République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

Université Abderahmane Mira de Bejaia
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Département des Sciences Alimentaires
Laboratoire de Biomathématiques, Biochimie, Biophysique et de Scientométries

Mémoire
En vue de l’obtention du diplôme de Magister
En Sciences Alimentaires
Option : Sciences Alimentaires
Présenté par :
Melle MEKHOUKHE AIDA

Thème

Etude de certaines activités biologiques des

composés phénoliques extraits de cinq
plantes médicinales de la région de Bejaia

Devant le jury :

Président MAKHLOUFI L. (Pr., Université de Bejaia)

Promoteur CHIBANE M. (Pr., Université de Bejaia)
Co-promoteur MADANI K. (M.C. Université de Bejaia)
Examinateurs KACI. Y (M.C. Université de USMB)
IGUER-OUADA M. (M.C. Université de Bejaia)

Année 2008
 Sommaire

Liste des abréviations

Liste des illustrations

Introduction ............................................................................................................................1

Aperçu bibliographique

I. Généralités sur les plantes étudiées

I.1. Ceratonia siliqua .L...........................................................................................................3

I.1. 1. Données botaniques .......................................................................................................3
I.1. 2. Utilisation.......................................................................................................................5
I.1. 3.Drogue.............................................................................................................................5
I.1. 4. Données phytochimiques ...............................................................................................5
I.1.5. Données pharmacologiques ............................................................................................6
I.1.6. Données Toxicologiques.................................................................................................6
I.2. Crataegus monogyna. L ....................................................................................................7
I.2. 1. Données botaniques .......................................................................................................7
I.2. 2. Utilisation.......................................................................................................................9
I.2. 3. Drogue............................................................................................................................9
I.2 4. Données phytochimiques ................................................................................................9
I.2.5. Données pharmacologiques ..........................................................................................10
I.2.6. Données Toxicologiques...............................................................................................10
I.3. Fraxinus excelsior.L .......................................................................................................11
I.3. 1. Données botaniques .....................................................................................................11
I.3. 2. Utilisation.....................................................................................................................13
I.3. 3. Drogue..........................................................................................................................13
I.3.4. Données phytochimiques..............................................................................................13
I.3.5. Données pharmacologiques ..........................................................................................14
I.3.6. Données Toxicologiques...............................................................................................14
1.4. Quercus coccifera L........................................................................................................15
I.4. 1. Données botaniques .....................................................................................................15
I.4. 2. Utilisation.....................................................................................................................17
I.4.3. Drogue...........................................................................................................................17
I.4.4. Données phytochimiques ..............................................................................................17
I.4.5. Données pharmacologiques ..........................................................................................17
I.4.6. Données Toxicologiques...............................................................................................18
I.5. Urtica dioica. L ................................................................................................................19
I.5. 1. Données botaniques .....................................................................................................19
I.5. 2. Utilisation.....................................................................................................................21
I.5. 3. Drogue..........................................................................................................................21
I.5.4. Données phytochimiques ..............................................................................................21
I.5.5. Données pharmacologiques ..........................................................................................22
I.5.6. Données Toxicologiques...............................................................................................22

II. Etude de certaines de leurs activités biologiques

II.1. Classification et structure des polyphénols ....................................................................23

II.2. Interactions polyphénols– protéines...........................................................................28
II.2.1 Interaction des polyphénols avec la Sérum Albumine Bovine (BSA) .........................28
II.2.2 Interaction des polyphénols avec les protéines de la salive .........................................29
II.2. 3. Principe de la complexation .......................................................................................29
II.2.4 Différentes liaisons mises en jeu ..................................................................................31
II.2.5 Paramètres influençant l’interaction polyphénols- protéines .......................................32
II. 3 Activité antioxydante ...................................................................................................34
II.3.1 Activité antioxydante des composés phénoliques ........................................................34
II.3. 2 Modes d’action des polyphénols .................................................................................34
II.3. 4 Méthodes utilisées pour l’évaluation de l’activité antioxydante .................................36
II. 4 Activité antibactérienne ...............................................................................................39
II.4. 1 Activité antibactérienne des composés phénoliques ...................................................40
II.4. 2 Modes d’action des polyphénols .................................................................................40

Matériel et méthodes

I. Matériel Végétal ...............................................................................................................43

П. Récolte des plantes et identification ...............................................................................43
III. Traitement des échantillons ..........................................................................................43
IV. Etude phytochimique.....................................................................................................45
IV.1. Dosage des polyphénols totaux.....................................................................................45
IV.2. Dosage des polyphénols polaires ..................................................................................45
IV.3. Détermination des polyphénols polaires .......................................................................46
IV.4. Dosage des flavonoides.................................................................................................46
IV.5. Dosage des tanins..........................................................................................................47
V. Étude de certaines activités biologiques des extraits de plantes testées .....................47
V.1. Interaction polyphénols protéines (SAB) .......................................................................47
V.1.1. Etude de la densité optique en fonction de la concentration des extraits de plantes...47
V.1.2. Mesure de la densité optique en fonction de la concentration en NaCl ......................48
V.1.3. Etude de la densité optique en fonction du pH ............................................................48
V.2. Etude de l’activité antioxydante .....................................................................................48
V.2.1. Activité scavenger au radical DPPH• ..........................................................................49
V.2.2. Pouvoir réducteur ........................................................................................................49
V.3. Etude de l’activité antibactérienne .................................................................................50
VI. Etude statistique.............................................................................................................51

Résultats et discussions

I. Traitement des échantillons .............................................................................................52

I.1.Teneur en humidité séchage des feuilles ..........................................................................52
I. 2. Rendement en extrait sec ................................................................................................53
II. Etude phytochimique ......................................................................................................54
II.1 Dosage des polyphénols totaux ......................................................................................54
II.2. Dosage des polyphénols polaires et apolaires ................................................................56
II.3. Détermination des flavonoides ......................................................................................57
II.4. Détermination des tanins ................................................................................................58
III. Étude de certaines activités biologiques des extraits polyphénoliques des
différentes plantes.................................................................................................................60
III.1. Étude de l’interaction polyphénols protéines (BSA) ....................................................60
III.1.1. Etude de la densité optique en fonction de la concentration des extraits de plantes .60
III.1.2. Mesure de la densité optique en fonction de la concentration en Na Cl ...................62
III1.3. Etude de la densité optique en fonction du pH ...........................................................62
III.2. Etude de l’activité antioxydante ...................................................................................64
III.2.1. Activité scavenger au radical DPPH• .........................................................................64
III.2.2. Effet de la concentration sur le radical DPPH ...........................................................65
III.2. 3. Pouvoir réducteur......................................................................................................67
III.3. Etude de l’activité antibactérienne................................................................................70
Conclusion .............................................................................................................................73

Références bibliographiques ...............................................................................................75

Glossaire
Annexes
 Liste des abréviations

ABTS : acide 2,2’-Azobis-ethylBenzoThiazoline-6-Sulphonique

ADN : Acide Désoxyribo Nucléique

BHA : Butyl Hydroxy Anisol

SAB : Sérum Albumine Bovine

DMPD: Di Methyl-p-Phenylene Diamine

DO : Densité Optique

DPPH : 2,2-Diphényl-1-PicrylHydrazyle

EAG : Equivalent Acide Gallique

EAT : Equivalent Acide Tannique

EQ : Equivalent Quercétine

GC-MS : Gas Chromatography Mass Spectrometry

HPLC : High Performance Liquid Chromatography

MH : Mueller Hinton

MS : Matière Sèche

RMN : Résonance Magnétique Nucléaire

SDS : Sodium Dodecyl Sulfate

TEA : TriEthAnolamine

UFC : Unité Formant Colonie

 Liste des illustrations

Figures

Figure 1 : Photographie des feuilles de l’espèce C. siliqua de la région de Bejaia

Figure 2 : Photographie des feuilles de l’espèce C. monogyna de la région de Bejaia
Figure 3: Photographie des feuilles de l’espèce F. excélsior de la région de Bejaia
Figure 4 : Photographie des feuilles de l’espèce Q. coccifera de la région de Bejaia
Figure 5: Photographie des feuilles de l’espèce U. dioica de la région de Bejaia
Figure 6 : Classification des polyphénols
Figure 7 : Mécanisme réactionnel polyphénols- protéines
Figure 8 : Liaisons mises en jeu dans l’interaction polyphénols protéines
Figure 9 : Chélation des ions métalliques
Figure 10 : Teneur en polyphénols totaux des extraits de plantes
Figure 11 : Teneur en polyphénols polaire et apolaire des plantes
Figure 12 : Teneur en flavonoïdes des différents extraits phénoliques
Figure 13 : Teneur en tanins des extraits méthanoliques
Figure 14 : Variation de la densité optique en fonction de la concentration des extraits
de plantes étudiées
Figure 15 : Variation de la densité optique en fonction de la force ionique
Figure 16 : Variation de la densité optique en fonction du pH
Figure 17 : Pouvoir antiradicalaire en fonction des concentrations des extraits de
plantes
Figure 18: Corrélation entre les teneurs en composés phénoliques totaux et l’activité
antiradicalaire des extraits de plantes
Figure 19 : Pouvoir réducteur des extraits méthanoliques des plantes
Figure 20 : Corrélation entre la teneur en composés phénoliques totale et le pouvoir
réducteur des extraits de plantes
Figure 21 : Corrélation entre le pouvoir réducteur et antiradicalaire des extraits de
plantes
 Tableaux

Tableau I : Tableau des structures des composés phénoliques

Tableau II : Tableau représentant la teneur en eau des différentes plantes étudiées
Tableau III: Rendement en extrait sec des différentes plantes étudiées
Tableau IV : Tableau résumant les résultats du test d’inhibition du radical DPPH
Tableau V : Tableau illustrant les résultats de l’activité antibactérienne déterminée par
la méthode des disques
 Introduction

Les plantes médicinales constituent depuis toujours une alternative idéale à travers
leurs emplois dans plusieurs secteurs y compris le domaine médical et
pharmaceutique. À cet égard, plusieurs résolutions ont été adoptées afin de répondre
au regain d'intérêt suscité par leurs usages et comprendre ainsi certaines propriétés
préconisées par nos ancêtres (Nostro et al., 2002 ; Djeridane et al., 2005). Avec le
progrès de la biochimie et l'analyse organique et pharmacologique ainsi que la
physiologie végétale, un tri rationnel dans la masse des actions attribuées aux plantes a
été entamé pour comprendre certaines activités tributaires aux molécules bioactives
présentes dans les végétaux (Nascimento et al., 2000).

La plupart des matrices naturelles sont des molécules biologiquement actives qui

constituent la clé de voûte du système interactionnel plantes et environnement, et ils

sont assez souvent impliquées dans la défense des végétaux. Ces composés d'origine
naturel présentent l'avantage d'une très grande diversité structurale possédant un large
éventail d'activités biologiques (Wills et al., 2000). Les polyphénols font partie de ces
substances actives qui trouvent d'ores et déjà une large utilisation en phytothérapie
(Siddhuraju, 2007). Pour autant, leur connaissance est encore mal élucidée et leur
étude devient de plus en plus un outil dans différentes disciplines scientifiques ;
physiologie, biologie, botanique et également en technologie alimentaire.

L’Algérie est un pays possédant un capital nature très diversifié, sa position

biogéographique privilégiée entre la Méditerranée et l’Afrique sub-saharienne

l’enrichit d’un potentiel faunistique et floristique composée d’éléments
méditerranéens, endémiques et autres et les connaissances traditionnelles relatives aux
plantes et leurs propriétés permettent d’élargir le champ de valorisation par
l’exploitation des nombreuses et diverses activités biologiques, évoquées par la
médecine traditionnelle.

1
Afin de mieux situer le contexte dans lequel s'inscrit cette étude, une revue de

littérature est présentée sur les plantes étudiées décrivant leurs principales
caractéristiques, leurs différentes utilisations ainsi qu’une synthèse des principaux
résultats phytochimiques antérieurs relatifs aux espèces sélectionnées.

Le deuxième volet est voué aux résultats phytochimiques obtenus à partir des plantes
sélectionnées. Cette partie décrit les étapes substantielles suivis au cours de cette étude
(prétraitements, extraction et quantification des composés phénoliques).

Enfin le dernier volet de ce travail sera consacré à l’évaluation in vitro de quelques

activités biologiques des extraits polyphénoliques des plantes étudiées, et proposé à la
lumière des résultats obtenus différentes investigations et perspectives de recherche.

2
 Aperçu bibliographique

I.1. Ceratonia siliqua .L

I.1. 1. Données botaniques
I.1. 1. 1. Description de la plante
Le caroubier est un arbre de la famille des Fabacées (Légumineuses ou
cesalpiniacées), originaire des régions méditerranéennes (Boullard, 1997 ; Balaban,
2003). C’est une essence thermophile d’une hauteur pouvant atteindre 15 m, d’un
tronc épais et tordu, l'écorce brun et rugueux. Les Feuilles sont composées de 5
folioles ovales, coriaces, d’un vert sombre, luisantes sur la face dorçalle légèrement
échancrées et plus pales sur la face ventrale (Boullard, 1997 ; Benzager-Beauquesne et
al., 1990 ; Rejeb et al., 1991). Les fleurs sont d’une couleur vert rougeâtre dépourvues
de corolle, la floraison débute à la fin de l'été à l'automne (juillet à octobre novembre
selon le climat) (Morton, 1987 ; Batlle et Tous, 1997). Les Fruits appelées caroube
sont des gousses pendantes d’un brun chocolat à maturité dure et luisante, renfermant
des graines (Batlle et Tous, 1997 ; Fintelman et Ureiss, 2004) ovoïdes, sinueuses sur le
bord, séparées les unes des autres par des cloisons pulpeuses, la pulpe jaune pale
contenue dans les gousses est farineuse et sucrée à maturité (Lizardo et al., 2002 ;
Makris et Kefalas, 2004).

