analisis microbiologico de productos farmaceuticos no esteriles

1
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE PRODUCCIÓN Y CONTROL DE BIOLÓGICOS
Análisis microbiológico de
productos farmacéuticos no
estériles

2
Las formas farmacéuticas no estériles son aquellos preparados que permiten la presencia
de una carga bacteriana en cantidad limitada y ausencia de microorganismos específicos,
que están relacionadas a la forma farmacéutica y vía de administración.
Son susceptibles a contaminarse con bacterias, hongos y levaduras durante el transcurso
del proceso de su manufactura. Es importante controlar las poblaciones microbianas pero
no debe poseer algún microorganismo especifico, que son indicativos de contaminación.
Pesado Fabricación Llenado Almacén Uso

3
PFNE
SÓLIDOS
Pastillas
Tabletas
Capsulas
Polvos
SEMI-SÓLIDOS
Cremas
Ungüentos
Supositorios
Óvulos
LÍQUIDOS
Jarabes
Suspensiones
Colirios
AEROSOLES
Forma Farmacéutica:
Es la disposición física que se da
a los fármacos y aditivos para
constituir un medicamento y
facilitar su dosificación y
administración

5
Considerar
• Proceso de fabricación
• Vía de administración
• Naturaleza del producto
• Actividad de agua
• Presencia de preservativos adecuados

6
• Son agentes que inhiben el crecimiento de
microorganismos capaces de causar deterioro biológico de
sustancias o materiales.

7
• Pruebas para evaluar la calidad microbiológica
de productos de productos farmacéuticos
mediante el recuento de las colonias y la
determinación de la ausencia de ciertos
microorganismos en función de la vía de
administración.
Recuento de Organismos
Mesofílicos Aerobios (OMA)
Recuento de Hongos
Filamentosos y Levaduras (H/L)
Investigación de
microorganismos específicos:
E. coli, Salmonella, P.
aeruginosa, S. aureus, C.
albicans.

8
CUANTITATIVA
Mesofílicos aerobios
Hongos
Levaduras
CUALITATIVA
E. coli
Salmonella
Candida albicans
Clostridium
P. aeruginosa
S. aureus

9
Producto Organismo mesofílicos
aerobios (OMA) (UFC(g o
mL)
Hongos filamentosos y
levaduras (UFC(g o mL)
Ausencia por 1 g o 1 mL de
producto
Oral: Sólido 103 102 E. coli
Líquido 102 101 E. coli
Rectal 103 102 No se determina
Bucal 102 101 S. aureus., P. aeruginosa
Tópica (incluye parches
transdérmicos)
102 101 S. aureus (1g. 1mL o parche)
P. Aeruginosa (1g. 1mL o parche)
Nasal 102 101 S. aureus, P. aeruginosa
Ótico 102 101 S. aureus, P. aeruginosa
Vaginal 102 101 S. aureus, P. aeruginosa, C.
albicans
Para inhalación 102 101 S. aureus, P. aeruginosa, Bacterias
Gram (-) tolerantes a la bilis

10
MUESTRA ANALIZADA
Principio activo
OMA
(ORGANISMOS
MESOFILICOS
AEROBIOS)
UFC/g ó Ml
H/L
(HONGOS Y
LEVADURAS
UFC/g ó mL
MICROORGANISMOS
ESPECIFICOS
(AUSENTES)
Clorhidrato de ambroxol.
Sol. Oral
No más de 100 No más de 100 E. coli
Oximetazolina Sol. nasal No más de 100 No más de 100
S. aureus,
P. aeruginosa
Albendazol jarabe No más de 100 No más de 100 E. coli
Amoxicilina polvo para
suspensión
No más de 100 No más de 100 E. coli
Ungüento de
betametasona
No más de 100 No más de 100
S. aureus
P. aeruginosa
Supositorio de acetato de
aluminio e hidrocortisona
No más de 100 No más de 100 No se determina

11
• Filtración por membrana
• Cuenta en placa (vaciado y extensión)
• Numero mas probable (NMP)
Cualquiera que sea el método elegido se debe probar su aptitud.
ELECCIÓN
DEL MÉTODO
Analizar la cantidad
de muestra suficiente
Naturaleza y
especificaciones del
producto

