Guia IX-X: Toma de muestra y Diagnóstico Viral - Métodos de estudio virológico

UNIVERSIDAD CATÓLICA
SANTO TORIBIO DE MOGROVEJO

Facultad de Medicina
Escuela de Medicina

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

Práctica N°09-10
Toma de muestra y Diagnóstico Viral - Métodos de estudio
virológico

Jesús Alonso Custodio Marroquín

Código: 062ac03464

Ciclo 2009 – IV

Métodos de Diagnóstico Directo

Son aquellos que detectan:

1. El virus como agente infeccioso (aislamiento viral).
2. La presencia de antígenos virales (técnicas inmunológicas): Inmunofluorescencia (IF),
Enzimoinmunoanálisis (EIA), Test de Aglutinación.
3. La presencia de ácidos nucleicos virales (PCR, etc.).
4. El virus como partícula viral (microscopía electrónica).

1. Aislamiento Viral - Cultivos Celulares

Descripción:

La base del diagnóstico viral es la detección del virus o de sus componentes. El aislamiento del virus era
la técnica standard de oro sobre la cual se medían todas las otras pruebas de diagnóstico viral, pero hoy
en día con el desarrollo de las nuevas técnicas de Biología Molecular ya no es la más sensible.
De igual forma el aislamiento de virus tiene una sensibilidad y una especificidad muy alta. Debido a que
sólo se amplifica el virus, se aumenta la sensibilidad sin disminuir la especificidad.

Desventajas:
• El proceso suele ser lento, ya que demanda días a semanas para la identificación, y en
consecuencia puede no estar disponible a tiempo para influir en la atención del paciente.
• Además, es un proceso laborioso y caro.
• Por otra parte requiere el uso de sistemas de cultivos adecuados, por ejemplo, se necesitan
varias líneas celulares para la detección óptima de virus.

Fundamento:

Los cultivos celulares son, pues, los biosubstratos más corrientemente empleados para la propagación
de los virus.
Un cultivo celular es obtenido, de explantes de órganos o de embriones de animales.
Estas células obtenidas asépticamente se disocian tratándolas con una enzima (tripsina) que rompe el
cemento intercelular. La suspensión de células libres así obtenidas se coloca en la superficie plana de un
recipiente de vidrio o plástico en donde las células se adhieren y multiplican formando una fina capa de
células que se llama MONOCAPA CELULAR.
Esta monocapa de células crece en un medio de cultivo complejo que contiene albúmina, vitaminas,
sales, glucosa, etc., en un sistema buffer. Se previene la contaminación bacteriana adicionándole al
medio antibióticos adecuados.
Los cultivos celulares en monocapa son los más usados, aunque hay otros sistemas (cultivos en
suspensión, explantos, cultivos de órganos, cultivos en microcarriers, etc.).

Los cultivos celulares se dividen en:
• Cultivos Primarios: Se obtienen a partir de células, tejidos u órganos tomados directamente
del organismo y pueden subcultivarse una o dos veces.
• Líneas Celulares Diploides: Son aquellas que crecen en pasajes sucesivos hasta
aproximadamente 50 subcultivos y que conservan por lo menos en un 75% el cariotipo
correspondiente a la especie de que provienen.
• Líneas Celulares Continuas: Permite un número finito de subcultivos y son heteroploides.
Para considerar que se ha logrado establecer una línea continua, esta debe de haber sido
subcultivada por lo menos 70 veces.

2. Detección de Antígenos - Técnicas Inmunológicas

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (ID)
Es una de las técnicas más antiguas y de uso
más difundido en el laboratorio clínico.
Muestras clínicas apropiadas son recolectadas y
colocadas sobre portaobjetos donde se dejan
secar y fijar.
Luego se agregan anticuerpos específicos
marcados con isotiocianato de fluoresceína que
difunden a través de la membrana celular y se
combinan con los antígenos víricos en el interior
de las células.
La reacción antígeno anticuerpo se visualiza
con el microscopio de fluorescencia, por la
aparición de fluorescencia de color verde
manzana.
Esta técnica se puede utilizar para una identificación rápida del virus directamente sobre la muestra
(por ejemplo: células eluidas de un lavado nasal, o de un hisopado nasofaríngeo), o se la puede emplear
para la confirmación del efecto citopático observado en cultivos celulares.

