Tecnica necropsia y toma de muestras
- 1. CATEDRA DE PATOLOGIA DE AVES Y PILIFEROS TÉCNICA DE NECROPSIA Y TOMA DE MUESTRAS 2008
- 2. TECNICA DE NECROPSIA DE LAS AVES 1.-MUESTRA La muestra que se envía al laboratorio debe ser representativa del lote en el cual se va a realizar el diagnóstico. Se requiere un mínimo de tres a cinco animales. Esto puede variar según la edad de las aves y la cantidad que compone el lote. Se deben tomar aves que presenten la enfermedad y no las retrasadas en su crecimiento, esta mala selección de las muestras puede llevarnos a un diagnóstico erróneo y a una medicación innecesaria. Las aves deben llegar al laboratorio preferentemente vivas, el objetivo de esta premisa es la de poder realizar una buena inspección externa y observar la sintomatología de las mismas. Al mismo tiempo, esto nos permite extraer sangre para la obtención de suero y realizar distintas pruebas serológicas. Las aves que se envíen muertas al laboratorio deberán remitirse refrigeradas, una mala conservación, sobre todo en época estival, no solo dificulta la tarea de observación de las alteraciones pos-mortem, sino que impide la realización de pruebas complementarias como por Ej. Bacteriología, virología, etc. 2.-DATOS ANAMNESICOS O ANTECEDENTES CLINICOS Estos datos son muy importantes, ya que sumados a la experiencia del necropsista, orientan al mismo a llegar al diagnóstico de la enfermedad presente en el animal o lote de animales. Todos los datos anamnésicos se deben volcar a una ficha u hoja de Protocolo, la cual deberá estar perfectamente identificada con un número, el mismo, servirá para en un futuro poder identificar cualquier estudio complementario que se realice. También se deberá consignar fecha de ingreso de la muestra, nombre y apellido del propietario, nombre del establecimiento, dirección, localidad y número telefónico. Estos datos son imprescindibles en caso de diagnosticarse una enfermedad exótica o de denuncia obligatoria ante las autoridades sanitarias. RAZA: Se debe consignar si el lote esta compuesto por animales de raza pesadas, semipesadas o livianas. Las razas pesadas y semipesadas son más propensas a padecer afecciones del aparato locomotor o afecciones de la quilla debidas a su peso. Las razas livianas son más sanguíneas, por lo tanto más propensas a golpes y picaje. ORIGEN: Es conveniente conocer el origen o procedencia de las aves. Existe un grupo importante de enfermedades que son trasmitidas a través del huevo, y por lo tanto el problema no reside solo en el criador que recibe el producto, sino también en el propietario de los reproductores, por lo tanto, las medidas adecuadas se deberán tomar en ambas explotaciones.
- 3. EDAD: En las explotaciones avícolas el conocimiento de la edad de los animales adquiere una gran importancia, existe un gran número de enfermedades que afectan solamente a animales jóvenes, como las hay, que afectan solamente a animales adultos. TIPO DE EXPLOTACION: Los sistemas de explotación más frecuentes son: reproductores, ponedoras de huevos para consumo y parrilleros. Existen enfermedades que afectan con mayor frecuencia a cada una de estas explotaciones, por lo tanto su importancia económica y profilaxis son distintas. TIEMPO QUE SE OBSERVA LA ENFERMEDAD: Conocer cuanto tiempo hace que comenzaron los síntomas o la mortandad nos indicará la evolución de la enfermedad, de esta manera podemos dividirlas en agudas, subagudas y crónicas. Este dato nos permite conocer el período de incubación de la misma, dato éste muy importante en las enfermedades avícolas. MORBILIDAD: Indica la cantidad de animales enfermos en el lote, y debe ser expresado en porcentaje. MORTALIDAD: Indica la cantidad de animales muertos en el lote, se expresa también en porcentaje. Estos dos índices son muy importantes, pues nos dan pautas que orientan significativamente en el diagnóstico. Algunas enfermedades presentan altos índices de morbilidad con baja mortalidad, mientras que en otras, ambos índices son muy similares. CONSUMO DE ALIMENTO Y AGUA: Se debe consignar con el objeto de determinar la disminución o aumento de los mismos. En casi todas las enfermedades, las aves disminuyen el consumo de alimento por falta de apetencia y movilidad, en las etapas febriles el consumo de agua está aumentado. Esto debe también deslindarse de los consumos aumentados normalmente en las épocas estivales. VACUNAS: Se deben conocer perfectamente los planes de vacunación establecidos en el criadero. Estos datos permiten interpretar estudios serológicos posteriores, establecer posibles errores con respecto a la edad o vía de vacunación, etc. MEDICAMENTOS: Se debe conocer si las aves fueron medicadas, que droga se utilizó, por que vía se suministró, y cuanto tiempo recibieron la medicación. Estos datos son muy importantes en casos de enfermedades bacterianas, ya que se pueden observar lesiones particulares de una determinada enfermedad, pero no se puede hacer el aislamiento del agente, la causa es que los animales estaban recibiendo un antibiótico, dato que se desconocía. También es importante en los casos de haberse suministrado una medicación, poder determinar si fue efectiva o no, y cambiarla si fuera necesario.
