SlideShare una empresa de Scribd logo
TECNICAS DE OBSERVACIÓN
MICROSCOPICA
Coloraciones
1. Observación en fresco
Son preferibles en las situaciones siguientes:
• La morfología de las bacterias se altera cuando se desecan y tiñen.
• Cuando las bacterias se observan para determinar movilidad
• Para observar los cambios citológicos que ocurren durante la
división celular
• Por este método se observan fácilmente algunas inclusiones
celulares como vacuolas y materias grasa.
2. Observación con tinciones
• Para observar las características morfológicas de las bacterias
• Identificación y diferenciación de microbios entre especie y
dentro de la misma especie (tinción diferencial o selectiva).
Lunes
TIPO DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS
1. Observación en fresco
•preparación en fresco simple
•preparación en gota pendiente
2. Observación con tinciones
•Tinción simple: un solo colorante.
•Tinción diferencial: más de un colorante
•Tinción especial
Tinción negativa: colorea el medio que rodea a la
bacteria permaneciendo ésta sin teñir.
Lunes
TIPO DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS
Porta objeto
Muestra
1. Colocar una gota de SSF o
agua en un porta
2.- Tomar la muestra con el asa
de siembra o un gotero
Procedimiento para un preparado en fresco
("entre porta y cubre")
Observación microscópica
1. Observación en fresco
 Bacterias: Leptospiras, treponemas (M.
campo oscuro)
Observación microscópica
1. Observación en fresco : (SSF)
 Parásitos : Trofozoitos, larvas.
Observación microscópica
1. Observación en fresco
 Hongos: Levaduras
Observación microscópica
1. Observación en fresco con modificaciones
 Hongos
 NaOH 10% (hifas)
Procedimiento para un preparado en fresco
en gota pendiente
2. TINCIONES O COLORACIONES
Coloraciones
COLORANTE: DEFINICIÓN
• Son compuestos orgánicos que tienen alguna
afinidad específica por algún componente.
• Los colorantes son compuestos químicos
utilizados para aumentar el contraste
COLORANTES: Tipos
a) Sales colorantes: más comúnmente usados
 básicos: Consisten en un catión coloreado unido a un anión
incoloro. Tiñen la célula bacteriana uniformemente (ácidos
nucleicos y los polisacáridos ácidos )
 (cromatina nuclear de pro y eucariotas)
 (más usados en citología bacteriana).
• Ej: clorhidrato (-) de azul de metileno (+). la safranina, la fucsina básica,
el cristal violeta
 ácidos: Tienen el catión incoloro unido a un anión coloreado. No
tiñen la célula bacteriana, pueden usarse como color de contraste
(coloración negativa). Tiñen estructuras citoplasmáticas de las
células eucariotas(Rx básicas)
 Ej: eosinato (-) de sodio (+),la fucsina ácida y el rojo Congo.
COLORANTES: Tipos
b) Colorantes liposolubles
• Se combinan con los componentes lipídicos de
la célula, usados para revelar la localización de
los depósitos de grasa. Ej. Negro Sudán.
COLORACIONES : Tipos
• Vitales
– Son aquellas que se practican sobre células que están
vivas, mediante la introducción de un colorante en la
circulación de un organismo vivo.
– Ejem: el verde Jano y el azul de metileno.
• Supravitales
– son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos,
pero que están aislados del organismo del que proceden.
• No vitales
– se realizan sobre células muertas.
TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
a) Frotis o película (extensión)
b) La fijación
c) Coloración.
Tinción de células para la observación
microscópica
Extensión de una fina capa
de células sobre el porta
Secado al aire
Fijación por flameado del porta
Adición del colorante
lavado y secado
Se coloca una gota de aceite
de inmersión sobre el porta y
se observa con el objetivo de
100X
Coloraciones
TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
a) Frotis o película (extensión)
• Utilizar portaobjetos limpios y desengrasados
Coloraciones
TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
b) La fijación:
Los microorganismos queden adheridos al portaobjeto ( coagula las sustancias proteicas)
TIPOS
– CON CALOR (O MÉTODO DE KOCH)
– FIJACIÓN QUÍMICA: alcohol metílico, formalina al 5 % (v/v), licor de Hoffman (partes iguales
de etanol absoluto y éter)
Metanol
TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
c) Coloración. SIMPLE : Positiva o negativa
Tinción simple de azul de metileno.