I.1. 1.2. Classification

La classification de C. siliqua Gaussen et al. (1982) est comme suit :
Règne : Végétal
Embranchement : Spermatophytes (plantes à graine)
Sous embranchement : Angiospermes
Classe : Dicotylédones
Ordre : Fabales
Famille : Fabaceae (Leguminosae)
Genre: Ceratonia
Espèce: Ceratonia siliqua. L

3
 Aperçu bibliographique

I.1.1. 3. Nom vernaculaire

Français : Caroube, pain de saint Jean, fève de phytagore
Anglais : Carob, St John's Bread
(Morton, 1987)
Berbère : Taslifou, (Djerroumi et
Nacef, 2004)
Arabe : El Kharroube, riba
(Djerroumi et Nacef, 2004)

Figure 1 : Photographie des feuilles de l’espèce C. Siliqua

de la région de Bejaia
I.1.1. 4. Etymologie et origine
Le nom de caroube dérive du mot arabe kharoube, son nom latin Ceratonia vient du
grec Keratia signifiant petit corne en se referant à ses fruits ; caroubes ou gousses en
forme de corne à maturité, le nom de l’espèce siliqua désigne en latin une silique ou
gousse (Batlle et Tous, 1997). Le caroubier est originaire d’orient (Arabie Saoudite),
(Morton, 1987 ; Lambraki, et al., 1994)

I.1.1.5. Habitat et distribution géographique

Le caroubier est originaire d’orient mais qui s’étend sur le pourtour méditerranéen
(Lambraki et al., 1994 ; Batlle et Tous, 1997) il a été largement diffusé par les arabes
et les berbères dans la péninsule ibérique (Rejeb, 1995). On le rencontre actuellement
en allant de l’Espagne et Portugal, jusqu’en Turquie en passant par le Maroc et
l’Algérie (Rejeb, 1995 ; Batlle et Tous, 1997). La caroube algérienne est connue pour
ses vertus et sa couleur très caractéristique (un marron qui tire vers le foncé) lui
confère une renommée internationale. C’est une essence rustique très intéressante,
thermophile qu’on retrouve sur les pentes arides résistantes aux fortes sécheresses

4
 Aperçu bibliographique

estivales et à des pluies irrégulières mais ne tolère pas le froid (Morton, 1987) il
s’adapte à plusieurs types de sols à l’exception des sols hydro morphes et salés (Rejeb,
1995 ; Bures et al., 2004).

I.1. 2. Utilisation
C’est une plante mellifère et pastorale très intéressante en égard de ces particularités
biologiques, écologiques éventuellement socioéconomique indéniable (Lizardo et al.,
2002). Tous ces composants étant utilisés il ne génère pratiquement pas de déchets, ses
feuilles et la pulpe des ses fruits sont riches en unités fourragères, son bois est très
apprécié en ébénisterie ainsi que la fabrication du charbon, quant à l’écorce et ses
racines, ils sont employés dans le tannage (Rejeb, 1995).
L’arbre peut contribuer à l’amélioration des ressources pastorales du pays, il peut être
cultivé en arbre ornemental (Morton, 1987) compte tenu de sa couronne sphérique et
son feuillage persistant (Rejeb et al., 1991 ; Rejeb, 1995) et on tire à partir de cette
plante deux produits très différents utilisés par les industries agroalimentaires la farine
(poudre) et la gomme (Batlle et Tous, 1997)

I.1. 3. Drogue
C’est le fruit et la graine qui sont utilisés, les fruits sont récoltés en fin d’été jusqu'à la
moitié de l’automne et ils sont généralement employés dans le traitement des diarrhées
(Paris et Hurabielle, 1988).

I.1. 4. Données phytochimiques

Elle a été exploitée depuis des siècles dans l’alimentation humaine et animale,
aujourd’hui elle est principalement utilisée dans la fabrication de la gomme de caroube
(Batlle et Tous, 1997 ; Lizardo et al., 2002)

L’espèce C. siliqua est connu par sa constitution en tanin (Mangan, 1988 ; Lambraki et
al., 1994). On a pu identifier plusieurs principes actifs à partir du caroube ; on retrouve
par exemple de l’arginine qui lui procure une propriété aphrodisiaque, on décèle
également de l’acide gallique, glutamate de l’acide linoléique (Duke et al., 2003) et au
niveau de la pulpe des proportion assez élevées en oses principalement glucose,

5
 Aperçu bibliographique

saccharose, de la cellulose, de protéine (Lambraki et al., 1994 ; Silanikove et al.,

1994 ; Kivak et al., 2002) quant aux graines elles contiennent prés de 90% d’un
galatomannane (Benzager-Beauquesne et al., 1990).

I.1.4. Données thérapeutiques et pharmacologiques

La pulpe du fuit est un antidiarrheique grâce à la présence des tanins qui sont très
utilisé pour soigner les gastro-entérites des nourrissons en substitution partielle de
l’amidon et de la caséine. Provoque un abaissement du cholestérol sanguin et
hépatique chez les rats. Quant à la gomme elle est très utilisée contre les vomissement
du nurisson, elle est non digestible, ôte la sensation de la faim, on la propose pour le
traitement de l’insuffisance rénale chronique, capable de capter dans le liquide
intestinale des malades l’urée, la créatinine, l’acide urique, ammoniaque et phosphates
provoquant un abaissement assez important de l’urémie (Benzager-Beauquesne et al.,
1990). Des études réalisée sur les feuilles de Ceratonia siliqua L ont démontrées une
activité inhibitrice vis-à-vis de certaines bactéries et peut même présenter une activité
cytotoxique (Kivçak et al., 2002). Ses tanins présentent d’importantes propriétés
antidiarrheique et ils sont des astringents naturels qui s’utilisent régulièrement dans la
prévention et le traitement des diarrhées (Lizardo et al., 2002).

I.1.5. Données Toxicologiques

Très peu d’effets indésirables liés à la prise de la caroube ont été rapportés les rares cas
observés sont des réactions allergiques (Morton, 1987).

6
 Aperçu bibliographique

I.2. Crataegus monogyna.Jacq

I.2. 1.Données botaniques
I.2.1.1. Description de la plante
L'aubépine est un nom commun à toute les espèce du genre Crataegus, elle comprend
environ 280 espèces pour la plupart épineuses (Chang et al., 2002) certains d'entre elles
sont officiellement énumérées dans les pharmacopées de plusieurs pays (Bruneton, 1999).
Crateagus monogyna encore appelée épine blanche; est un arbrisseau de 2-4 mètres très
robuste formant des enchevêtrement impénétrables de rameaux à l’écorce (Messegue,
1975 ; Wichtl et Anton, 2003). Ses feuilles sont d’un vert sombre et luisantes en dessus,
plus pales en dessous, caduques, obovées, échancrées, pétiolées de 3 à 5 lobes pointus et
plus ou moins dentés (Messegue, 1975 ; Bezanger-Beauquesne et al., 1990 ). Les fleurs
sont blanchâtres fortement odorantes presque nauséabondes quand elles sont rassemblées
en amas, fleuris à la fin du printemps (Messegue, 1975). Le Fruit appelé « cenelle » est
une baie non toxique d’un rouge vineux à jaune- brun rouges en automne contenant une
seule graine (Messegue, 1975 ; Chang et al., 2002).

I.2.1.2. Classification
La classification selon Guignard (1989) de C. monogyna, est comme suit :
Règne : Végétal
Embranchement : Spermatophytes
Sous embranchement : Angiospermes
Classe : Dicotylédones
Ordre : Rosales
Famille : Rosaceae
Genre: Crataegus
Espèce: Crataegus monogyna. L

7
 Aperçu bibliographique

I.2.1.4. Nom vernaculaire

Les noms vernaculaires de Crataegus monogyna sont énumérés comme suit :
Français : Aubépine monogyne, épine
Blanche, albépine, noble Épine,
cennelier (Zhang, 2002)
Anglais: Hawthorn, Quickthorn
(Zhang , 2002)
Arabe: Zaarour Berri, baba aajina
(Djerroumi et Nacef, 2004)
Berbère: Idhmim, atelmen (Djerroumi
et Nacef, 2004)

Figure 2: Photographie des feuilles de l’espèce C. monogyna de la

région de Bejaia
I.2.1.5. Étymologie et origine
L’aubépine est un mot féminin qui vient du nom du latin "alba spina" épine blanche en
raison de sa fleur blanche (du type de la rose) et des épines à la base. Crataegus vient du
grec de kratos qui signifie force faisant allusion à la dureté de son bois et monogyna fait
référence à possession d’un seul style de fleur. Elle est commune dans les haies des zones
tempérées de l’hémisphère nord (Zhang, 2002).

I.2.1.6. Habitat et distribution géographique

Native d'Europe et d'Asie occidentale avec une faible aire de distribution en Afrique du
nord-ouest cultivée comme haie en Angleterre, retrouvée dans toutes les zones tempérées
nordiques. C’est une espèce héliophile ou de demi ombre mais fleurissent mieux en plein
soleil, croissant sur des sols riches en bases (calcium) préférence argileux et avec un sous-
sol calcaire dont le pH est neutre à légèrement acide, supportant le froid (Williams et
Bruxton, 1986).

8
 Aperçu bibliographique

I.2.2. Utilisation
Son utilisation est variée, c’est un arbuste d'ornement mellifère très apprécié utilisé isolé,
en groupe, en alignement massif, haies naturelles ou taillées (Messegue, 1975).

En Europe centrale et orientale la cenelle ou le fruit de l'aubépine souvent dénommés

"poires d'oiseau" ou "poires à Bon Dieu", est largement réduit en farine qui est utilisée
pour la fabrication du pain de disette, mais également une boisson fermentée très
enivrante et agréable différant peu du poiré. En médecine elle est l'une des meilleures
substances phytopharmaceutiques ; Utilisée en infusion ou décoction contre les fièvres,
les spasmes nerveux et diarrhée (Messegue, 1975 ; Djerroumi et Nacef, 2004).

I.2.3. Drogue
La feuille et la fleur séchée (rameaux florifères séchés entiers ou coupés) sont deux
drogues fournies par l’aubepine (Bruneton, 2002). Les fruits sont également cueillies en
début de floraison séchés à l’ombre et utilisés en infusion contre les diarrhées, la goutte
et autre ; il en est de même pour l’écorce qui est récolté avec la monté de la sève et peu
être utilisé frais ou séché (Messegue, 1975 ; Bruneton, 2002 ; Djerroumi et Nacef, 2004).
Les feuilles et les fleurs peuvent être administrées par voie orale, en infusion (tisane) ou
décoction (infusion froide) mais également par voie externe on effectuant des bains de
main et des pieds. Actuellement, des préparations à base d’aubépine occupent une place
prépondérante dans le domaine de la pharmacothérapie, ces préparations renferment des
extraits secs, fluides, des teintures (préparer avec 40 à 50% d’alcool) (Messegue, 1975 ;
Bruneton, 1999 ; Wichtl et Anton, 2003)

I.2.4. Données phytochimiques

Cr. monogyna est principalement constituée figure en annexe (6) de flavonoïdes ; rutine,
hypéroside (galactoside en 3quercétol), rutoside, des flavones glycosylées (vitexine,
vitexine-2 rhamnoside, et son derivé, le 4-acétyl (Bruneton, 1999 ; Zhang, 2002;
Urbonaviciute et al., 2006). Elle contient également de la catéchine et epicatéchine des
oligomères procyanidiniques ou des tanins condensés former de flavan3-ols dimères

9
 Aperçu bibliographique

(Wichtl et Anton, 2003 ; Cui et al., 2006), des acides phénoliques (acide chlorogenique,
caféique), des polysaccharides neutres (Cui et al., 2006), des tri terpènes pentacycliques
(oleanolique, ursolique), de faibles quantités d’amines biogènes (Khosh et Khosh, 2001),
des stérols, des traces d’huiles essentiels (Chang et al., 2002 ; Zhang, 2002).

I.2.5. Données thérapeutiques et pharmacologiques

L’activité des extraits d’aubépine est justifiée par de nombreuses études cliniques et
pharmacologiques tributaire à l’action conjointe de ses constituants notamment en
flavonoïdes notamment l'hyperoside et la vitexine et procyanidines (Haslam, 1998 ;
Samura et al., 2005). Elle régularise le rythme cardiaque (Zapatero,1999 ; Svedstrom et
al., 2006) cet effet a était démontré par études cliniques sur l’homme, en effet
l’administration prolongée de préparation à base de cet extrait s’avère très efficient sur
l’artère coronaire (Vierling et al., 2003) contribuant à l’augmentation de l’apport sanguin
au muscle cardiaque et par voie de conséquence son oxygénation, sa nutrition et son
activité (Chang et al., 2002 ; Urbonaviciut et al., 2006 ). On plus de ces usages, elle
contribue à l’apaisement des règles douloureuses (Zhang , 2002) utilisée également pour
traiter les troubles urinaires; rétention d’eau, hypertension, hydropisie (anasarque), calculs
urinaires, sans pour autant oublié son activité antioxydante (Wichtl et Anton, 2003).

I.2.6. Données toxicologiques

On lui connaît pas ou très peu d’effets indésirables liés à la prise d’extrait d’aubépine
(Messegue, 1975 ; Bruneton, 1999). Au cour d’une étude impliquant 3664 patients
recevant quotidiennement une dose élevée d’extrait (900mg), 26 patients uniquement ont
signalé un effet indésirable pouvant entre autre être en relation avec le traitement prescris
et aucune interaction médicamenteuse ne semble être signalé (Bruneton, 2002).

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 Aperçu bibliographique

I.3. Fraxinus excelsior.L

I. 3.1 Données botaniques
I. 3.1.1. Description de la plante
C’est un arbre majestueux à cime arrondie appartenant à la famille des Oléacées pouvant
atteindre 30m, à écorce lisse et grisâtre, à rameaux luisants portant des bourgeons latéraux
sphériques (Scimeca et Tetaux, 2005). Les Feuilles sont imparipennées formées de 7 à 15
folioles lancéolées, denticulées et effilées s'insèrent directement sur la nervure principale,
elles sont glabres d’un vert moyen au dessus, légèrement pubescentes en dessous
(Bézanger-Beauquesne et al., 1990 ; Scimeca et Tetaux, 2005). Les fleurs sont des
apétales, groupées en panicules, opposées, apparaissent avant les feuilles, composées de
petites boules rouge-violacées, puis à complète éclosion : jaune verdâtres, apparaissent en
avril mai suivant les conditions climatiques (Messegue, 1975 ; Bézanger-Beauquesne et
al., 1990). Quant aux fruits appelées « samares » elles sont aplaties, indéhiscentes
prolongées par une aile membraneuse, coriace et disposées en grappes pendantes
(Messegue, 1975 ; Bézanger-Beauquesne et al., 1990 ; Boullard, 2001).