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS.
MÉTODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA
12
El fundamento de la técnica consiste en contar las colonias, que se desarrollan en el medio
de elección después de un cierto tiempo y temperatura de incubación, presuponiendo
que cada colonia proviene de un microorganismo de la muestra bajo estudio. El método
admite numerosas fuentes de variación, algunas de ellas controlables, pero sujetas a la
influencia de varios factores.
Expresión de resultados: Consideraciones
En la lectura, seleccionar aquellas placas donde aparezcan entre 25 a 250 UFC, para
disminuir el error en la cuenta. Calcular la cuenta promedio por gramo o mililitro de dicha
dilución y reportar.
Placas sin colonias.- Cuando las placas de todas las diluciones no muestran colonias,
reportar la cuenta en placa como menor que una vez el valor de la dilución más baja
usada

13
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994,
BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA
CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA.

15
• El estudiante será capaz de llevar a cabo el control microbiológico de materias
primas y productos farmacéuticos no estériles manejando las técnicas
adecuadas descritas en las metodologías oficiales.
• Tendrá la capacidad para analizar, discutir y concluir sobre los diferentes casos
que se le presenten para resolver este tipo de análisis

18
Validez de la prueba de recuento microbiano.
• Para demostrar la aptitud del método es necesario recuperar a los
microorganismos control previamente inoculados en la muestra bajo las
condiciones de prueba.
• Para prueba de aptitud del método para OMA, H/L: no mas de 100 UFC.
• Y para microorganismos específicos: Recuperar el microorganismo de prueba.

19
Cuando se verifica la aptitud del método por el método de cuenta en placa, el
promedio de la cuenta de los microorganismos de referencia en presencia del
producto no debe diferir por un factor mayor que 2 de los valores del control.
Por ejemplo, Si la cuenta control es de 100 UFC:
o El límite inferior aceptable es 100/2 = 50 UFC
o El límite superior es de 100 x 2 = 200 UFC
Si la muestra inhibe el crecimiento, adicionar la suspensión microbiana después
de neutralizar o diluir la actividad antimicrobiana.

20
METODO MICROORGANISMOS
ENUMERACION DE ORGANISMOS
MESOFÍLICOS AEROBIOS (OMA)
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Bacillus subtilis ATCC 6633
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus brasiliensis ATCC 16404
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
ENUMERACION DE HONGOS
FILAMENTOSOS Y LEVADURAS (H/L)

21
METODO MICROORGANISMOS
DETERMINACION DE
MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS
Escherichia coli ATCC 8739
Salmonella enterica ATCC 14028
Clostridium sporogenes ATCC 11437
DETERMINACION DE BACTERIAS GRAM
NEGATIVAS BILIS TOLERANTES
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Escherichia coli ATCC 8739

analisis microbiologico de productos farmaceuticos no esteriles

PRUEBA EQUIPO PRUEBA MATRAZ
SUBCULTI
VO EN
CALDO
McCONKE
Y
(+) / (-)
RECUPERACI
ÓN EN PLACA
POR ESTRÍA
CRUZADA EN
AGAR
McCONKEY
(+) / (-)
LA MORFOLOGÍA
COLONIAL
CORRESPONDE AL
MICROORGANISMO
INOCULADO
SI o NO o NO SE
RECUPERÓ
APTITUD
DEL
METODO
PARA
MICROOR
GANISMO
S
ESPECIFI
COS
3
CONTROL
NEGATIVO
TAT+ diluyente (-) (-) N.A.
CONTROL
POSITIVO
TAT
100 UFC /E. coli (+) (+) SI
PRODUCT
O
TAT+producto+mo de
prueba 100 UFC (+) (+) SI
8
CONTROL
NEGATIVO
CONTROL
POSITIVO
TAT
100 UFC /E. coli (+) (-) NO
PRODUCT
O
TAT+producto+mo de
prueba 100 UFC (+) (-) NO

Medios de cultivo para microorganismos específicos

28
Uso: Medio de cultivo sólido selectivo, diseñado para el aislamiento
de Pseudomonas aeruginosa. Está basado en poner en evidencia la
producción de pigmentos característicos de esta especie.
Morfología colonial esperada: Colonias que están rodeadas de
pigmentos azul-verdoso y presentan fluorescencia a la luz
ultravioleta (254 nm).
Pseudomonas aeruginosa
Uso: medio moderadamente selectivo y de diferenciación para el
aislamiento y la diferenciación de patógenos entéricos Gram
negativos (Salmonella y Shigella).
Morfología colonial esperada: Colonias rojas con centros de color
negro.
Salmonella spp

