Practica Nº 06 medios de cultivo, presentación
- 1. PRACTICA Nº 07 MICROBIOLOGIA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
- 2. PRACTICA: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
- 3. OBJETIVOS: Conocer los distintos medios de cultivo Conocer la composición de los medios de cultivo Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de medios de cultivo deshidratados Indicar el método de esterilización apropiado.
- 4. FUNDAMENTO • La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio.
- 5. INTRODUCCIÒN • QUE SON MEDIOS DE CULTIVO? Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.
- 6. MEDIO DE CULTIVO • Conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes. • Es la mezcla de sustancias, naturales, sintéticas o ambas, que permite el crecimiento y la reproducción de microorganismos o bien que permite mantener su viabilidad es lo que conocemos como Medio deCultivo. • No existe un medio universal común.
- 7. ADECUADOS • Como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas, vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento; sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar. DISPONIBILIDAD DE • Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los NUTRIENTES medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbóno CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO • Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido • Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, su inconveniente es que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente sino a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXÍGENO Y OTROS GASES
- 8. POR SU COMPOSICIÓN MEDIOS LÍQUIDOS • Llamado también caldo. • USO: diluciones homogenizar mezclas enriquecer cultivos Ejemplos: Infusión cerebro corazón, Caldo Selenito, Agua peptonada alcalinizada
- 9. POR SU COMPOSICIÓN MEDIOS SÓLIDOS • Llamado también agar. • Se le añade 2% de agar. • En cajas petri o en tubos • USO: Para separar microorganismos Para favorecer el desarrollo de colonias aisladas Ejemplo: Agar sangre, Agar azida sangre, Mac conkey, Agar SS, Agar XLD
- 10. POR SU COMPOSICIÓN MEDIOS SEMISÓLIDOS • Consistencia leve o gelatinosa. • Medio líquido al que se adiciona agar (0.4 a 0.8%). • USO: Para determinar la movilidad de los microorganismos microaerófilos. Ejemplo: Medio de MIO, medio de SIM
- 11. MEDIO DE CULTIVO SOLIDO MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO MEDIO DE CULTIVO SEMI SOLIDO
- 12. POR SU USO TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO * MEDIOS DE CULTIVO GENERALES, UNIVERSALES, NOSELECTIVOS •Permiten el crecimiento de gran variedad de microorganismos. Pertenecen a esta categoría las infusiones de extractos de carne y peptona, una mezcla de composición similar a la de los líquidos orgánicos * MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS. •llevan incorporadas determinadas sustancias que inhiben el crecimiento de un microorganismo y facilita el crecimiento del microorganismo que nos interesa. Ejm.l caldo lactosa bilis verde brillanteo el agar Salmonella- Shigella. M EDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES. • incorpora determinadas sustancias que nos permiten diferenciar entre dos tipos de microorganismos. Ej. El agar de sal y manitol: nos permite diferenciar en el caso de los staphylococos, los que utilizan el manitol en su metabolismo de los que no. MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. •son aquellos medios en los cuales a un medio base se le añaden determinadas sustancias nutritivas que son necesarias para el crecimiento de un microorganismo exigente.. Por ejemplo el caldo selenito cistina o el caldo agar sangre.
- 13. Tipos de medios de cultivos https://www.youtube.com/watch?v=HnRbriYrHHw
- 14. ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO • Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25°), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar en calor. etiquetar con el nombre del medio de cultivo correspondiente, el número de lote y la fe cha de caducidad. Se almacenan en frigorífico
- 16. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
- 17. • Material y Reactivos: • *Papel de filtro. • *Probeta o vaso de precipitado. • *Varilla de vidrio. • *Papel de aluminio. • *Lápiz. • *Placa Petri. • *Rotulador permanente. • *Mechero Bunsen. • *Mechero. • *Balanza. • *Espátula. • *Medio de cultivo deshodratado. • *Agua destilada. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO (PROTOCOLO)
- 18. PROCEDIMIENTO 1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo asignado. 2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cada uno de los ingredientes. Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo 3. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante. Si es necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar. 4. Esterilizar de inmediato el medio de cultivo siguiendo las instrucciones señaladas por el fabricante. 5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones señaladas por el profesor. 6. Identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre, distribución y fecha de preparación
- 19. Ejemplo de preparación: • 1. Preparar todos los materiales necesarios en la mesa de trabajo. • 2. Depositar 250mL de agua destilada en una probeta. • 3. Pesar en la balanza el agar nutritivo. ( Queremos preparar 250mL de caldo nutritivo: en las indicaciones del bote nos indica que hay que poner 23g por cada 1L, por lo que al querer preparar 250mL ( 0,25 L) —> 5,75g por 250mL ( 23×0,25= 5,75g). • 4. Mida la cantidad de agua necesaria, poner un poco de agua destilada del vaso de precipitado o matraz. Depositar la cantidad de agar pesado y termine de añadir el resto de agua destilada. Cuando se haya añadido todo el Agar nutritivo y el agua destilada remover bien para eliminar posibles grumos. • 5. Tapar el bote con su tapón o con papel y una liga de coloque encima de la cocinilla removiendo constantemente hasta hervir y complete su disolución.
