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TD de Génie Génétique M . MAHAMEDI A-E
Série 5
Question 1 : Quelle sont les propositions exactes parmi les suivantes ?
o L‘hybridation moléculaire est une association entre simples brins olus ou moins homologues
o L‘hybridation moléculaire est utilisée dans différentes techniques d’étude de l’ADN telles que le Southern
Blot, la PCR ou le séquençage
o La sonde qui est un fragment généralement court (10-30 nt) à pour but de repérer une séquence d’ADN,
alors que l’amorce qui est un fragment généralement long (>100 nt) sert de site de démarrage à l’ADN poly.
o La longueur et la composition en base d’une amorce sont les facteurs prépondérants qui vont influencer son
hybridation sur ADN
o La sonde est généralement marquée radioactivement par des désoxynucléotides dans lesquelles le phosphore
en α est un P32
Question 2 : Concernant l’électrophorèse sur gel, quelle sont les réponses justes ?
o L’électrophorèse sur gel de l’ADN consiste en la migration de l’ADN dans un champ électrique
o Plus les fragments d’ADN sont longs, plus ils migrent loin grâce à leur grande charge négative
o Grâce à l’utilisation du Bromure d’éthidium et de fragments témoins, on peut déterminer
approximativement la taille d’une bande
o On observe des bandes visibles après digestion d’une purification d’ADN génomique car il ne sera coupé
qu’en certains points
o En pratique, on utilise le même gel pour toutes les préparations
Question 3 : Concernant la technique de Southern Blot
o Fait obligatoirement intervenir une ADN polymérase
o Permet l’analyse des ARN messagers exprimés dans un tissu ou une cellule
o On peut utiliser comme sonde un oligonucléotide de synthèse
o On peut utiliser comme sonde un fragment d’ADNc
Question 4 : Classer dans l’ordre les étapes de la méthode de Southern Blot
1. Electrophorèse
2. Hybridation
3. Transfert sur membrane
4. Digestion de l’ADN par une enzyme de restriction
5. Autoradiographie
Question 5 : A propos de la PCR, choisir les réponses justes
o Cette technique permet d’obtenir un grand nombre de copie d’un gène à partir d’une faible quantité de
celui-ci
o Cette technique nécessite l’utilisation des sondes pour créer un double brin permettant à l’ADN poly de
fonctionner
o Du fait de variation de la température au cours des cycles de la PCR, on utilise une polymérase
thermosensible
o Comme substrats pour la synthèse des nouveaux brins, on utilise des ddNTPs.
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Question 6 : Parmi les propositions suivantes concernant la PCR
o Permet l’amplification de fragments d’ADN de séquence complètement inconnue
o Nécessite des amorces à ARN
o Deux amorces différentes sont nécessaires
o Fait intervenir une ADN-Ligase
o L’élongation par la Taq polymérase se fait à 72°C
Question 7 :
Vous voulez étudier un fragment d’ADN de 536 pb correspond à un gène d’une protéine recherchée. Cette
séquence est la suivante :
Parmi les huit (8) amorces suivantes quelles sont les deux amorces qui permettront l’amplification de ce
fragment par PCR ?
Question 8 :
On désire amplifier par PCR une séquence d’ADN de 25 duplex qui serviront de matrice. Déterminer quelles
sera le nombre de duplex généré au bout de 10 cycles ?
o 2048
o 500
o 22
o 20
o Autre choix
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