Articulo Modelo Revista Croizatia

137
INFLUENCIA DE LA SALINIDAD POR NaCl Y DEL pH SOBRE LA
ESPORULACIÓN IN VITRO DE UN AISLADO AUTÓCTONO DEL HONGO
ENTOMOPATÓGENO Beauveria bassiana
CAZORLA, Dalmiro; MORALES, Pedro y ACOSTA, María E.
Laboratorio de Entomología, Parasitología y Medicina Tropical (L.E.P.A.M.E.T.), Centro de
Investigaciones Biomédicas, Decanato de Investigación, Universidad Nacional Experimental
«Francisco de Miranda», Coro- Estado Falcón, Venezuela. Lutzomyia@Hotmail.com
RESUMEN: El presente trabajo es parte de un proyecto global para seleccionar micopesticidas
autóctonos contra triatominos. Esta fase se evalua in vitro, sobre medio sólido agar-Lactrimel, el
cual favorece la esporulación de los hongos, los efectos de gradientes de NaCl (1-50%) y pH (2-
12) inicial sobre la esporulación de un aislado autóctono (LF14) del hongo entomopatógeno
Beauveria bassiana (Bálsamo) Vuillemin, el cual posee una elevada virulencia hacia Rhodnius
prolixus y Triatoma maculata, vectores de la tripanosomiasis americana en Venezuela. Después
de 15 días de cultivo a 26 °C y humedad relativa (HR) >90% en cámara de ambientación, la
cantidad de conidias decreció significativamente con el incremento de la concentración de NaCl
[NaCl] (F= 193,08; p < 0,0000), inhibiéndose totalmente el proceso de esporulación a partir de la
[NaCl] del 15%. El aislado LF14 de B. bassiana esporuló en todos los pH ácidos (2, 3, 4,) y
básicos (10, 11, 12) ensayados, alcanzando su mayor producción de conidias en el rango de pH
inicial entre 4 y 6,7 (F= 78,82; p < 0,0000).A la luz de estos resultados, el aislado nativo LF14 de
B. bassiana aparece como un patotipo resistente y adaptable a condiciones salinas y de pH
estresantes, siendo por lo tanto un potencial agente de control biológico para ser empleado en
futuros programas de manejo integrado de poblaciones triatominas.
Palabras clave: Beauveria bassiana, micopesticida, Rhodnius prolixus, Triatoma maculata.
INFLUENCE OF NaCl SALINITY AND pH ON IN VITRO SPORULATION OF AN
AUTOCHTHONOUS ISOLATE OF Beauveria bassiana.
ABSTRACT: As part of a global project for selecting native fungal biopesticide for triatomine vectors,
the in vitro effects on Lactrimel-agar medium, which enhance fungus sporulation, of saline (1 to
50% NaCl) and pH (2 to 12) gradients on conidial production of an autochthonous isolate (LF14) of
entomopathogenic fungi Beauveria bassiana (Bálsamo) Vuillemin, highly virulent to Rhodnius
prolixus y Triatoma maculata, vectors of American tripanosomiasis in Venezuela, was studied.
After 15 days of incubation at 26 °C and relative humidity >90%, conidial production decreased
significantly (F= 193. 08; p < 0. 0000) with increases of NaCl concentration ([NaCl]), and sporulation
was fully inhibited over a range of [NaCl] 15%. Fungal sporulation was observed on all initial pH
values assayed, with greatest conidium production at pH 4 and 6.7 (F= 78.82; p < 0.0000).
In the light of these results, native isolate LF14 shows salinity and pH tolerance. Thus, it appeared
to be considered as a good potential biocontrol agent to be used in integrated control strategies
against triatomine vectors.
Key words: Beauveria bassiana, micopesticides, Rhodnius prolixus, Triatoma maculata.
Croizatia Vol Nº 2: 137 - 144. Julio - Diciembre de 2006
Recibido: Diciembre 2006 Aceptado: Febrero 2007 Publicado: Junio 2007