TEST DE AGLUTINACION
El test de aglutinación es un método simple, de un solo paso, que a veces se usa para la detección de
antígenos virales en muestras clínicas. Los ensayos de aglutinación, dependen de la fijación inicial de
anticuerpos antivirales específicos sobre eritrocitos o partículas de látex. Luego este reactivo se incuba
con la muestra clínica en la cual se investiga el antígeno y las partículas se aglutinan si el antígeno
adecuado se encuentra presente. Estas pruebas en general se complementan o se confirman por medio
de otros ensayos debido al elevado porcentaje de reacciones inespecíficas.
El test de aglutinación ha sido usado para detectar antígeno de Rotavirus en heces (el más importante)
mostrando una buena sensibilidad cuando se lo compara con el EIA para Rotavirus. Además es una
técnica rápida y barata. También se la ha usado para detectar antígenos de Adenovirus.

RADIOINMUNOENSAYO

Fue originalmente aplicado para identificar el antígeno de superficie de la Hepatitis B (HBsAg) y el
anticuerpo5 anti-HBsAg. Estos ensayos tienen una buena sensibilidad y especificidad.
Técnica muy sensible basada en la competencia de unión al anticuerpo específico entre la sustancia a
cuantificar y cantidades conocidas de la misma sustancia marcada con un isótopo. A mayor antígeno a
cuantificar, menor será el antígeno marcado unido al anticuerpo y viceversa.

ENZIMOINMUNOANALISIS (EIA)

Los EIA para la detección de antígeno se basan habitualmente en la captura del antígeno por
anticuerpos específicos unidos a una fase sólida, en general el pocillo de una microplaca o una pequeña
esfera de plástico. El antígeno viral presente en la muestra clínica se combina con el anticuerpo fijado a
la fase sólida y el antígeno viral se detecta mediante la adición de otro anticuerpo específico conjugado
a una enzima. La enzima conjugada suele ser peroxidasa o fosfatasa alcalina. El substrato para esas
enzimas varía. En la reacción con la peroxidasa el substrato es un peróxido capaz de oxidar un
compuesto químico incoloro que en su forma oxidada tiene un color característico.
En el caso de la fosfatasa la desfosforilización es la responsable directa de la aparición del color.
Por esta técnica se puede procesar gran número de muestras en forma rápida y automatizada, no
requiriendo de un observador experimentado para leer los resultados, ya que estos se leen por medio
de espectrofotómetros especialmente diseñados, siendo entonces una técnica más objetiva.

3. Técnicas de Biología Molecular Investigación de ácidos nucleicos virales

SONDAS DE ACIDOS NUCLEICOS
Actualmente es posible extraer secuencias específicas de un fragmento de ADN por medio de las
endonucleasas de restricción. Luego estas secuencias extraídas, se pueden desnaturalizar y marcar ya
sea con una enzima o con un isótopo radioactivo. A estas cadenas marcadas y que tienen una secuencia
conocida se llaman sondas de ácidos nucleicos. Hoy en día se están produciendo sondas de ácidos
nucleicos sintéticas, con lo que se obtiene sondas de oligonucleótidos de muy alta especificidad.

DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS VIRALES POR SONDA SINTETICA

Es un ensayo de hibridación molecular con una sonda marcada. Las hibridaciones pueden ser: DNA-
DNA, RNA-RNA y RNA-DNA.
Primero se trata a muestras con reactivos que solubilizan y desnaturalizan los ácidos nucleicos.
Posteriormente se añade un DNA marcado, complementario del DNA del virus y se incuba en
condiciones para que se produzca la hibridación. La muestra se pasa entonces por una columna que
contiene un gel que separa la sonda ligada al DNA viral hibridado de la no hibridada.
Dependiendo de como este marcada la sonda, se detecta la hibridación: Si está marcada con un isótopo
radiactivo se puede hacer una lectura en un contador gamma de manera que la cantidad de radiación
medida en la columna es directamente proporcional a la cantidad de DNA viral presente en el suero
problema o también se puede realizar la electroforesis del DNA hibridado con la sonda marcada en gel
de poliacrilamida y detectar la radioactividad emitida por la sonda mediante la aplicación de una placa
de rayos X (Autoradiografía). Si esta marcada con una enzima se detecta por una simple evaluación
colorimétrica.
Citomegalovirus, Papilomavirus y Epstein-Barr virus han sido identificados usando sondas de ácidos
nucleicos.

AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS VIRALES MEDIANTE UNA REACCION EN CADENA DE
LA POLIMERASA (PCR)

La PCR es una amplificación de secuencias específicas del DNA. Se basa en la utilización de secuencias
cortas de nucleótidos sintéticos llamados primers o cebadores, que se hibridan de forma especifica con
cada una de las cadenas de DNA, previamente desnaturalizadas, llamadas moldes o templados. Para
que la reacción tenga lugar se usa una enzima, Taq pol (ADN Polimerasa termoestable obtenida de la
bacteria Thermus aquaticus) y deoxinucleótidos trifosfatos. La función natural de la DNA polimerasa
consiste en reparar y replicar el DNA. Los deoxinucleótidos trifosfatos se necesitan como ladrillos para
la construcción. El nucleótido al cual se una la polimerasa será complementario de la base en la posición
correspondiente de la cadena templado. Se sintetiza así una cadena simple de DNA, complementaria y
alineada a cada "primer ".

Se realiza una serie repetida de ciclos cada uno compuesto por 3 pasos básicos:
a. Desnaturalización del ADN doble cadena por la elevada temperatura (95ºC).
b. Acoplamiento de los primers, desciende la temperatura (entre 55ºC-72ºC).
c. Elongación del primers, aquí se eleva la temperatura a 72ºC permitiendo la incorporación de los
deoxinucleótidos.

Mientras tanto se van deplecionando los primers y los deoxinucleótidos, y se van sintetizando nuevas
cadenas de DNA. Al final se consiguen miles de copias de DNA del fragmento de DNA limitado por los
"primers ".
Los fragmentos de DNA así obtenidos se pueden identificar por varias técnicas: visualización en geles
de agarosa o poliacrilamida mediante tinción con bromuro de etidio y examen con luz ultravioleta, o
hibridación con una sonda marcada. La combinación de la PCR y las sondas de ácidos nucleicos
marcadas promete ser el método más sensible para la detección e identificación de los virus.

4. Microscopía Electrónica
Mediante el microscopio electrónico es posible observar la morfología de los viriones presentes en
muestras clínicas. La limitación del método además del costo del microscopio, es que necesita de una
alta concentración de viriones (aproximadamente 109 partículas virales/ml, dependiendo del virus)
presentes en la muestra, por ello es poco sensible. Esto hace que sea una técnica poco utilizada.
El microscopio electrónico nos permite, por ejemplo, obtener resultados positivos rápidos de muestras
de materias fecales de pacientes con diarrea, ya que tanto los Rotavirus, como los Adenovirus,
Coronavirus y Calcivirus pueden ser visualizados e identificados como causantes de enfermedad. Por
ejemplo, los Rotavirus poseen una forma característica en doble rueda y un tamaño distintivo, 70nm de
diámetro, y se los encuentra en concentraciones de hasta 1011 partículas virales por gramo de heces.
También en otras muestras, como líquido vesicular, biopsia de tejidos, verrugas, orina o suero es
posible obtener resultados positivos, mediante coloración negativa. Si la concentración de virus en la
muestra clínica es baja, y por tanto no visible directamente por microscopio electrónico, se pueden
utilizar técnicas que aumenten la visualización, por ejemplo, la inmunoelectromicroscopía, que consiste
en el agregado de anticuerpos específicos antivirales y la formación de agregados de partículas que son
más fácilmente visibles que las partículas solas.

