Paper - Simulación in vitro de los efectos causados por la plata
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El estudio investiga los efectos del nitrato de plata en especies de peces como Carassius auratus y Xiphophorus helleri, revelando que causa daños severos a nivel físico y microbiológico, incluyendo muerte total y daño celular evidente. Se utilizaron técnicas de análisis de micronúcleos para evaluar los efectos en las células, confirmando la toxicidad del compuesto. Los resultados indicaron descamación, decoloración y cambios en el entorno acuático tras la exposición a diferentes concentraciones de nitrato de plata.
Paper - Simulación in vitro de los efectos causados por la plata
- 1. SIMULACIÓN in vitro DE LOS EFECTOS CAUSADOS POR LA PLATA EN LAS ESPECIES XIPHOPHORUS HELLERI Y CARASSIUS AURATUS Baldarrago Maico Leslie1, Bobadilla Atao Leo2, Cuadros Cuya Ana3, Olivares Rodríguez Ligia4, Oré Romero Carmen5 & Sandoval Vizcarra Carolina6 Universidad Privada del Norte (UPN). Ingeniería ambiental. Bioquímica y toxicología ambiental. RESUMEN La plata es un elemento químico que se usa para diversas actividades. Este no es toxico de por sí, pero cuando se vuelven sales se convierten en un gran riesgo para la salud si se entra en contacto, ya que puede convertirse en un cancerígeno. El proyecto busca identificar cuáles son las reacciones que causan este químico, en forma de nitrato de plata, en el organismo, a nivel físico y microbiológico. Para realizar dichos estudio, se usará una simulación in vitro usando como organismos de muestra a las especies Carassius auratus y Xiphophorus hellari. Para la identificación del daño celular se usara la técnica de micronúcleos, una técnica fácil de realizar y de bajo costo; además, que arroja resultados confiables. Al realizar el proyecto de investigación, arrojo como resultado final la muerte de todos los peces que se usaron en la prueba. Se observó que sufrieron daños físicos, descamación y decoloración, y microbiológicos, explotaron las células. Palabras clave: Plata, tóxico, in vitro, ensayo de micronúcleos, daños. ABSTRACT SILVER IS A chemical element VARIOUS ACTIVITIES usa para. This is non-toxic and of itself, but when sales are Vuelven become Great Health Risk if it comes into contact, and may Becoming a carcinogen . The project seeks to identify Which child the chemical reactions that cause esta in the form of silver nitrate in the Agency , a Physical and microbiological level . Perform For such study , in vitro Using A simulation Agencies As Displays a Species Goldfish and Xiphophorus hellari be used. For the identification of cell damage Technique micronuclei, A Technical Easy to make and low cost will be used ; : Also, Reliable Results That throws . To Perform Research Project , throw As a result m final death of all fish used in the test. It was noted suffered Physical , peeling and discoloration , microbiological Damage and exploited the cells . Keywords : Silver , toxic in vitro micronucleus assay , damages.
- 2. INTRODUCCIÓN Según la ingeniería química Blanca Elena Jiménez (2001). La plata es un elemento químico pesado, que si bien es usado para diversas actividades económicas, puede causar severos daños a la salud de los seres vivos, no es tóxica de por sí, pero la mayoría de sus sales son venenosas y pueden ser carcinógenas. Las sales solubles de plata, especialmente el nitrato de plata (AgNO3), son letales en concentraciones de hasta 2 g. Los compuestos de plata pueden ser absorbidos lentamente por los tejidos corporales, teniendo como consecuencia pigmentación azulada o negruzca en piel. Estudios realizados por el Departamento de Salud y Servicios para Personas Mayores de New Jersey, exponen que el nitrato de plata causa serios riesgos para la salud, y es que causa efectos tanto agudos, crónicos a largo plazo, dependiendo del tiempo de exposición, también causa un riesgo de cáncer, así como para la reproducción. Es por ello, que hemos decidido realizar una simulación in vitro de los efectos causados por la plata en un organismo. Tomaremos como referencia el estudio realizado por Victoria Barahona Gomáriz (2000). Para realizar este proyecto de curso usamos peces para las pruebas experimentales, del género Carassius auratus y Xiphophorus hellari, a los cuales sometimos a diferentes dosis de nitrato de plata para observar su reacción, cambio físico y microbiológico y su mortandad. El Acuario Paradise (2013), expone que los peces espada o Xiphophorus hellerii son de Cuerpo alargado y medianamente robusto, con la boca levemente orientada hacia arriba, lo cual nos indica que se alimenta de la superficie. Buen nadador. Posee una aleta caudal cuyos radios inferiores se proyectan hacia atrás, dándole así una cola con forma de espada, de ahí su nombre común. Y los peces Goldfish Cometa o Carassius auratus son de cuerpo alargado y cuenta con una sola aleta caudal. Es muy similar al Japones Común con la diferencia de que el cuerpo es más alargado, elegante y tiene las aletas más desarrolladas. Se les encuentra en color blanco, plata, amarillo y tonos rojizos. Esta es la especie de goldfish más resistente. Para la identificación de daños a nivel celular se usará la prueba de micronúcleos. Según lo expuesto en la investigación realizado por Gómez Belinda (2006, Abril), dentro de las ventajas de la técnica se incluyen la facilidad y rapidez, la posibilidad de probar un sólo químico sin otros compuestos, la abundancia de células analizables en diferentes periodos del ciclo celular y el que los micronúcleos formados durante la división celular persisten al menos durante la siguiente interface; además, la prueba no deja lugar a dudas sobre el daño producido, pues lo que se observa como micronúcleos es claramente una pérdida de ADN. Por otro lado, la prueba no detecta agentes que no producen pérdidas de material genético o rezagos anafásicos, y tampoco es útil en poblaciones celulares que no se dividen.