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INTRODUCCION
Beauveria bassiana (Bálsamo) Vuillemin
es un hongo filamentoso (Ascomycota:
Hypocreales) entomopatógeno que en la
actualidad se encuentra bajo un intenso estudio
como agente para el control biológico de una
amplia variedad de artrópodos-plagas de
importancia agrícola, así como también de
aquellos que poseen relevancia en la salud
pública humana y animal (Goettel e Inglis, 1997;
Shah y Pell, 2003; Westwood et al., 2006).
De interés han sido los hallazgos en años
recientes que el hifomiceto ha demostrado ser
patogénico, tanto en ensayos experimentales
como a nivel in situ de campo, para varias
especies de triatominos, trasmisores de la
tripanosomiasis americana, con resultados
exitosos, con especial interés hacia aquellas
especies triatominas de hábitos peridomésticos
y selváticos, donde los insecticidas de origen
químico resultan ecológicamente inviables o han
sido poco efectivos o imprácticos en el manejo
ecológico de sus poblaciones (Luz et al., 1998;
2004; Lecuona et al., 2001).
En Venezuela, se aplican formulaciones de
este hifomiceto para el manejo de plagas de
plantaciones agrícola (Fernández y
Colmenares, 1997; Alcalá et. al., 1999; Ferrer,
2001); sin embargo, se conoce muy poco acerca
de su uso a nivel del manejo biorracional de
artrópodos-plagas que transmiten patógenos al
hombre y sus animales.
Como parte de un proyecto global para
seleccionar patotipos autóctonos de hongos
entomopatógenos que sean altamente virulentos
contra vectores de enfermedades metaxénicas
y adaptados a las condiciones del medio
venezolano. El equipo de investigación del
presente estudio ha demostrado bajo
condiciones de laboratorio, la elevada
patogenicidad y virulencia que posee el aislado
nativo LF14 de B. bassiana sobre Rhodnius
prolixus y Triatoma maculata (Cazorla et. al.,
2005; Morales et. al., 2005), vectores de la
enfermedad de Chagas, siendo por lo tanto un
potencial patotipo para ser empleado en futuros
programas de manejo integrado (MIP) de la
tripanosomiasis americana en zonas endémicas
del país, y particularmente de la región
falconiana. Sin embargo, para su selección
definitiva como agente bioplaguicida para el
MIP, se necesita que éste posea una alta
capacidad de crecimiento para producir buena
masa micelial con abundante y rápida
esporulación, así como también conocer con
mayor amplitud su biología, fisiología y genética
(Goettel e Inglis, 1997; Vélez et al., 2001;
Monteiro et al., 2004).
En un intento por comenzar a identificar
algunas de las limitaciones ambientales que
posee el aislado LF14 de B. bassiana para
crecer y esporular, se llevaron a cabo ensayos
de laboratorio para determinar y cuantificar la
capacidad que posee este aislado autóctono
del hifomiceto entomopatógeno para esporular
sobre medios de cultivos sólidos sometidos a
un amplio rango de concentraciones de NaCl
([NaCl]) y pH inicial.
MATERIALES Y MÉTODOS
Microorganismos
Los ensayos fueron hechos con el aislado
LF14 de B. bassiana, de la micoteca del
Laboratorio de Fitopatología, Núcleo
Universitario «Rafael Rangel», Universidad de
Los Andes, Trujillo, Estado Trujillo, Venezuela.
El mismo fue aislado en 1992, a partir de
cadáver esporulado de insecto coleóptero no
identificado recolectado en la población de
Monay, estado Trujillo, región andino-
venezolana.
Preparación de la suspensión de conidias
Todos los ensayos de esporulación se
realizaron sobre placas de Petri de 90 mm de
diámetro conteniendo medio sólido Lactrimel-
Esporulación in vitro de Beauveria bassiana

139
agar (30 gr harina de trigo; 250 cc de leche
pasteurizada; 15 cc de miel de abejas; 18 gr
de agar y 1000 cc de agua destilada) (Borelli,
1962), a las cuales se les esparcía por rastrilleo
con aguja de platino 200ìl de suspensión
fúngica ajustada, mediante cámara de Nebauer
(hemocitómetro), a 1 x 107
conidias/ml. Las
conidias se obtuvieron removiendo, mediante
asa de platino, la superficie de cultivos
esporulados de 15 días crecidos sobre medio
sólido (Lactrimel), y mantenidos a temperatura
ambiente (25-27°C). El material fúngico
cosechado se suspendió en agua destilada
estéril, y se filtró a través de gasa para separar
el micelio de las conidias (Figura 1), las cuales
se emplearon para los ensayos. La suspensión
de conidias se utilizaba inmediatamente.
Efecto de la concentración de NaCl ([NaCl])
Para estos ensayos, el medio Lactrimel –
agar se preparó añadiendo diversas [NaCl],
incluyendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30,
40 y 50% (P/V). Como testigo (control) se
incluyeron cultivos a los cuales no se les añadió
NaCl. Se realizaron 5 placas (repeticiones) por
cada concentración de NaCl. Las placas se
incubaron por 15 días a 26 °C y humedad
relativa (HR) >90% en cámara de ambientación
(Biotronette®
Mark II, modelo 845, Lab Line
Instruments, Inc, Illinois, USA). Una vez
concluido el periodo de incubación, se removió
mediante asa de platino, la superficie de los
cultivos y se suspendieron y homogenizaron
en agua destilada estéril, como ya se describió
Figura 1. Conidia de Beauveria bassiana (400X) (tinción: azul de lactofenol)

