Ag Pa Tic
- 1. TÉCNICAS RÁPIDAS DE DETECCIÓN DE ANTÍGENO
- 2. INFECCIÓN Diagnóstico etiológico (microbiológico) A) Detección del microorganismo B) Detección de la respuesta inmune del hospedador Visión directa Cultivo Detección de Ag Detección de genoma Serología Estudio de respuesta celular
- 3. Dx TARDÍO (salvo IgM). Seropositividad no implica infección actual. Útil en gérmenes no cultivables/difíciles de obtener. Valoración de estado inmune. Serología Complejidad técnica, personal adiestrado, infraestructura. Mínimo 2 horas. Género y especie. Posible cuantificación. No necesita viabilidad del germen. Detección de ADN/ARN No antibiograma. FP y FN. Análisis múltiple subóptimo. Rápido. Algunos muy sencillos. Identifica género +/- especie. No necesita viabilidad del germen. Detección de antígeno No siempre factible. LENTO Identificación de género y especie. Antibiograma . Cultivo Gérmenes que no se tiñen. Sólo formas y propiedades tintoriales (inespecífico). No antibiograma. Rápido. Sencillo. No necesita viabilidad del germen. Valoración de la muestra. Visión directa (tinciones habituales) Inconvenientes Ventajas Técnica
- 4. ¿En qué circunstancias nos pueden ser útiles las técnicas rápidas de detección de antígeno? Por su sencillez ( rapidez): Escasez de recursos, personal no especializado (“point of care testing”). Por su rapidez: Cuadro de presentación aguda ( gravedad)= situación de urgencia. El resultado del test dará lugar a un cambio (rápido) en el manejo del paciente: tto, medidas de aislamiento…
- 5. Técnicas de detección de antígeno Inmunofluorescencia Enzimoinmunoensayo (EIA) Inmunocromatografía (ICG) Aglutinación facilitada 3-4 h < 30 min < 30 min <1 a 3 h (según formato y automatización)
- 6. Fundamento: Antígeno : Molécula reconocida como no propia por el organismo, la cual es capaz de desencadenar una respuesta inmunitaria . Epitopo=determinante antigénico Sitio de unión al antígeno (región hipervariable) Anticuerpo : Proteína (inmunoglobulina) producida en respuesta a la estimulación por un antígeno, con el cual reacciona de forma específica Unión antígeno (Ag)-anticuerpo (Ab)
- 7. Haciendo visible lo invisible… 1. Aglutinación facilitada Aglutinación Ac MICROSCÓPICA Ag Partícula (látex) Aglutinación facilitada A SIMPLE VISTA Sencillo Rápido Problema: S (lectura requiere experiencia)
- 8. Haciendo visible lo invisible… 2. Marcado de anticuerpos Enlace covalente Trazador (DETECTABLE, MEDIBLE) = Enzima color del producto de reacción: = Fluorocromo fluorescencia: Inmunofluorescencia Directa (IFD) Indirecta (IFI) ELISA = Molécula lumínica Luz: Quimioluminiscencia = ADN : Inmuno-PCR Otros: Oro coloidal Isótopo radiactivo Etc Ag Fc
- 9. ELISA Microplaca: 2-3 h, adiestramiento. No observador-dpte. Membrana: 30 min, sencillo Enzimoinmunoensayos automatizados: 1,5-2 h Tutorial recomendado: http:// www.sumanasinc.com / webcontent / animations / content / ELISA.html
- 10. Inmunofluorescencia Más rápida Más artefactada Consume más tiempo Más nítida Permite el estudio simultáneo de varios Ag Requiere entrenamiento previo del técnico y el observador. Evaluación de la muestra Ig Anti Ag Ag IFDirecta Ag Ig Anti Ag Ig Anti Fc IFIndirecta
- 11. Inmunocromatografía Realización e interpretación sencillas (pero… interpretación observador dpte, “+ débil”) Muy rápido
- 12. ¿Qué muestras nos son útiles? Foco de infección. Muestra representativa Evitar contaminaciones Sangre Orina: se concentra el Ag (hasta 50x respecto a suero) ¡ !Patógenos que a su vez pueden ser parte de la flora comensal
- 13. ¿Qué microorganismos podemos detectar? (1) Tests comercializados Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae Neumococo Haemophilus influenzae: Ag capsular Meningococo: Ag capsular Chlamydia : Ag común Neisseria gonorroheae S. aureus : enterotoxinas Bacillus cereus: enterotoxina Helicobacter pylori Clostridium difficile : toxina A/ toxinas A+B E. Coli O157:H7 Salmonella Campylobacter Legionella Treponema pallidum Bacterias
- 14. ¿Qué microorganismos podemos detectar? (2) Tests comercializados Virus Gripe A y B VRS Parainfluenza 1, 2 y 3 Adenovirus Metapneumovirus VVZ VHS V. del sarampión V. de la parotiditis Hepatitis B: HBsAg y HBeAg HCV core Ag HIV p24 Rotavirus: Ag grupo VP6 Adenovirus Astrovirus
- 15. ¿Qué microorganismos podemos detectar? (y 3) Tests comercializados Hongos Criptococo: Cápsula/ glucuronoxil manano Aspergillus : galactomanano Candida : mananos Pneumocystis jiroveci Giardia Cryptosporidium parvum Entamoeba histolytica Plasmodium falciparum : HRP-2 Plasmodium spp: LDH y aldolasa Leishmania Wuchereria bancrofti Protozoos
- 16. Ejemplos de su aplicación práctica: Diagnóstico de infección de tracto respiratorio inferior (IRTI) Diagnóstico de meningitis aguda
- 17. Utilidad del diagnóstico rápido en IRTI Son útiles en dx rápido : Tinciones, detección de antígeno. Permiten: Ajustar tratamiento antibacteriano: empírico dirigido Indicar tto antivírico (influenza, VRS) Medidas de aislamiento (VRS, TBC) Declaración epidemiológica (Legionella , TBC)
- 18. Diagnóstico rápido de meningitis aguda ¡¡¡URGENCIA TERAPÉUTICA!!! PL LCR Bioquímica Microbiología Sugiere meningitis aguda bacteriana : >2000 células/ l con predom. Pmn Proteínas>200 mg/dl Glucosa< 40% plasmática simultánea A) Tinción de Gram: SIEMPRE S: 60-90% Según : UFC/ml y tipo de germen . Si tto previo S E: 97% B) Técnicas de detección de Ag: complementario S: 50-100%, según prueba y bacteria E: Variable: Evitar: orina (esp. neonatos), multiplex. Sí :preparación previa de la muestra.
- 19. ¿Por qué es mejor no usar orina? H. influenzae, S. pneumoniae: Colonización orofaringe. S. agalactiae, E. coli: Colonización periné neonatos “ un resultado de detección de antígeno en orina puede deberse a colonizaciones bacterianas o a infecciones invasoras diferentes a la meningitis”
- 20. Conclusiones Utilidad de los tests rápidos de detección de Ag: Escasez de recursos Urgencia dx Cambio del manejo clínico del paciente en función del resultado. Debe confirmarse el dx en pacientes/enfermedades que lo requieran mediante las técnicas de referencia. Resultado (-) no excluye. Debemos conocer las causas de falsos para una interpretación adecuada.