I. 3.1. 2. Classification
Selon Guignard et Dupont (2004), la classification de F. excélsior est comme suit :
Règne : Végétal
Embranchement : Spermatophytes
Sous embranchement : Angiospermes
Classe : Dicotylédones
Ordre : Oleales
Famille : Oleaceae
Genre: Fraxinus
Espèce: Fraxinus excélsior. L

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 Aperçu bibliographique

I. 3.1. 3. Nom vernaculaire

Français : Grand frêne, quinquina d'Europe,
l’ssane l’ousfour (Eddouks et al., 2005)
Anglais : Ash tree (Gerosa et al., 2003)
Arabe: Dardar (Djerroumi et Nacef, 2004)
Kabyle: Asslen, adardar (Djerroumi et
Nacef, 2004)

Figure 3: Photographie des feuilles de l’espèce F. excélsior

de la région de Bejaia
I. 3.1. 4. Etymologie et origine
Le mot "fraxinus dérivé du grec phraxis qui veut dire clôture, haies, dans les forêts. Le
genre Fraxinus, est représenté par 65 espèces à travers le monde indigène en Europe,
Scandinavie, Russie, l’Asie et l’Amérique du nord (Percivala et al., 2006 ; Meusinger,
2006).

I. 3.1.5. Habitat et distribution géographique

F. excelsior couvre toute l'Europe occidentale, l'Asie occidentale, l'Afrique du nord,
l’Amérique. C’est une essence ligneuse, autochtone, fondamentale des forêts
européennes. C’est une espèce post-pionnière qui a des exigences édaphiques marquées
en particulier en ce qui concerne l’alimentation en eau, sa croissance est donc optimale
sur les sols profonds humides à frais notamment dans les vallées alluviales, elle est
sensible à la sécheresse et tolère la pollution atmosphérique (Percivala et al., 2006). Elle
est considérée comme une espèce nitrophile qui se développe bien sur les sols calcaires à
légèrement acides ( Hofmeister et al., 2004).

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 Aperçu bibliographique

I. 3.2. Utilisation
Les nombreuses qualités technologiques du frêne font de son bois un produit très adulé. Il
est très résistant, se rétracte peu et se prête bien au façonnage manuel ou mécanique. En
aménagement intérieur ses abondantes régénérations naturelles, son fort potentiel de
croissance et sa qualité font de cette plante une essence sylvicole importante en forêt. Le
frêne contribue à la stabilisation de pentes menacées par des mouvements de terrain. Son
réseau racinaire étendu et dense fixe les talus de rives et permet ainsi d'éviter qu'elles ne
soient érodées et emportées par l'eau (Percivala et al., 2006). On les utilise en infusion
comme préparation laxative et diurétique (Messegue, 1975 ; Djerroumi et Nacef, 2004)

I. 3.3. Drogue
La partie aérienne utilisée est la feuille grâce sa teneur élevée en composés actifs,
flavonoides, coumarines, tanins et autre, procure au F. excélsior, des vertus très attrayant
(Bruneton, 1999 ; Bézanger-Beauquesne et al., 1990).

I. 3.4. Données phytochimiques

Un intérêt accru pour la phytochimie de F. exlésior a était motivé par la découverte des
glucosides de secoiridoid 1-3, qui constituent les métabolites principaux du genre et de la
famille des Oleaceae (Egan et al., 2004). La figure en annexe (7) illustre les principaux
constituant phytochimiques de cette plante. En étudiant sa composition chimique on y
décèle la présence de benzoquinones, phenylethanoides glycosides, mannitol, sels de
potassium, de mucilages (Egan et al., 2004 ; Kostova et Iossifova, 2007). On peut
évoquer également sa grande teneur en polyphénols, on retrouve des acides phénoliques
et ses dérivés tels l’acide p-hydroxybenzoique, l’acide protocatehuique, l’acide vanillique,
de l’acide gallique, et ses dérivés hydroxy p-coumariques, caféique (Kostova et Iossifova,
2007). On retrouve également des flavonoides (rutoside, Catéchine et epicatechine)
(Bézanger- Beauquesene et al., 1990 ; Kostova et Iossifova, 2007), on a constaté la
présence de coumarine glycoside dénommée fraxine (7,8-dihydroxy-6-methoxycoumarin-
8-β
-D-glucopyranoside ou 8-(β
-D-glucopyranosyloxy)-7-hydroxy-6-methoxycoumarin)
(Meusinger, 2006) et de excelsioside (Bruneton, 1999)
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 Aperçu bibliographique

I. 3.5. Données thérapeutiques et pharmacologiques

L’histoire thérapeutique du frêne remonte à plusieurs ères, ses feuilles sont inscrites dans
la pharmacopée française très tôt grâce à des molécules bioactives qu’il peut contenir
(Leclerc, 1976 ; Maghrani et al., 2004). Les propriétés de ses feuilles sont connus depuis
Hippocrates, pour leurs effets diurétiques et laxatives (Leclerc, 1976 ; Eddouks et
Maghrani, 2004) grâce à leur teneur en mannitol, ce qui facilite l’élimination de l’eau
(Boullard, 2001). C’est un antiarthritique et analgésique, il est aussi très utilisé contre les
constipations (Maghrani et al., 2004 ; Kostova et Iossifova, 2007). On a récemment
prouvé qu’ils peuvent avoir une activité hypoglycémique (Maghrani et al., 2004) et
certain auteurs on même pu illustré leur activité antihypertensive (Eddouks et al., 2005).
Des études récentes réalisées sur les feuilles de F. exlésior, ont démontré leur activité
antioxydante, grâce à leur composition en polyphénols. Leurs propriétés anti-
inflammatoires sont liées à leurs teneurs en flavonoïde, rutoside et sont de ce fait
particulièrement adaptées pour soigner naturellement la goutte, l'arthrose, les rhumatismes
et les problèmes de rétention d'eau et d'oedème (Messegue, 1975 ; Bézanger-
Beauquesene et al., 1990 ; Maghrani et al., 2004). Des travaux sur des extraits de feuilles
de F. excelsior L affirme leur aptitude à inhiber la croissance de plusieurs champignons
(Kostova et Iossifova, 2007) et ses qualités d’anti fièvre les font recommander dans tous
les cas d’infections par des verus ou des bactéries (Messegue, 1975).

I.3.6. Données toxicologiques

La commission Allemande n'autorise pas encore l’emploie de cette drogue, puisque la
proportion adéquate n'a pas été justifiée, néanmoins, elle n’est formellement prohibée
(Bruneton, 1999)

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 Aperçu bibliographique

I.4. Quercus coccifera.L

I.4. 1.Données botaniques
I.4.1.1. Description de la plante
Le chêne est le nom vernaculaire de nombreuses espèces d'arbres et d'arbustes
appartenant au genre Quercus (Gaussen et al., 1982). Il existe plusieurs centaines dans
le monde la plupart autour de la Méditerranée orientale parmi lesquelles on retrouve le
chêne-liège (Quercus suber), le chêne pédonculé (Quercus pedunculata), le chêne
kermès (Quercus coccifera) (Messegue, 1975). Quercus coccifera L. est une plante
biannuel appartenant à la grande famille des fagacées, c’est un arbuste ou arbrisseau
touffu à port buissonnant d'une hauteur maximum de 3 mètres, à tiges recouvertes d'un
écorce brun noir finement crevassé, portant de nombreux rameaux enchevêtrés
(Dureau et al., 2003). Ses feuilles sont persistantes, coriaces, dentées épineuses, d’un
vert foncé à sa face supérieure plus claire sur sa face intérieure (Laaidi, 1997 ; Dureau
et al., 2003). Quant aux fleurs elles sont jaunâtres apparaissent en avril mai pourvus
d'une cupule écailleuse très piquante (Laaidi, 1997 ; Djerroumi et Nacef, 2004). Le
fruit « akène »est un gland plus ou moins profondément inséré dans une cupule garnie
d'écailles rigides terminés en pointe aiguë isolés portés par un pédoncule très court
(Laaidi, 1997 ; Djerroumi et Nacef, 2004).

I.4.1.2.Classification
La classification selon Gaussen et al. (1982) de Q. coccifera, est comme suit :
Règne : Végétal
Embranchement : Spermatophytes
Sous embranchement : Angiospermes
Classe : Dicotylédones
Ordre : Fagales
Famille : Fagaceae
Genre: Quercus
Espèce: Quercus coccifera. L

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 Aperçu bibliographique

I.4.1.3. Nom vernaculaire

Les noms vernaculaires de Q. coccifera
sont énumérés comme suit :
Français : Chêne kermès, chêne à
cochenille, chêne garrigue (Laaidi,
1997)
Anglais: Oaks, Kermes oaks (Pascual et
al., 2002)
Arabe: El Balout (Djerroumi et Nacef,
2004)
Berbère: Abalout (Djerroumi et Nacef,
2004)
Figure 4: Photographie des feuilles de l’espèce Quercus
coccifera de la région de Bejaia

I.2.1.4. Étymologie et origine

Le chêne kermès est un petit chêne exclusivement méditerranéen, son nom vient du
mot arabe « alqirmiz », qui veut dire chêne porteur de cochenille, parasite qu’il abrite,
appelé Kermès vermillon, son nom latin Quercus vient de coccum, coccifera vient du
mot latin fero et qui veut dire porter faisant allusion au parasite (Laaidi, 1997).

I.4.1.5.Habitat et distribution géographique

C’est une espèce du bassin méditerranéen occidental, on peut la retrouver en Portugal,
Espagne, en France, en Afrique du Nord, en Tunisie (Ben Salem et al., 2005), en
Algérie en la rencontre dans les régions d’Annaba, Blida et en Kabylie (Laaidi, 1997).
Ce sont les conditions climatiques et hydriques qui déterminent avant tout sa
répartition, sa préférence pour les régions à faible pluviosité, et une certaine
sensibilité, aux températures minimales trop faibles (Laaidi, 1997 ; Dureau et al.,
2003), il croit, sur des sols riches en calcaires, parfois siliceux, et pierreux et les
associations de type garrigue (Laaidi, 1997 ; Papatheodorou et Stamou, 2004).

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 Aperçu bibliographique

I.4.2.Utilisation
L’extension actuelle de Q. coccifera résulte d’un long passé de valorisation
économique, auquel a succédé un siècle d’abandon de toute activité d’exploitation. Ce
qui témoigne des multiples intérêts qu’elle a suscités par le passé (Dureau et al., 2003).
La plupart des chênes sont appréciés pour leur bois, qui est dur et dense, cette qualité,
alliée à la forme courbe de ses branches, était mise à profit en construction navale, le
chauffage domestique, mais il existe bien d'autres utilisations, selon la partie de l'arbre
employée. On en fait également des tonneaux du fait de la présence de tanin. Il est
parasité par le kermès, ou cochenille, un insecte dont les oeufs séchés et traités
servaient à confectionner une teinture de couleur écarlate. Son écorce est utilisée pour
tanner le cuir (car elle contient du tanin). Enfin, son gland, riche en amidon, servait à
engraisser les porcs ; torréfié, il constituait un substitut de café (Laaidi, 1997).

I.4.3. drogue
Les feuilles sont cueillies en été, utilisés en infusion pour soigner les saignement, les
diarrhées, l’écorce récolté en automne et utilisé en compresse, contre les gerçures et
les dermatoses. Les glandes sont cueillies quand ils sont bien mures, ils sont
employées contre les maux digestifs (Djerroumi et Nacef, 2004).

I.4.4. Données phytochimiques

En étudiant la composition chimique de Q. coccifera, elle dispose en éléments
minéraux tels calcium, potassium, fer et magnésium, des protéines et des matières
organiques (Papatheodorou et Stamou, 2004 ; Ben salem et al., 2005). On retrouve des
quantités de polyphénols (Ben salem et al., 2003), des tanins hydrolysables appelés
cocciferine D2 et des ellagitanins (Ito et al., 2002 ; Khennouf et al., 2003), et selon la
littérature les feuilles de chênes sont connues, pour leur richesse en tanins (Dawra et
al., 1988), on retrouve aussi de la lignine (Ben salem et al., 2005), des molécules
organiques volatiles biogéniques tels les terpènes (Ormeno et al., 2007).

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 Aperçu bibliographique
I.4.5. Données thérapeutiques et pharmacologiques
Les chênes, par leur richesse en tanins, sont essentiellement antidiarrhéiques
(Boullard, 2001), d’arrêter le sang, resserrer les tissus trop agressés par les
traumatismes ou les infections, dans tous les cas d’hémorragies d’ulcères, de
crachement de sang, on peut également l’utilisé pour soigner les diarrhées, des varices
et d’eczémas (Messegue, 1975). Khennouf et al. (2003), ont montré que des extraits
acetoniques de feuilles de Q. coccifera, presentent des effets gastroprotecteurs sur des
lapins.

I.4.6. Données toxicologiques

Pour l’homme le risque majeur lié aux fagacées est avant tout professionnel, la
responsabilité des poussières dégagées lors du travail, du bois dans l’apparition de
rhinites, d’asthme bronchique et d’autres affections néoplasiques (Bruneton, 1999).
La toxicité due à la consommation des feuilles de chaînes peut être attribué aux tanins
hydrolysables particulièrement les gallotanins (Makkar et Becker, 1998). Il n’est pas
par contre de même pour les glandes qui, consommées en grande quantité représentent
un risque mortel pour la plus part des animaux de et l’intoxication du bétail par les
glandes est assez fréquente dans toutes les zones géographiques ou poussent les
chênes. Ce problème est souvent attribué à l'effet des tanins sans considérer le profil
nutritif (Ben Salem, 2003).

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 Aperçu bibliographique
I.5. Urtica dioica. L
I.5.1. Données botaniques
I.5.1.1. Description de la plante
La famille des Urticacées est présente partout dans le monde mais la grande ortie ou
ortie dioïque (Urtica dioica. L) est la plus commune de toute (Bruneton, 1999).
C’est une plante herbacée, vivace, vigoureuse, d’un vert sombre, pourvue de tiges
robustes, dressées, quadrangulaires, non ramifiée (Messegue, 1975 ; Beloued, 1998).
Des feuilles ovoïdes, opposées, pétiolées et dentés recouvertes de poils hérissés
urticants appelés « cytolithes » (Zhang, 2002) ils se brisent facilement injectant des
substances telles : histamine, l’acétylcholine, acide formique (Messegue, 1975 ;
Gaussen et al., 1992 ; Bruneton, 1999). Les fleurs sont verdâtres portées par des pieds
différents forment de longues grappes dressées, rameuses plus longues que les
pétioles, réunies en inflorescences (Bezanger-Beauquesne et al., 1990 ; Wichtel et
Anton, 2003) quand aux fruits appelés « akène » enfermés dans un calice persistant,
rempli de minuscule graines brunâtre à noirâtre (Gaussen et al., 1992).