140
anteriormente La cantidad de conidias
producidas se determinó con hemocitómetro,
realizándose los contajes por duplicado.
Efecto del pH
Para estos bioensayos, el medio
Lactrimel-agar se ajustó a pH inicial de 2, 3, 4,
10, 11, 12 y 6,7 (testigo o control) mediante la
adición de HCl 1N o NaOH 1N. Los ensayos se
realizaron bajo las mismas condiciones de
temperatura y HR de la experiencia con [NaCl].
Por cada pH se montaron 5 repeticiones. La
cuantificación de la esporulación, se hizo
similarmente como en los ensayos anteriores.
Análisis estadístico
La significancia estadística de las
diferencias entre las cantidades promedio de
conidias/ml de los diferentes ensayos, se
calculó mediante las pruebas de Análisis de
Varianza (ANOVA) y de comparación múltiple
de Student-Newman-Keusl (SNK). Los datos se
analizaron mediante paquetes estadísticos
MINITAB versión 13.20 (MiniTab Inc., 2000) y
STATGRAPHICS Plus for Windows 20
(Statistical Graphic Corp., 1994-1996), yPágina
Web para cálculos estadísticos StatPages.net
(members.aol.com/johnp71/javastat.html).
RESULTADOS
En la Tabla 1 se muestra los resultados
obtenidos de la evaluación de la [NaCl]. La
cantidad de conidias del hifomiceto decreció
significativamente con el incremento de la [NaCl]
(F= 193,08; p < 0,0000). A partir de la [NaCl]
del 15%, no se obtuvo crecimiento, y por ende
esporulación.
DISCUSIÓN
Los factores ambientales, tales como,
temperatura, HR, la radiación solar, entre otros,
pueden afectar o inhibir la viabilidad,
crecimiento y la esporulación de los hongos
entomopatógenos. Por ello, la efectividad de
un aislado fúngico a ser utilizado en un
programa de MIP, dependerá de su habilidad
para crecer y esporular más rápidamente bajo
las condiciones ambientales locales,
especialmente las extremas (Knudsen et al.,
1991; Goettel y Inglis, 1997; Monteiro et al.,
2004).
Los resultados revelaron que el aislado
LF14 de B. bassiana no es capaz de crecer
ni esporular a partir de la adición de una
[NaCl] e»15% al medio de cultivo. Un
incremento en la concentración de NaCl en el
sustrato puede conllevar a que el hifomiceto
se encuentre bajo los efectos de un stress
hídrico, incluyendo la desecación y el stress
osmótico, estando limitada la disponibilidad
de agua (i.e., disminución de la actividad
acuosa) para sus estructuras, por lo que
potencialmente las funciones metabólicas se
vean alteradas (Hallsworth y Magan, 1996).
Por otra parte, la elevada salinidad también
pudiera producir un efecto tóxico sobre el
hifomiceto, tal como ocurre en las plantas
(Lerner, 1985). Sin embargo, el aislado LF14
de B. bassiana logró producir conidias a
[NaCl] de hasta el 9%, donde la disponibilidad
de agua y HR son limitados; factores éstos
que son críticos para que ocurra el desarrollo,
y particularmente la esporulación de los
hifomicetos (Goettel y Inglis, 1997; Luz y
Fargues, 1997; Sun et al., 2002; Monteiro et
al., 2004; Lazzarini et al., 2006). Si se
comparan estos resultados con los obtenidos
para otras especies de hongos filamentosos,
de una vez resaltan los contrastes. En este
sentido, Mert y Dizbay (1977) encontraron que
Paecilomyces lilacinum no logró esporular in
vitro a [NaCl] de 5%, mientras que,
contrariamente, Aspergillus níger desarrolló
sus conidias a esta concentración salina. Por
su parte, Mert y Ekmecki (1987) reportan que
la salinidad posee un efecto inhibitorio sobre
la producción de conidias de A. flavus y
estimulante sobre la de Penicilium
chrysogenum. Ala luz de esto último discutido,

141
[NACl] (%)
PRODUCCIÓN DE CONIDIAS
(Conidias/ml)
++
± D.S.
INTERVALO
(MÍNIMO – MÁXIMO)
0* 1,14 x 108 a
± 8,67 x 106
9,95 x 107
- 1,21 x 108
1 8,60 x 107 b
± 5,96 x 106
7,89 x 107
- 9,35 x 107
2 6,77 x 107 c
± 3,42 x 106
6,26 x 107
- 7,2 x 107
3 5,76 x 107 d
± 5,94 x 106
4,98 x 107
- 6,63 x 107
4 4,09 x 107 e
± 1,22 x 107
2,87 x 107
- 6,1 x 107
5 3,28 x 107 f
± 8,59 x 106
2,03 x 107
- 4,31 x 107
6 2,45 x 107 g
± 5,48 x 106
1,91 x 107
- 3,33 x 107
7 1,95 x 107 h
± 5,67 x 106
1,33 x 107
- 2,67 x 107
9 1,46 x 107 i
± 6,24 x 106
9,19 x 106
- 2,42 x 107
15-50** 0,0 j
± 0,0 0,0 - 0,0
Tabla 1
Cuantificación de esporulación del aislado LF14 de Beauveria bassiana cultivado
a diferentes concentraciones de NaCl ([NACl]), y mantenido a 26 °C y Humedad
Relativa >90% durante 15 días
* Cultivo control (testigo), al cual no se le añadió NaCl; ** Incluye el rango de [NACl] desde 15, 20, 30,40 y 50%
++
En el análisis de comparación múltiple (SNK), cuando dos medias posean letras iguales sus diferencias resultaron estadísticamente no significativas
(p < 0,05). = Media aritmética; D.S.= Desviación Standard.
pareciera ser que la tolerancia hacia el stress
salino-osmótico es un proceso especie-
dependiente en los hongos filamentosos.
Antes de realizar el análisis de la influencia
del pH, se debe tener presente que
generalmente durante el crecimiento fúngico la
[H+
] del medio de cultivo se puede ver alterado
debido a la degradación de proteínas al
producirse compuestos alcalinos, así como
también por la fermentación de carbohidratos
(Hanlon et al., 1994). En este sentido, Galani
(1987) observó que después de cultivar al
hifomiceto Verticilium lecanii en medio líquido
a pH iniciales elevados, la alcalinidad del medio
se incrementó.
Según Rojas (2004), a B. bassiana se le
clasifica, de acuerdo a su tolerancia hacia
gradientes de pH, como un hongo alcalofílico,
i.e., que se desarrolla solamente a pH 9-10. Por
su parte, Hallsworth y Magan (1996) indican que
B. bassiana crece mejor en un rango de pH entre
5 y 8, mientras que Teng (1962) refiere que el
pH 6 es más efectivo para la esporulación de
este hifomiceto. Contrastando con éstos
hallazgos, el aislado LF14, tal como se
demostró en el presente estudio, puede crecer
y esporular tanto a gradientes de pH ácidos
como alcalinos, aunque su mayor biomasa
(N°conidios x mL-1
) se obtuvo entre 4 y 6,8. A
diferencia de otras especies fúngicas, los
hongos entomopatógenos pueden regular su pH