29
Uso: se utiliza para el aislamiento selectivo de estafilococos y para la
detección de Staphylococcus aureus.
Morfolofia colonial esperada: Los estafilococos positivos a la
coagulasa (Staphylococcus aureus) producen colonias de color
amarillo y un medio circundante de color amarillo, mientras que los
estafilococos negativos a la coagulasa producen colonias de color
rojo y no producen cambio de color en el indicador de rojo fenol.
Uso: Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las
bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+,
Escherichia coli, Enterobacter y Klebsiella) y las que no pueden (Lac-,
Salmonella, Proteus y Shigella).
Morfología colonial esperada: colonias de color rosadas o rojas.
Staphylococcus aureus
Escherichia coli

30
Uso: medio líquido para el enriquecimiento selectivo de Salmonellas.
Crecimiento esperado: Crecimiento homogéneo. Turbidez.
Uso: Medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado
para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y diferenciarlos
sobre la base de la fermentación de la lactosa.
Crecimiento esperado: Los coliformes fermentan la lactosa con
producción de ácido y gas, al acidificar el medio se produce un vire
del indicador de pH de color púrpura al amarillo.
Salmonella spp
Escherichia coli

10 -1
TAT
90 mL
Incubar de 30 a 35°C por 48 h
en condiciones anaeróbicas
10
mL
PRODUCTO
10 g o 10 mL
Resiembra en Agar Columbia
Clostridia
Identificar si hay crecimiento
caracteristico
Determinar la ausencia o presencia
PRODUCTO
10 g o 10 mL
10 -1
Caldo dextrosa
Sabouraud
90 mL
Candida albicans
Resiembra en Agar dextrosa
Sabouraud
Incubar de 30 a 35°C por 18 a
72 h
Incubar de 30 a 35°C
por 3 a 5 días
Tratamiento térmico a un
matraz
Calentamiento a 80°C/10
min
Enfriar
Inocular medio de enriquecimiento para
clostridios
Incubar de 30 a 35°C por 18 a 72 h
Identificar si hay crecimiento
caracteristico
Determinar la ausencia o presencia

32
Uso: Es un medio no selectivo para el cultivo, recuento y
mantenimiento de hongos patógenos y no patógenos y levaduras.
logra selectividad mediante la adición de cloranfenicol. Investigación
para Candida albicans.
Morfología colonial esperada: Colonias cremosas de color blanco
amarillento, opacas, poco elevadas y de bordes bien definidos.
Uso: aislamiento, identificación y conservación de hongos patógenos
y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras.
Investigación para Candida albicans.
Crecimiento esperado: Crecimiento homogéneo. Turbidez.
Candida albicans
Candida albicans

33
Uso: medio de uso general para el cultivo de organismos anaerobios
obligados, en especial Clostridium spp.
Crecimiento esperado: El crecimiento se indica mediante turbidez y,
en el caso de algunos organismos, con la presencia de burbujas de
gas en el medio.
Clostridios
Uso: Detección de microorganismos de crecimiento difícil, recuento
total y ambiental. Investigación para Clostridium sporogenes.
Morfolofia colonial esperada: Colonias grises, hemolíticas o no.
Clostridios

35
Si la recuperación de los microorganismos inoculados no es posible debido a la actividad
antimicrobiana del producto (preservativos o actividad per se), se modifica el procedimiento para
garantizar la validez de los resultados.
AGENTES NEUTRALIZANTES PARA SUSTANCIAS CON
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
SUSTANCIAS CON ACTIVIDAD
ANTIMICROBIANA
NEUTRALIZANTES POTENCIALES
Glutaraldehido, mercuriales Sulfito ácido de sodio (bisulfito de sodio)
Fenoles, Alcoholes, Aldehídos, Sorbatos Dilución
Aldehídos Glicina
Sales cuaternarias de amonio, parahidroxibenzoatos
(parabenos), bis-guanidas
Lecitina
Sales cuaternarias de amonio
Yodo, parabenos
Polisorbato 80 al 3%
Mercuriales Tioglicolato
Mercuriales, Halógenos y Aldehídos Tiosulfato
EDTA (Edetatos) Iones Mg2+
o Ca2+
Fuente: FEUM 2018

¿El neutralizante es efectivo?

