Taller #3
Nombre: Noriel González, Bonilla Diógenes Fecha: 23-9-23
Clase: Construcción de un vector.
Taller 3 Instrucciones: Leer el documento: Cuaderno No 18: Elaboración de una planta
transgénica. Confeccionar un vector de clonación utilizando un gen resistente a la
desecación CPK25 de la especie Arabidopsis thaliana. El gen CPK25
Paso 1: Por medio de la dirección proporcionada a continuación entre a la página de
Vector Builder.
Paso 2: Seleccione “Desing My Vector”
Paso 3: ¿Cuál de los dos plásmidos debemos elegir si nos interesa utilizar como
vector el plásmido Ti? _T-DNA binar vector (for plant transformation).
Paso 4: Tome unos minutos para familiarizarse con el plásmido. Les recomiendo que lean
qué son cada una de las secuencias del plásmido.
Paso 5:
Elegir una secuencia promotora. Vamos a elegir a CaMV35S(enhanced) ¿Por qué?
Paso 6: Debemos introducir la secuencia de nuestro gen de interés. Para esto,
debemos encontrar la secuencia del gen CPK25 de la especie A. thaliana.
Visite la página https://www.uniprot.org/ e ingrese el siguiente código Q9SJ61. Lea
detenidamente la información proporcionada. ¿Se trata del gen que estamos
interesados?
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*Verificación de un plásmido recombinante mediante electroforesis en gel*
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Paso 7.
Descargue la secuencia de interés en formato FASTA (canonical).
Copiarla en el siguiente cuadro:
>sp|Q9SJ61|CDPKP_ARATH Calcium-dependent protein kinase 25 OS=Arabidopsis
thaliana OX=3702 GN=CPK25 PE=2 SV=1
MGNVCVHMVNNCVDTKSNSWVRPTDLIMDHPLKPQLQDKPPQPMLMNKDDDKTKLN
DTHG
DPKLLEGKEKPAQKQTSQGQGGRKCSDEEYKKRAIACANSKRKAHNVRRLMSAGLQA
ESV
LKTKTGHLKEYYNLGSKLGHGQFGTTFVCVEKGTGEEYACKSIPKRKLENEEDVEDVR
RE
IEIMKHLLGQPNVISIKGAYEDSVAVHMVMELCRGGELFDRIVERGHYSERKAAHLAKVI
LGVVQTCHSLGVMHRDLKPENFLFVNDDEDSPLKAIDFGLSMFLKPGENFTDVVGSPY
YI
APEVLNKNYGPEADIWSAGVMIYVLLSGSAPFWGETEEEIFNEVLEGELDLTSDPWPQ
VS
ESAKDLIRKMLERNPIQRLTAQQVLCHPWIRDEGNAPDTPLDTTVLSRLKKFSATDKLKK
MALRVIAERLSEEEIHELRETFKTIDSGKSGRVTYKELKNGLERFNTNLDNSDINSLMQI
PTDVHLEDTVDYNEFIEAIVRLRQIQEEEANDRLESSTKV
Conteste: Indique el tipo de molécula en la que se presenta la secuencia:
________________.
Paso 8.
Es necesario convertir la secuencia. Dirigirse a:
https://www.bioinformatics.org/sms2/rev_trans.html
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Paso 9:
Pegue la secuencia obtenida en el siguiente cuadro:
atgggcaacgtgtgcgtgcatatggtgaacaactgcgtggataccaaaagcaacagctgg
gtgcgcccgaccgatctgattatggatcatccgctgaaaccgcagctgcaggataaaccg
ccgcagccgatgctgatgaacaaagatgatgataaaaccaaactgaacgatacccatggc
gatccgaaactgctggaaggcaaagaaaaaccggcgcagaaacagaccagccagggccag
ggcggccgcaaatgcagcgatgaagaatataaaaaacgcgcgattgcgtgcgcgaacagc
aaacgcaaagcgcataacgtgcgccgcctgatgagcgcgggcctgcaggcggaaagcgtg
ctgaaaaccaaaaccggccatctgaaagaatattataacctgggcagcaaactgggccat
ggccagtttggcaccacctttgtgtgcgtggaaaaaggcaccggcgaagaatatgcgtgc
aaaagcattccgaaacgcaaactggaaaacgaagaagatgtggaagatgtgcgccgcgaa
attgaaattatgaaacatctgctgggccagccgaacgtgattagcattaaaggcgcgtat
gaagatagcgtggcggtgcatatggtgatggaactgtgccgcggcggcgaactgtttgat
cgcattgtggaacgcggccattatagcgaacgcaaagcggcgcatctggcgaaagtgatt
ctgggcgtggtgcagacctgccatagcctgggcgtgatgcatcgcgatctgaaaccggaa
aactttctgtttgtgaacgatgatgaagatagcccgctgaaagcgattgattttggcctg
agcatgtttctgaaaccgggcgaaaactttaccgatgtggtgggcagcccgtattatatt
gcgccggaagtgctgaacaaaaactatggcccggaagcggatatttggagcgcgggcgtg
atgatttatgtgctgctgagcggcagcgcgccgttttggggcgaaaccgaagaagaaatt
tttaacgaagtgctggaaggcgaactggatctgaccagcgatccgtggccgcaggtgagc
gaaagcgcgaaagatctgattcgcaaaatgctggaacgcaacccgattcagcgcctgacc
gcgcagcaggtgctgtgccatccgtggattcgcgatgaaggcaacgcgccggataccccg
ctggataccaccgtgctgagccgcctgaaaaaatttagcgcgaccgataaactgaaaaaa
atggcgctgcgcgtgattgcggaacgcctgagcgaagaagaaattcatgaactgcgcgaa
acctttaaaaccattgatagcggcaaaagcggccgcgtgacctataaagaactgaaaaac
ggcctggaacgctttaacaccaacctggataacagcgatattaacagcctgatgcagatt
ccgaccgatgtgcatctggaagataccgtggattataacgaatttattgaagcgattgtg
cgcctgcgccagattcaggaagaagaagcgaacgatcgcctggaaagcagcaccaaagtg
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Paso 10:
Procesa a finalizar su vector pegando la secuencia del gen de interés.
¡¡¡Felicidades!!! Ha construido su primer vector de clonación y recombinación genética.
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