2.METODOS DE DIAGNOSTICO EN ENFERMEDADES INFECCIOSAS 2021.pptx

PRUEBAS DIAGNOSTICAS ACTUALES EN
ENFERMEDADES INFECCIOSAS
INFECTOLOGÍA CLINICA
Dr. Luis Ignacio Dircio Leyva
Docente. UAT

PANORAMA GENERAL EN PRUEBAS DIAGNOSTICAS

METODOS DE DETECCIÓN
Se utilizan 5 planteamientos generales para detectar
microorganismos y la respuesta del huésped a infecciones
especificas:
1. Microscopia
2. Cultivo
3. Detección de antígenos
4. Detección de ácidos nucleicos bacterianos
5. Detección de Ac dirigidos contra el microorganismo
Mandel, Douglas y Bennett. Enfermedades Infecciosas. Principios y practicas. Octava Edición.

MICROSCOPIA
Es el conjunto de técnicas y métodos
destinados a hacer visible los objetos de
estudio que por su pequeñez están fuera
del rango de resolución del ojo normal.

MICROSCOPIA

MICROSCOPIA
Las bacterias son detectadas
mas comúnmente por medio
de colorantes diferenciales
(ej. Gram, acido –alcohol
resistente, Giemsa) y
tinciones fluorescentes
(naranja de acridina,
auramina – rodamina).
Tinción de Gram: positivas o
negativas y si es coco o
bacilo.
Tinción acido –alcohol:
bacterias de interés clínico

MICROSCOPIA
Tinción de Giemsa y Wright-Giemsa: útiles para bacterias,
hongos y parásitos en sangre. Poco sensibles. Es efectiva ya que
al dar positivo es una confirmación de un microorganismo.
Tinciones fluorescentes: Son mas sensibles, y Misma
sensibilidad que otras tinciones.
Tinciones de anticuerpos fluorescentes directos (DFA): Útiles
para identificas virus, y para bacterias con ciertas limitaciones
por los reactivos poco accesibles.

CULTIVOS
Se basan sobre la
capacidad de los
microorganismos
para crecer in vitro.
Medios generales
enriquecidos
Selectivos Diferenciales Específicos

CULTIVOS
Medios generales
enriquecidos, sustentan el
crecimiento de la mayoría
de los microorganismos.
(Agar - sangre; agar –
chocolate).
Medios selectivos;
sustentan el crecimiento de
ciertos microorganismos e
inhiben a otros, sea G+ o
G-. (Agar de McConkey, agar
de bifeniletil alcohol)

CULTIVOS
Medios diferenciales: Es capaz de
distinguir dos microorganismos por su
crecimiento diferencial en el mismo,
usando propiedades de ambos en
presencia de un determinado nutriente
y de un indicador que evidencia, ej. Un
pH acido en su entorno.
Medios específicos: Se utilizan para
llevar a cabo las pruebas de
sensibilidad antimicrobiana.

DETECCION ANTIGENICA (INMUNOENSAYO)
Las pruebas de detección rápida (PDR) son
técnicas inmunológicas que se fundamentan
en la afinidad antígeno-anticuerpo, de forma
que si disponemos de anticuerpos específicos
podemos detectar los antígenos
correspondientes en una muestra clínica.
Son pruebas que se pueden utilizar
rápidamente y son relativamente baratas.
Son de baja especificidad y sensibilidad y son
de disponibilidad limitada.

DETECCION ANTIGENICA
 Ejemplos utilizados:

DETECCION ANTIGENICA
Contrainmunoelectroforesis
Inmunofluorescencia directa o indirecta
Aglutinación con látex
Ensayo inmunoenzimatico

PRUEBAS BASADAS EN ACIDOS NUCLEICOS
Son pruebas limitadas, y que se han ido desarrollando a la
fecha.
Utilizadas principalmente para detección de N. gonorrhoeae,
C. trachomatis y M. tuberculosis.
Son pruebas muy complejas.
Ejemplos: BD MAX, BioFire FilmArray, GeneXpert y Verigene
Son muy caras.

PRUEBAS BASADAS EN ACIDOS NUCLEICOS

SEROLOGÍA
Se emplea para confirmar infecciones que son
difíciles de detectar por otras pruebas.
Inconvenientes que tienen:
• Los pacientes inmunocomprometidos no desarrollan una
respuesta de anticuerpos y no son detectados sino hasta
mucho tiempo después.
• La diferencia de anticuerpos es difícil establecer si es reciente
o ya con mucho tiempo de que sucedió la enfermedad.
• Que existan pruebas cruzadas.
Es el estudio de las reacciones antígeno-anticuerpo in vitro (detección de Ac inducidos por un patógeno)

OTRO PUNTO DE VISTA EN LAS PRUEBAS DIAGNOSTICAS
Señales biológicas
• Es un material que puede diferenciarse las veces que sea
necesario de otras sustancias presentes en el mismo entorno
físico.
• Ejemplos: componentes estructurales de bacterias, hongos y
virus; antígenos específicos; productos metabólicos
terminales; secuencias de bases singulares de DNA o RNA;
enzimas; toxinas u otras proteínas y polisacáridos de
superficie.
Harrison. Principios de Medicina Interna, 19e
Dennis Kasper, Anthony Fauci, Stephen Hauser, Dan Longo, J. Larry Jameson, Joseph Loscalzo

PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA SEÑALES BIOLOGICAS:
Inmunofluorescencia
Quimioluminiscencia con sondas de DNA/RNA
Identificación (por medio de ionización de llama) de ácidos grasos de cadena corta
o larga
Detección de uso de sustratos o la formación de productos terminales con base en
cambios colorimétrico
Actividad de enzimas en la forma de cambios en la absorbencia lumínica
Cambios de la turbidez como un índice de crecimiento o proliferación
Efectos citopáticos en líneas celulares
Aglutinación de partículas como una medida de la presencia del antígeno.