Métodos Indirectos
Son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del huésped:
• Detección de anticuerpos específicos antiviralespor técnicas inmunológicas (EIA, IFI,WB, etc.).
• Producción de anticuerpos in vitro.

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI)

La IFI, es un método rápido y confiable para la determinación de anticuerpos antivirales en el suero del
paciente.
Se basa en la unión de anticuerpos antivirales presentes en el suero del paciente a los antígenos virales
expresados en la superficie y citoplasma de células infectadas, que han sido fijadas a un portaobjeto de
vidrio. Como control de especificidad se usan células no infectadas.
El procedimiento es el que sigue:
Se incuba el suero del paciente con las células infectadas y no infectadas.
Luego se realiza un lavado con PBS y se agrega posteriormente anticuerpo anti IgG humana conjugada
con isotiocianato de fluoresceína. El isotiocianato de fluoresceína es una sustancia que se vuelve
fluorescente a la exposición de la luz ultravioleta y emite una luzverde característica.
El conjugado se unirá a los anticuerpos del paciente si la reacción es positiva, leyéndose la prueba en un
microscopio de fluorescencia.
La presencia de Ac se evidencia por la aparición de fluorescencia en el citoplasma y superficie de las
células infectadas, mientras que las células control no fluorescen.

ENZIMOINMUNOANALISIS INDIRECTO (EIA)

Tiene las ventajas de ser un método versátil, relativamente económico, sensible y de lectura objetiva
(instrumental).
Los antígenos virales se inmovilizan sobre una fase sólida (esferita, policubetas para microtitulación u
otros elementos de plástico) y se agregan los sueros en estudio; se incuban, se lavan y se revela la
reacción Ag-Ac por el agregado de una inmunoglobulina antiespecie conjugada con una enzima,
seguida por el substrato apropiado para esta. Los resultados se pueden leer con un espectrofotómetro
y en algunos casos de forma visual.

TEST DE AGLUTINACION
El fundamento es el mismo del Test de Aglutinación Directo.
Ahora lo que buscamos es detectar anticuerpos antivirales, por eso se usan partículas de látex
recubiertas
con Ag viral.

WESTERN BLOT (WB)

Las técnicas inmunológicas de
Inmunoblot están encontrando amplias
aplicaciones en el diagnóstico virológico.
Son particularmente útiles para el
diagnóstico del HIV.
La técnica de WB se basa en la
separación electroforética de proteínas
virales que son posteriormente
inmovilizadas en papel de nitrocelulosa
con el objeto de determinar la presencia
de anticuerpos específicos contra cada
una de esas proteínas.

Esta técnica se realiza esquemáticamente en 3 pasos:
1. Se produce en cultivos celulares grandes cantidades de virus que luego son tratados químicamente
para su disgregación e inactivación. Los antígenos resultantes del lisado viral se separan por
electroforesis en gel de Poliacrilamida.
2. Se realiza una transferencia (blotting o electrotransferencia) de los Ag separados a membranas de
nitrocelulosa.
3. Se coloca el suero del paciente sobre la membrana de nitrocelulosa. Posteriormente se añaden
anticuerpos anti-inmunoglobulina humana unida a una enzima (peroxidasa o fosfatasa alcalina) y, por
último, se agrega el substrato enzimático para la visualización de las bandas reactivas con un producto
final coloreado.
La técnica es muy similar a un EIA, menos sensible pero más específica que esta.

PRODUCCION DE ANTICUERPOS IN VITRO

Se trata de una técnica nueva que ha sido aplicada para el diagnóstico de la infección perinatal. Este
procedimiento revela la presencia de anticuerpos antivirales producidos in vitro a partir de los linfocitos
B extraídos de sangre total, lo que indicaría que el sistema inmune del paciente ha sido estimulado por
el virus.
La producción de Ac antivirales in vitro promete ser de gran valor en el diagnóstico temprano de niños
infectados por VIH.