I.5. 1.3. Classification

Selon Guignard (1989) la classification de U. dioica est comme suit :
Règne : Végétal
Embranchement : Spermatophytes
Sous embranchement : Angiospermes
Classe : Dicotylédones
Ordre : Urticales
Famille : Urticaceae
Genre: Urtica
Espèce: Urtica dioica. L

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 Aperçu bibliographique
I.5. 1.4. Nom vernaculaire
Français : Ortie, grande ortie, ortie
piquante, dioïque (Valent, 2003)
Anglais : Nettele, common nettele,
greater nettele (Caldecott, 2002)
Arabe: Horeig, bent anar (Beloued,
1998)
Berbère : Azegdouf, rimezrit (Beloued,
1998)

Figure 5. Photographie des feuilles de l’espèce Urtica dioica

de la région de Bejaia
I.5. 1.5. Etymologie et origine
Le genre Urtica est indigène au Canada, il se compose d’une trentaine espèces
distribuées dans les deux hémisphères (Bertrand, 2001).
Il tire son nom du latin « uro » ou « urere » qui veut dire brûler faisant allusion à ses
poiles urticants et dont le contact est très irritant (Valent, 1992 ; Rioux et al., 2005), le
mot dioica vient de dioïque qui signifie que les deux sexes (males et femelles) sont
portés par des pieds différents (Valent, 1992 ; Zhang, 2002)

I.5. 1.6. Habitat et distribution géographique

Elle est indigène d’Afrique et l'Asie occidentale mais s’étend actuellement dans toutes
les régions tempérées du monde en Afrique du nord et l'Amérique du Sud, l'Asie,
l'Australie et l'Europe (Zhang, 2002 ; Rioux et al., 2005). En Algérie elle sillonne les
ravins frais des montagnes de Djurdjura, Atlas de Blida et d’Akfadou (Beloued, 1998).
C’est une plante rudérale, envahissante, cosmopolite des endroits incultes, elle est
présente le plus souvent dans des endroits humides et les haies, décombres et au tour
des habitations, elle pousse assez souvent en grands massifs dans lesquels vivent un
bon nombre d’insectes, elle est dite nitrophile contribuant à débarrasser le sols de son
excès en fer, elle affectionnent particulièrement les sols riche en azote humide mais
drainés, tolère l’ombre (Valent, 1992 ; Zhang, 2002).

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 Aperçu bibliographique

I.5. 2. Utilisation
L’utilisation de l’ortie est multiple dans le domaine alimentaire elle perd son caractère
urticant au séchage ou à la cuisson mais elle est surtout consommée cuite en soupe
(Bnouham, et al., 2003 ; Guil-Guerrero et al., 2003). Elle très usitée en médecine
traditionnelle en infusion ou décoction contre plusieurs maladies telles la jaunisse, les
règles abondantes, l'urticaire, l'anémie et également pour le traitement du cuir chevelu
(Messegue, 1975 ; Rioux et al., 2005), la liste de son utilisation demeure non
exhaustive, sa richesse en sels minéraux et oligo-éléments contribue à son utilisation
en purin (macération, filtration) et très employée comme en activateur de croissance
(Bruneton, 2002).

I.5. 3.Drogue
Ce sont les parties aériennes notamment les feuilles qui sont utilisées dans la majorité
des préparations médicinales. Ces dernières sont récoltées au printemps puis sont
utilisées soit fraîches soit séchées. Les racines sont également utilisées chez l’homme
pour leurs propriétés diurétiques en cas d’hypertrophie de la prostate (Bruneton, 1999 ;
Wichtl et Anton, 2003).

I.5. 4. Données phytochimiques

L’ortie dioïque est riche en éléments minéraux essentiellement en fer, calcium,
potassium, silicate partiellement solubles (Hojnik et al., 2007) contient également des
caroténoïdes (figure en annexe8) (Guil-Guerrero et al., 2003), de la chlorophylle qui
est très utilisé comme colorant dans le domaine alimentaire et médicale (Guil-Guerrero
et al., 2003 ; Hojnik et al., 2007) de la vitamine A et de l’acide ascorbique (Ozen et
Korkmaz, 2003 ; Chrubasik et al., 2007) elle renferme acides aminés libres, des
glucides à l’état libre ou complexées, des glycoprotéines, des acides gras (Guil-
Guerrero et al., 2003). Des substances secondaires telles les acides phénoliques,
l’acide caféique et ses esters, l’acide gallique, et des tanins ; l’acide cafeyl- malique
(Leclerc, 1994 ; Valent, 2003 ; Chrubasik et al., 2007). Elle est riche en flavonoides
(3-glucosides, et 3-rutinisides du quercétol, du kaempférol, et de l’isorhamnétol
(Konrad et al., 2000 ; Wichtl, 2003), on a isolé des lignanes, coumarines, triterpènes,
céramides, stérols et lectines, parmi elles on retrouve l'acide oxalique, l'acide

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 Aperçu bibliographique
linoléique, le scopoletine, le p-hydroxybenzaldehyde, l'alcool de homovanillyl
(annexe8) (Zhang , 2002). On retrouve aussi des traces de nicotine, de faibles quantités
d’acétylcholine, d’histamine, de sérotonine, de l’acide formique et des huiles essentiels
(Özen et Korkmaz, 2003).

I.5. 5. Données thérapeutiques et pharmacologiques

Considérée comme une panacée au moyen age les parties aériennes et la racine
figurent en France sur la liste des plantes médicinales retenues comme telles par la
pharmacopée (Bruneton, 2002). On lui attribue diverses propriétés ; dépuratives,
diurétiques, (Wichtl et Anton, 2003 ; Chrubasik et al., 2007) antioxydantes (Özen et
Korkmaz, 2003 ; Chrubasik et al., 2007), antimicrobiennes (Gulçin et al., 2004 a)
d’antihypérglycemiantes (Bnouham et al., 2003). C’est une excellente hypotenseur,
hémostatique et vasoconstricteur (Cetinus et al., 2005). Elle se révèle bénéfique dans
le cadre d’une insuffisance hépatique et pancréatique en stimulant la production
d’enzymes (Wichtl et Anton, 2003) des règles douloureuses mais aussi de rhumatismes
articulaires, d’arthrose de périarthrite (Leclerc, 1994 ; Riehemann et al., 1999). On la
conseille en usage interne (infusion ou décoction) en cas d’inflammation de la vessie
et des voies urinaires (Wichtl et Anton, 2003) mais peut être administrée en usage
externe pour traiter les entorses, névralgie et soulager les douleurs arthritiques, pour le
traitement du cuir chevelu et des affections de la peau tel l’eczéma (Riehemann et al.,
1999)

I.2.5. Données toxicologiques

Elle possède une toxicité minimale ou négligeable par rapport à l’homme, des études
réalisées sur des animaux ont démontré qu’à une certaine dose l’extrait d’Urtica dioica
peut être toxique, en effet l’administration par voie oral d'un extrait d'éthanol (50%) a
présenté chez des lapins une toxicité aiguë associé à une diarrhée occasionnelle
(Wichtl et Anton, 2003). Une injection sous-cutanée par contre elle était tolérée alors
qu’une dose très élevée a eu comme conséquence la mort de ces animaux. Ils ont
également observé que l’ébullition de cet extrait diminue sa toxicité. Le LD50 intra
péritonéal de l'extrait aqueux chez des souris s'est avéré 3625 mg/kg (Bnouham et al.,
2003 ; Chrubasik et al., 2007).

22
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II. Etude de certaines activités biologiques des composés phénoliques

Introduction

Les polyphénols communément dénommés composés phénoliques sont présents de façon

ubiquitaire dans le règne végétal (Scalbert et Williamson, 2000) depuis les racines
jusqu'aux fruits, cette appellation générique désigne un vaste ensemble de substances aux
structures chimiques variées (Mompon et al., 1998).

A l’heure actuelle, plus de 8000 composés naturels satisfaisant à ces critères ont été isolés
et identifiés leur point commun, présence dans leur structure d’au moins un cycle
aromatique à 6 carbones, lui-même porteur d’un nombre variable de fonctions hydroxyles
(OH) (Hennebelle et al., 2004) issues du métabolisme de l’acide shikimique et ou de celui
d’un polyacétate (Ribereau-Gayon, 1968)

II.1 Classification et structure des polyphénols

Les polyphénols regroupent de grande classe chimique qui se distingue entre elle par la
nature de leur squelette carboné ils sont illustrés dans le tableau ci après
Tableau I : Tableau des structures des composés phénoliques (Balasundram et al., 2006)

Classe Structure
Phénols simples, benzoquinones C6
Acides hydroxybenzoiques C 6-C1
Acethophenones, acides phénylacétique C 6-C2
Acides hydroxycinnamiques, phénylpropanoides (coumarines, isocoumarines, chromones, C 6-C3
chromenes)
Naptoquinones C 6-C4
Xanthones C 6-C1 - C 6
Stilbènes, anthraquinones C 6-C2 - C 6
Flavonoïdes, isoflavonoides C 6-C3 - C 6
Lignanes, néolignanes (C6-C 3) 2
Biflavonoides (C6-C 3- C6) 2
Lignines (C6-C 3) n
Tannins condensés (proanthocyanidines) (C6-C 3- C6) n

23
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

Plusieurs classifications des polyphénols ont été avancées, Ribereau-Gayon, (1968) les a
classé comme suit qui est :
 Acides benzoïques, acides cinnamiques et coumarines
 Flavones, flavanols et dérivés
 Chalcones, déhydrochalcones et aurones
 Anthocyanes
Rodriguez Vaquero et al. (2007) (figure 6) les ont subdivisés en flavonoïdes et en non
flavonoïdes

24
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

Non flavonoïdes
Acide hydroxybenzoique et dérivés

Acide gallique Acide protocatechuique Acide vanillique

Acide hydroxycinnamique et dérivés

Acide caféique

Flavonoïdes
Flavonols

Rutine Quercetine

Flavanols

Catéchine

Figure 6. Classification des polyphénols selon Rodriguez Vaquero et al. (2007)

25
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II.1.1 Flavonoïdes
Les flavonoïdes constituent un groupe de composés naturels quasiment universels chez
les plantes vasculaires (Harborne et Sherratt, 1961 ; Hasten, 1983) ils forment des
pigments responsables de colorations jaune, orange et rouge de différents organes
végétaux (Harborne et Sherratt, 1961 ; Middleton et al., 2000). On les rencontre assez
souvent dans les fruits, les légumes mais également dans plusieurs plantes médicinales
(Cooray et al., 2004).

Ils ont une origine biosynthétique et structurale commune et par conséquent possèdent
tous un squelette de base à quinze atomes de carbones constitué de deux unités
aromatiques, deux cycles en C6 (A et B) reliés par une chaîne en C3 (Pietta, 2000 ;
Manach et al., 2004). Ils se répartissent en plusieurs classes de molécules dont les plus
importantes les flavones (Chrysine, apigénine, lutéoline), les flavonols (Kaempférol,
quercétine, myricétine), les flavanones (naringénine). Ces diverses substances se
rencontrent à la fois sous forme libre ou glycosylée (Bruneton, 1999 ; Puupponen-Pimiä
et al., 2001).

Les flavonoïdes peuvent être divisés en plusieurs classes selon leur degré
d’hydroxylation, methylation et glycosylation (Harborne et Sherratt, 1961).

Des travaux relatifs aux flavonoïdes se sont multipliés depuis la découverte du « French
paradox » correspondant à un taux de mortalité cardiovasculaire faible observé chez des
populations méditerranéennes associant une consommation de vin rouge à une prise
importante de graisses saturées (Nijveldt et al., 2001). Leur propriété antioxydante (Van
Acker et al., 1996 ; Harder et al., 1998) ainsi que d'autres effets physiologiques
potentiellement intéressants expliquent l'intérêt accru que suscitent ces composés et qui a
pris un essor non négligeable ces dernières années (Scalbert et Williamson, 2000).

26
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II.1. 2Tanins
Les tanins sont des polyphenols à haut poids moléculaire présents dans les fruits, l’écorce,
les feuilles et les racines de nombreux arbres et arbustes (MC Arthur et Sanson, 1993).
Leur structure chimique leur confère une habilité très développée à se complexer avec
toutes sortes de polymères naturels essentiellement les protéines (Mangan, 1988). Martin
et al. (1991) les ont subdivisés en deux grands groupes ; les tanins condensés et les tanins
hydrolysables.

Les tanins condensés communément appelés proanthocyanidines possèdent un poids

moléculaire élevé (Ribereau-Gayon, 1968) sont capables de libérer des anthocyanidines
en milieu acide et en conditions d’oxydation (Roux et Evelyn, 1958 ; Hagerman et Butler,
1981). On les rencontre assez souvent chez les plantes vasculaires telles, les
dicotylédones, les gymnospermes et les fougères (Hagerman et al., 1992).
Les tanins hydrolysables quand à eux sont constitués par une molécule glucidique sur
laquelle est estérifié de l’acide gallique ou un de ses dérivés (Ribereau- Gayon, 1968) sont
facilement hydrolysés par voie chimique ou enzymatique (Reed, 1995) retrouvés
uniquement chez les dicotylédones (Okuda, 2005).

Il existe une toute autre classe de tanins ; les phlorotanins, c’est des polymères d’unités
phloroglucinol (1, 3, 5-trihydroxybenzene) liées via des ponts C-C ou C-O (Stern et al.,
1996) rencontrés pour la plus grande proportion dans les algues brunes (Stern et al.,
1996 ; Hagerman et al., 1998).

27
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

Cet aperçu volontairement succinct évoque des composés actifs présentant des propriétés
biologiques bénéfiques à l’homme, démontrés grâce à de nombreuses études
épidémiologiques laborieuses.

II.2 Interactions polyphénols– protéines

Introduction
Les composés phénoliques possèdent des propriétés qui sont en grande partie attribuable à
leur tendance à interagir entre eux et avec d’autres macromolécules, de manière réversible
et irréversible formant des systèmes moléculaires organisés (Baxter et al., 1997). Ces
caractéristiques leurs confèrent de nombreux intérêts biologiques exploités notamment
par les industries pharmaceutiques et agroalimentaires (Haslem, 1998).

