se convierte en L-lactato por la

acción de la lactato deshidrogenasa y está
acoplada a una reacción de oxidación del
NADH.

Es una reacción termodinámicamente

favorable, aunque es reversible.

En las células de mamífero se va a generar L-lactato, la única forma asimilable para ellos. Sin
embargo, en otros organismos (como bacterias) se genera la forma D.

La glucosa genera piruvato, gastando NAD+ y se forma NADH. Este NADH se regenera mediante
la fermentación láctica.

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 Tema 9: Fermentaciones
BIOQUÍMICA

4. LA FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA: una descarboxilación no oxidativa del piruvato

Consiste en el paso del piruvato a etanol. La fermentación alcohólica realmente consta de dos
reacciones consecutivas:

1- La descarboxilación del piruvato por la enzima piruvato descarboxilasa para generar

acetaldehído, que utiliza como factor el pirofosfato de tiamina
2- El producto se reduce a etanol por acción de la alcohol deshidrogenasa:

Piruvato ↔ CO2 + acetaldehído + NADH + H+ ↔ Etanol + NAD+

Los microorganismos fermentativos transforman el piruvato hasta etanol, en dos reacciones:

descarboxilación y reducción. Ésta última permite a las células recuperar el NAD+ necesario para
la glucólisis.

La segunda reacción (reducción) permite a las células recuperar el NAD+ necesario para la
glucólisis.

Este tipo de fermentación se da sobre todo en levaduras y en algunos tipos de bacterias y tiene
igualmente un interés industrial elevado, ya que está implicada en la elaboración de bebidas
alcohólicas como, por ejemplo, la cerveza o el vino, y también en la fabricación de pan.

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 Tema 9: Fermentaciones
BIOQUÍMICA

• Las levaduras generan fermentación alcohólica

-Se produce etanol a partir de piruvato en dos etapas.

-Los humanos no tienen piruvato descarboxilasa.

-Sin embargo, sí expresamos alcohol deshidrogenasa para el metabolismo del etanol, pero se
usa fundamentalmente en la reacción inversa.

-El CO2 que se produce en la primera etapa es el responsable de:

a) La carbonatación en la cerveza
b) Elevar la masa cuando se hornea el pan.

• Piruvato descarboxilasa

-Necesita del coenzima pirofosfato de tiamina (TPP) y de Mg++ como cofactores.

-TPP es un derivado de la vitamina tiamina (B1), y también participa en otras reacciones.

El anillo de tiazol transporta los grupos aldehído. Cuando los aldehídos activos se unen, se le
llama hidroxietil tiamina pirofosfato. Esta molécula es muy importante para 3 tipos de
reacciones químicas fundamentales.

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 Tema 9: Fermentaciones
BIOQUÍMICA

• Pirofosfato de tiamina (TPP)

Juega un papel importante en la rotura de enlaces adyacentes a un grupo carbonilo

(descarboxilación de los α-cetoácidos y en reordenamientos químicos donde hay transferencia
de un grupo aldehído activo desde un átomo de carbono a otro).

1) Se ioniza el C2 del anillo de tiazolio de la TPP (carbanión

TPP).

2) El carbanión TPP actúa como un nucleófilo atacando el

grupo carbonilo del piruvato.

3) Se forma un carbanión después de la descarboxilación que

se estabiliza por el anillo de tiazolio.

4) Tiene lugar una protonación para formar hidroxietil TPP.

5) Se libera el acetaldehído.

6) Se disocia un protón y se regenera el carbanión

• Alcohol deshidrogenasa

El centro activo de la alcohol deshidrogenasa contiene un ion zinc

coordinado a dos átomos de azufre de dos residuos de cisteína y a un
átomo de nitrógeno de una histidina.

El ion zinc polariza el grupo carbonilo del sustrato para favorecer la

transferencia de un hidruro desde el NADH.

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