Frotis y fijación
Tinción
1.- Poner una gota de agua en
un porta
2.- Tomar la muestra con el asa
de siembra
3.-Extender sobre el agua y
fijar a la llama del mechero
1.- Cubrir la preparación
con Azul de Metileno 5’
2.- Lavar con agua, dejar
secar y observar al
microscopio
Micrococcus luteus
Lunes
1.- Colocar una gota de
Nigrosina en un porta
2.- Tomar muestra del
microorganismo con el asa,
flamear el tubo y tapar
3.- Mezclar con la
Nigrosina y extender por
todo el porta. Secar al aire
y observar
Tinción negativa.
Lunes
cápsulas tanto bacterianas como de levaduras, esporas que se observan como cuerpos
refringentes y espiroquetas
 Hongos
 Tinción negativa
TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA
PREPARACIÓN COLOREADA
c) Coloración. Diferencial o compuesta
se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos
Etapas :
1. tinción primaria
2. Tinción de contraste o secundaria
- Ejemplo.: COLORACION GRAM, COLORACION DE ZIEHL-
NEELSEN, ESPORAS
Coloraciones
TERMINOS
• Los mordientes, aunque no son
colorantes, intensifican la tinción
porque aumentan la afinidad de la
célula por el colorante. También se
pueden utilizar para producir un
engrosamiento de ciertas estructuras
celulares externas, como los flagelos,
que debido a su delgadez no podrían
ser visualizados de otra forma.
Diferencias en la pared celular
Frotis y fijación
1.- Poner una gota de
agua en un porta
2.- Tomar la muestra con
el asa de siembra
3.- Extender sobre el
agua y fijar a la llama
del mechero
Tinción
1.- Cubrir la
preparación con
Cristal Violeta 2’
2.- Añadir Lugol
(mordiente) durante 1’
3.- Decolorar con Alcohol
96º hasta que no suelte
colorante
4.- Lavar con agua 5.- Teñir con Safranina 1’ 6.- Lavar con agua, dejar
secar y observar al
microscopio
L-3.2.3.- Tinción de Gram
Lunes
Tinción de Gram
Paso 1
Paso 2
Paso 3
Paso 4
Tinción del frotis
Previamente fijado al calor,
con cristal violeta
Durante 1 minuto.
Todas las células se tiñen
de color azul-violeta.
Añadir Lugol,
dejar actuar 2 minutos
Todas las células siguen
de color azul-violeta.
Decolorar con alcohol
Las células Gram +
siguen de color azul-violeta.
Las Gram negativas
se decoloran.
Tinción de contraste
Con safranina 2 minutos.
Las células G+
se ven azul-violeta.
Las G- rosas o rojas.
Gram +
Gram -
PROCEDIMIENTO COLORACION
GRAM
Cocos Gram - Bacilos Gram -
Tinción de Gram
Lunes
COLORACIÓN DE ZIEHL- NEELSEN
fundamento de esta técnica diferencial se basa en la propiedad
de la pared celular Orden Actinomycetales. (acidos micólicos)
• Resiste la decoloración con alcohol y un ácido fuerte cuando
• VARIANTES
• Caliente : Mycobacterium
• En frío (o de Kinyoun) : Cryptosporidium, Cyclospora E
Coloraciones
Coloraciones
Frotis y fijación
1.-Poner una gota de agua en un
porta
2.- Tomar la muestra de un
cultivo de Mycobacterium
3.-Extender sobre el agua y
fijar a la llama del mechero
1.-Cubrir la preparación con
Fuchina fenicada
2.-Calentar con un hisopo de
algodón empapado en alcohol y
prendido con la llama del mechero
hasta la emisión de vapores.
Mantener durante 5 minutos.
3.-Lavar con agua y
decolorar con alcohol
ácido
4.-Teñir con Azul de
Metileno 1’
5.-Lavar con agua, dejar
secar y observar al
microscopio
Miercoles
Tinción
Tinción de ácido-alcohol-resistente.
Tinción de esporas.
Frotis y fijación
1.-Poner una gota de
agua en un porta
2.-Tomar la muestra de un
cultivo de Bacillus
3.-Extender sobre el
agua y fijar a la llama
del mechero
1.-Cubrir la
preparación con Verde
Malaquita
2.-Calentar, con un
hisopo de algodón
empapado en alcohol y
prendido con la llama
del mechero, hasta la
emisión de vapores.