142
Tabla 2
Cuantificación de la esporulación del aislado LF14 de Beauveria bassiana cultivado a
diferentes pH inicial, y mantenido a 26 °C y Humedad Relativa >90% durante 15 días
*Cultivo control (testigo). ++
En el análisis de comparación múltiple (SNK), cuando dos medias posean letras iguales sus diferencias resultaron
estadísticamente no significativas (p < 0,05). = Media aritmética; D.S.= Desviación Estandard.
citosólico con mayor eficacia, especialmente en
aquellos pH por debajo de 7; propiedad ésta
que es deseable cuando se requiere realizar
la producción industrial de sus formulaciones,
toda vez que se inhibe el crecimiento de
contaminantes (e.g., bacterias) sin afectar su
propio medio, además que les puede permitir
soportar mejor los «shock osmóticos» en
medios de baja disponibilidad de agua
(actividad acuosa), al poder acumular polioles
citosólicos que protegen sus membranas
(Hallsworth y Magan, 1996).
Es significativo comentar que el pH puede
regular la expresión de los genes involucrados
en la secreción de las proteasas de
Metarhizium anisopliae, otro hifomiceto
entomopatógeno, que degradan la cutícula de
los insectos, además de otros factores de
virulencia; proceso de relevancia para el éxito
de un hongo entompatógeno en el proceso
invasivo y colonizador de sus hospedadores
artrópodos (St Leger et al., 1998; 1999).
A pesar de lo discutido, se debe tener
siempre presente las diferencias con las
condiciones naturales existentes en la cutícula
o el hemocele de los insectos, así como también
la complejidad de la interacción de estas
estructuras con las conidias e hifas de los
hiphomicetos. (Luz y Fargues, 1997; Lazzarini
et al., 2006).
En el presente trabajo se carece de datos
experimentales para dar una explicación acerca
del mecanismo por el cual el aislado autóctono

143
del hifomiceto ensayado posee tolerancia hacia
los estreses de NaCl y pH; sin embargo,
Hallsworth y Magan (1996), encontraron que B.
bassiana, así como en otros dos hiphomicetos
entomopatógenos, M. anisopliae y P. farinosus,
acumulan solutos compatibles osmóticamente
(e.g., manitol, trehalosa, glicerol) en sus
vacuolas citoplasmáticas, que ayudan a las
membranas y proteínas de éstos a protegerse
de los factores ambientales estresantes.
Trabajando con aislados de B. bassiana
y M. anisopliae patogénicos para termitas
(Isoptera) del género Coptotermes, Sun et al.
(2002) encontraron una correlación altamente
positiva entre la producción de conidias in vivo
e in vitro, concluyendo que esto permite realizar
ensayos preliminares in vitro, que son más
rápidos, con una gran cantidad de aislados para
proyectar cuáles serán aquellos con la más alta
esporulación in vivo. Por lo que a juzgar por la
alta producción de biomasa obtenida durante
estos bioensayos in vitro, y su amplia tolerancia
hacia los estreses salinos por NaCl y de pH, el
aislado nativo LF14 de B. bassiana se muestra
como un potencial patotipo para ser
implementado como micopesticida en un futuro
programa de MIP de triatominos, esperándose;
en primer término, obtener una buena
rentabilidad durante su producción en masa, y
que, por otra parte, permita mantener y esparcir
las epizootias dentro de la poblaciones de
insectos en una amplia área geográfica. Sin
embargo, es necesario realizar estudios más
amplios y detallados acerca de la influencia de
otros factores, tanto bióticos como abióticos,
durante el proceso de esporulación, tanto in vitro
como in vivo, de este aislado.
AGRADECIMIENTOS
Decanato de Investigaciones (Proyecto CI-
2001-007), Universidad Nacional Experimental
«Francisco de Miranda» (UNEFM), Coro,
Estado Falcón, Venezuela. Prof. Christian Luz,
Instituto de Patología Tropical e Saúde Pública,
Universidade Federal de Goiás, Goiânia, Brasil,
por consejos y enseñanzas.
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145
RESEÑA DE TEXTO
Álvarez, F., Emig, C.C., Roldán, C., Viéitez, J.M. 2005. Lophophorata, Phoronida, Brachiopoda.
En: Fauna Ibérica, Vol. 27. Ramos M.A. et al.(Eds.). Museo Nacional de Ciencias Naturales. Consejo
Superior de Investigaciones Científicas (CSIC). Madrid. 276pp.
La Monografía está dedicada a los Phoronida y Brachiopoda. Esta es la primera parte del estudio
de los celomados bentónicos marinos sésiles. En esta obra se analizan siete especies de
foronídeos (agrupados en dos géneros) y 30 especies de braquiópodos (agrupadas en 21
géneros, 14 familias, cinco órdenes y tres subfilos.También se discuten dos especies de foronídeos
y cinco de braquiópodos que se citan en localidades próximas a la Península Ibérica. La obra
está ilustrada con 80 figuras, consta de una introducción general a los Lophophorata, varios
capítulos dedicados al estudio de los Phoronida y Brachiopoda, posición sistemática, distribución
geográfica, morfología y clasificación, con descripciones y claves de identificación hasta el nivel
de género y especie y de taxones supragenéricos para los braquiópodos. Cada especie señalada
incluye datos sobre su distribución geográfica y biológica y una sección actualizada de referencias
bibliográficas. Esta Monografía consta de cuatro apéndices: los dos primeros referidos a la
nomenclatura actualizada y una lista de nombres taxonómicos de Phoronida y Brachiopoda de
las costas de la Península Ibérica e Islas Baleares, el tercero se refiere a una clave ilustrada
bilingüe (español-inglés) de especies ibéricas de los grupos referidos en esta obra, el cuarto
apéndice incluye un glosario de términos morfológicos y anatómicos.
La publicación de esta monografía es parte de una estrategia en España: la necesidad de revivir
la taxonomía, en efecto, este trabajo es parte de la serie Fauna Ibérica, como respuesta a la
necesidad de un proyecto en el área taxonómica. Esto no sería útil solo con una lisa de nombres,
es muy importante la descripción de las especies. Esta monografía es una suerte de vademécum
en taxonomía. Los apéndices que acompañan la obra son, en mi opinión muy ilustrativos para los
taxónomos e identificadores. Este trabajo, como parte de la serie fauna ibérica, es sólo el punto
de partida, aquí no acaba el camino. Especies nuevas se describirán e irán incorporándose al
conocimiento acumulado; por ello, este esfuerzo no termina aquí, es una tarea dinámica.
Ricardo Bitter Soto
Centro de Investigaciones Marinas
Universidad Francisco de Miranda
SantaAna de Coro, Venezuela
Croizatia Vol Nº 2: 145. Julio - Diciembre de 2006

