Actividad enzimática: catalasa.
- 2. Ejemplos de enzimas: Catalasa Se encuentra en casi todas las células aerobias, en los peroxisomas. Actúa rompiendo el peróxido de hidrógeno que se produce en las células en agua y oxígeno : 2 H2O2 catalasa 2 H2O + O2
- 3. Materiales y utilidad Patata. En ella están presentes las enzimas de catalasa cuya actividad queremos observar. Se escogió la patata por ser muy manipulable y accesible. Bisturí o cuchillo. Pinzas. Tubos de ensayo. Gradillas para tubos. Mechero. Para calentar las muestras y ver el efecto del aumento de temperatura.
- 4. NaOH. Para observar el efecto del pH demasiado básico. Vinagre. Para observar el efecto del pH demasiado ácido Hielo. Para enfriar ciertas muestras y desnaturalizar la catalasa, esta vez por frío. Agua oxigenada comercial (peróxido de hidrógeno al 3%). Es el sustrato, que reaccionará con la enzima si ésta no está desnaturalizada, y que no reaccionará en caso de que sí lo esté. La evidencia de la reacción es que al realizarse se libera espuma o burbujas por el desprendimiento de O2.
- 5. Desarrollo de la práctica Cada grupo dispone de 5 tubos señalados de la A a la E. A los tubos A se les añade un cubito de patata y 2ml de H2O2. A los tubos B se les añade un cubito de patata y 2ml de vinagre. Hay que esperar al menos 5 minutos para que el vinagre surta efecto. A los tubos C se les añade un cubito de patata y 2 ml de la disolución de NaOH. Hay que esperar 5 minutos para que el NaOH surta efecto
- 6. A los tubos D se les añade un cubito de patata y 2ml de H2O. Hay que hervir durante 5 minutos. A los tubos E se les añade un cubito de patata y 2ml de H2O. Hay que introducir los dos tubos en recipiente con agua y hielo durante 10 minutos. Por último se añaden 2ml de H2O2 a todos los tubos que aún no lo tenían (todos menos el A ) Desarrollo de la práctica
- 7. Observación de resultados TUBO TRATAMIENTO RESULTADO OBSERVADO EXPLICACIÓN A Patata + 2ml H2O2 Salen burbujas. B No salen burbujas. C No salen burbujas. D No salen burbujas. E Apenas salen burbujas. En los tubos E no deberían haber salido burbujas; la desnaturalización debería haber sido más radical, pero quizá el tiempo al que se sometieron las muestras al frío no fue suficiente. Pudo haberse dado la renaturalización de la catalasa. Sería mejor añadir el H2O2 lo antes posible después de quitar los muestras F y F’ del hielo, para que no haya tiempo de renaturalización.
- 8. Interpretación Tubo A: la catalasa contenida en la patata reacciona con el H2O2 dando agua y oxígeno que al ser un gas, tiende a salir y al hacerlo, burbujea. Tubo B: El vinagre añadido desnaturaliza la catalasa (a un pH ácido las proteínas se desnaturalizan) y cuando añadimos el H2O2 no se produce reacción. Tubo C: El NaOH ha desnaturalizado la catalasa (un pH alcalino también la desnaturaliza) y tampoco hay reacción con el H2O2. Tubo D: No hay reacción con el H2O2 porque el calor a desnaturalizado la enzima. Tubo E: Hubo una pequeña reacción que no debió darse. Tal vez la inmersión en medio frío debió durar más o, quizás, se tardó un poco en añadir el H2O2 después de sacar la muestra del agua helada y la enzima tuvo tiempo de renaturalizarse.
- 9. Efecto de la temperatura
- 10. El efecto del pH