ELISA

Permite identificar inmunocomplejos por medio de enzimas unidas al antígeno o anticuerpo, estando
uno de ellos adsorbido a un soporte sólido (placa de poliestireno). La reacción antígeno-anticuerpo se
detecta mediante la utilización de un marcador que es una enzima conjugada químicamente al
antígeno o anticuerpo (peroxidasa, fosfatasa), se añade un sustrato al cuál la enzima convierte de
incoloro a un producto coloreado.

ELISPOT

Prueba diseñada originalmente para la detección de células B secretoras de anticuerpos antígeno
específicos.
Se ha adaptado para la detección de células secretoras de citocinas específicas u otros antígenos.
Incorpora el ensayo inmunoenzimático en fase sólida ELISA.
Es un método sensible y selectivo para el estudio de citocinas, no requiere estimulación previa para
reflejar la situación in vivo.
Se puede utilizar para cuantificar y monitorear respuesta de células T con frecuencias del orden de 1 en
100,00, así como células que secreten menos de 100 moléculas de citocina por segundo.
El IFN-γ secretado por las células en cultivo, es capturado en las inmediaciones de la células por un
anticuerpo específico anti- IFN-γ adsorbido en el fondo del pozo.
Las células se retiran mediante lavados sucesivos y se adiciona un segundo anticuerpo específico anti-
IFN-γ marcado con una enzima, el cuál va a adherirse al interferón inmovilizado por el primer
anticuerpo, al adicionar el sustrato de la enzima se forma un producto colorido insoluble que permite
ver el sitio en donde se encontraba la célula secretora de IFN-γ como una mancha de color.1

V. CUESTIONARIO.

1. ¿Cuáles son los mecanismos de transmisión en las infecciones virales?

Mecanismos de transmisión vírica:
• Gotas de aerosol.
• Comida, agua.
• Fomites (p. ej., tejidos, ropa).
• Contacto directo con secreciones (p.ej., saliva, semen).
• Contacto sexual, nacimiento.
• Transfusión de sangre o trasplante de órgano.
• Zoonosis (animales, insectos [arbovirus]) 2

2. ¿Qué es el virión y cuál es su estructura?

En medicina, microbiología y biología se denomina virión a la partícula vírica morfológicamente
completa e infecciosa. Está compuesto por:

• Ácido nucleico vírico: Puede ser ADN o ARN, solo una de ellos, de cadena doble o sencilla.
• Proteínas víricas: Forman la cubierta externa o cápside, compuesta por subunidades que se
denominan "capsómeros", son proteínas estructurales, pero el virión puede tener también
proteínas enzimáticas y aglutinantes.
• La nucleocápside (es decir, la cápside más el genoma (ARN o ADN)) puede tener distintas
formas.

En algunos casos (virus con envoltura) el virión contiene también una membrana lipídica que envuelve a
la nucleocápside y contiene proteínas de origen viral y algunas proteínas de la célula infectada.Ejemplos
de virus con envoltura son el VIH (contiene las glicoproteínas gp120 y gp41 virales y algunas moléculas
celulares) o el virus de la gripe (contiene la neuraminidasa y la hemaglutinina virales)3

VI. CONCLUSIONES.

Métodos Directos:
1. El virus como agente infeccioso (aislamiento viral).
2. La presencia de antígenos virales (técnicas inmunológicas): Inmunofluorescencia (IF),
Enzimoinmunoanálisis (EIA), Test de Aglutinación.
3. La presencia de ácidos nucleicos virales (PCR, etc.).
4. El virus como partícula viral (microscopía electrónica).

Métodos Indirectos:
Son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del huésped:
• Detección de anticuerpos específicos antiviralespor técnicas inmunológicas (EIA, IFI,WB, etc.).
• Producción de anticuerpos in vitro.

VII. BIBLIOGRAFÍA

1. Sandin M. Métodos de Estudio y Diagnóstico Viral [Sede Web].Agentina. Universidad de Buenos Aires;
2009-[acceso el 31 de octubre de 2009]. Disponible en:
http://www.vet.unicen.edu.ar/html/Areas/Virologia/Documentos/2009/Diagnostico%20viral.pdf
2. Murray P. Microbiología Clínica. 5ed. España: Elsevier; 2006.
3. Wikipedia.org. Virión[Sede Web]. España: Wikipedia.org; 2009- [actualizado el 28 de agosto de 2009;
acceso el 31 de octubre de 2009]. Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Viri%C3%B3n

Prueba rápida para VIH

Alumna: Jenny Cedrón Custodio.