- 4. SINTOMAS: En este rubro consignaremos los síntomas observados por el propietario, estos datos debemos evaluarlos con precaución. Algunas veces los datos pueden ser equivocados o estar tergiversados ya sea por el encargado, el propietario o el mismo veterinario que nos trae la muestra, con el fin de disimular posibles errores de manejo. Otras veces el error se produce por desconocimiento o mala interpretación de los mismos, por esta razón los síntomas deben ser corroborados por el necropsista durante el examen externo de los animales. Los síntomas deben dividirse en: Respiratorios: por ejemplo, boqueo, exudado nasal u ocular, hipertrofia de los senos infraorbitarios, etc. Digestivos: por ejemplo, diarrea, aquí se debe consignar color, aspecto etc. Nerviosos: por ejemplo, parálisis, paresias, torsión de cuello opistótonos, etc. Producción de huevos: se deberá consignar si está afectada la misma, ya sea en calidad o cantidad. 3.-INSPECCION EXTERNA DEL AVE Una vez cumplimentados todos los datos anamnésicos, comienza a trabajar el necropsista, realizando la inspección externa de los animales. Corrobora primeramente si la sintomatología observada por el avicultor se corresponde con la que manifiestan las aves en ese momento. Se deberá observar el plumaje, si se encuentra brilloso, erizado, sucio, si las plumas se encuentran limpias o aglutinadas con materia fecal alrededor de la cloaca. Es importante mirar la pigmentación de patas, pico y piel, coloración de la cresta, carúnculas y barbillones, estado de los párpados, forma y tamaño de las pupilas, coloración del iris. Fosas nasales (presencia o ausencia de exudados), senos infraorbitarios (hipertrofia o no de los mismos). En la boca, observar la presencia de exudados, seudomembranas, placas, etc. Se deberá prestar atención a la presencia de parásitos externos debajo del ala y alrededor de la cloaca. Las articulaciones se deberán observar con detenimiento sobre todo la tarsiana, así como las almohadillas plantares. (Pueden observarse desviaciones, exudados inflamatorios, hipertrofia etc.). En la quilla podemos encontrar exudados inflamatorios, desviaciones de la misma. Por último debemos observar la presencia o ausencia de fracturas, traumas, heridas o malformaciones, como así también todo dato de interés que considere importante. 4.-SACRIFICIO DEL AVE Antes de sacrificar las aves se extrae sangre, de este modo se obtiene suero para eventuales estudios serológicos. La extracción se puede realizar por punción
- 5. cardiaca o a través de la vena axilar, en este momento se puede inyectar unos pocos centímetros de aire, los que serán suficientes para producir la muerte del animal. Otros métodos de sacrificio pueden ser: Punción occipito-atlantoidea. (esto se realiza con punzón, produciendo la destrucción de la masa encefálica.). Torsión de cuello, con este método se produce la fractura de las vértebras cervicales. Sangrado a blanco, esto se logra con la sección de las venas yugulares o palatinas, o también por punción cardiaca extrayendo la sangre con una jeringa grande. Se debe tener en cuenta que el método de sacrificio será elegido de acuerdo a la sintomatología observada. Si por ejemplo, los animales presentan signos nerviosos, nunca se debe pensar en sacrificar las aves por punción occipito-atlantoidea, del mismo modo, si los animales presentan signos respiratorios, no se deben seccionar las venas yugulares, ni utilizar la torsión del cuello. El método de la embolia gaseosa tiene como ventaja que conserva la estructura de todos los órganos, pero como las aves no sangran, éstos se hallan pletóricos de sangre, y la sección de los vasos en la necropsia dificulta la observación por la gran acumulación de sangre. Por lo tanto el necropsista es el que decidirá a su juicio, y de acuerdo a la inspección externa, el método de sacrificio. 5.-NECROPSIA Se denomina necropsia a la acción de examinar un cadáver (de nekros: muerto y opsie: ver). Los sinónimos más frecuentes son examen pos mortem o autopsia. La necropsia tiene como objetivo confirmar, rectificar o establecer un diagnóstico sobre un animal muerto. Hace un llamado a la observación, al conocimiento de la salud y la patología, utiliza la técnica de la disección. Es únicamente en el curso de una necropsia donde se tiene la posibilidad de examinar en detalle todos los órganos de un animal, y rápidamente, darse una precisa idea de su estado. Por lo tanto el examen de la necropsia ofrece las mejores facilidades para el establecimiento de un diagnóstico. Ante la falta de