L’une des propriétés la plus déterminante des tanins est leur capacité à former des
complexes très stables avec les protéines (Haslem, 1974 ; Ramachandra et al., 1977) ainsi
que les glycoprotéines salivaires responsables de la sensation d’astringence (Baxter et al.,
1997 ; Haslem, 1998). Plusieurs auteurs rapportent que les polyphénols présentent une
affinité beaucoup plus marquée avec les protéines et peptides ayant une proportion élevée
en résidus proline (Hagerman, 1980 ; Hagerman et Butler, 1981). Mais depuis quelque
années, une autre protéine suscite l’intérêt de plusieurs études ; la sérum albumine bovine
(SAB) ou (BSA) (Haslem, 1998 ; Mateus et al., 2004 b).

II.2. 1 Interaction des polyphénols avec la Sérum Albumine Bovine (SAB)

La Sérum Albumine Bovine (SAB) est une protéine soluble, présentant
approximativement 60% des protéines totales du plasma sanguin (Carter et Ho., 1994).
C’est une protéine globulaire possédant un poids moléculaire important caractérisée par
une proportion relativement élevée en acides aminés chargés. Ce qui lui donne la capacité
à transporter certaines substances et molécules bioactives (Cushman et Rizack, 1970). De
part son poids moléculaire et son hydrophobicité élevé elle est capable de se lier à
plusieurs molécules de polyphénols par rapport à α
-lactalbumin et le lysozyme (Prigent,
2005).

28
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II.2.2 Interaction des polyphénols avec les protéines de la salive

La salive est un fluide aqueux constituée en grande partie par un mélange de protéines
riche en proline (PRPs) et des protéines riche en histidine (HRPs) ou histatine (Lu et
Bennick, 1998 ; Cai et Bennick, 2006). Ces dernières sont à l’origine de l’astringence
provoquant une sensation de sécheresse et de rugosité dans la bouche (Charlton et al.,
2002).

Les protéines Riches en Proline (PRPs) sont classées en trois groupes selon leur nature
chimique et leur charge caractéristique qui leur attribuent des propriétés basiques ou
acides plus ou moins phosphorylées, ou encore glycosylées émanant de leur aptitude à
fixer covalemment un groupement carbohydrate (Mehansho et al., 1992 ; Bennick, 2002).
Les protéines basiques ont une très forte capacité à fixer les polyphénols (Charlton et al.,
1996), cette caractéristique constitue une protection contre le potentiel toxique et
carcinogénique des tanins alimentaires (Charlton et al., 2002 ; Simon et al., 2003).

Les protéines Riches en Histidines (HRPs) sont des protéines cationiques riches en
histidine avec une proportion moins élevée en résidus lysine et arginine (Wroablewski et
al., 2001). Elles ont également l’aptitude à se complexer avec les polyphénols (Baxter et
al., 1997 ; Bennick, 2002).

II.2. 3 Principe de la complexation

Plusieurs hypothèses ont été avancées à fin d’expliquer le mécanisme réactionnel
polyphénol protéine. Un modèle de complexation a été proposé par Haslam (1998) selon
cet auteur la complexation polyphénols protéines s’effectue selon un processus de
reconnaissance moléculaire induisant une précipitation.

L’interaction est telle qu’un ou plusieurs tanins fixent la protéine formant une mono
couche réduisant son caractère hydrophile. À faible concentration en protéine, les tanins
se fixe sur un ou plusieurs sites à la surface de la protéine (interaction multi site) ce qui
permet la formation d’une monocouche moins hydrophile induisant l’apparition

29
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

d’agrégats (figure 7), en revanche avec une concentration plus élevée les polyphénols
acquièrent le rôle d’agents de pontage.
D’après Bennick (2002) à partir d’un certain poids moléculaire ces complexes deviennent
trop hydrophobes ce qui peut mené à une précipitation.

Figure 7. Mécanisme réactionnel polyphénols- protéines; (a) à faible concentration de

protéines, (b) à concentration élevée en protéine (Haslem, 1998)

Cette réaction peut être réversible par l’adjonction de protéines ou d’autres molécules
telles les polysaccharides (Haslam, 1998)

II.2. 4 Différentes liaisons mises en jeu

A ce jour, la force majeure de l’interaction n’a pu être élucidé et entre les liaisons
hydrogène et les interactions hydrophobes on se contre balance (Bennick 2002 ; Simon,

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Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

2003). Selon certains auteurs, ces deux forces auraient un rôle dans l’interaction
polyphénols protéines (Jöbstl et al., 2004). Hagerman et Butler (1981) rapportent que les
liaisons hydrogène seraient fournies par les fonctions hydroxyles des polyphénols qui
forment des liaisons avec les groupements carbonyles des protéines. Richard et al. (2001)
énoncent que l’empilement hydrophobe des polyphénols sur la proline serait le mode
d’interaction majeur.

Considérant la diversité structurale des tanins et les différents groupements fonctionnels

présents, trois types de liaisons sont mises en jeu (figure10); interaction hydrophobe,
liaison hydrogène et enfin interaction de type ionique (Ezaki-Furuichi et al., 1987)
L ia ison h ydr og è ne
O

R N NH C H3
N N
H H
O+ O+
H3 N +
+
OH -
HO + O
HO
In tér a ctio n
hyd ro pho be

H O L ia is on ion iqu e
H O
HO
HO

HO
HO
OH
OH

Figure 8. Liaisons mises en jeu dans l’interaction polyphénols protéines

(Simon, 2003)

II.2. 5 Paramètres influençant l’interaction polyphénols- protéines

L’affinité des polyphénols pour les protéines peut être modulée par plusieurs facteurs, il
existe des facteurs liés à la nature de la protéine et les polyphénols et des paramètres liés
aux conditions réactionnelles (pH, force ionique, solvants) éventuellement la température
et même le temps (Hagerman et Butler, 1978 ; de Freitas et Mateus, 2001a).

31
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II.2. 5.1. Paramètres liées aux protéines et polyphenols

A priori, une protéine trop longue a tendance à se replier masquant ainsi les sites de
fixation et par voie de conséquence limiter la reconnaissance de certains sites
d’interaction entre les polyphénols et les protéines. Néanmoins, cette taille lui permet
l’augmentation du nombre de sites potentiels étant donné l’aspécificité de la réaction
(Simon, 2003). Il est indéniable que l’augmentation du poids moléculaire des polyphénols
favorise la complexation avec les protéines (Ribereau-Gayon, 1968; Shahidi et Nacz,
2003). Simon (2003) rapporte que le nombre et les groupements hydroxyles sur les cycles
aromatique pourraient moduler l’interaction polyphenols – protéines, ainsi plus il y a de
OH plus l’affinité est importante et donc le nombre d’unités monomériques fait accroître
la quantité en hydroxyle.

II.2. 5.2. Paramètres liées aux conditions réactionnelles

II.2. 5.2.1. Influence du PH
L’interaction polyphenols-protéines est fortement affectée par le pH (Hagerman et Butler,
1978) lui même sensible à la nature des ions présents dans le milieu (Hagerman et Butler,
1981). Selon la littérature, l’affinité des protéines pour les polyphénols augmente
sensiblement quand le pH est proche du point isoélectrique de la protéine (Hagerman et
Butler, 1978). D’après certains auteurs aux pH isoélectrique la répulsion électrostatique
de la protéine est minimisée et par voie de conséquence une précipitation meilleure
(Hagerman et Butler, 1981).

II.2. 5.2.2. Effet des carbohydrates

Plusieurs études ont démontré l’habilité des polysaccharides tels que la pectine, la gomme
arabique, xanthane, la cyclodextrines à interagir avec les polyphenols (de Freitas et
Mateus, 2001a ; Mateus et al., 2004 a) grâce à des liaisons hydrogènes ou hydrophobes et
interférer ainsi d’une manière compétitive avec les protéines dans leur interaction avec les
polyphenols (Mateus et al., 2004 a). En effet Haslam et al. (1998) ont démontré que

32
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

certains polysaccharides sont capables de développer une structure secondaire en solution

formant des poches hydrophobes habiles à s'encapsuler et de complexer les polyphénols.

La liste des facteurs influençant l’interaction polyphenols protéine reste non exhaustive ;
la quantité et la taille des complexes polyphénols-protéines dépendent des concentrations
de protéines, de polyphénols et du rapport entre les deux molécules (Siebert, 2006). La
force ionique du milieu (Bennik, 2002) l’adjonction d’un solvant peut jouer un rôle dans
la solubilité des polyphénols (Oh et al., 1980) le solvant agit sur l’association de ces
molécules avec les protéines une faible solubilité favorise la fixation des tanins (Simon,
2003). La présence et la nature d’ions (organiques et/ou inorganiques) présente également
un effet sur le complexe tannins-protéines de sorte que la présence d’ions inorganiques
(K +, Na+) favorise la précipitation de ce complexe (Simon, 2003).

33
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II.3 Activité antioxydante

Introduction
Le monde des sciences biologiques et médicales est envahi par un nouveau concept celui
des antioxydants. Le terme " antioxydant " recouvre un ensemble d'activités diverses ou
plusieurs espèces sont habiles à ralentir ou à empêcher l’oxydation des substrats
biologiques. Ces molécules, occupent du point de vue biologique une place
impressionnante parmi plusieurs recherches menées depuis une dizaine d’années (Ames
et al., 1993).

II.3. 1 Activité antioxydante des composés phénoliques

Les polyphénols suscitent depuis une dizaine d’année une attention et un engouement
considérable et plusieurs de leurs propriétés biologiques font l’objet de nombreuses
études non exhaustives (Manach et al., 2004 ; Djeridane et al., 2005). Une des raisons
primordiales est la reconnaissance de leur propriété antioxydante, ainsi qu’à leur
implication dans la prévention de diverses pathologies associées au stress oxydatif
(Akagawa et Suyama, 2001).

Ils ont une valeur commerciale très importante surtout dans le domaine agroalimentaire
et pharmaceutique en tant que puissants antioxydants naturels (Mompon et al., 1998)
particulièrement les flavonoïdes qui sont des piégeurs efficaces de radicaux libres les plus
prooxydants (Meddleton et al., 2000).

II.3. 2 Modes d’action des polyphénols

Leur intervention se fait assez souvent à plusieurs niveaux : piégeages de radicaux libres
(Saint-Cricq de Gaulejac et al., 1999), chélation de métaux prooxydants par les
groupements hydroxyles, et par inhibition de certains enzymes (Pulido et al., 2000).

II. 3. 2.1 Piégeage des radicaux libres

Les perspectives de recherche sur les polyphénols ce sont associées aux Espèces
Oxygénées Réactives (E.O.R), tels peroxyles (ROO·), alcoxyles (RO ·), superoxydes

34
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

(O2 ·-) et hydroxyles (HO· ) ils peuvent attaquer des cibles bioactives telles les protéines
(altérant ainsi les récepteurs cellulaires et les enzymes) glucides, lipides et les acides
nucléiques favorisant la survenue de mutations délétères à l’origine de divers cancers
(Ames et al., 1993 ; Lee et al., 2004). Ces derniers peuvent apparaître lors du
métabolisme oxydatif de l’oxygène, l’anoxie, l’inflammation et l’auto oxydation des
lipides (Aurousseau, 2002).

L’interaction des flavonoïdes avec de nombreux radicaux a été employée dans plusieurs
études afin de déterminer les éléments majeurs de cette activité antioxydante, ils
inactivent et stabilisent les radicaux libres grâce aux groupements hydroxyles fortement
réactifs selon la réaction suivante (Nijveldt et al., 2001).
Fl- OH + R. Fl – O. + RH
Les radicaux flavonoxy (Fl –O .) produits peuvent interagir avec d’autres radicaux pour
former des structures plus stables (Marfak, 2003).

II.3. 2.2 Chélation des ions métalliques

Les polyphénols ont la capacité de chélater les ions métalliques (tels les ions du fer et du
cuivre) largués à partir de leur protéine de fixation ou de transport. Ces ions métalliques
renforcent les effets nocifs du stress oxydant, en stimulant la production des radicaux
hydroxyles (OH–) (Pietta, 2000). Ces composés en chélatant les ions métalliques forment
des complexes de coordination avec ces métaux en occupant tous les emplacements, et
peuvent ainsi convertir les ions métalliques en complexes insolubles empêchant leurs
interactions avec les intermédiaires lipidiques (Lee et al., 2004).

D’après des études réalisées par Van Acker et al. (1996) la contribution principale à la
chélation des ions métalliques figure (12) est due au noyau catéchol sur le cycle B, les
groupes 3-hydroxyle et 4-oxo de hétérocyclique C, et les groupes 4-oxo et 5-hydroxyle
entre l'hétérocyclique C et A et on considère la quercétine la plus active des flavonoïdes
grâce aux 3 sites de complextation qu’elle possède et qui lui permet de chélater les
métaux

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Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

Figure 9. Chélation des ions métalliques (Rice-Evans, 1999)

II.3. 2.3 Inhibition des enzymes

Les composés phénoliques sont capables d’affecter et d’inhiber le système enzymatique
de nombreux enzymes (Middleton et al., 2000)
La xanthine oxydase est considérée comme une source biologique importante du radical
superoxyde lors de l’oxydation de l’hypoxanthine en acide urique elle catalyse la
conversion de l’hypoxanthine en xanthine et la xanthine en acide urique (Nijveldt et al.,
2001).

En effet, les flavonoïdes peuvent agir sur l’activité de cette enzyme et par conséquent
peuvent faire régresser la maladie de la goutte en réduisant à la fois les concentrations en
acide urique et celles du radical superoxyde dans les tissus humains (Hansaki, 1994).
D’autres études ont établies que les polyphénols sont habiles à inactiver entre autre
l’histidine décarboxylase, l’aldose réductase, la NADPH oxydase, la protéine kinase C,
des enzymes de l’inflammation telles la cyclooxygénase, la lipooxygénase, et la
phospholipase A2 (Middleton et al., 2000 ; Derbel et Ghedira, 2005)

II.3.3 Méthodes utilisées pour l’évaluation de l’activité antioxydante

La mesure du potentiel antioxydant et le suivi des processus d’oxydation sont abordés
globalement en déterminant des produits résultant de l’oxydation par des techniques
photométriques ou en évaluant l’aptitude à piéger des radicaux de modèles réactionnels.

36
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II.3.3.1 Tests mesurant l’inhibition de l’oxydation des lipides

L’oxydation est une réaction rapide qui se propage en cascade (Rolland, 2004) sa
maîtrise est donc capitale afin de gérer l’évolution des systèmes biologiques dans leur
complexité, et l’efficacité d’un antioxydant en général peut être estimée par son aptitude
à inhiber l’oxydation d’un substrat approprié (Marc et al., 2004).

