Tinciones En El Lab De Analisis Clinicos

Aumenta la resolución Acentúa las características morfológicas Conserva la muestra Tinción de la muestra

Colorantes Hacen más visibles las estructuras internas y externas aumentando el contraste con el fondo 2 características fundamentales : Grupos cromóforos Con dobles enlaces conjugados Dan al colorante su color Afinidad por los componentes celulares Por enlaces iónicos (más comunes) , covalentes o hidrófobos

Colorantes Ácidos: afinidad por las estructuras alcalina  hemoglobina Eosina. Básicos: afinidad por las estructuras ácidas  ácidos nucleicos. Azul de metileno.

Colorantes Neutros: Sales de un ácido y de una base coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro. Eosinato de azul de metileno. Indiferentes: Insolubles en el agua y tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante. Sudán III  para teñir las grasas.

Fijación Por calor Preserva la morfología general pero no las estructuras internas Química Protege la subestructura fina y la morfología de los microorganismos delicados de mayor tamaño

Fijación química Aldehídicos Ácido ósmico Tetróxido de osmio Compuestos mercúricos y crómicos, Alcoholes, la acetona, el dietil-pirocarbonato.

Tipos de tinción Tinción simple Un solo colorante. Colorantes básicos Mas usados Tienen cargas positivas Ej.: Cristal violeta, fucsina básica, safranina, verde malaquita Colorantes ácidos Menos usados Tienen cargas negativas Ej.: Eosina, Fucsina ácida Safranina

Tipos de tinción Tinción diferencial 2 ó más colorantes Divide a las bacterias en grupos diferentes según sus propiedades de tinción: Tinción de Gram Tinción ácido alcohol resistente

Tinción Ácido-alcohol resistente Elevado contenido en lípidos de las paredes de estas células Se tiñen calentando una mezcla de fucsina básica y fenol Mycobacterium leprae Colorante de contraste: azul de metileno

Método de Ziehl-Neelsen Frotis  fijación x calor  teñir con fucsina fenicada  Calentar suavemente con el mechero hasta la emisión de vapores. El colorante no debe secarse ni hervir, añadir más si es necesario. Mantener la emisión de vapores durante 5 minutos. Lavar con agua  decolorar con alcohol ácido  Lavar con agua  teñir con azul de metileno un minuto. Lavar con agua  escurrir  dejar secar al aire  microscopio *Rojo  Positivo *Azul  Negativo

TINCIÓN DE KINYOUN Ziehl-Neelsen modificado  Método frío Extensión  Desecación  Fijación  Dejar enfriar  Coloración Fucsina de Kinyoun 5-7 minutos-min., sin calentar. Lavar con agua/escurrir el colorante  Decolorar con alcohol-HCl  Lavar con agua  Coloración de contraste Azul de metileno 2-3 min. Lavar  secar  microscopio.

Tinción de estructuras específicas Tinción negativa Para capsulas Se mezclan las bacterias con tinta china o colorante de nigrosina y se extienden sobre un porta Las capsulas se observan sin color sobre un fondo oscuro Cryptococcus neoformans – tinción negativa con tinta china

Doble tinción Las esporas se tiñen primero calentando las bacterias con verde malaquita Se contratiñe con safranina quedando las células vegetativas y las endosporas con colores diferentes Tinción de esporas (Método de Schaeffer-Fulton) Bacillus cereus

Tinción de flagelos Los flagelos deben ser recubiertos con suficiente colorante como para ser observados Se aplica mordiente (como ácido tánico y alumbre de potasio) para aumentar el grosor de los flagelos y se tiñen con pararosanilina (Método de Leifson) o fucsina básica (Método de Gray) Vibrio cholerae O1

Tinciones policrómicas Tipo Romanowsky un colorante ácido (eosina) Colorantes básicos (tiacinas). Azul de metileno y sus derivados (colorantes tipo azur). Diagnóstico hematológico Wright Giemsa sola o en combinación con la de May-Grünwald

TINCIÓN GIEMSA Frotis sanguíneo Fijación con metanol x 3 minutos  Escurrir  secar al aire Diluir en un tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosina-azul de metileno según Giemsa con 2 ml de solución tampón pH 7,2. Cubrir el frotis con la dilución de colorante dejándolo actuar durante 25 minutos. Escurrir  lavar con agua del grifo. Lavar con tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante. Escurrir y secar en posición vertical

TINCIÓN GIEMSA Eritrocitos  color rosa asalmonado Plaquetas  color violeta. Neutrófilos  núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo

TINCIÓN DE WRIGHT Frotis sanguíneo muy fino  secar al aire. Verter 1 ml de eosina-azul de metileno por un minuto Lavar con solución tampón pH 7,2  escurrir y secar en posición horizontal Diluir 0,5 ml. de eosina-azul de metileno con 0,5 ml de solución tampón pH 7,2.  Mezclar bien y cubrir la extensión. durante 3-5 minutos Lavar con agua del grifo  con solución tampón pH 7,2  escurrir y secar en posición vertical.

Tinción de estructuras específicas Sistemas de marcaje inmunocitoquímico Métodos directos primer anticuerpo o anticuerpo primario se encuentra unido a algún tipo de marcador fluorocromo

Tinción de estructuras específicas Métodos indirectos El anticuerpo primario aplicado sobre las células es reconocido por un segundo anticuerpo, secundario, unido a un marcador El anticuerpo secundario se aplica a una concentración en exceso. Mas sensible

Tinción de estructuras específicas Métodos del anticuerpo no marcado o de puente anticuerpo primario  anti-anticuerpo, secundario  anticuerpo anti-peroxidasa  peroxidasa.

Otras tinciones Para protozoos Para Trichomonas vaginalis Para amibas de vida libre Para helmintos

Conclusión Materiales Técnica Observacion

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