lesiones macroscópicas el operador tiene la posibilidad de extraer muestras para realizar exámenes complementarios que ayuden al diagnóstico. Cuando se trate de establecer un diagnóstico en un grupo de animales, el estudio de las lesiones en conjunto permitirá arribar a un diagnóstico preciso. La necropsia se efectúa sobre un animal muerto en forma espontánea o sobre un animal enfermo o supuestamente enfermo que se ha sacrificado para tal fin, por lo tanto existe el riesgo de favorecer la liberación de elementos patógenos al medio ambiente. Es por esto que la necropsia nunca deberá realizarse hasta no estar seguro de la ausencia de riesgos de contaminación del medio ambiente y del operador. Una necropsia detallada requiere de la sección total del animal, por lo tanto se podrá realizar solo una vez. Una buena necropsia debe ser sistemática, precisa y completa. 6.-TECNICA: Primeramente se debe introducir el ave en un recipiente que contenga agua con el agregado de una solución antiséptica, (amonio cuaternario, espadol, etc.)
- 6. con el objeto de mojar las plumas y evitar que éstas se diseminen por la sala de necropsias. Se coloca el ave en decúbito dorsal, se realizan dos incisiones en la piel, entre la quilla y las patas, luego se tracciona de las patas abriendo las articulaciones coxofemorales, de esta forma el ave queda en condiciones para comenzar la necropsia. Se realiza un ojal en la piel por debajo de la quilla y con tijera se hace una incisión hasta la comisura del pico, y hacia abajo, hasta la cloaca. Se tracciona la piel hacia los laterales dejando al descubierto los músculos pectorales, del cuello y de las patas. En este momento se debe observar el tejido subcutáneo y los músculos. Se realiza un ojal en los músculos abdominales por debajo de la quilla, se cortan los músculos pectorales a la altura de las articulaciones condro costales, con tijera o costótomo se cortan las costillas hasta la clavícula. (Figura N° 1) Una vez cortada la clavícula y el hueso coracoides, con la mano se vuelca la quilla hacia un lado, quedando expuesta la cavidad torácica y abdominal. (Figura N° 2) Se observa el corazón, el hígado, el estómago muscular y una porción del intestino. Antes de tocar cualquier órgano se deben observar los sacos aéreos que de otra forma serían destruidos. Se deben mirar con detenimiento los sacos aéreos interesternales, claviculares, axilares, torácicos anteriores y posteriores, y abdominales. (Gráfico N° 1) En este momento se deben tomar las muestras necesarias para los exámenes bacteriológicos. Hacia el lado derecho del necropsista se debe buscar la unión del estomago glandular y el esófago, donde, con tijera se realiza un corte (Figura N° 3), a continuación se retira todo el aparato digestivo y el bazo. (Estómagos, intestino e hígado), terminando la extracción con un corte en el recto cerca de la cloaca. Separar todos los órganos y dejarlos sobre la mesa, (Gráfico N° 2) el intestino se separa de los estómagos con un corte a la altura del píloro, se debe observar el páncreas (se encuentra incluido en el asa duodenal). Abrir el estomago glandular y muscular por la línea media, observando el contenido, las mucosas, etc. Disponer el intestino en forma de U invertida, abriéndolo en su totalidad, verificando el contenido, estado de las mucosas, presencia o no de parásitos, etc. En animales jóvenes observar con detenimiento la bolsa de Fabricio (ubicada por debajo de la cloaca con el animal en decúbito dorsal), tamaño, presencia de exudado, estado de los pliegues, etc. Retirar el corazón realizando un corte en los grandes vasos, observar el pericardio y miocardio. En la cavidad abdominal queda el aparato urogenital, (Figura Nº 4) en los machos se deben observar los testículos, forma tamaño, coloración, en las hembras el ovario izquierdo (el derecho esta atrofiado), su grado de desarrollo, lo que indica si el ave esta en postura, si los hubiera observar los óvulos, su tamaño, forma, color, etc. Retirar el oviducto en su totalidad, observar la presencia de lesiones. Se observan los riñones formados por tres lóbulos, (anterior, medio y posterior) y ubicados centrolateralmente a la columna vertebral, observar los uréteres hasta su desembocadura en la cloaca. Luego se comienza la observación de digestivo superior y respiratorio, (Figura N° 5). Se abre por la comisura del pico, se observa la lengua, pliegue palatino, paladar blando y fosa palatina. Luego se abre el esófago comenzando en la faringe hasta el buche, observando el contenido y estado de las mucosas.
