Reconocimiento de Glúcidos
- 2. Reacción Fehling Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos. Si el glúcido que se investiga es reductor, se oxidará cediendo e- que reducirán el sulfato de cobre (II), de color azul, a óxido de cobre (I), de color rojo-anaranjado. ácido
- 3. Si hay un compuesto reductor (un aldehído), se oxida (a ácido) y reduce al Cu que cambia su estado de oxidación de (2+ a 1+), lo que se evidencia por el cambio de color. Cu SO4 + RCOH Cu2O + RCOOH + H2O (2+ azul) (1+ rojo) Reacción Fehling
- 4. Reacción Lugol La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la amilosa y la amilopectina del almidón. No es por tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta. Si se calienta, la amilasa y la amilopectina pierden las espiras, sueltan el yodo y la muestra pierde el color azul. Si se deja enfriar, de nuevo se reconstituye la estructura de los polisacáridos y vuelve al color azul al atrapar de nuevo el yodo.
- 5. Protocolo de reacción Fehling Se toman 3 ml de las tres muestras que se quieren analizar (glucosa, sacarosa y almidón disueltas al 0,5%) Se ponen en tres tubos de ensayo numerados 1, 2, 3. Añadir 1 ml del reactivo Fehling A y 1 ml del reactivo Fehling B El líquido del tubo de ensayo adquirirá un fuerte color azul. Poner a calentar al baño maría o directamente con el tubo de ensayo sobre la llama. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso
- 6. Análisis de resultados De las tres muestras, sólo la glucosa puede dar positivo ya que la sacarosa tiene los dos carbonos anoméricos involucrados en el enlace y carece de poder reductor y los polisacáridos (almidón) no tienen poder reductor. La muestra que cambie de color será glucosa. Sacarosa
- 9. Protocolo de la reacción del Lugol Se preparan otros dos tubos de ensayo con las dos muestras que dieron negativo (las otras se han inutilizado con el fehling). Se añaden 2 ó 3 gotas de lugol a cada una. El almidón virará a color azul oscuro. La muestra que permanece blanca es la sacarosa.
- 10. Rotura del enlace O-Glicosídico Si a un disacárido se le añade un ácido en caliente, se hidroliza y se separa en los monosacáridos que la forman. La sacarosa con HCl al calentar se rompe en glucosa y fuctosa. La glucosa tiene poder reductor y la fructosa, en medio alcalino y en caliente, se isomeriza en aldosa y también lo tiene. Ahora dará positivo a la reacción Fehling
- 11. Protocolo de la hidrólisis de sacarosa Se prepara otro tubo con 3 ml de la muestra que ha dado negativo al Fehling y al lugol y que sabemos que es sacarosa. Se añaden unas gotas de HCl. Se calienta a la llama del mechero hasta ebullición y después se deja enfriar un par de minutos. Ahora se añade 1 ml de Fehling A y otro de Fehling B. Se comprueba que la sacarosa se ha hidrolizado porque da positivo al fehling.
- 12. Acción de la amilasa salival sobre el almidón Preparar dos tubo de ensayo con almidón disuelto al 0,05%. En uno de ellos añadir saliva y agitar. Calentar los tubos al baño maría sin que pase de 40º (15 min) o sobre la llama pasando el tubo acercando al brazo para que no pase de 37-40º (3-5 min) Sacar y dejar enfriar cinco minutos agitando de vez en cuando. El tubo de la saliva, dará positivo al reactivo Fehling por haberse hidrolizado el almidón a maltosa (disacárido reductor) El otro tubo, dará negativo por seguir el almidón, no reductor. En este segundo se puede hacer la prueba del lugol que dará positivo.