Mantener caliente
durante 5 minutos.
3.-Lavar con agua 4.-Teñir con Safranina 1’
5.-Lavar con agua, dejar
secar y observar al
microscopio
Tinción
Bacterias
Esporas
Miercoles
Coloraciones
Coloraciones
Coloraciones
Coloraciones
La tinción de flagelos de Leifson
• 1.Se fija químicamente la suspensión bacteriana,
mediante formol, y se hace la extensión en un
portaobjetos.
• 2.Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno.
• 3.Se cubre la preparación con una mezcla de ácido
tánico y el colorante rosanilina, de preparación
extemporánea. El ácido tánico engruesa los flagelos y
la rosanilina los tiñe.
• 4.Se retira el exceso de colorante con agua.
5. Por último, se deja secar al aire, antes de su
observación al microscopio.
• Figura 3.11Tinciones específicas. (a) La tinción de Wirtz-Conklin se utiliza para observar
endosporas. Bacilius cereus (b) La tinción de Leifson revela que este microorganismo posee
flagelos, lo cual contribuye a su identificación como Spirillum volutans..(c) La tinción negativa
con tinta china permite observar que esta bacteria posee cápsula, lo que facilita su
identiticación como Klebsiella pneumoniae, agente causal de la neumonía.
Tinción Uso Técnicas
Tinciones
simples
Un colorante; proporciona contraste para
observar mejor un organismo completo
Se tine con un colorante básico (azul de metileno, cristal violeta, o fucsina
básica) durante unos 5 minutos. Aclarar brevemente con agua. Se tiñen casi
todas las bacterias; la rnayoría de los tejidos no se tiñen.
Tínciones
diferenciales
Tinción de Gram Dos o más colorantes; distingue entre
bacterias Gram positivas y Gram negativas
Se cubre la preparación de bacterias fijadas con cristal violeta y después con
una solución de iodo (mordiente). Todas las células quedan tenidas de color
violeta oscuro. Se decolora con acetona al 95%.
Las células Gram positivas permanecen tenidas, pero las negativas pierden el
colorante. Se tiñe con safranina (contraste). El color violeta de las Gram
positivas se vuelve más oscuro y las Gram negativas se tiñen de rosa.
Tinción de
ácido-alcohol
resistencia
(Ziehl-Neelsen)
Dos colorantes; distingue entre las
micobacterias (ácido-alcohol resistentes) y el
resto de las bacterias
Se tiñen las células con fucsina básica y se calienta a emisión de vapores
durante 5 minutos. Todas las bacterias se tinen de rojo. Se decolora
brevemente con una mezcla de alcohol-HCl. Las bacterias resistentes
permanecen teñidas de rojo; todas las demás se decoloran. Se trata con el
colorante de contraste azul de metileno. Las bacterias ácido-alcohol resistentes
continúan tenidas de rojo, las otras se tiñen de azul.
Tinciones
especificas
Tinción de
esporas de
Wirtz-Cortitlin
Tiñe selectivamente las endosporas Se cubre la preparación con verde de malaquita y se calienta a emisión de
vapores durante 60 segundos. Se lava con agua durante 30 segundos y se tiñe
con safranina. Las endosporas retienen el color verde; el resto de la célula
toma el color rosa.
Tinción de
flagelos de
Leifson
Permite observar los flagelos A las células previamente fijadas, se le añade una mezcla de ácido tánico
(mordiente) y del colorante rosanilina. El mordiente engruesa los flagelos y el
colorante los fine.
Tinción negativa Revela la presencia de cápsulas Se utiliza tinta china o nigrosina para tenir una preparación en fresco del
espécimen. Las particulas de colorante no pueden penetrar en la cápsula, que
se observa como una región clara alrededor de la célula.
Técnicas de tinción para bacterias
Imágenes de Paramecium al mismo aumento (1000x), pero con distintos
microscopios. (a) La microscopía de campo claro permite observar la forma y las
estructuras internas de mayor tamaño, como el núcleo. (b) La imagen de
contraste de fases muestra mayor detalle interno, y el característico halo. (c) La
microscopía de campo oscuro revela la presencia de cilios. (d) La imagen de
Nomarsky es casi tridimensional.
PARASITOS: Plasmodium
• GIEMSA O WRIGHT
COLORACION LEISHMAN
HONGOS
• AZUL DE LACTOFENOL
• T. MENTAGROPHYTES
COLORACION DE TEJIDOS
HEMTOXILINA /EOSINA
Hay alguna pregunta…?
o de lo contrario…
…seguimos en la
próxima clase !!!