- 20. • 6. Meter en el autoclave, a 121ºC durante 15-20 minutos, el bote con el caldo de cultivo para esterilizarlo. • 7. Tras aproximadamente 20 minutos se terminará la esterilización del autoclave. Sacar el bote de Agar nutritivo y dejar enfriar un poco el bote en la mesa de trabajo. • 8. Rotular con permanente las placas de Petri ( fecha y medio de cultivo). • 9. Encender el mechero Bunsen para crear un ambiente de esterilidad. Pasar la boca del bote por el mechero, abrir la placa de Petri ( coger un montón de tres o cuatro placas de Petri y coger de abajo a arriba), depositar Agar nutritivo hasta la mitad de la placa de Petri y tapar. Hacer 3 o 4 placas y volver a esterilizar la boca del bote y repetir el proceso. Continuaremos hasta terminar con el Agar nutritivo del bote. • 10. Dejar en reposo las placas Petri hasta que solidifiquen, introducirlas en la nevera con papel de aluminio con el nombre del cultivo y fecha rotuladas con permanente en montones de 10-12 placas de Petri.
- 21. REVISIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Es importante comprobar que el medio se comporta correctamente. Las pruebas que debes hacer para tener seguridad son: Revisión macroscópica: Se examina el medio a simple vista, atendiendo a su color, a su opalescencia y transparencia, a la humedad en las placas ya preparadas y a la posible aparición de precipitados. Vigilancia de Ph: Porque la mayoría de los microorganismos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro. Vigilancia de la esterilidad: Se lleva a cabo incubando a 30 ºC durante 72 horas una pequeña porción, representativa del lote de medio preparado, para comprobar que allí no crecen gérmenes. Prueba de la eficacia: En una pequeña porción representativa del medio preparado, se inocula un microorganismo normalmente el propio fabricantea conseja el más adecuado y se cultiva. Así se comprueba si en el medio de cultivo preparado ese microorganismo se desarrolla correctamente.
- 22. Medios de cultivo selectivos y diferenciales https://www.youtube.com/watch?v=H1-IpZ8T-_U
- 23. RESULTADOS • MEDIO DE CULTIVO PREPARADO:____________________________ • CANTIDAD PREPARADA: ___________________________________ • CANTIDAD PESADA: ______________________________________ • CÁLCULOS REALIZADOS: • MODO DE PREPARACION:
- 24. • ASPECTO DEL MEDIO DE CULTIVO: _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ • ESTADO FÍSICO: Sólido:…… Líquido:………… Semisólido:……….. • TIPO DE MEDIO DE CULTIVO • Según la naturaleza de los ingredientes: Natural o complejo:…….. Sintético:……… • Según el propósito de uso: Enriquecimiento……… Selectivo:…….. Diferencial:………. Otro:……… DISTRIBUCIÓN: ______________________________________________________________ CONDICIONES DE ESTERILIZACIÓN: _______________________________________________ CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO: ____________________________________________
- 25. Fuentes de error en la preparación de medios de cultivo • Las posibles fuentes de error son: • Selección inadecuada del medio de cultivo o uso inapropiado. • Adición de un volumen incorrecto de agua o utilización de agua corriente con impurezas. • Adición de menor cantidad de agar al medio, lo cual se manifiesta por la no solidificación correcta del mismo. • Utilización de balanzas inadecuadas cuyo margen de error altera la composición del medio. • Distribución errónea del volumen del medio que puede resultar inapropiado para su utilización. • Disolución insuficiente del agar. Al distribuir el medio agarizado en recipientes (tubos) dan como resultado tubos con medio que no logran solidificar. • La esterilización a temperaturas elevadas y/o durante períodos de tiempo largos, puede ocasionar el deterioro de algunos constituyentes. • Los residuos adheridos al vidrio pueden inhibir algunos microorganismos exigentes.