146
Eventos
11er Congreso Nacional de Hortifruticultura y 3er Congreso Panamericano
de Promoción del consumo de frutas y hortalizas
del 21 al 23 de mayo de 2007
Montevideo, Laboratorio Tecnológico del Uruguay (LATU)
http://www.alfacreaciones.com/suhf
Congreso Venezolano Interdiciplinario de Orientacion
Santa Ana de Coro del 16 al 20 julio de 2007
http://investigacion.unefm.edu.ve/incongresodeorientacion
E-mail: nimia_m@hotmail.com
VII Jornadas de Investigación UNEFM
del 18 y 20 de julio de 2007
Complejo Académico Los Perozos
SantaAna Coro - Venezuela
http://investigacion.unefm.edu.ve
II Simposio Latinoamericano de Citogenética y Evolución
en la ciudad de Palmira, Valle del Cauca, Colombia
del 15 al 18 de agosto de 2007
www. palmira.unal.edu.co/citoevolucion
XVIII Congreso Latinoamericano de Parasitología FLAP2007
del 21 al 25 de Octubre de 2007
Hotel Hilton Margarita, Porlamar - Isla de Margarita Venezuela
Trends in Medical Mycology
Torino, Italy, Octubre 2007
www.timm2007.org
Conference Biodeterioration of wood and Products
www.kki.Iv/bwwp2007/>www.kki.Iv/bwwp2007/