Le premier mode nécessite une connaissance préalable des composés issus de l’oxydation
tels les hydroperoxydes et les peroxydes et leur quantification s’effectue par des
techniques photométriques plus ou moins directes. Ou bien par l’incorporation d’un
antioxydant à une huile, lipide ou un modèle de substrat tel que l’acide linoléique ou le
linoléate de méthyle, après incubation l’activité antioxydante s’exprime par le taux
d’inhibition de la formation des hydro peroxydes (Miller, 1971 ; Manian et al., 2008).

II.3.3. 2 Tests évaluant l’effet «scavenger» sur les radicaux libres

Un éventail de techniques ont été développés afin d’estimer l’activité antioxydante en
mesurant l’aptitude des antioxydants à exercer un effet «scavenger» sur les radicaux
libres.

III.4.2.1 Effet «scavenger» sur les radicaux cationiques ABTS •+

Dans cette méthode l’effet «scavenger» des antioxydants est déduit par leurs capacité à
inhiber le radical ABTS•+ , obtenu à partir de l’acide 2,2’-azobis-ethylbenzothiazoline-6-
sulphonique (l’ABTS) (Gil et al., 2000 ; Pellegrini et al., 2003) en présence d’une
enzyme de peroxydation (peroxydase met myoglobine, ou en présence de peroxyde
d’hydrogène (H2 O2) ou d’un oxydant (dioxyde de manganèse ou persulfate de
potassium). La formation du radical ABTS•+ se traduit par une coloration bleue verte dont
l’intensité diminue par la présence d’un piégeur de radicaux ABTS•+ (Prior et al., 2000).

II. 3. 3.2.2 Effet «scavenger» sur les radicaux cationiques DMPD •+

Le test de NN-dimethyl-p-phenylene diamine (DMPD) est analogue à celui de l’ABTS en
présence d’une solution oxydante (FeCl 3) et à pH acide, le DMPD est transformé en un

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Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

radical cationique DMPD•+ coloré (Fogliano et al., 1999). La présence d’un antioxydant
habile à transférer un atome d’hydrogène au radical DMPD •+ entraîne la décoloration de
la solution de façon proportionnelle à la concentration et à la capacité de l’antioxydant. Il
existe un autre test mesurant la capacité d’un antioxydant à piéger les radicaux libres en
utilisant le radical stable DPPH • (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) qui est réduit en son
hydrazine correspondant lorsqu’il réagit avec un donneur d’hydrogène (Marc et al.,
2004).

Autres méthodes peuvent être citées telles la mesure du pouvoir réducteur qui met en
avant la capacité d’une molécule à réduire un oxydant en lui cédant un électron. Le test
de la chélation des ions Fe2+ quand à lui met en avant la capacité d’une molécule à fixer
les ions Fe 2+. Les ions Fe 2+ jouent un rôle important lors de la production des radicaux
libres notamment lors de la réaction de Fenton qui survient à chaque fois qu’une
molécule d’H2O2 est en contact avec les ions Fe2+ et qui est à l’origine de la production
des radicaux hydroxyl (OH) un des radicaux les plus réactifs. Le fer joue aussi un rôle
dans la phase de propagation de la lipoperoxydation ainsi que dans la formation du
radical O 2-(Huang, et al., 2005).

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Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II. 4. Activité antibactérienne

Introduction
L’Homme a de tout ère, cherché et exploité des panacées à base de plante susceptibles
d’opérer des modifications une fois employées (Zouhdi et al., 1997). Leurs mérites sont
attribués entre autre à des nutriments ou phytonutriments dotés de plusieurs propriétés
biologiques et pharmacologiques bénéfiques (Cowan, 1999 ; Ferreira de Lima et al.,
2006).

L'organisation mondiale de la santé « OMS » certifie que les plantes médicinales sont
constituées d’une panoplie de molécules caractérisées par des structures riches,
complexes et variées par conséquent elles devraient être étudiées intensivement afin de
mieux comprendre leurs propriétés et leurs efficacités (Nascimento et al., 2000).

Parallèlement l’intérêt est de plus en plus affirmé pour l’utilisation des plantes dans des
domaines non alimentaires, et le fait que les antibiotiques traditionnels sont devenus
inopérants (Hernandez et al., 2004 ; Zampini et al., 2005) a ouvert une porte à de
nouveaux débouchés et axes de recherches sur des antimicrobiens et d'autres remèdes
dérivants des plantes (Papadopoulou et al., 2004 ; El- Fatimi et al., 2007).

II.4. 1 Activité antibactérienne des composés phénoliques

La capacité d’une espèce végétale à résister à l’attaque des insectes et des micro-
organismes, est souvent corrélée avec leur teneur en métabolites secondaires tels les
polyphénols (Bahorun, 1997). Plusieurs études épidémiologiques et cliniques attestent le
rôle incontestable des composés phénoliques dans l’inhibition d’innombrables bactéries
pathogènes voir même toxiques, fongicides et antibiotiques (Mompon et al., 1998 ;
Drewnowski et Gomez-Carneros, 2000). Ces métabolites secondaires peuvent conduire à
la diminution de l’activité enzymatique ainsi qu’à la croissance microbienne (Karou et al.,
2004).

39
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

Choi et al. (2006) signalent que les composés phénoliques sont même habillent à
neutraliser des toxines bactériennes grâce à plusieurs travaux entrepris ces dernières
années.

D’après Cowan (1999) les acides caféique et cinnamique sont très efficients contres les
virus, les bactéries et les champignons. Les propriétés antibactériennes des flavonoïdes
vis-à-vis de différentes souches bactériennes ont été mises en évidence (Miller et al.,
1995 ; Puupponen-Pimiä et al., 2001) ils atténuent le pouvoir infectieux ou affectent la
réplication intracellulaire de plusieurs virus tels que le virus respiratoire syncytial (VRS),
l’herpès simplex virus (HSV) et les adénovirus (Middleton et al., 2000). Quant aux tanins
plusieurs travaux ont démontré leurs toxicités vis à vis des champignons filamenteux,
levures et bactéries et certains d’entres eux sont même capables d’inhiber la réplication de
quelques virus (Henis et al., 1964 ; Scalbert, 1991).

II.4. 2 Modes d’action des polyphénols

Le mécanisme d’action des composés phénoliques est sans doute très complexe et
plusieurs hypothèses ont été avancées afin d’élucider leur activité contre de nombreux
microorganismes parmi elles ; l’inhibition des enzymes extracellulaires microbiennes
(protéases, et des carbohydrolases), la séquestration de substrat nécessaire à la croissance
microbienne ou chélation de métaux (tels que le fer), et l’inhibition du métabolisme
microbien (Cowan 1999 ; Scalbert, 1991).

II.4.2. 1 Action sur les membranes cellulaires

Les polyphénols s’adhèrent à la surface de la membrane plasmique et pénètrent à
l’intérieur de la cellule bactérienne, inactivent certaines enzymes tels les perméases qui
sont impliquées dans le transport de substrats (aminoacides et des polysaccharides) ce qui
peut par voie de conséquence entraîné une modification de la perméabilité cellulaire,
induisant à la lyse de la cellule bactérienne (Lojkowska et Holubovsca, 1992).

40
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

Plusieurs études rapportent que les flavonoïdes lipophiles sont à l’origine de la rupture de
la membrane bactérienne ce qui confirme l’idée que leur cible est bien la membrane
bactérienne (Cowan, 1999). Tsuchiya et Iinuma (2000) restituent que la sophoraflavanone
G isolée d’une plante médicinale réduit la fluidité de la membrane cellulaire bactérienne.

II.4. 2.2 Action sur les enzymes

Les composés phénoliques sont des inhibiteurs enzymatiques à l’égard de nombreuses
enzymes (Cowan, 1999). Ils sont capables de se complexer avec les protéines et par voie
de conséquence bloquer les sites actifs des enzymes inhibant ainsi leur activité (Haslem,
1998 ; Huang et al., 2004).

Tout comme les tanins condensés les tanins hydrolysables ont la capacité de se complexer
avec les protéines. Ce processus peut inhiber et/ou immobiliser les enzymes microbiennes
extracellulaires (Maie et al., 2003). Ohemeng et al. (1993) ont pu identifier 14 composés
flavonoique de structure variable capable d’inhiber in vitro l'ADN gyrase d'Escherichia
coli. Jones et al. (1994) signalent que les tanins condensés inhibant l’activité enzymatique
des protéases.

II.4.2. 3 chélation des métaux

Les composés phénoliques peuvent limiter la croissance des bactéries grâce à leur
capacité à chélater le fer, ce dernier est un nutriment indispensable à la survie des
microorganismes. Il joue un rôle important dans plusieurs fonctions y compris sa
nécessité pour la respiration et pour la synthèse de l’ADN (Akiyama et al., 2001).

Daud et al. (2005) dénotent que la présence des ions Mg 2+dans le milieu, diminue la
sensibilité de Pseudomonas aeruginosa contre l’extrait de Phrygilanthus acutifolius qui
est d’après eux, est liée à la capacité des cations bivalents à stabiliser la membrane
externe des bactéries à gram négative.

41
Aperçu bibliographique Etude de certaines activités biologiques des polyphénols

II.4.2. 4 Action sur le métabolisme énergétique

Les composés phénoliques sont capables de chélater les ions métalliques largués à partir
de leur protéine de fixation ou de transport. Haraguchi et al. (1998) rapportent que deux
type de flavonoides (licochalcone A et C) sont capables d’inhiber l’activité de
Staphylococcus aureus et Micrococcus luteus, mais inactifs vis-à-vis d’ Escherichia coli
selon ces auteurs, ces groupes de flavonoides s’avèrent de puissant inhibiteur de la
NADH-cytochrome c réductase empêchant ainsi la consommation de l’oxygène par
conséquent le métabolisme énergétique.

42
 Matériel et méthodes

Objectifs de l’étude
Un des objectifs spécifique de cette étude est de tester certaines activités biologiques
des extraits phénoliques (activité antioxydante, antibactérienne et l’interaction
polyphénols- protéines) à cet égard des prétraitements préalables ont été effectués sur
les feuilles des différentes plantes sélectionnées avant de procéder aux analyses. Nous
présentons ci-après les principales étapes établies depuis la récolte jusqu'à l’obtention
d’un extrait aqueux.

I. Matériel Végétal
Dans ce présent travail cinq plantes ont été soigneusement choisies d’après des
enquêtes ethnobotaniques, établies auprès des personnes ayant certaines connaissances
en médecines traditionnelles ainsi qu’a leurs traditions et croyances et on s’est
éventuellement basé sur la littérature comme il est important qu’avant d’entreprendre
une quelconque investigation phytochimique d’une espèce végétale donnée d’effectuer
des recherches approfondies.

П. Récolte des plantes et identification

Les différentes plantes sélectionnées ont été collectées dans leur habitat naturel. La
récolte des feuilles a été effectuée d’une manière aléatoire, les informations relatives
au lieu et la date de prélèvement sont illustrées d’une manière succincte (annexe1).
L’indentification des différentes espèces étudiées à était effectué par Mr BOUADAM
enseignent en physiologie végétale, université de Abderahmane Mira Bejaia

III. Traitement des échantillons

III.1. Prétraitements
III.1.1. Séchage
Aussitôt après sa collecte, le matériel végétal préalablement débarrassé de toute
poussières et toute autres impuretés, lavé abondamment avec de l’eau distillée et séché
dans une étuve à une température 40°C pendant une période variant de 5 à 7 jours
selon la nature de la plante .

43
 Matériel et méthodes
Afin de déterminer la teneur en humidité des différentes plantes étudiées, un test a été
réalisé selon la norme Française (NF V04 - 407), sur des échantillons représentatifs de
1g (10fois) 10g et 100g, portés à l’étuve à une température de 103°C pendant 4heures,
et la teneur en eau a été déterminée comme suit :

Teneur en eau % = Ma Mp * 100

Ma
Ma: Matière végétal avant traitement

Mp : Matière végétal après traitement

III.1.2. Broyage et Tamisage

Les feuilles précédemment séchées sont broyées. Cette étape est fastidieuse sa
réalisation doit être minutieuse et non dénaturante pour permettre l’obtention d’une
poudre végétale fine et homogène. Les poudres obtenues sont tamisées avec des tamis
à différente granulométrie (500, 250, 125, 63, 53 et 45 μm) dans le but de récupérer la
poudre la plus fine. Les poudres ainsi obtenues ont été conservées à l’abri de la
lumière.

III.2. Extraction
Afin d’extraire les principes actifs des plantes testées, une extraction de type solide
liquide (Macération) a été utilisée avec un solvant polaire méthanol pur à (99%) à
température ambiante selon le protocoles décrit par Owen et Johns, (1999) avec
quelques modification :
200 mg de poudre des différentes plantes ont été dissous dans 500 ml méthanol pur à
(99%), le mélange à été soumis à une agitation mécanique durant une semaine à
température ambiante et à l’abris de la lumière.

Apres filtration, le filtrat obtenue est concentré au rota vapor à 40°C, l’extrait obtenu
est quantifié comme suit :

Taux de l’extrait (%)= M 1 M 0 100

M2
M0: Poids du cristallisoir vide (g)
M1: Poids du cristallisoir après évaporation (g)
M2: Masse de la poudre (g)
Les extraits obtenus sont par la suite reconstitués avec le méthanol

44
 Matériel et méthodes
IV. Etude phytochimique
IV.1. Dosage des polyphénols totaux
Le réactif Folin Ciocalteu, consiste en une solution jaune acide contenant un complexe
polymérique d'ions formés à partir d'hétéropolyacides phosphomolybdiques
(H3 PW12 O40 ) et phosphotungstiques (H3PMo 12O 40). Ce dernier oxyde les phénols en
ions phénolates en milieu alcalin et réduit partiellement ces hétéropolyacides d'où la
formation d'un complexe molybdotungstique bleu (Wen Rehaba, 2001).
La coloration bleuâtre obtenue est proportionnelle à la quantité de phénols présents
(Ribéreau-Gayon, 1968).
 Solution d’essai : Un aliquote d’extrait aqueux de plante est dilué dans le
méthanol
 Mode opératoire
La détermination de ces composés est réalisée selon la méthode décrite par Owen et
Johns (1999) avec quelques modifications :
Un volume d’extrait aqueux est porté au bain marrie pendant 5 à 10mn à 50°C, un
volume de cette solution préalablement filtrée est additionné de 11,25ml d’H2 O
distillée et 0,25ml de Folin Ciocalteu à (1N), ajouté Na CO3 ( 200g/l) après agitation de
3mn. Après incubation à l’abris de la lumière pendant 1heure, la lecture est réalisée au
moyen d’un spectrophotomètre (UV-Visible) à une longueur d’onde de 740 nm après
avoir réaliser un balayage de 800 -400 nm.
Les concentration en composées phénoliques sont déterminées en se referant à une
courbe d’étalonnage réalisée avec de l’acide gallique

IV. 2. Dosage des polyphénols polaires

L’estimation en composés phénoliques polaires des extraits méthanoliques est basée
sur le même principe que celui des polyphénols totaux.
 Solution d’essai : Un aliquote d’extrait de plante est dilué dans le méthanol

 Mode opératoire
La méthode utilisée est celle Owen et Johns, (1999) avec quelques modifications :
Un volume d’extrait de plante est centrifugé à 3500 t/m pendant 15 mn, incubé
pendant 24h à température ambiante.