La barra roja solo apareció en la ventan Control, lo que demuestra que la prueba fue negativa.

Fundamento:

El SIDA se caracteriza por los cambios en la población de linfocitos T.

El virus reduce el número de linfocitos T colaboradores, lo que provoca que los individuos infectados
sean más vulnerables a tumores e infecciones oportunistas.

La presencia del virus del SIDA provoca la producción de anticuerpos específicos frente al VIH-1 ó al
VIH-2.

Resultados:

• Si los anticuerpos del VIH-1 y VIH-2 están presentes en
la muestra, se unen al coloide de selenio-antígeno y
luego, a los antígenos de la ventana de resultados del
paciente formándose una barra roja en esta ventana.

• Si los anticuerpos del VIH-1 y VIH-2 NO están
presentes, el coloide de selenio-antígeno traspasa la
ventana de resultados del paciente y no aparece
ninguna barra roja en esta ventana.
• Esta última barra sirve para asegurar la validez de los
resultados, o de barra de control del procedimiento.

Prueba rápida para Hepatitis B.

La banda roja apareció solo en la ventana Control, por lo que la prueba es negativa.

Fundamento

La tira de prueba de diagnóstico rápida superficial del antígeno de la hepatitis B (HBsAg) es una prueba
obligatoria para la detección visual de antígeno superficial de la hepatitis B (HBsAg) en suero o un
plasma rápida, directa. Se utiliza como ayuda en la diagnosis de la infección de la hepatitis B. La una tira
de prueba de HbsAg del paso se basa en el principio de immunoensayo del emparedado para la
determinación de HBsAg en suero o el plasma y los anticuerpos policlonales se emplean para identificar
HBsAg específicamente. Esta una prueba de paso es muy sensible y tarda solamente 20-30 minutos.
Los resultados de la prueba se pueden leer visualmente sin ningún instrumento.1

Resultados:

Es positivo cuando aparecen ambas bandas.
Es negativo cuando solo aparece la banda Control.

II.

Resultados:

A 1,728
B 1,843
C 1,608
D 1,523
E 1,588
F 1,600
G 1,417
H 1,312

F = 1,600 G = 1,417

H = 1,312

V. CUESTIONARIO.

1. Señale tres factores importantes de considerar en la toma de la muestra para un
aislamiento viral y para una determinación de anticuerpos séricos.

• Utilice guantes.
• No pipetee con la boca.
• No coma, beba, fume, utilice cosméticos ni maneje lentes de contacto en los lugares donde se
trabaje con estos materiales.
• Limpie y desinfecte las salpicaduras de muestras o de reactivos usando un desinfectante
adecuado como, por ejemplo, una solución de hipoclorito sódico al 0,5%.
• Descontamine y deseche las muestras, los reactivos y todos los materiales potencialmente
contaminados de acuerdo con las normativas vigentes.

2. Mencione las familias de los virus considerando su clasificación según su genoma.

Grupo I - ADN bicatenario
Grupo II - ADN monocatenario
Grupo III- ARN bicatenario
Grupo IV - ARN monocatenario + (misma secuencia que el ARNm+)
Grupo V - ARN monocatenario - (secuencia complementaria del ARNm+)
Grupo VI - Virus ARN monocatenario retrotranscrito (o Virus ssRNA-RT)
Grupo VII - Virus ADN bicatenario retrotranscrito (o Virus dsDNA-RT).2

3. Mencione 3 diferencias entre un cultivo primario y una línea celular.

4. ¿Cómo se puede determinar la presencia de un virus en un cultivo celular? ¿Es siempre
necesario confirmar el agente sospechado con otra prueba?