- 3. MATERIALES Y METODOLOGÍA I. Materiales y equipos Materiales - Comida para peces - 5 envases de plástico de 5L - Motor de oxígeno - Declorador - Pecera - Vaso precipitado - Probeta Equipos - Microscopio - Estereoscopio Reactivo - Wright Especie a estudiar - 8 Golfish cometa (Carassius auratus) - 8 Pez espada (Xiphophorus hellari) Muestra problema - 100ml de solución de Nitrato de Plata II. Procedimiento Preparación de la muestra 1. Se preparó 4 soluciones de AgNO3, en concentraciones de 5%, 10%, 15% y 20%. Cálculos (Factor gravimétrico) 푋푔푟 퐴푔 = 107,87 퐴푔 169,87 퐴푔푁푂3 = 0,63 푔푟 퐴푔 Es decir, en la solución del Nitrato de plata, el 63% corresponde al elemento: plata. Preparación de la muestra 2. A las 16 hras, en los 5 recipientes, se colocaron dicha soluciones de la siguiente manera. Recipiente 1 2 3 4 5 Concentración 0% 5% 10% 15% 20% , , m (5ml de la solución por cada litro de agua)* Ilustración 1. Recipientes donde se llevara a cabo el experimento.
- 4. 3. Se dejó en periodo de prueba por 24 horas. Ilustración 2. Inicio del experimento. Ensayo de micronúcleos a) Se procede a cortar una parte del pez, con el fin de obtener una cantidad pequeña (una a dos gotas) de sangre. La cual será esparcida, con ayuda de un portaobjeto, sobre otro, usando la técnica del raspado. b) Luego se espera 15 minutos como mínimo para que seque y se sumerge los portaobjetos en alcohol frio durante 10 minutos. c) Pasado ese tiempo, y una vez seca la muestra, utilizamos el reactivo Wright para colorear las células. Aplicamos unas gotas sobre el portaobjeto. d) Posteriormente, con la ayuda del microscopio se observó el cambio y /o daño celular que sufrieron los peces. Ilustración 3. Corte al pez para obtener muestras de sangre. Ilustración 4. Técnica del raspado.
- 5. TABLA Nº 1: Vista microscópica del daño celular RECIPIENTE CONCENTRACIÓN EXPOSICIÓN AL AgNO3 Blanco 0% 2 5% 3 10% 4 15% 5 20%
- 6. RESULTADOS El ensayo realizado dio como resultado la muerte de todos los peces que se sometieron a la prueba. Se pudo observar una decoloración leve en la piel, así como una descamación en varias zonas de ambas especies, Carassius auratus y Xiphophorus hellari. El ensayo de micronúcleos arrojo un daño celular, y es que se pudo observar que las células habían explotado por completo. Los cuerpos de agua en donde se realizaron las pruebas cambio de color, se tornó de color marrón oscuro. TABLA Nº 2: Cambios físicos en el cuerpo de los peces RECIPIENTE CONCENTRACIÓN EXPOSICIÓN AL AgNO3 Blanco 0% 2 5% 3 10% 4 15% 5 20%
- 7. CONCLUSIONES Finalmente, podemos decir que la experimentación de cuán grande puede ser el daño de la plata en seres vivos, en este caso con peces de las especies Carassius auratus y Xiphophonus hellari, es severa; ya que, no solo se obtuvo como resultado la muerte de todos los peces, sino que pudimos comprobar que el elemento químico ya mencionado les causo una decoloración y descamación parcial, completa en algunos casos, a los peces; Además, se pudo apreciar los daños a nivel celular que presentaron los bioindicadores estudiados, como pudimos ver las células habían explotado por completo debido al compuesto problema. BIBLIOGRAFÍA La Contaminación Ambiental en México. Ingeniera Blanca Elena Jiménez (2001). Instituto de ingeniería de la UNAM y FEMISCA. México. FAO (1975) “Curso de Capacitación FAO/sida sobre contaminación de las aguas del mar en relación con la protección de los recursos vivos. Gotemburgo Suecia. Supl. 1:328 Gomez, Belinda (2006,abril). La Ciencia y El Hombre. La prueba de Micronúcleos. http://www.uv.mx/cienciahombr e/revistae/vol19num1/articulos/ micronucleos/index.htm Olivia Torres-Bugarín, María Guadalupe Zavala-Cerna, etc. (2013, Enero- Abril). Procedimientos básicos de la prueba de micronúcleos y anormalidades nucleares en células exfoliadas de mucosa oral. http://www.medigraphic.com/pd fs/residente/rr-2013/rr131b.pdf Anónimo (2013). Acuario Paradise. INFORMACION GENERAL – Gold Fish, Cometas, Moros, Red Cap, Ojos de Burbuja, Escama de Perla y Variedades. http://paradisetropicalfish.com.s v/2010/06/06/gold- fish-cometas-moros- y-variedades/ Ruiz, Lidia . metales pesados en los peces y sus efectos. http://triplenlace.com/2013/01/0 6/los-metales-pesados-en- los-peces- y-sus-efectos/ Riesgo toxicológico ambiental de compuestos activos utilizados para la desinfección de torres de refrigeración. Victoria Barahona Gomariz (2000). Editorial Complutense, S.A. España