45
 Matériel et méthodes
1,25 ml du surnagent est additionné à 0,25ml Folin Ciocalteu (2N) ajouté 0,75ml de
Na CO3 (200g/l) après 5 mn. Incubé à l’obscurité pendant 2h et à température ambiante
et réalisé une deuxième centrifugation à 6000t/mn pendant 15mn.
La quantité en composées phénoliques polaires est déterminée selon une courbe
d’étalonnage réalisée avec de l’acide gallique à une longueur d’onde de 750nm.

IV. 3. Détermination des polyphénols apolaires

Le taux en polyphénols apolaires est déterminé comme suit :

TPT = T PO + TPA TPA = TPT - TPO

IV. 4. Détermination des flavonoides

La majorité des dérivés flavoniques naturels possèdent des groupements (OH) libre en
position C3 et C5 susceptibles et de l’oxygène en C4 de former des complexes de
couleur jaunâtre en présence de chlorure aluminium (AlCl3 ) (Ribéreau-Gayon, 1968)
 Solution d’essai : un aliquote d’extrait de plante est dilué dans le méthanol
 Mode opératoire
L’estimation des flavonoides contenus dans les extraits de plantes est déterminée selon
le protocole décrit par Bahorun et al. (1996).
Un volume d’extrait de plante est additionné de 1ml d’une solution méthanolique de
chlorure d’aluminium (à 2 %). La lecture est réalisée à une longueur d’onde de
430 nm et la quantité en flavonoides totaux est déterminée en se referant à une courbe
étalon établie avec de la quercétine.

IV. 5. Détermination des tanins

L’une des caractéristiques la plus déterminante des tanins est leur habilite à former des
complexes très stables par précipitation avec des polymères essentiellement les
protéines (Mangan, 1988).

La protéine utilisée dans cette méthode; la sérum albumine bovine (SAB) qui réagit
avec les tanins en milieu acide et en présence de chlorure ferrique (FeCl3 ) (en milieu
alcalin : SDS/TEA) formant des chélates de couleur violette (Hagerman et Butler,
1989 ; Hagerman et al., 1992).

46
 Matériel et méthodes
 Mode opératoire
La quantification des tannins est déterminée selon le protocole décrit par Hagerman et
Butler, (1978) avec quelques modifications :
Un volume d’extrait aqueux de plante est additionné à 1ml de la solution BSA
(1mg/ml), agité et incubé pendant 24h à 4C°.
Après centrifugation à 14000t/mn pendant 15mn le précipite récupéré est ajouté à 2ml
de la solution de sodium dodecyl sulfate/ triethanolamine (SDS /TEA), effectué une
première lecture à 510 nm (A1) agité et additionné FeCl 3 (1ml). La deuxième (A 2)
lecture est effectuée à une longueur d’onde à 510 nm. La lecture finale due aux tanins
est calculée comme suit : A tanins= A2 - A 1
La teneur en tannin est déterminée selon une courbe établie avec de l’acide tannique

V. Étude de certaines activités biologiques des extraits de plantes testées

V.1. Interaction polyphénols protéines (BSA)
Dans cette étude l’effet du pH, la force ionique du milieu et la concentration des
extraits polyphénoliques ont été testés, sur le mécanisme réactionnel protéines
polyphénols, la densité optique de la solution est mesurée au moyen d’un
spectrophotomètre à une longueur d’onde maximale de 420 nm.

V.1.1 Etude de la densité optique en fonction de la concentration des extraits

phénoliques
Pour pouvoir étudier ce phénomène, une protéine standard; la Sérum Albumine Bovine
(BSA) a été choisie.
 Solution d’essai : Utilisation dans toute cette deuxième partie la même
concentration de la (SAB) pour tous les extraits, un témoin est préparé en
remplaçant l’extrait par le méthanol.
 Mode opératoire
La méthode utilisée est celle de Naczk et al. (1996) avec quelques modifications :
Une solution de (BSA) (pH=6,9) (1mg/L), est mise en contact avec différentes
concentrations (0,25- 2 mg/ml) des extraits de plante à raison de 1 mL pour chaque
solution.
La lecture de la densité optique est effectuée à 420 nm après incubation à 37°C
pendant une heure.

47
 Matériel et méthodes

V.1.2 Mesure de la densité optique en fonction de la concentration en NaCl

 Mode opératoire
L’influence de la concentration en NaCl sur la formation du complexe polyphénols-
BSA, est réalisée selon la méthode décrite par de Freitas et al. (2003) avec quelques
modifications :
Un volume d’extraits de plantes (1mg/ml) est additionné de 1mL de la solution de
BSA (1mg/ml), additionné de 1ml de la solution de NaCl à concentrations variables
(0,01-0,1M)
La mesure de la densité optique est réalisée à 420 nm après une heure d’incubation à
37°C, contre un témoin préparé dans du méthanol.

V.1.3 Etude de la densité optique en fonction du pH

 Mode opératoire
La méthode utilisée dans cette étude est celle de de Freitas et Mateus (2001b) avec
quelques modifications :
Des solutions d’extraits de plante sont préparées dans des tampons à différent pH (2,5
à 7,5) additionné de 1 mL de la solution de BSA (1 mg/mL).
La lecture de la densité optique est réalisée à 420 nm après une heure d’incubation à
37°C, contre un témoin préparé en remplaçant l’extrait de plante par le méthanol.

V.2. Etude de l’activité antioxydante

Les principales méthodes d’évaluation du potentiel antioxydant sont fondées sur la
détermination de produits résultant de l’oxydation, ou au contraire en mesurant
l’efficacité d’une substance à piéger les radicaux. Pour évaluer cette propriété deux
méthodes sont utilisées; la méthode d’évaluation de la capacité scavenger au radical
DPPH et le pouvoir réducteur du fer.

V.2.1. Activité scavenger au radical DPPH•

Le DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) est un radical libre ou accepteur
d’hydrogène de couleur violet intense (Parakash, 2001). Ce dernier perd sa coloration
native quand t’il se lie avec des substances antioxydantes, qui lui transmet des
électrons ou des protons et la forme réduite confère à la solution une coloration jaune
pale (Gadow et al., 1997 ; Gordon, 2001 ). Le virage vers cette coloration et l’intensité
48
 Matériel et méthodes
de la décoloration découle de la nature, de la concentration et la puissance des
principes actifs présents (Kroyer, 2003 ; Es Safi et al., 2007).
 Solution d’essai : Testé les cinq extraits de plante à plusieurs concentrations
(78 – 100 μg/ml)
 Mode opératoire
L’évaluation de l’activité antioxydante des extraits de plante a été estimée selon la
méthode décrite par Balasuhdram et al. (2005) avec quelques modifications :
100μl d’extrait de plante est additionné à un volume d’une solution méthanolique
DPPH (0,2mM), mélangé au vortex et incubé à l’obscurité à température ambiante
pendant 30mn. La lecture de l’absorbance est réalisée à 515nm.
Un control est préparé en parallèle en remplaçant l’échantillon par une solution
méthanolique DPPH. De même différentes concentrations d’extraits de plantes et des
antioxydants de synthèse (quercetine et acide ascorbique) ont été préparés pour tester
leurs effets sur le pouvoir antiradicalaire.
Le % d’inhibition du radical est donné par l’équation suivante :
Le % d’inhibition du DPPH= ( Ac Ae Ac) 100
AC: Absorbance du control
Ae: absorbance de l’échantillon

V.2.2. Pouvoir réducteur

Le pouvoir réduction est l’aptitude des antioxydants à réduire le fer ferrique en fer
ferreux (Blazovics et al., 2003). La forme réduite donne une couleur verte qui est
proportionnelle au pouvoir réducteur de l’extrait (Balasuhdram et al., 2005)
 Solution à tester : Testé plusieurs concentrations (20- 80μg/ml) des extraits de
plantes ainsi que des antioxydants de synthése (quercetine, BHA et acide
ascorbique)
 Mode opératoire
L’étude du pouvoir réducteur des plantes est estimée selon la méthode décrite par
Huang et al. (2006) avec quelques modifications :
Un aliquote d’extrait de plante est ajouté à 1,25ml de tampon phosphate (0,2M pH=
6.6) et à 1,25ml de ferricyanure de potassium (K3 F2 (CN) 6) à 1%, incubé à 50°C
pendant 20mn à l’abri de la lumière et additionné 1,25ml de l’acide trichloracétique à

49
 Matériel et méthodes
10%. Centrifugé à 3000t/mn pendant 10mn et prélevé 2,5ml du surnagent puis ajouté
2,5ml d’H2O distillée et 0,5ml de Chlorure ferrique (0,1%). Le mélange homogénéisé
préalablement est incubé pendant 10mn à l’abri de la lumière l’absorbance est lue à
700nm.

V.3. Etude de l’activité antibactérienne

Pour mettre en évidence l’activité antibactérienne des extraits de plantes la méthode
utilisée repose sur la diffusion des extraits à partir de disques sur un milieu solide. Les
résultats sont exprimées par l’apparition d’une zone d’inhibition au tour des disques,
plus la zone est grande plus la sensibilité des souches est élevée.

 Solution à tester : Tester un aliquote des différents extraits de plante vis-à-vis

de 4 souches bactériennes (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
Staphylococcus aureus, et Pseudomonas aeruginosa), qui ont été isolées à partir
de prélèvement de la matière fécale et des crachats des malades collectés au
niveau de deux laboratoires médicaux.
 Mode opératoire
La méthode utilisée dans cette étude est celle décrite par Kuete et al. (2006) avec
quelques modifications :
Une suspension bactérienne de 18 à 24 heures de chaque souche a été préparée dans de
l’eau distillée stérile après leur revivification et isolement. Cette suspension est diluée
jusqu'à l’obtention d’une opacité de Mac Ferland 0,5 (108 UFC/ml correspondant à une
DO de 0,1 à 600 nm), puis diluée au 1/100 pour avoir un inoculum de 106 UFC/ml.

1ml de l’inoculum est étalé uniformément à la surface de la gélose de Mueller-

Hinton (MH). Des disques en papier de 6 mm de diamètre préalablement imprégnés de
25μl des différents extraits méthanoliques (2mg/ml) sont déposé dans des boites de
pétri inoculées et l’ensemble est incubé pendant 24 heures à 37°C. Des disques
témoins sont préparés en remplaçant les extraits par le méthanol. Après 24 heures
d’incubation mesuré le diamètre des zones d’inhibition autours des disques.

50
 Matériel et méthodes

VI. Etude statistique

Pour pouvoir traiter les résultats obtenus, une étude statistique a été réalisée en
appliquant une analyse de la variance (ANOVA) test LSD (Least Signifiant
Differance) et test t à l’aide d’un logiciel STATISTICA 5.5.

51
 Résultats et discussions

Résultats et discussions
I. Traitement des échantillons
I.1.Teneur en humidité séchage des feuilles
Les résultats de la teneur en humidité des plantes étudiées sont regroupés dans le
tableau ci après :
Tableau II. Tableau représentant la teneur en eau des différentes plantes étudiées

Teneurs en humidité (%)

1g 10g 100g
C. siliqua d d’ d’’
53,63±0,44 54±0,816 53±0,816

C. monogyna c c’ c’’
58,2±0,86 59±0,816 57±0,816

F. excélsior b b’ b’’
72±0,816 73±1,08 71±2,09

Q. coccifera e e’ e’’
44,43±1,67 42,9±0,94 46,9±0,37

U. dioica a a’ a’’
78,1±1,49 77±1,22 79,4±1,25

* les valeurs portant les mêmes lettres ne présentent aucune différence significative (p<0,001)
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

Les teneurs en eau oscillent d’une plante à une autre de 44 à 78% ce qui montre le
caractère hygroscopique des plantes étudiées.
Le taux le plus élevé en humidité est observé chez les espèces U. dioica et F. excelsior
78,1± 1,4988, 72±0,816 respectivement et diffèrent significativement des trois autres
plantes qui sont moins riches en eau. L’analyse statistique effectuée indique qu’il
n’existe aucune différence significative (p<0,001) concernant la variation de la teneur
en humidité des plantes à 1g, 10g et 100g.

Les résultats obtenus pour l’espèce U. dioica sont en accord avec ceux établies par
Guil-Guerrero et al. (2003) qui confirment la richesse de cette plante en eau. Makkar
et Singh (1991) retrouvent une teneur en humidité au niveau des feuilles de Quercus
incana plante de la même espèce que Q. coccifera un résultat similaire.

52
 Résultats et discussions
Certains auteurs rapportent que les cellules végétales renferment des enzymes
susceptibles de modifier les composés phénoliques, en particulier les polyphénols
oxydases et les glycosidases via des réactions (brunissements enzymatiques) qui
conduisent à la transformation importante des composés natifs tels les hétérosides
complexes et l’apparition de nouvelles structures (hétérosides plus simples). Le
séchage contribue ainsi à la conservation de la plante en préservant son intégrité
biochimique sans modification importante en inhibant certaines activités enzymatiques
(Ribéreau-Gayon, 1968 ; Chang et al., 2000 ; Fintelmann et Weiss, 2004).

