mecanismos-de-accion-y-resistencia-a-blactamicos.pdf
- 1. Mecanismos de acción y resistencia a β-lactámicos en BGN. Pruebas de tamizaje para detección de BLEE, AmpC, carbapenemasas. Bioq. Melina Rapoport Servicio Antimicrobianos, INEI-ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”. Lab. Nacional/Regional de Referencia en Resistencia a los Antimicrobianos. Centro Colaborador de OMS en Vigilancia de Resistencia a los Antimicrobianos. www.antimicrobianos.com.ar
- 2. VIGILANCIA INTEGRADA DE RAM EN ANIMALES. PANEL DE ATB A VIGILAR EN E. coli y Salmonella ANTIBIOGRAMA AMPICILINA AMOXICILINA/CLAVULANICO C1G: CEFALOTINA/CEFAZOLINA CEFOXITINA C3G: CEFOTAXIMA/CEFTACIDIMA* AC. NALIDIXICO CIPROFLOXACINA ENROFLOXACINA FLORFENICOL ESTREPTOMICINA GENTAMICINA AMICACINA TRIMETOPRIMA/SULFAMETOXAZOL COLISTIN FOSFOMICINA TETRACICLINA** AZITROMICINA (solo en Salmonella) *(Ceftiofur) Si hay R a C3G → IMIPENEM **Si hay R a TET → TIGECICLINA β-lactámicos Polipéptidos
- 3. Antibióticos β-lactámicos C C C C C N O CH3 CH3 S R - CONH COOH H H Mecanismo de acción: Inhibición de la síntesis de pared bacteriana = unión a PBPs Mecanismos de resistencia: - Impermeabilidad - Eflujo - Modificación del sitio blanco: mutaciones en las PBPs - Inactivación enzimática = producción de β-lactamasas
- 4. AmpC MBL BLER BLEE OXA carb Carb APB + + Clasificación de β-lactamasas Past and Present Perspectives on β-lactamases. Bush K. AAC, 2018 (62).
- 5. Evolucion de β-lactamicos y β- lactamasas PENICILINAS CEFALOSP. 1a GEN CEFALOSP. 3a y 4a GEN CARBAPENEMES MONOBAC- TAMES (AZT) β-lactamasa espectro reducido
- 6. E. coli Cómo se ve una β-lactamasa de espectro reducido? *Grupo 2b KB: TEM-1 TEM-2 y SHV1. *Muy comunes en Enterobacterales *Alta prevalencia en E. coli de humanos. Resistencia a aminopenicilinas AMP Sensibilidad a C3G, C4G, carbapenemes, combinación con inhibidores (Amoxi/clavulánico, Pip/tazobactam, Ampi/sulbactam) Sensibilidad / Sensibilidad intermedia a C1G
- 7. Evolucion de β-lactamicos y β- lactamasas PENICILINAS CEFALOSP. 1a GEN CEFALOSP. 3a y 4a GEN CARBAPENEMES MONOBAC- TAMES (AZT) β-lactamasa espectro reducido β-lactamasa espectro extendido (BLEE) / AmpC
- 8. Cómo se ve una β-lactamasa de espectro extendido (BLEE)? *Grupo 2be KB: TEM, SHV, CTX-M, PER, VEB, GES, OXAs Resistencia a AMP, C1G, C2G, C3G, C4G. Sensibilidad a FOX y carbapenemes Sensibilidad o valores intermedios a AMC, PTZ, AMS. Inhibibles por CLAVULANICO, SULBACTAM, TAZOBACTAM CTX-M es la BLEE mas prevalente en Eco y Salmonella a nivel mundial
- 10. Distintas BLEE: Distintos Fenotipos E. coli CTX-M AMC CTX CAZ E. coli PER-2 AMC CTX CAZ E. coli SHV-2 AMC CTX CAZ E. coli SHV-5 AMC CTX CAZ
- 11. Cómo se ve una β-lactamasa tipo AmpC en E. coli o Salmonella? Resistencia AMP, C1G, AMC, FOX Sensibilidad FEP (C4G), carbapenemes Sensibilidad Intermedia o Resistencia a C3G Familias de AmpC plasmidicas descriptas: ACC, ACT, BIL, CMY, DHA, FOX, LAT, MIR, MOX CAZ FOX FEP AMC CTX FOX CTX CAZ CMY-2 *Grupo 1/Clase C: Cromosomica o Plasmídica. *Inhibible por Ac. Fenil Boronico (APB), Avibactam. E. coli posee AmpC cromosómico basal
- 12. APB: Acido Fenil-Borónico ACC-1 (FOX sensible) CMY-2 DHA (inducible) Detección con Ac. Fenil-Borónico β-lactamasas plasmídicas tipo AmpC APB APB APB