Más contenido relacionado

PPTX
Tema 7. Procesamiento citológico y tisular
PPTX
La historia de la microbiología
PPTX
Generalidades de Tecnicas de tincion en histologia
PPTX
Anatomía radiológica
PPTX
Tinciones de los hongos
PPTX
Tema 2.1 preparaciones fijas y en fresco
PPT
Citologia i
PDF
Matematicas Financieras ( PDFDrive.com ).pdf
Tema 7. Procesamiento citológico y tisular
La historia de la microbiología
Generalidades de Tecnicas de tincion en histologia
Anatomía radiológica
Tinciones de los hongos
Tema 2.1 preparaciones fijas y en fresco
Citologia i
Matematicas Financieras ( PDFDrive.com ).pdf

La actualidad más candente (20)

PPT
2.5.morfologia colonial
PPTX
Tinciones de capsula: TINCION NEGATIVA Y TINCION DE HISS
PPTX
Laboratorio no. 5 pruebas bioquímicas
PPTX
Tinciones microbianas
DOCX
Pruebas bioquímicas
DOCX
Reporte de práctica 3. Pruebas bioquímicas
DOCX
Tincion gram
PPTX
Laboratorio no. 3 medios de cultivo
PDF
Test de Camp
PDF
Medios De Cultivo Y Pruebas Bioquimica
PPTX
PPT
Pruebas bioquimicas en Enterobacterias
PPS
cocos gram positivos
PPTX
Tinciones de GRAM y ZIEHL NEELSEN
PPTX
Métodos de siembra y aislamiento
PPTX
Agar manitol salado
DOCX
Reporte de práctica 9. Antibiogramas.
PDF
Práctica 2. Tinción de Gram
DOC
Guía III: Identificación de Enterobacterias
PPTX
TINCIONES ÁCIDO-RESISTENTES
2.5.morfologia colonial
Tinciones de capsula: TINCION NEGATIVA Y TINCION DE HISS
Laboratorio no. 5 pruebas bioquímicas
Tinciones microbianas
Pruebas bioquímicas
Reporte de práctica 3. Pruebas bioquímicas
Tincion gram
Laboratorio no. 3 medios de cultivo
Test de Camp
Medios De Cultivo Y Pruebas Bioquimica
Pruebas bioquimicas en Enterobacterias
cocos gram positivos
Tinciones de GRAM y ZIEHL NEELSEN
Métodos de siembra y aislamiento
Agar manitol salado
Reporte de práctica 9. Antibiogramas.
Práctica 2. Tinción de Gram
Guía III: Identificación de Enterobacterias
TINCIONES ÁCIDO-RESISTENTES
Publicidad

Similar a Coloraciones (20)

PPTX
TINCIONES SIMPLES Y COMPUESTAS MICRO VET
DOC
Guia Laboratorio 3
DOCX
Examen microscopico de las bacterias
PPT
Técnicas de Tinción.ppt
DOCX
Examen microscopico de las bacterias
PPTX
Tema 2.1 Preparaciones fijas y en fresco.pptx
PPTX
TICCION.pptx
PPT
Tinciones Diferenciales Aspectos Tecnicos
PDF
15024971 cap-5-coloraciones
PPTX
PRACTICA 2 TINCION GRUPO 1 diferencial. simple, capsulas y endosporas
PDF
Métodos de tinción microbiana
PDF
Tincion Gram y Simple
PDF
Coloraciones_Microbiologicas_Simples_y-63935371.pdf
PPTX
Colonias Y tipos de tinciones
PDF
Tecnicasdetincion
PPTX
Exposición, tinciones Gram.pptx facil de entender
PPTX
Tuberculosis (fil eminimizer)
DOCX
Preparación de muestras microbiologicas para observación microscópica
DOCX
Lb coloracione
PPTX
Tinciones selectivas
 
TINCIONES SIMPLES Y COMPUESTAS MICRO VET
Guia Laboratorio 3
Examen microscopico de las bacterias
Técnicas de Tinción.ppt
Examen microscopico de las bacterias
Tema 2.1 Preparaciones fijas y en fresco.pptx
TICCION.pptx
Tinciones Diferenciales Aspectos Tecnicos
15024971 cap-5-coloraciones
PRACTICA 2 TINCION GRUPO 1 diferencial. simple, capsulas y endosporas
Métodos de tinción microbiana
Tincion Gram y Simple
Coloraciones_Microbiologicas_Simples_y-63935371.pdf
Colonias Y tipos de tinciones
Tecnicasdetincion
Exposición, tinciones Gram.pptx facil de entender
Tuberculosis (fil eminimizer)
Preparación de muestras microbiologicas para observación microscópica
Lb coloracione
Tinciones selectivas
 
Publicidad

Más de Isabel Carrillo (6)

DOCX
I will tell you about my personal information
DOCX
Deber 1 diseno experimental optimistas
PPTX
Microbiología