OTRO PUNTO DE VISTA EN LAS PRUEBAS DIAGNOSTICAS
La amplificación mejora la sensibilidad con la que pueden detectarse señales débiles. Por ejemplo:
Cultivos
Reacción de cadena a la Polimerasa (PCR)
Reacción de cadena a la ligasa (LCR)
Amplificación mediada por trascripción (TMA)
Técnicas dirigidas de modo específico a DNA y RNA del patógeno
Enzimoinmunoanálisis (EIA, enzyme immunossays) para antígenos y anticuerpos
Amplificación electrónica (para técnica de cromatografía de gas y líquido)
Métodos de captura de anticuerpos (para concentración o separación, o ambas)
Filtración y centrifugación selectiva.

VALOR DIAGNOSTICO DE UNA PRUEBA
La validez de una prueba se define como la capacidad de una prueba de
distinguir entre quienes presentan la enfermedad y quienes no la presentan.
Una enfermedad puede existir o no y el resultado de una prueba puede ser
positivo o negativo.
Por lo tanto existen 4 posibles combinaciones: positivos verdaderos, positivos
falsos, negativos verdaderos, negativos falsos.
Esta clasificación teóricamente solo seria factible cuando existiera algún
método de exactitud absoluta.

VALOR DIAGNOSTICO DE UNA PRUEBA
Presente Ausente Total
Positiva Positivos
verdaderos
Positivos falsos A+b
Negativa Negativos falsos Negativos
verdaderos
C+d
A+c B+d A+b++c+d
Prueba de detección
Enfermedad
Sensibilidad. Probabilidad de que la prueba sea positiva en las personas que tienen la enfermedad. a/(a+c)
Especificidad. Probabilidad de que la prueba sea negativa en las personas que no tienen la enfermedad. d/(a+b)
Valor predictivo positivo. Probabilidad de que la persona tenga la enfermedad cuando la prueba da un resultado
positivo. a/(a+b)
Valor predictivo negativo. Probabilidad de que la persona no tenga la enfermedad cuando la prueba da un resultado
negativo. d/(c+d).

ESPECIFICIDAD Y SENSIBILIDAD
Especificidad: Capacidad de una prueba de reconocer a un patógeno.
Una especificidad alta reduce los resultados positivos falsos.
Ejemplo: Para la detección de Neisseria gonorrhoeae, la especificidad de
la tinción de Gram es del 99% para los frotis de exudados uretrales de
hombres y aproximadamente el 95% para los exudados endocervicales
de mujeres.
Los resultados positivos falsos para la gonorrea son, por tanto, raros por
este método.
Sensibilidad: Se define como el número mínimo de patógenos o la
menor cantidad de un producto del patógeno que puede ser detectada.
Un nivel alto es cuando la prueba es capaz de identificar a un único
organismo o molécula.
Una alta sensibilidad previene las reacciones negativas falsas.
Ejemplo: Misma bacteria N. gonorrhoeae, misma prueba Tinción de
Gram, es 90% en hombres, 50% en mujeres, es decir en mujeres los
resultados falsos negativos se debe aplicar otra prueba mas sensible.

EJEMPLO DE INTEGRACIÓN DE PRUEBAS DIAGNOSTICAS EN LAS
ENFERMEDADES INFECCIOSAS

BIOMETRÍA HEMÁTICA
Baja sensibilidad y especificidad como
prueba aislada, pero adyuvante junto con
otras pruebas.
La anemia puede ser propia de
enfermedades virales
Plaquetas. Son consideradas como
“Reactantes de fase aguda”, ya sea
trombocitopenia o plaquetopenia,
traducen infección.
Leucocitos, tanto la leucopenia como la
leucocitosis podrían traducir infección en
el paciente.

REACTANTES DE FASE AGUDA
Son aquellas que
aumentan o disminuyen
en un 25% durante la
infección, en respuesta
al efecto de las
citoquinas sobre los
hepatocitos.
Ejemplos. Proteína C
Reactiva, Procalcitonina,
el fibrinógeno, la
ferritina, el amiloide, la
protrombina o el
plasminógeno. VSG.
De todas estas,
actualmente la
Procalcitonina, tienen
alto valor predictivo;
aparece en 2 a 3 horas
después de la agresión.

EXAMEN GENERAL DE ORINA
La combinación de la tira
reactiva de orina y estudio
microscópico de la muestra
permiten alcanzar una
sensibilidad muy alta con una
buena especificidad para el
diagnóstico de infección urinaria.
La combinación de tira reactiva y
estudio microscópico permite
alcanzar una sensibilidad del
99% (leucocituria o nitrituria o
bacteriuria) con una
especificidad del 80-90%

EXAMEN DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
 El estudio citobioquímico y microbiológico del líquido
cefalorraquídeo (LCR) es fundamental en todo paciente con
sospecha de infección del sistema nervioso central.

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