- 7. La inspección del aparato respiratorio se inicia en la laringe, donde comienza la apertura de la traquea, la que se abre en toda su extensión hasta la bifurcación de los bronquios, los que se cortan introduciéndonos en los pulmones, se observa la presencia de exudados en traquea o bronquios y estado de las mucosas. Los pulmones se separan de la pared costal, a la que están fuertemente adheridos, se observa el color, la consistencia, etc., por último se retira la traquea y los pulmones del cadáver. Para concluir con la inspección del sistema respiratorio debemos observar las fosas nasales y los senos infraorbitales, para la inspección de éstos últimos, se introduce la tijera por el orificio nasal y se corta paralelamente al pico por debajo del ojo, posteriormente se corta el pico en forma perpendicular al eje y a la altura de los orificios nasales. A continuación debemos observar el Sistema Nervioso Central, para tal fin se corta la piel por encima de los huesos craneanos, con una tijera se realiza un corte en los huesos frontales por detrás de la órbitas oculares, y dos cortes laterales por los huesos parietales que partiendo del anterior se unen en el orificio occipital. Se retira la tapa ósea quedando a la vista cerebro, cerebelo y lóbulos ópticos. (note que el cerebro no tiene circunvoluciones). Con tijera curva se retira el sistema nervioso central. El examen del Sistema Nervioso Periférico comienza con la observación de los neumogástricos, los que se localizan a lo largo del cuello, incluidos en el paquete vascular, del que deben ser disecados y observados. El plexo braquial se localiza a la entrada del pecho, los nervios intercostales se observan después de retirar los pulmones. El plexo lumbar y sacro se localizan por debajo del lóbulo medio del riñón, y por último, los nervios ciáticos entre los músculos aductores de la pata. (Gráfico N° 3) Se debe verificar la disposición y forma de los folículos de las plumas dejando expuesta la piel, esto se realiza retirando las plumas en las zonas de los muslos, pecho región, dorsal y especialmente a la altura del cuello. Por último se deben observar los huesos largos, comprobar su dureza o fragilidad quebrando uno con ambas manos. Realizar un corte longitudinal a fin de comprobar el estado de la medula ósea y de las zonas de osificación, también se deben abrir las articulaciones, principalmente la del tarso.
- 16. 7.-EXTRACCION Y ENVIO DE MATERIAL AL LABORATORIO. a) Estudios Histopatológicos: Estos estudios tienen mucha importancia en aquellas enfermedades que no presentan lesiones macroscópicas, o si las presentan son muy similares a otras. Todos los especimenes deben ser fijados antes de ser remitidos al laboratorio. Se entiende por fijación, la prevención de cambios post-mortem, la preservación de los componentes celulares y la conversión de la consistencia celular semifluida a una semisólida permanente con endurecimiento del tejido. Los trozos de órganos deben ser fijados en formol neutro al 10%. Se debe procurar extraer tejido lesionado abarcando parte de tejido normal, los cortes no deben exceder los 6 a 7 milímetros de espesor para favorecer la penetración del fijador hasta las zonas centrales. Se deben colocar en frascos de boca ancha y cierre hermético, en una proporción de 1 parte de tejido y 9 de formol neutro. Se debe asegurar la penetración del formol en las vísceras huecas, como por ejemplo, intestino. Si las muestras flotan, tejido adiposo, pulmón, conviene cubrirlas con un poco de algodón o papel absorbente. Conviene cortar el cerebro y el cerebelo en mitades por su plano sagital. Resulta aconsejable fijar los nervios periféricos plegados o enrollados en un solo plano. b) Estudios Virológicos: Cuando se sospeche de enfermedades de origen viral y se tenga la certeza de que el material no tardará más de 48hs en arribar al laboratorio, el mismo se puede enviar refrigerado o congelado. En caso contrario se debe enviar en glicerina estéril al 60%, la que conserva los virus por varios días sin necesidad de refrigeración, ejerciendo a su vez una acción bactericida. c) Estudios Bacteriológicos: El envío de órganos para aislamiento bacteriológico debe hacerse en forma refrigerada, tratando que el material sospechoso llegue al laboratorio lo antes posible. La refrigeración evita la proliferación de bacterias contaminantes y la putrefacción del material. Ante la imposibilidad de enviar al material refrigerado, se lo debe enviar en glicerina estéril al 33%, en esta concentración ejerce una acción bacteriostática. d) Estudios Parasitológicos: Los parásitos deben enviarse en formol al 5% o alcohol 70°, si se envía intestino o raspado de mucosa se hará en dicromato de potasio al 2%.