- 13. Sospecha de BLEE o AmpC BLEE NEG β-lactamasa tipo AmpC ✓ Salmonella: fenotipo AmpC implica adquisición de AmpC plasmídico. ✓ E. coli no hay forma de diferenciar fenotípicamente entre AmpC plasmídico e Hiperproducción de AmpC cromosómico. Evaluar sinergia FOX-APB-C3G 1) Sospecha de BLEE R a C3G? 2) Sospecha de AmpC R/I a FOX? E. coli / Salmonella R a C1G Evaluar sinergia CTX-AMC-CFR BLEE POSITIVA CTX cefotaxima CFR ceftiofur FOX cefoxitina
- 14. 1) E. coli ATCC 25922 2.) Cepa sospechosa FOX 1. Hisopar E. coli ATCC 25922 2. Realizar una estría con cepa sospechosa desde el centro hacia la periferia (cultivo fresco) 3. Colocar disco Detección de resistencia enzimática M e t o d o d e Para detector AmpC plasmídico: usar el disco de FOX 4. Incubar 18hs 35°C + +
- 15. Evolucion de β-lactamicos y β- lactamasas PENICILINAS CEFALOSP. 1a GEN CEFALOSP. 3a y 4a GEN CARBAPENEMES MONOBAC- TAMES (AZT) β-lactamasa espectro reducido β-lactamasa espectro extendido (BLEE) Carbapenemasas
- 16. SERINO enzimas. R a carbapenemes, C3G , C4G y AZT Inhibidor: APB, AVI Grupo 2f, Clase A Principales Carbapenemasas adquiridas KPC Carbapenemes: Imipenem, Meropenem, Ertapenem C3G/C4G: cefalosporinas de 3era/4ta generacion; AZT: aztreonam; APB: acido fenil boronico; AVI: avibactam
- 17. Deteccion de carbapenemasas clase A con discos de APB
- 18. METALO enzimas. R a carbapenemes, C3G y C4G S a AZT Inhibidor: EDTA VIM, IMP, NDM SERINO enzimas. R a carbapenemes, C3G , C4G y AZT Inhibidor: APB, AVI Grupo 2f, Clase A Principales Carbapenemasas adquiridas Grupo 3, Clase B KPC Carbapenemes: Imipenem, Meropenem, Ertapenem C3G/C4G: cefalosporinas de 3era/4ta generacion; AZT: aztreonam; APB: acido fenil boronico; AVI: avibactam
- 19. Detección de MBL con discos de EDTA
- 20. METALO enzimas. R a carbapenemes, C3G y C4G S a AZT Inhibidor: EDTA VIM, IMP, NDM SERINO enzimas. R a carbapenemes, C3G , C4G y AZT Inhibidor: APB, AVI Grupo 2f, Clase A Principales Carbapenemasas adquiridas Grupo 3, Clase B KPC Carbapenemes: Imipenem, Meropenem, Ertapenem C3G/C4G: cefalosporinas de 3era/4ta generacion; AZT: aztreonam; APB: acido fenil boronico; AVI: avibactam SERINO enzimas. R a carbapenemes, C3G y C4G Inhibidor: AVI +/- OXA-48like/OXA-163 Grupo 2df, Clase D
- 21. Métodos de Detección de carbapenemasas Métodos fenotípicos Hodge Test / THT mCIM/eCIM Métodos colorimétricos Métodos Inmunocromatográficos
- 22. mCIM/eCIM CLSI M100 Suspender un loop de 1ul de la bacteria en 2ml de TSB - Vortex Agregar disco meropenem 10µg Incubar por 4 hrs a 35°C Hisopar con E.coli ATCC 25922 Colocar el disco de MER en placa de agar MH inoculada con E.coli ATCC 25922 Incubar por 18 – 24 hr a 35°C Medir los halos POS: 6-15mm o 16- 18mm con colonias: Carbapenamasa positiva NEG: ≥ 19mm Carbapenemasa negativa eCIM: agregar un 2do tubo con 20ul de EDTA 5mM. Realizar mCIM en paralelo. Δ eCIM-mCIM ≥5mm = MBL
- 23. BlueCarbaTest CarbaNP-direct Rapidec CarbaNP® bioMerieux ✓ Un resultado positivo de un método colorimétrico indica la presencia de carbapenemasa. Por el contrario, un resultado negativo, requiere evaluar el fenotipo completo para definir la presencia o ausencia de carbapenemasa. ✓ Algunos alelos de carbapenemasa de tipo OXA pueden no ser detectadas por estos métodos. Métodos colorimétricos
- 24. Métodos Inmunocromatográficos Resist O.O.K: OXA-48, OXA-163, KPC NG-test 5: KPC, OXA-48like, VIM, IMP, NDM Métodos ultra rápidos: 15min.
- 25. Muchas gracias! Servicio Antimicrobianos INEI-ANLIS “Dr C. G. Malbran” www.antimicrobianos.com.ar [email protected]