PPT
Cultivos celulares
PPTX
Timcion gram
PDF
Mlc043 helados
I will tell you about my personal information
Deber 1 diseno experimental optimistas
Microbiología
Cultivos celulares
Timcion gram
Mlc043 helados

Coloraciones

  • 3. 1. Observación en fresco Son preferibles en las situaciones siguientes: • La morfología de las bacterias se altera cuando se desecan y tiñen. • Cuando las bacterias se observan para determinar movilidad • Para observar los cambios citológicos que ocurren durante la división celular • Por este método se observan fácilmente algunas inclusiones celulares como vacuolas y materias grasa. 2. Observación con tinciones • Para observar las características morfológicas de las bacterias • Identificación y diferenciación de microbios entre especie y dentro de la misma especie (tinción diferencial o selectiva). Lunes TIPO DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS
  • 4. 1. Observación en fresco •preparación en fresco simple •preparación en gota pendiente 2. Observación con tinciones •Tinción simple: un solo colorante. •Tinción diferencial: más de un colorante •Tinción especial Tinción negativa: colorea el medio que rodea a la bacteria permaneciendo ésta sin teñir. Lunes TIPO DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS
  • 5. Porta objeto Muestra 1. Colocar una gota de SSF o agua en un porta 2.- Tomar la muestra con el asa de siembra o un gotero Procedimiento para un preparado en fresco ("entre porta y cubre")
  • 6. Observación microscópica 1. Observación en fresco  Bacterias: Leptospiras, treponemas (M. campo oscuro)
  • 7. Observación microscópica 1. Observación en fresco : (SSF)  Parásitos : Trofozoitos, larvas.
  • 8. Observación microscópica 1. Observación en fresco  Hongos: Levaduras
  • 9. Observación microscópica 1. Observación en fresco con modificaciones  Hongos  NaOH 10% (hifas)
  • 10. Procedimiento para un preparado en fresco en gota pendiente
  • 11. 2. TINCIONES O COLORACIONES
  • 13. COLORANTE: DEFINICIÓN • Son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por algún componente. • Los colorantes son compuestos químicos utilizados para aumentar el contraste
  • 14. COLORANTES: Tipos a) Sales colorantes: más comúnmente usados  básicos: Consisten en un catión coloreado unido a un anión incoloro. Tiñen la célula bacteriana uniformemente (ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos )  (cromatina nuclear de pro y eucariotas)  (más usados en citología bacteriana). • Ej: clorhidrato (-) de azul de metileno (+). la safranina, la fucsina básica, el cristal violeta  ácidos: Tienen el catión incoloro unido a un anión coloreado. No tiñen la célula bacteriana, pueden usarse como color de contraste (coloración negativa). Tiñen estructuras citoplasmáticas de las células eucariotas(Rx básicas)  Ej: eosinato (-) de sodio (+),la fucsina ácida y el rojo Congo.
  • 15. COLORANTES: Tipos b) Colorantes liposolubles • Se combinan con los componentes lipídicos de la célula, usados para revelar la localización de los depósitos de grasa. Ej. Negro Sudán.
  • 16. COLORACIONES : Tipos • Vitales – Son aquellas que se practican sobre células que están vivas, mediante la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo. – Ejem: el verde Jano y el azul de metileno. • Supravitales – son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos, pero que están aislados del organismo del que proceden. • No vitales – se realizan sobre células muertas.
  • 17. TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN COLOREADA a) Frotis o película (extensión) b) La fijación c) Coloración.