Los cultivos celulares son, pues, los biosubstratos más corrientemente empleados para la propagación
de los virus.
Un cultivo celular es obtenido, de explantes de órganos o de embriones de animales.
Estas células obtenidas asépticamente se disocian tratándolas con una enzima (tripsina) que rompe el
cemento intercelular. La suspensión de células libres así obtenidas se coloca en la superficie plana de un
recipiente de vidrio o plástico en donde las células se adhieren y multiplican formando una fina capa de
células que se llama MONOCAPA CELULAR.
Esta monocapa de células crece en un medio de cultivo complejo que contiene albúmina, vitaminas,
sales, glucosa, etc., en un sistema buffer. Se previene la contaminación bacteriana adicionándole al
medio antibióticos adecuados.
Los cultivos celulares en monocapa son los más usados, aunque hay otros sistemas (cultivos en
suspensión, explantos, cultivos de órganos, cultivos en microcarriers, etc.).

Cuando los virus no producen efecto citopático, se puede recurrir a técnicas que ponen en evidencia su
presencia en el cultivo. Las más usadas son:
• Hemadsorción
• Hemaglutinación
• Tinciones con anticuerpos monoclonales.3

5. ¿Cómo se lleva a cabo la síntesis de las proteínas víricas?

1. El ADN bicatenario (ADN bc) utiliza la maquinaria del anfitrión localizada en el núcleo (a
excepción de los poxvirus) para producir ARNm, que es traducido (por los ribosomas de la
célula del anfitrión) en proteínas.
La replicación del AND vírico se realiza de un modo conservador (enroscamiento circular).
2. El ADN monocatenario (ADN mc) se convierte en ADN bc y se replica del mismo modo que
éste último.
3. El ARN + se asemeja al ARN m que se fija en los ribosomas para producir una poliproteína que
posteriormente es escindida en proteínas individuales. Una de las proteínas víricas es una
ARN-polimerasa que produce una plantilla de ARN (-) y, a continuación, una mayor cantidad
de genomas ARN+ y ARNm.
4. El ARN- es transcrito en los ARNm y en una plantilla de ARN+ por una ARN-polimerasa
contenida en el virión. La plantilla de ARN(+) se utiliza para producir la progenie del genoma
ARN (-).
5. El ARN bc actúa como el ARN-. Las cadenas (-) son transcritas en los ARNm mediante la acción
de una ARN-polimerasa contenida en la cápside. Posteriormente los ARN+ adquieren cápside
y los ARN- se producen en el interior de la cápside.
6. Los retrovirus son ARN+ que se convierte en ADN(copia de ADN o ADNc) mediante la acción
de una transcriptasa inversa presente en el interior del virión. La ADNc se integra en el interior
del cromosoma del anfitrión y éste se encarga de producir los ARNm, las proteínas y las copias
completas del genoma ARN.4

VI. CONCLUSIONES

• La prueba rápida de VIH fue negativa debido a que solo apareció la banda C.
• La prueba rápida para Hepatitis B fue negativa pues solo apareció la bande C.
• Los valores obtenido de los sueros fueron: F: 0,94, G: 0,83, H: 0,77. Todos menores que 1,
por lo que la prueba para VIH fue negativa.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1.JD Lab. Kit de prueba de diagnóstico rápido superficial del antígeno de la hepatitis B (HBsAg)
[Sede Web]. España: JD Biotech; 2009-[acceso el 31 de octubre de 2009]. Disponible en:
http://spanish.alibaba.com/product-gs/hepatitis-b-surface-antigen-hbsag-rapid-
diagnostic-test-kit-212886202.html
2. Wikipedia.org. Virus[Sede Web]. España: Wikipedia.org; 2009- [actualizado el 28 de agosto de
2009; acceso el 31 de octubre de 2009]. Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Virus
3. Sandin M. Métodos de Estudio y Diagnóstico Viral [Sede Web].Agentina. Universidad de
Buenos Aires; 2009-[acceso el 31 de octubre de 2009]. Disponible en:
http://www.vet.unicen.edu.ar/html/Areas/Virologia/Documentos/2009/Diagnostico
%20viral.pdf
4. Murray P. Microbiología Clínica. 5ed. España: Elsevier; 2006.

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