¿El neutralizante es tóxico?

42
Cálculo de UFC/mL:
UFC/mL = UFC x 1 / dilución x 1 / alícuota
Si no se presenta crecimiento en las cajas registrar como 0 (Cero)
pero para emitir un resultado final en la columna de UFC/mL se
debe expresar como < 10 UFC/mL, por ser esta la menor dilución.

PRODUCT
O
OMA H/L
MICROORGANIS
MO ESPECIFICO
ESPECIFIFCAIÓN DE CALIDAD
MICROBIOLÓGICA
Clorhidrato de ambroxol. Sol. Oral
¿CUMPLE
CON LA
ESPECIFICACI
ÓN DE
CALIDAD
MICROBIOLO
GÍCA?
SI O NO
dilución
#
COLONIAS
UFC/
g o
mL
dilución
# COLONIAS
UFC/g
o mL
Sin
crecimiento
/Con
crecimiento
OMA
(ORGANISMO
S
MESOFILICOS
AEROBIOS)
UFC/g ó mL
H/L
(HONGOS
Y
LEVADUR
AS)
UFC/g ó
mL
Microorga
nismos
patógenos
CAJA
1
CAJA
2
CAJA
1
CAJA
2
ORAL 10-1 3 1 20 10-1 0 1 10
Sin
crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/
ausente
Si
ORAL 10-1 2 0 10 10-1 0 0 <10
Con
crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/
ausente
No
UFC/g ó mL = UFC promedio X 1/dilución x 1/alícuota

RESULTADOS DE
PRODUCTOS
FARMACÉUTICOS NO
ESTÉRILES

PRUEBA EQUIPO
M.O. DE
PRUEBA
MATRAZ PRUEBA
# Colonias
Dilución 10-1
PROMEDIO
Factor de 2
(Control)
CAJA Límite
inferior
Límite
superior
1 2
EFICACIA DEL
NEUTRALIZANTE
1 y 6
E.coli
TAT+mo de prueba
(104 UFC)
(A) CONTROL 63 71 67 34 134
TAT+producto+mo
de prueba (104
UFC)
(B) NEUTRALIZANTE 43 51 47
C.
albicans
TAT+mo de prueba
(104 UFC)
(A) CONTROL 44 56 50 25 100
TAT+producto+mo
de prueba (104
UFC)
EQUIPO
M.O. DE
PRUEBA
MATRAZ PRUEBA
# Colonias
Dilución 10-1
PROMEDIO
Factor de 2
(Control)
CAJA Límite
inferior
Límite
superior
1 2
TOXICIDAD DEL
NEUTRALIZAN
2 y 7
E.coli
CST+mo de prueba
(104 UFC)
(A) CONTROL 64 81 72 36 108
TAT+mo de prueba
(104 UFC)
C. albicans
CST+mo de prueba
(104 UFC)
(A) CONTROL 50 62 56 28 112
TAT+mo de prueba
(104 UFC)

PRUEBA EQUIPO
M.O. de
prueba
MATRAZ PRUEBA
# Colonias
Dilución 10-1
PROMEDI
O
Factor de 2
(Control)
CAJA Límite
inferior
Límite
superior
1 2
APTITUD
DEL
METODO
PARA OMA
Y H/L
5 y 10
E.coli
TAT+Diluyente+mo de
prueba (104 UFC)
(A) CONTROL 60 75 68 34 136
TAT+producto+mo de
prueba (104 UFC)
(B) OMA 48 61 109
C. albicans
TAT+Diluyente+mo de
prueba (104 UFC)
(A) CONTROL 50 48 49 25 98
TAT+producto+mo de
prueba (104 UFC)
(B) H/L 69 54 62
4 Y 9
Control negativo OMA (AST) 0 0
Control negativo H/L (ADS) 0 0
PRUEBA EQUIPO PRUEBA MATRAZ
SUBCULTIVO EN
CALDO McCONKEY
(+) / (-)
RECUPERACIÓN EN
PLACA POR ESTRÍA
CRUZADA EN
AGAR McCONKEY
(+) / (-)
LA MORFOLOGÍA
COLONIAL CORRESPONDE
AL MICROORGANISMO
INOCULADO
SI o NO o NO SE RECUPERÓ
APTITUD
DEL
METODO
PARA
MICROORG
ANISMOS
ESPECIFICO
S
3
CONTROL
NEGATIVO
CONTROL
POSITIVO
TAT
100 UFC /E. coli (+) (+) SI
PRODUCTO
TAT+producto+mo de prueba 100
UFC (+) (+) SI
8
CONTROL
NEGATIVO
CONTROL
POSITIVO
TAT
100 UFC /E. coli (+) (+) NO
PRODUCTO
TAT+producto+mo de prueba 100
UFC (+) (+) NO