147
CROIZATIA es una revista multidisciplinaria que considera para publicación trabajos inéditos sobre
temas en Ciencias Básicas, Ciencias de la Salud, Ciencias del Agro, del Mar y Tecnología.
Todos los trabajos serán arbitrados en forma confidencial. Para la publicación, el trabajo deberá ser
enviado al Editor en original y tres copias y en un diskette de 3.5 HD. El diskette debe estar identificado
con el nombre del primer autor y título abreviado del trabajo. Deberá contener los archivos siguientes:
uno para el texto del trabajo en Word versión 5 o superior; otro para tablas y el tercero conteniendo las
figuras. El trabajo debe estar acompañado de una carta del autor correspondiente firmada por todos los
co-autores en la que señalen estar de acuerdo con el orden de los autores y agradecimientos, así
como la publicación del trabajo en Croizatia. Un autor es la persona que hizo una contribución sustancial
al diseño general y a la ejecución de los experimentos. Aquellos individuos que colaboraron en la crítica
del manuscrito o proporcionaron material pueden ser reconocidos en la sección de agradecimientos.
Debe consignarse así mismo la carta de cesión de derechos de publicación, que se le devolverá al
autor correspondiente en el caso de no ser aceptado su trabajo para publicación en Croizatia. Si el
trabajo involucra investigación en seres humanos y/o animales sometidos a investigación, deben seguirse
los criterios de bioética del Ministerio de Ciencia y Tecnología (www.mct.gob.ve). No se aceptarán
trabajos que carezcan de alguno de los requisitos solicitados.
1) La extensión del trabajo será de máximo 20 páginas numeradas, escritas en letra Times New Roman
tamaño 12, a doble espacio, con márgenes de 4 cm superior e izquierdo y 3 cm inferior y derecho, con
cada línea numerada.
2) Se recomienda subdividir el contenido del texto, con subtítulos descriptivos, en: Resumen, Abstract,
Introducción, Materiales y Métodos, Resultados, Discusión, Agradecimientos (si los hubiere) y
Referencias.
3) El título en el idioma original y en inglés (colocado en página aparte) debe ser explicativo sobre la
esencia del trabajo. Debe incluirse un título corto para el encabezamiento en cada página; nombre y
apellidos completos de cada autor, sin hacer alusión a los títulos profesionales; filiación a la cual
pertenece cada autor, incluyendo el correo electrónico, fax y teléfono del autor al cual debe dirigirse la
correspondencia.
4) Cada trabajo deberá tener un resumen en español y otro en inglés, con un máximo de 250
palabras, en páginas separadas, en un solo párrafo. Se recomienda asesoramiento con un especialista
para la redacción correcta del resumen en inglés. Al final de ambos debe anexarse un grupo de 3-6
palabras claves en el idioma correspondiente.
5) Las figuras y las tablas deben identificarse con números arábigos: Tabla 1. Figura 1,
consecutivamente. Las figuras incluyen fotos, diagramas, mapas, gráficos elaborados en computadora
con calidad láser o por dibujante. Las figuras deben ser en blanco y negro, de nitidez impecable. Los
autores deben asegurarse que las letras, números y símbolos que están incluidos en las figuras sean
comprensibles después de reducidos. Se aceptará un máximo de cinco figuras, que deben tener un
tamaño de 9 cm de alto x 13 cm de ancho y colocadas en página aparte. Las leyendas de cada figura
o tabla, con un texto claro y conciso, deben suministrarse en hoja aparte. Las aclaratorias de las tablas
deben estar en notas al pie. El fondo de las tablas debe ser de color blanco.
6) Las drogas utilizadas se citarán con el nombre genérico. El nombre comercial debe ir entre paréntesis.
Debe incluirse en el manuscrito una lista de abreviaturas nuevas o especiales utilizadas en el texto y su
significado. Algunos ejemplos de abreviaturas comúnmente usadas: ºC (grados centrígrados); ha
(hectárea); km (kilómetro); m (metro); µm (micrómetro); t (tonelada); g (gramo); min (minuto); seg
(segundo); cal (caloría); ppm (partes por millón); % (por ciento); rpm (revoluciones por minuto); UI
(unidades internacionales); msnm (metros sobre el nivel del mar). Los nombre científicos y las
expresiones latinas (ad libitum, ad hororem, et al., vs) deben escribirse sólo en letra cursiva, sin
negrillas y sin subrayar.
7) Las referencias deben limitarse a trabajos publicados que tengan pertinencia con el artículo. No se
Normas Editoriales

148
aceptarán como referencias trabajos en arbitraje ni comunicaciones personales. Los resúmenes sólo se
citarán si son la única fuente bibliográfica disponible. Las citas bibliográficas en el texto se basarán en el
sistema de apellido y año (Gutiérrez, 2003; Leal y Carrillo, 1999;Avila et al., 2002 para más de dos autores).
Las referencias se listarán en estricto orden alfabético con base en el apellido del autor principal. Referencias
sin autor y año no serán aceptadas. Los nombres de las revistas serán abreviados con base en lo establecido
en Word List of Scientific Periodicals, excepto los nombres únicos como Croizatia, Interciencia, Ecotrópicos,
Hypertension, HERZ. Ejemplos:
•Revista: Autor, año, título, revista, volumen, páginas, Díaz, H., Conde, J., Origuela, B. 1992. Estimating the
species number and cover of mangrove-root community. A comparison of methods. Aust. J. Mar. Res. 43:
707-714.
•Libro: Autor, año, título, institución o editorial, ciudad, páginas. Greene, C.E. 2000. Enfermedades infecciosas
en perros y gatos. McGraw-Hill Interamericana, México. 1014 p.
•Capítulo de libro colegiado: Autor, año, título del capítulo, páginas, En: Editor (ed.), Título, editorial, ciudad.
Brenes, C. 1989. Costa Rica, p. 163-174. En: I. Hedstron (ed.). La Situación en CentroAmérica. Edit.Acribia,
San José.
•Trabajos Especiales de Grado, Tesis de Grado, Trabajos de ascenso: Autor, año, título, tipo de trabajo,
Universidad, ciudad, país. Rivero, M., Valdez, V. 1997. Relación glucosa sanguínea-actividad útero-ovárica en
vacas mestizas. Trabajo Especial de Grado para Médico Veterinario, Universidad Francisco de Miranda,
Coro, Venezuela, 80 p
•Documentos legales (decretos, leyes, otros)
Nombre del documento, año, datos editoriales
Decreto No. 2649. 1988. Emisión de bonos de la deuda pública. Gaceta Oficial de la República de Venezuela,
35517, 14 agosto 1988.
Fuentes Electrónicas
•Libros
Autor, fecha, título del libro (en línea), datos editoriales si los hay, disponible en: dirección electrónica, fecha de
consulta.
Sastry R., Bodson,T. 1994. Adaptative control: stability, convergence and robustness (libro en línea).
Prentice Hall. Advanced reference. Series Engineering. Disponible en: www.elen.utah.edu (18 mayo
2000).
• Publicaciones periódicas
Autor, año, título del artículo, título publicación (revista en línea), volumen(Número):páginas. Disponible en:
dirección electrónica, (fecha de consulta).
Bitter, R. 1999. Benthic communities associated to Thalassia testudinum (Hydrocharitaceae) at three
localitiesofMorrocoyNationalPark,Venezuela.RevistadeBiologíaTropical(enlínea).47(3):443-452.Disponible
en: www.ucr.ac.cr (10 abril 2001).
•Resumen en línea
Autor, año, título del artículo (resumen en línea), título de la publicación, volumen (número): páginas (si existen),
(tomado de la base de datos). Disponible en: dirección electrónica. Fecha de consulta.
Leena, S. 1996. The teacher as a researcher (resumen en línea). Chilhood education: international perspective
(tomado de Eric database No. ED403069. Disponible en: www.ericir.syr.edu/ (23 abril 2001).
•Fuentes Electrónicas (Documentos no periódicos)
Páginas web de programas de universidades o departamentos
Autor, fecha, título del documento, fecha de consulta, institución o departamento, página web.
Chou, L., McClintock, C. 1993. Technology and education: new wine in new bottles: choosing pasts and
imagining educational futures..Columbia University , Institute for Learning Technology Web site.
www.ilt.columbia.edu/publications/papers/new (24 agosto 2000)
Cómo enviar el manuscrito: Los manuscritos y sus anexos deben ser enviados en sobre manila a: Editor,
Revista Croizatia, Universidad Francisco de Miranda, Decanato de Investigación. Calle Norte, frente al
Rectorado, Coro 4131, Estado Falcón. Los trabajos no aceptados se regresarán al autor con un anexo
explicativo de los motivos del rechazo.

