Analisis de la leche
- 1. Práctica 3 y 4: Protocolos determinaciones analíticas Productos Lácteos 1.- DENSIDAD DE LA LECHE La densidad de la leche se determinará utilizando un lactodensímetro contrastado a una temperatura determinada (15ºC) en comparación con el agua. MATERIAL - Probeta transparente de 100 mL. - Lactodensímetro Quevenne. - Termómetro. PROCEDIMIENTO Se coloca en la probeta la leche problema procediendo de manera cuidadosa para impedir la formación de espuma. Se introduce el lactodensímetro de forma que la leche rebose de la probeta para evitar una posible formación de espuma que dificulte la lectura tubo de ensayo y se mide la temperatura de la leche teniendo en cuenta que ésta siempre debe permanecer entre 13 y 18ºC. La lectura se realizará en grados Quevenne. Cuando la temperatura sea diferente a 15ºC es necesario realizar una corrección. Para ello, sumaremos o restaremos 0,2 a los grados Quevenne leídos por cada ºC superior o inferior a 15ºC, respectivamente. 2.- ACIDEZ TITULABLE DE LA LECHE La acidez titulable de la leche es el resultado de una valoración ácido-base en la que un volumen de leche es llevado al punto de viraje de un indicador de pH que suele ser la fenolftaleína (punto de viraje pH = 8,3) utilizando para ello una disolución alcalina (hidróxido sódico). En la acidez de valoración estamos determinando la suma de la acidez natural de la leche (caseínas, sustancias minerales - ácidos orgánicos y fosfatos) y la acidez desarrollada (ácidos orgánicos generados a partir de la lactosa por crecimiento microbiano). MATERIAL - Vasos de precipitados de 25 mL - Bureta - Pipetas Pasteur - Pipetas de 10 mL REACTIVOS - Disolución de hidróxido sódico 0,1 N - Disolución de fenolftaleína al 1% en etanol PROCEDIMIENTO Se toman 9 mL de leche homogeneizada y se valoran con la disolución de hidróxido sódico en presencia de 5 gotas de la disolución de fenolftaleína hasta la aparición de una coloración rosa persistente durante unos segundos. Los resultados se expresan como gramos de ácido láctico por 100 mL de leche dividiendo por 10 los mililitros de sosa empleados, o como grados Dornic multiplicando por 10 los mililitros de sosa. 1
- 2. Práctica 3 y 4: Protocolos determinaciones analíticas Productos Lácteos 3.- pH DE LA LECHE La determinación del pH se realiza por lectura directa introduciendo el electrodo de un pHmetro, previamente ajustado con tampones de pH conocido 4,00 y 7,00, en la leche, la cual debe ser calentada y homogeneizada a 40ºC para dispersar la materia grasa y posteriormente enfriada a 20ºC. 4.- PRUEBA DE LA FOSFATASA ALCALINA La destrucción de la fosfatasa alcalina de la leche (enzima presente de forma natural en la misma) requiere temperaturas superiores a tratamientos más drásticos que los necesarios para destruir a Mycobacterium tuberculosis, el más termorresistente de los gérmenes patógenos (formas vegetativas) que se encuentran en la leche. La determinación de la eficacia de la pasterización (o la prueba de que una leche ha sido bien pasterizada) puede constatarse por tanto poniendo de manifiesto la no existencia de esta enzima. La fosfatasa escinde los fosfatos. Si actúa sobre un fosfato no coloreado ligado a otro compuesto que presenta en su forma libre una coloración más o menos intensa, el color aparecido y la velocidad de aparición serán proporcionales a la actividad fosfatasa. MATERIAL - Baño de agua a 37ºC - Tubos de ensayo - Pipetas de 10 mL - Tapones de plástico o goma para los tubos - Varillas de vidrio - Agitador de tubos REACTIVOS - Kit Lactognost, integrado por 3 componentes: - Lactognost I - Lactognost II - Lactognost III PROCEDIMIENTO Se colocan en un tubo de ensayo 10 mL de agua destilada, se le añade una pastilla de Lactognost I y otra de Lactognost II, se tapa el tubo y se agita hasta la completa disolución, en caso de ser necesario para la mejor disolución se utilizará una varilla de vidrio. A continuación, añadimos 1 mL de la leche problema en el tubo de ensayo, homogeneizamos e incubamos durante una hora en en un baño termostatizado a 37ºC. Seguidamente, a cada tubo de ensayo añadimos una cucharadita dosificadora rasa de Lactognost III, homogeneizamos e incubamos diez minutos a la misma temperatura comprobando el resultado: - Color marrón: prueba negativa Þ ausencia de fosfatasa alcalina. - Color verde: prueba débilmente positiva Þ presencia de vestigios de enzima. - Color azul: prueba positiva Þ presencia de enzima. 2
- 3. Práctica 3 y 4: Protocolos determinaciones analíticas Productos Lácteos 5.- GRASA DE LA LECHE La determinación de la grasa en la leche se realiza mediante la técnica volumétrica de Gerber empleando el butirómetro de Gerber según el método oficial de análisis de leche y productos lácteos (Presidencia de Gobierno, 1977). MATERIAL - Centrífuga Gerber - Pipetas de 11 mL. - Dosificador de 10 mL para el H2SO4. - Dosificador de 1 mL para el alcohol isoamílico. - Butirómetros Gerber, tapones y vástago de ajuste. - Guantes. - Gradilla. REACTIVOS - Ácido sulfúrico 90-91%. - Alcohol isoamílico. PROCEDIMIENTO Se colocan en un butirómetro de Gerber graduado y siguiendo este orden: - 10 mL de la disolución de H2SO4, - 11 mL de leche de forma cuidadosamente para que no se mezclen y - 1 mL de alcohol isoamílico Se coloca el tapón en el butirómetro con la ayuda del vástago y se agita enérgicamente hasta la disolución total de la fase proteica de la leche. Se centrifuga en la centrífuga Gerber termostatizándola a 65ºC. Se sacan los butirómetros con cuidado de la centrífuga para no mezclar la capa de grasa separada y se procede a leer rápidamente el porcentaje de grasa sobre la escala del butirómetro. 6.- EXTRACTO SECO: DISCO DE ACKERMANN La determinación de los sólidos totales de la leche de forma directa (desecación en estufa de aire forzado a 100ºC) es un procedimiento demasiado lento para usarse rutinariamente y decidir soluciones a la hora de estandarizar la composición de la leche que va a ser utilizada para elaborar un producto lácteo. Esto ha llevado al desarrollo de modelos matemáticos predictivos a partir de otras determinaciones más rápidas. Uno de ellos es el disco de Ackermann. Consiste en 3 discos superpuestos, uno móvil central que indica la densidad de la leche y dos fijos: uno indica el contenido graso y el otro el extracto seco total de la leche. Así conociendo la densidad y el contenido graso de la leche podremos calcular su extracto seco total. 3