  • 18. Tinción de células para la observación microscópica Extensión de una fina capa de células sobre el porta Secado al aire Fijación por flameado del porta Adición del colorante lavado y secado Se coloca una gota de aceite de inmersión sobre el porta y se observa con el objetivo de 100X
  • 20. TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN COLOREADA a) Frotis o película (extensión) • Utilizar portaobjetos limpios y desengrasados
  • 22. TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN COLOREADA b) La fijación: Los microorganismos queden adheridos al portaobjeto ( coagula las sustancias proteicas) TIPOS – CON CALOR (O MÉTODO DE KOCH) – FIJACIÓN QUÍMICA: alcohol metílico, formalina al 5 % (v/v), licor de Hoffman (partes iguales de etanol absoluto y éter) Metanol
  • 23. TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN COLOREADA c) Coloración. SIMPLE : Positiva o negativa
  • 24. Tinción simple de azul de metileno. Frotis y fijación Tinción 1.- Poner una gota de agua en un porta 2.- Tomar la muestra con el asa de siembra 3.-Extender sobre el agua y fijar a la llama del mechero 1.- Cubrir la preparación con Azul de Metileno 5’ 2.- Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio Micrococcus luteus Lunes
  • 25. 1.- Colocar una gota de Nigrosina en un porta 2.- Tomar muestra del microorganismo con el asa, flamear el tubo y tapar 3.- Mezclar con la Nigrosina y extender por todo el porta. Secar al aire y observar Tinción negativa. Lunes cápsulas tanto bacterianas como de levaduras, esporas que se observan como cuerpos refringentes y espiroquetas
  • 27. TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN COLOREADA c) Coloración. Diferencial o compuesta se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos Etapas : 1. tinción primaria 2. Tinción de contraste o secundaria - Ejemplo.: COLORACION GRAM, COLORACION DE ZIEHL- NEELSEN, ESPORAS
  • 29. TERMINOS • Los mordientes, aunque no son colorantes, intensifican la tinción porque aumentan la afinidad de la célula por el colorante. También se pueden utilizar para producir un engrosamiento de ciertas estructuras celulares externas, como los flagelos, que debido a su delgadez no podrían ser visualizados de otra forma.
  • 30. Diferencias en la pared celular
  • 31. Frotis y fijación 1.- Poner una gota de agua en un porta 2.- Tomar la muestra con el asa de siembra 3.- Extender sobre el agua y fijar a la llama del mechero Tinción 1.- Cubrir la preparación con Cristal Violeta 2’ 2.- Añadir Lugol (mordiente) durante 1’ 3.- Decolorar con Alcohol 96º hasta que no suelte colorante 4.- Lavar con agua 5.- Teñir con Safranina 1’ 6.- Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio L-3.2.3.- Tinción de Gram Lunes
  • 32. Tinción de Gram Paso 1 Paso 2 Paso 3 Paso 4 Tinción del frotis Previamente fijado al calor, con cristal violeta Durante 1 minuto. Todas las células se tiñen de color azul-violeta. Añadir Lugol, dejar actuar 2 minutos Todas las células siguen de color azul-violeta. Decolorar con alcohol Las células Gram + siguen de color azul-violeta. Las Gram negativas se decoloran. Tinción de contraste Con safranina 2 minutos. Las células G+ se ven azul-violeta. Las G- rosas o rojas. Gram + Gram -
  • 34. Cocos Gram - Bacilos Gram - Tinción de Gram Lunes
  • 35. COLORACIÓN DE ZIEHL- NEELSEN fundamento de esta técnica diferencial se basa en la propiedad de la pared celular Orden Actinomycetales. (acidos micólicos) • Resiste la decoloración con alcohol y un ácido fuerte cuando • VARIANTES • Caliente : Mycobacterium • En frío (o de Kinyoun) : Cryptosporidium, Cyclospora E
  • 38. Frotis y fijación 1.-Poner una gota de agua en un porta 2.- Tomar la muestra de un cultivo de Mycobacterium 3.-Extender sobre el agua y fijar a la llama del mechero 1.-Cubrir la preparación con Fuchina fenicada 2.-Calentar con un hisopo de algodón empapado en alcohol y prendido con la llama del mechero hasta la emisión de vapores. Mantener durante 5 minutos. 3.-Lavar con agua y decolorar con alcohol ácido 4.-Teñir con Azul de Metileno 1’ 5.-Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio Miercoles Tinción Tinción de ácido-alcohol-resistente.