149
Indice Acumulado de Autores Volúmenes 1 - 7
(vol, Nº)
Acosta, J. 2,2
Acosta, M. 6(1&2)7(2)
Alvarez, Z. 4(1&2)
Barrios, R. 5(1&2)
Becerra , L. 2,2
Bello,A. 5(1&2)
Bitter, R. (1,1) 5(1&2)
Candelle, D. 5(1&2)
Cazorla, D. 3(1&2)6(1&2)7(2)
Cuauro, I. 3(1&2)
De Lima, R. 1,2
Ders, K. 1,1
Díaz, M. 1,1)(2,1)
Escalona, Y. 1,1
Fernández, L (1,1)(1,2)
García, E 6(1&2)
García, E. de 2,1
García, J 7(1)
Garvett, M. 6(1&2)
Genatios, C 7(1)
Giardina, S. 3(1&2)
Giménez, C. 2,1
Gómez, E. 7(1)(2)
Gómez, J. 7(2)
Gómez, R. 1,1
Gorayeb, I 7(1)
González, C. (1,1) 2,1
González, M. 7(2)
Guerra, M. 1,1
Gutiérrez, C. 2,2
Hartt, Y. 3(1&2)
Jiménez, M 7(1)
LaFuente, M 7(1)
La Marca, E. 6(1&2)
Lemus, L. 4(1&2)
Lubo, A. 7(2)
Lugo M, J. 7(2)
Maldonado, C. 1,1
Merman, S. 3(1&2)
Mijares, A. 6(1&2)
Mogollón, J.P. 3(1&2)
Morales, P. 7(2)
Morillo, Y. 5(1&2)
Mussett, S. 2,1
Nava, L. 1,2
Naveda, R. 7(2)
Ortíz, I. 7(1)
Padilla, W (2,2)6(1&2)

150
Indice acumulado de Autores Volúmenes 1 - 7
Parada, S. 1,2
Petit, M. 7(2)
Peñalosa, M. 4(1&2)
Pérez, K. 4(1&2)
Piña, H. 3(1&2)
Portillo, L. 7(2)
Prato, M. (1,2)(2,2)
Quevedo, AL. 7(2)
Rey, C. 4(1&2)
Reyes, L. 1(1,2)
Reyes, R. (1,2)(2,2)
Reyes, S. 3(1&2)7(2)
Rivas, B. 1,1
Romero, J. 3(1&2)
Rodríguez, R. 7(1)
Ruiz,A 6(1&2)
Ruiz, C. 6(1&2)
Russián, T. 6(1&2)
Sánchez, A. 6(1&2)
Sánchez, R. 4(1&2)
Smith, F. 1,1
Tremont, O. 3(1&2)
Vargas, E. 2(1)7(1)
Viéitez, JM 7(2)
Viloria,A. 5(1&2)
Yepez, L. 2,1
Yepez, Y.C. 3(1&2)7(1)
Zambrano, B. 3(1&2)7(1)(2)
Zavala, Y. 4(1&2)
Indice Acumulado de Materias
Acuicultura
La acuicultura en el estado Falcón 4(1&2)
Agroecosistemas
Efecto del cambio de uso de la tierra sobre la actividad ureásica
en agroecosistemas cafetaleros del estado Falcón 3(1&2)
Diptera de importancia veterinaria y evaluación de trampas de
captura en los municipios Miranda y Petit del estado Falcón 7(1)
Agroindustria
El proceso gerencial en la agroindustria del estado Falcón. Caso
caficultores de Falcón C.A 3(1&2)
Agronomía
Efecto del etileno y acetileno sobre las características químicas de calidad

