enzimas mitocondriales
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Este documento describe un experimento realizado por estudiantes de medicina para medir la actividad de las enzimas mitocondriales. El procedimiento involucra la extracción de enzimas y coenzimas de tejidos de pollo y corazón, y su medición utilizando varios reactivos químicos. Los resultados se registraron en tablas y compararon la actividad enzimática entre los tejidos.
enzimas mitocondriales
- 1. EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS LABORATORIO DE ENZIMAS MITOCONDRIALES ROCIO CASTRO TANIA CUADROS DIANA BENAVIDES ANGELICA PINILLA JONATAN PRIETO FACULTAD DE MEDICINA. 2014.
- 2. MATERIALES. 10 tubos de ensayo. 2 Erlenmeyer de 50ml 1 de precipitado de 500ml 1 mortero con mano 4 pipetas de 5ml 5 pipetas de 2ml 2 tubos de centrífuga 1 gradilla 1 pipeteador.
- 3. REACTIVOS. buffer fosfato 0,1M y pH 7.4 (300ml) solución malonato de sodio 1% (100ml) Solución cianuro de potasio 0,05M (50ml) PELIGROSO Solución de p-fenilendiamina al 1% (100ml) Solución de succinato de sodio al 1% (100ml) Solución de azul de metileno 0,01% (100ml) aceite mineral (200ml) Agua destilada Baño de maría termostatado a 37ºC Tejido cardiaco y tejido fresco de pollo (deben conseguir tejidos de animales recién sacrificados en un matadero, puede ser de porcino, vacuno o ave (órgano entero) y mantenerlos refrigerados. Son pequeñas porciones y sirven para todo el grupo)
- 6. 1. EXTRACCION Y PREPARACION DE LAS ENZIMAS Y LAS COENZIMAS: Tomar aproximadamente 5 gr de tej libre de sangre y colocarlos en un mortero con 2 gr de arena lavada y adicionar 3 porciones de 5 ml de buffer fosfato y macerar.
- 8. Se macero hasta obtener una pasta fina, luego se transfirió a un Erlenmeyer y se puso en una nevera por 15 minutos mezclando ocasionalmente.
- 9. Al mismo tiempo que se realizaba el proceso anterior, también, se rotularon 5 tubos de ensayo (B’, 1’, 2’, 3’,4’) para luego adicionarles los siguientes reactivos: TABLA 2.
- 11. Luego de adicionar los reactivos a los tubos de ensayo, se mezclaron suavemente y se llevaron los tubos al baño serológico.
- 12. Luego de los 15 minutos de estar el extracto enzimático en la nevera, se adiciono este en 1 tubo de centrifuga y se llevo a centrifugar a 1500 rpm por 10 minutos.
- 13. Al terminar el centrifugado del extracto enzimático, se termino el procedimiento de la tabla 2. Se adiciono el extracto enzimático sin sacar los tubos del baño serológico y luego el aceite mineral para establecer condiciones anaerobias. TABLA 2.
- 15. Al mismo tiempo del procedimiento anterior, se realizo otro procedimiento en el que se adiciono los reactivos de la siguiente tabla: TABLA 1.
- 18. Luego se mezclo bien el contenido y se puso en el baño serológico por un periodo de 20 minutos.
- 20. TABLA 2. Proceso realizado con corazón.
- 21. TABLA 1. Proceso realizado con pollo.
- 22. Resultado del proceso hecho con hígado.