  • 39. Tinción de esporas. Frotis y fijación 1.-Poner una gota de agua en un porta 2.-Tomar la muestra de un cultivo de Bacillus 3.-Extender sobre el agua y fijar a la llama del mechero 1.-Cubrir la preparación con Verde Malaquita 2.-Calentar, con un hisopo de algodón empapado en alcohol y prendido con la llama del mechero, hasta la emisión de vapores. Mantener caliente durante 5 minutos. 3.-Lavar con agua 4.-Teñir con Safranina 1’ 5.-Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio Tinción Bacterias Esporas Miercoles
  • 44. La tinción de flagelos de Leifson • 1.Se fija químicamente la suspensión bacteriana, mediante formol, y se hace la extensión en un portaobjetos. • 2.Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno. • 3.Se cubre la preparación con una mezcla de ácido tánico y el colorante rosanilina, de preparación extemporánea. El ácido tánico engruesa los flagelos y la rosanilina los tiñe. • 4.Se retira el exceso de colorante con agua. 5. Por último, se deja secar al aire, antes de su observación al microscopio.
  • 45. • Figura 3.11Tinciones específicas. (a) La tinción de Wirtz-Conklin se utiliza para observar endosporas. Bacilius cereus (b) La tinción de Leifson revela que este microorganismo posee flagelos, lo cual contribuye a su identificación como Spirillum volutans..(c) La tinción negativa con tinta china permite observar que esta bacteria posee cápsula, lo que facilita su identiticación como Klebsiella pneumoniae, agente causal de la neumonía.
  • 46. Tinción Uso Técnicas Tinciones simples Un colorante; proporciona contraste para observar mejor un organismo completo Se tine con un colorante básico (azul de metileno, cristal violeta, o fucsina básica) durante unos 5 minutos. Aclarar brevemente con agua. Se tiñen casi todas las bacterias; la rnayoría de los tejidos no se tiñen. Tínciones diferenciales Tinción de Gram Dos o más colorantes; distingue entre bacterias Gram positivas y Gram negativas Se cubre la preparación de bacterias fijadas con cristal violeta y después con una solución de iodo (mordiente). Todas las células quedan tenidas de color violeta oscuro. Se decolora con acetona al 95%. Las células Gram positivas permanecen tenidas, pero las negativas pierden el colorante. Se tiñe con safranina (contraste). El color violeta de las Gram positivas se vuelve más oscuro y las Gram negativas se tiñen de rosa. Tinción de ácido-alcohol resistencia (Ziehl-Neelsen) Dos colorantes; distingue entre las micobacterias (ácido-alcohol resistentes) y el resto de las bacterias Se tiñen las células con fucsina básica y se calienta a emisión de vapores durante 5 minutos. Todas las bacterias se tinen de rojo. Se decolora brevemente con una mezcla de alcohol-HCl. Las bacterias resistentes permanecen teñidas de rojo; todas las demás se decoloran. Se trata con el colorante de contraste azul de metileno. Las bacterias ácido-alcohol resistentes continúan tenidas de rojo, las otras se tiñen de azul. Tinciones especificas Tinción de esporas de Wirtz-Cortitlin Tiñe selectivamente las endosporas Se cubre la preparación con verde de malaquita y se calienta a emisión de vapores durante 60 segundos. Se lava con agua durante 30 segundos y se tiñe con safranina. Las endosporas retienen el color verde; el resto de la célula toma el color rosa. Tinción de flagelos de Leifson Permite observar los flagelos A las células previamente fijadas, se le añade una mezcla de ácido tánico (mordiente) y del colorante rosanilina. El mordiente engruesa los flagelos y el colorante los fine. Tinción negativa Revela la presencia de cápsulas Se utiliza tinta china o nigrosina para tenir una preparación en fresco del espécimen. Las particulas de colorante no pueden penetrar en la cápsula, que se observa como una región clara alrededor de la célula. Técnicas de tinción para bacterias
  • 47. Imágenes de Paramecium al mismo aumento (1000x), pero con distintos microscopios. (a) La microscopía de campo claro permite observar la forma y las estructuras internas de mayor tamaño, como el núcleo. (b) La imagen de contraste de fases muestra mayor detalle interno, y el característico halo. (c) La microscopía de campo oscuro revela la presencia de cilios. (d) La imagen de Nomarsky es casi tridimensional.
  • 50. HONGOS • AZUL DE LACTOFENOL • T. MENTAGROPHYTES
  • 52. Hay alguna pregunta…? o de lo contrario… …seguimos en la próxima clase !!!