151
poscosecha de pimentones (Capsicum annuum I) durante el
almacenamiento 6(1&2)
Evaluación de extractos acuosos de Agave cocui Trelease para
el control de las palomillas de las solanáceas 7(2)
Astronomía
Respuesta radiativa del cielo y de la superficie durante el
eclipse solar del 3 de febrero de 1916 en Tucacas y durante
el eclipse solar del 26 de febrero de 1998 4(1&2)
Biomedicina
Control del comportamiento en familias extendidas 1(1)
Juntas socio-sanitarias: cultura organizacional y cultura de la
participación en salud 1(2)
Las reflexoterapias como una opción para la supresión
del tabaquismo 2(2)
Efectos de la procaína y la dibucaína sobre la ultraestructura
de Leishmania (Viannia) braziliensis in vivo 3(1&2)
Orientación temática, clasificación metodológica y
pertinencia de los trabajos especiales de grado de enfermería,
UNEFM 5(1&2)
La Acupuntura: un método médico contemporáneo 6(1&2)
Revisión de aspectos quimioterapeuticos de la enfermedad de chagas 7(1)
Control de Gestión
Sistema Automatizado en control de gestión para la toma de desiciones
basada en árboles de indicadores para el Complejo Académico el Sabino 7(2)
Corrosión
Corrosividad de la afmósfera falconiana: revisión documental 1(2)
Mineralogía, granulometría y reactividad de arenas y arcillas
de Falcón 2(2)
Ecología
Nicho complementario en tres especies de asteroideos del
género Astropecten 1(1)
Manejo ecológico de la cochinilla rosada de la cayena
Maconellicoccus hirsutus (Green) en el Complejo Docente
El Hatillo - UNEFM, Falcón 4(1&2)
Competencia entre especies de esponjas crecidas en sustratos
artificiales en el Parque Nacional Morrocoy 5(1&2)

152
Entomología
Identificación de especies de la familia Chysopidae
(Neuropteras), en algunas zonas agrícolas del estado Falcón 3(1&2)
Evolución biológica
Visión crítica de la teoria del mimetismo en la obra de León Croizat 5(1&2)
Epidemiología
Perfil Epidemiológico del estudiante de nuevo ingresa a la unersidad del
Zulia. Período 2000 - 2001 7(2)
Fisioecología Vegetal
Notas preliminares sobre la propagación clonal in vitro de
Agave cocui Trelease 2(1)
Genotipos promisorios en Agave cocui Trelease: avances
metodológicos en la selección de plantas madres para la
propagación in vitro 2(1)
Establecimiento de Agave cocui Trelease en zonas semiáridas
de Falcón: efecto de la densidad de siembra y asociación con
Eritrina velutina Willd 2(1)
Ecología reproductiva del Agave cocui Trelease (Agavaceae) en
zonas áridas del estado Falcón, Venezuela: I. Fenología reproductiva,
biología floral, mecanismo de polinización y sistema genético de
reproducción 4(1&2)
Geoestadística
Diseño de la Red Hidrometeorológica del estado Falcón. Región
Centro-Norte-Costera 5(1&2)
Gerontología
La discapacidad en la vejez 1(1)
Representación social de la vejez. Estudio de casos 1(2)
Historia
Conversiones judaicas en Coro durante la época española 1(1)
Inversión Extranjera
Zonas de procesamiento para la exportación: Caso Venezuela 1(1)
Microbiología
Influencia de la salinidad por NaCl y del pH sobre la esporulación invitro
de un aislado autoctono del hongo entomopatógeno Beauveroa bassiana 7(2)
Nutrición
Antropometría nutricional en preescolares y escolares de 14
comunidades rurales del estado Falcón, Venezuela 6(1&2)

153
Parasitología
El uso de la biología molecular en el diagnóstico de
Anaplasma marginale 3(1&2)
Evaluación piloto de Babesia canis (Piroplasmida: Babesidae)
y eficacia de garrapaticidas contra Rhipicephalus sanguineus
Lantreille (Acari: Ixodidae) en el estado Falcón, Venezuela 4(1&2)
Procesos técnico-administrativos
Gestión legal para la creación y operación de un restaurante 1(1)
Producción, rendimientos y comercialización de los cultivos más frecuentes
en participantes de la misión vuelvan caras, Curimagua, estado Falcón,
Periodo 2004-2005 7(1)
Producción Animal
Comportamiento productivo de pollos de engorde con dietas
contentivas de vaina de cují (Prosopis juliflora) y contenido ruminal 5(1&2)
Reseña Histórica
León Croizat y su aporte a las ciencias biológicas 1(1)
Reseña de Texto
Lophophorata, Phoronida, Brachiopoda. Fauna Ibérica 7(2)
Tecnología
Diseño de sistema fotovoltaico para vivienda rural unifamiliar 1(2)
Aplicación de las redes neuronales para la identificación de un
sistema de reacción continuo 2(2)
vivienda y desastres sísmicos: vulnerabilidad y prevención 7(1)
Alternativas para el incremento de la capacidad de la torre de
fraccionamiento de la unidad de coquización retardada de la
refinería de amuay 7(1)
Tecnología de Alimentos
Análisis parcial de control de calidad en acíbar y pasta
de zábila (Aloe barbadensis Miller) 1(1)
Zoología
Los Renacuajos de cuatro especies especies de Atelopus
( Anura: Bufonidae) 6(1&2)

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