PRODUCTO EQUIPO
OMA H/L
MICROORGANISMO
ESPECIFICO
MICROBIOLÓGICA
Clorhidrato de ambroxol. Sol. Oral ¿CUMPLE CON
LA
ESPECIFICACIÓN
DE CALIDAD
MICROBIOLOGÍC
A?
SI O NO
dilución
# COLONIAS
UFC/g o
mL dilución
# COLONIAS
UFC/g o
mL
Sin crecimiento
/Con
crecimiento
OMA
(ORGANISMO
S
MESOFILICO
S AEROBIOS)
UFC/g ó mL
H/L
(HONGOS Y
LEVADURAS)
UFC/g ó mL
Microorga
nismos
especifico
s
CAJA
1
CAJA
2
CAJA
1
CAJA
2
ORAL 1 y 6 10-1 0 1
10 10-1 0 1
10
Con
crecimiento No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 2 y 7 10-1 0 0
<10 10-1 2 4
30
Sin crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 3 y 8 10-1 9 8
90 10-1 0 0
<10
Sin crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
SI
ORAL 4 y 9 10-1 0 0
<10 10-1 2 1
20
Con crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 5 y 10 10-1 3 8
60 10-1 0 0
<10
Sin crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
SI
ANÁLISIS DE PRODUCTO UFC/g ó mL = UFC x 1/dilución x 1/ alícuota
Donde la alicuota es = 1mL

PRODUCTO EQUIPO
OMA H/L
MICROORGANISMO
ESPECIFICO
MICROBIOLÓGICA
Clorhidrato de ambroxol. Sol. Oral
¿CUMPLE CON
LA
ESPECIFICACIÓN
DE CALIDAD
MICROBIOLOGÍC
A?
SI O NO
dilución
# COLONIAS
UFC/g o
mL dilución
# COLONIAS
UFC/g o
mL
Sin crecimiento
/Con
crecimiento
OMA
(ORGANISM
OS
MESOFILICO
S
AEROBIOS)
UFC/g ó mL
H/L
(HONGOS Y
LEVADURAS
)
UFC/g ó mL
Microorg
anismos
patógeno
s
CAJA
1
CAJA
2
CAJA
1
CAJA
2
ORAL 1 10-1 1 2 20 10-1 0 0 <10 Con crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 2 10-1 5 8 70 10-1 2 1 20 Sin crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 3 10-1 0 0 <10 10-1 0 0 <10 Sin crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
SI
ORAL 4 10-1 0 0 <10 10-1 2 1 20 Con crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 6 10-1 50 65 580 10-1 2 2 20 Con crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 7 10-1 25 32 300 10-1 0 0 <10 Sin crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 8 10-1 0 0 <10 10-1 8 10 90 Sin crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
NO
ORAL 10 10-1 0 0 <10 10-1
1 0 10 Sin crecimiento
No más de
100
No más
de 10
E. coli
/ ausente
SI
ANALISIS DE PRODUCTO: OMA’S, H/L Y MICROORGANISMOS ESPECIFICOS UFC/g ó mL = UFC X 1/dilución x 1/alícuota

analisis microbiologico de productos farmaceuticos no esteriles

Más contenido relacionado

La actualidad más candente (20)

Similar a analisis microbiologico de productos farmaceuticos no esteriles (20)

Más de IPN (20)

Último (20)

analisis microbiologico de productos farmaceuticos no esteriles

Notas del editor