- 17. e) Estudios Serológicos: Para realizar pruebas serológicas se debe extraer sangre de un número representativo de aves, (No menos de 25 sueros). Se extrae 1 o 2 ml de sangre a cada animal colocándolos en tubos en forma individual, los mismos se deben colocar en forma inclinada, lo que facilita la coagulación y extracción del suero. Si la muestra va a tardar más de 24hs. en llegar al laboratorio se debe separar el suero del coágulo, enviando el suero solo, refrigerado o congelado. 8.-GUIA PARA EL ENVIO DE MATERIAL AL LABORATORIO DE ALGUNAS ENFERMEDADES DE LAS AVES. Enfermedad de Newcastle Estudios Virológicos: Tráquea, pulmón y tonsilas cecales. Hisopados cloacales o traqueales. Sueros. Influenza aviar Estudios Virológicos: Tráquea, pulmón y tonsilas cecales. Hisopados cloacales o traqueales. Sueros. Bronquitis Infecciosa Estudios Virológicos: Tráquea, pulmón e hisopados cloacales. Sueros. Laringotraqueítis Infecciosa Estudios Virológicos: Tráquea Estudios Histopatológicos: Tráquea (al comienzo de la enfermedad) Suero. Enfermedad Infecciosa Bursal (Enfermedad de Gumboro) Estudios Histopatológicos: Bolsa de Fabricio. Sueros. Encefalomielitis Aviar Estudios Histopatológicos: Cerebro, cerebelo, estómago glandular y páncreas. Estudios Virológicos: Cerebro. Diftero Viruela Aviar Estudios Virológicos: Lesiones diftéricas o papulo costrosas de piel. Estudios Histopatológicos: Lesiones papulo costrosas de piel. Sueros.
- 18. Artritis Vírica Estudios Virológicos: Tendones y sinoviales, hisopados cloacales. Estudios Histopatológicos: Tendones, corazón. Sueros. Adenovirus Estudios Virológicos: Intestino delgado, tráquea, pulmón, y materia fecal. Estudios Histopatológicos: Hígado Sueros. Enfermedad de Marek / Leucosis Linfoidea. Estudios Histopatológicos: Hígado, bazo, riñón, gónadas, bolsa de Fabricio, Nervios (neumogástricos, ciático etc.). Cualquier otro órgano que presente lesiones tumorales. Síndrome de Caída de Postura. Estudios Virológicos: Hisopados cloacales. Sueros. Síndrome de Mala Absorción. Estudios Virológicos: Hisopados cloacales, intestino. Estudios Histopatológicos: Intestino, estómago glandular, huesos largos. Sueros Salmonelosis. Estudios bacteriológicos: Hígado, bazo, ovario, intestino, pulmón (En los casos de pullorosis) Sueros. Cólera Aviar - (Pasteurelosis). Estudios bacteriológicos: Médula ósea, hígado, barbillones, sangre. Coriza Infecciosa. Estudios bacteriológicos: Cabeza entera. (Es el único caso en que se puede enviar la cabeza congelada.) Micoplasmosis. Estudios bacteriológicos: Tráquea, sacos aéreos, líquido sinovial. Sueros. Tuberculosis. Estudios bacteriológicos: Órganos lesionados. Estudios Histopatológicos: Hígado, bazo, intestino, y otras lesiones granulomatosas. Coligranuloma de Hjärre. Estudios bacteriológicos: Intestino, mesenterio, lesiones granulomatosas. Estudios Histopatológicos: Intestino, mesenterio. Enteritis Ulcerativa. Estudios Histopatológicos, y bacteriológicos: Intestino.
- 19. Dermatitis Necrótica. Estudios Histopatológicos: Piel. Aspergilosis. Aislamiento del hongo: Pulmones, sacos aéreos, cualquier órgano que presente lesiones. Estudios Histopatológicos: Pulmones, cualquier órgano que presente lesiones. Impronta de lesiones para observación directa. Candidiasis. Aislamiento del hongo: Raspado de la mucosa del buche, o el buche refrigerado. Estudios Histopatológicos: Buche. Histomoniasis. Estudios Histopatológicos: Hígado, ciego. Osteoporosis. Estudios Histopatológicos: Hueso largo. Coccidiosis. Estudios Histopatológicos: intestino. Estudios Parasicológicos: raspado de mucosa intestinal.