I.2. Rendement en extrait sec

Les feuilles préalablement séchées à 40°C ont été broyées et tamisées afin d’obtenir
une poudre fine (D<45μm) utilisée pour l’extraction des polyphénols contenus dans les
plantes étudiées.
Afin d’extraire les principes actifs (polyphénols) contenus dans les plantes une
extraction de type solide liquide (macération) avec un solvant polaire (méthanol à
99%) est utilisée. Le méthanol est un solvant polaire qui extrait le plus de classes de
composés phénoliques et présente l’avantage d’être éliminé facilement sous vide
(Ribéreau-Gayon, 1968).

Les résultats du rendement en extrait sec sont regroupés dans le tableau ci-dessous :
Tableau III. Rendement en extrait sec des différentes plantes étudiées

Rendement en extraction
Plantes Extrait sec (%) m/m
C. siliqua 47,5
Cr. monogyna 42,5
F. excelsior 45
Q. coccifera 32,5
U .dioica 34

Les rendements en extractions varient entre 40 et 30 %. L’espèce C. siliqua

représente la plante avec le taux d’extraction le plus élevé, elle est suivie par les
espèces Cr. monogyna, F. excélsior, U. dioica et enfin par l’espèce Q. coccifera.

53
 Résultats et discussions

Très peu de travaux sont entrepris sur les feuilles de l’espèce C. siliqua, toutefois
d’après une étude effectuée par Balaban (2004) sur le bois de cette plante révèle un
taux de 15,41% utilisant méthanol-eau comme solvant pour l’extraction. Skerget et
al. (2005) obtient 28% utilisant le méthanol pour l’extraction des polyphénols au
niveau Crataegus laevigata plante de la meme espece Cr monogyna.

Hayouni et al., (2007) retrouvent un rendement beaucoup plus faible au niveau des
feuilles de l’espèce Q. coccifera utilisant l’eau, chloroforme et l’acétone comme
solvant d’extraction.

Les rendements en extrait sec obtenus sont dans l’ensemble élevés et varient d’une
plante à une autre, cette variation émane probablement du degré de polymérisation des
polyphénols ainsi qu’à leur tendance à se combiné avec des macromolécules tels les
protéines, polysaccharides et autres molécules qui rendent l’extraction délicate
(Mompon et al., 1996 ; Naczk et Shahidi, 2006).

II. Etude phytochimique

II. 1 Dosage des polyphénols totaux
Les résultats de la quantification des polyphénols totaux sont illustrés sous forme
d’histogramme ci-dessous :
400 369,76 a
350

300 288,76 b
258,63 b
T e n e u r e n m g /g M S

250 220,51c
200 180,85 d

150

100

50

0
Plantes
Ceratonia. S Crataegus.M Fraxinus.E Quercus .C Urtica.D

Figure 10. Teneur en polyphénols totaux des extraits de plantes

* les valeurs portantes les mêmes lettres ne présentent aucune différence significative (p<0,001),
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

54
 Résultats et discussions

Les résultats obtenus indiquent, que l’espèce C. siliqua représente la plante avec le
taux le plus important en polyphénols totaux avec 369,76 ± 1,3183mg d’EAG/g MS,
suivit par les espèces Q. coccifera, Cr. monogyna et U. dioica avec (288,76 ±1,1269
mg d’EAG/g MS); (258,63 ±2,5983 mg d’EAG /g MS); (220,51 ±5,8407 d’EAG mg/g
MS) respectivement et enfin l’espèce F. excélsior avec 180,85 ±3,4042 mg d’EAG /g
MS. L’analyse statistique révèle l’existence de différence significative entre les plantes
(p<0,001) quant à leurs teneurs en polyphénols totaux à l’exception des deux plantes
Q. coccifera, Cr. Monogyna

L’espèce C.siliqua possède la teneur la plus élevée en polyphénols totaux. Corsi,

(2002) retrouve au niveau des extraits aqueux de feuilles de cette plante un taux plus
faible (6,28mg/g). Le résultat obtenu pour la quantification des polyphénols
concernant l’espèce Q. coccifera indique un taux accru similaire à ceux obtenus par
Ben Salem (2003) ce qui confirme sa richesse en ces composés.

Bahourn (1997) obtient au niveau des feuilles et les boutons floraux de l’espèce Cr.
monogyna un taux plus important en polyphénols par rapport aux autres parties de la
plante. Boullard (2001) et Egan et al. (2004) rapportent que les feuilles de F. excélsior
sont d’excellentes sources de polyphénols ce qui confirme les résultats obtenus dans
cette présente étude.

Les plantes étudiées diffèrent quand à leurs teneurs en composés phénoliques, cette
divergence de résultats est probablement tributaire au matériel végétal utilisé dérivant
de la grande diversité structurale des composés phénoliques, conduisant à la variabilité
des propriétés physicochimiques rendant impossible une présentation unique et
générale d’une technique d’extraction et de quantification des polyphénols (Mompon
et al., 1996) elle peut être également liée aux solvants employés, aux conditions
climatiques, phases végétatives et même aux surfaces de cultivations (Farrukh et al.,
2006).

55
 Résultats et discussions

II.2. Dosage des polyphénols polaires et détermination des polyphénols apolaires

Les résultats de la quantification en polyphénols polaires et l’estimation des
polyphénols apolaires sont représentés sous forme d’histogramme :

200 186,95a Polyphénols polaires

Polyphénols apolaires 174,9
180
162,66b
160 147,67c
137,98d 136,54
Teneurs mg/g MS

140 128,23
116,53e
120
100,38
100
80
64,74
60
40
20
0
C.siliqua Cr.monogyna F.excelsior Q .coccifera U.dioica
Plantes

Figure 11. Teneur en polyphénols polaire et apolaire des plantes

* les valeurs portantes les mêmes lettres ne présentent aucune différence significative (p<0,001)
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

Les proportions en polyphénols polaires et apolaires obtenues varient respectivement

entre 186,95 à 116,5mg/g MS et entre 174,9 à 64,74 mg/g MS. D’après la figure (11)
la teneur en polyphénols polaires est beaucoup plus importante que celle des
polyphénols apolaires et l’analyse statistique révèle une différence significative
(p<0,001). Cette différence provient probablement de la nature hydrophile des extraits
polyphénoliques des feuilles des plantes étudiées.

Très peu de travaux sont réalisés concernant la détermination des polyphénols polaires
et apolaires des feuilles des plantes étudiées. Owen et Johns, (1999) retrouvent au
niveau des feuilles de plantes de la même famille que l’espèce C. siliqua et F.
excélsior des teneurs en polyphénols polaires plus importante que celle des
polyphénols apolaires.

56
 Résultats et discussions

II.3. Détermination des flavonoides

La figure ci après représente les résultats de la quantité des flavonoides des plantes
étudiées :

60

49,73a 50,56a
50
Teneur enmg/g MS

40 36,35b
32,01c
30 25,6d

20

10

0
Plantes
C. silqua Cr.monogyna F.excelsior Q .coccifera U.dioica

Figure 12. Teneur en flavonoides des différents extraits phénoliques

* les valeurs portantes les mêmes lettres ne présentent aucune différence significative (p<0,001)
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

L’espèce U. dioica et F. excélsior représentent les deux plantes avec la teneur la plus
importante 50,56± 0, 4189 mg EQ /g MS et 49,73±0,1963 mg EQ /g MS alors que
l’espèce Q. coccifera présente la plante avec le taux le plus faible 25,6±0,3138 mg
EQ/g MS. L’analyse statistique révèle l’existence de différence significative entre les
plantes (p<0,001).

À l’issu de la détermination des flavonoides, les résultats obtenus concernant l’espèce

U. dioica concordent avec ceux établis par Pourmorad et al. (2006) qui confirment la
richesse de cette plante en ces composés. Wichtl et Anton (2003) révèlent l’existence
de grande quantité de flavonoides (3-glucosides, et 3-rutinisides du quercétol, du
kaempférol, et de l’isorhamnétol).

À l’image des travaux effectués sur l’espèce Cr. monogyna in vivo et in vitro, il est
avéré qu’elle soit très intéressante tenant compte de ses propriétés biologiques
(Fintelmann et Weiss, 2004 ; Sokol-Letowska et al., 2006). Les résultats obtenus dans
57
 Résultats et discussions

cette étude sont en corrélation avec ceux établies par Jakstas et al. (2004) qui
reconnaissent la richesse de l’espèce Cr. monogyna en flavonoides. L’analyse du profil
qualitative des feuilles de cette espèce révèle la présence principalement de
l'hyperoside (galactoside du quercétol) ainsi que des flavones glycosylés (vitexine,
vitexine-2 rhamnoside, et son dérivé, le 4-acétyl du rutoside et du piréoside et de
proanthocyanidols (Skerget et al., 2005 ; Svedstrom et al., 2006).

Le criblage phytochimique de l’espèce F. excélsior permet l’affirmation de sa richesse

en flavonoides. Meusinger (2006) authentifie la présence de fraxine ; un dérivé de
coumarine glycoside, elle contient également de le rutoside, catéchine et épicatechine
et une faible quantité en coumarine (fraxoside hydrolysable en fraxétol) (Kostova et
Iossifova, 2007).

El Allagui et al. (2006) ont obtenus à partir d’un extrait méthanolique des feuilles de
l’espèce C. siliqua un taux de 9,8mg/g de flavonoïdes. Pourmorad et al. (2006)
obtiennent une teneur plus élevée (57±5,4mg/g) dans un extrait méthanolique d’une
espèce appartenant à la même famille que cette plante.

Cette différence dans la quantification des flavonoïdes est probablement liée à leur
diversité structurale (Bahorun et al., 2004). Où ils se rencontrent à la fois sous forme
libre ou sous forme de glycosides (Pietta, 2000 ; Heim et al., 2002).

II.4. Détermination des tanins

L’insolubilité des protéines par les tanins a été exploitée dans un panel analytique par
Hagerman et Butler (1978) qui se sont basés sur les caractéristiques des polyphénols et
leur aptitude à se complexer avec les protéines.

La protéine utilisée dans cette étude est la sérum albumine bovine (SAB) protéine de
référence souvent employée pour mesurer la réactivité des tanins (Mateus et al., 2004
b). Sa dissolution dans un tampon phosphate à pH 4,9 permet une meilleure
précipitation de la protéine, sachant que sa solubilité diminue quand elle se rapproche
de son point isoélectrique (BSA pHi= 4,9 à 5) (Haslam, 1998)

58
 Résultats et discussions

Les résultats de la quantification des tanins sont représentés dans la figure ci après :

45
40 36,05a

35
26,95b
Teneur mg/g MS

30

25

20
15 10,73c

10 6,06d 6,44d

0
C. siliqua C.monoguna F.excelsior Q .coccifera U.dioica
Plantes

Figure 13. Teneur en tanins des extraits méthanoliques

* les valeurs portantes les mêmes lettres ne présentent aucune différence significative (p<0,001)
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

L’espèce Q. coccifera représente la plante la plus riche en tanins avec 36,05±2,692 mg

EAT/g MS, elle est suivis par l’espèce C. siliqua 26,95±1,3504 mg EAT/g MS, et
l’espèce F. excelsior représentent la plante avec la teneur le plus faible en tanin avec
6,06±1,9324 mg EAT/g MS. Les variations de la teneurs des tanins entre ces plantes
significative (p<0,001)

La teneur en tanins obtenus dans les feuilles de l’espèce Q. coccifera, est en

concordance avec ceux établis par Ben Salem et al. (2005) qui reconnaissent la
richesse de cette plante quant à sa teneur en tanins, Ito et ses collaborateurs en (2002)
ont isolé au niveau de ses feuilles des tanins hydrolysables appelés cocciferine D2.

Silanikove et al. (1994) authentifient la présence de tanins dans les feuilles de l’espèce
C. siliqua. Owen et johns (1999) en étudiant les composés bioactifs de certaines
plantes médicinales décèlent la présence de 14,64mg/g chez l’espèce U. dioica, et
retrouvent au niveau d’une plante de la même espèce que F. excélsior un taux très
importante en tanin dont les teneurs différent largement à celles obtenus dans cette
étude.

59
 Résultats et discussions

Les résultats de la quantification des tanins varient d’une plante à une autre cette
fluctuation diffèrent selon l’espèce, l’âge de la plante, la saison et le climat.
Mole et Waterman (1988) suggèrent que la synthèse des polyphénols induite par la
lumière conduit à une plus grande capacité à précipiter les protéines. En examinant le
feuillage du chêne Makkar et al. (1991) constatent que le contenu des polyphénols et
leur capacité à précipiter les protéines sont beaucoup plus importants chez le jeune
feuillage et que la teneur en tanins condensés augmente avec la maturation des feuilles.
Makkar et Becker (1998) retrouvent une teneur plus élevé en tanins au niveau des
plantes Africaine par rapport à celles des collines de l’Himalaya et d’après ces auteurs
la disponibilité de l'eau et d'autres facteurs tels la maturité des feuilles sont à l’origine
de cette divergence.

III. Étude de certaines activités biologiques des extraits phénoliques des

différentes plantes
Plusieurs activités biologiques des extraits phénoliques; interaction polyphénols
protéine, antioxydante et antibactérienne ont été évalué

III.1. Étude de l’interaction polyphénols protéines (BSA)

Sachant que le complexe polyphénols et protéines formés est dépendant de plusieurs
facteurs dans cette étude nous avons testé l’effet de la concentration des polyphénols
sur ce complexe, la force ionique ainsi que le pH

III.1.1. Etude de la densité optique en fonction de la concentration des extraits

phénoliques
À l’issu de la mise en contact de différentes concentrations d’extraits de plantes avec
la sérum albumine bovine (SAB), il y a eu formation d’un trouble natif au complexe
polyphénols protéines son intensité diffère d’une plante à une autre. Les résultats de la
densité optique en fonctions des concentrations des extraits phénoliques sont
représentés ci-dessous :

60
 Résultats et discussions

C. siliqua C. monogyna
F. excélsior Q. coccifera
3,5 U. dioica
3
DO à 420 nm 2,5
2
1,5
1
0,5
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
Concentration des extraits (mg/ml)

Figure 14. Variation de la densité optique en fonction de la concentration des

extraits de plantes étudiées
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

Les courbes obtenues montrent que la densité optique (DO) est proportionnelle aux
concentrations des extraits de plante et présente une allure hyperbolique ressemblant à
l’isotherme de Langmuir.

D’après la figure (14) la densité optique des espèces C. siliqua, Q. coccifera et Cr.
monogyna augmente jusqu'à 1mg/ml ou elle tend à se stabilisé, alors que pour les
espèces U. dioica et F. excelsior s’accroît légèrement puis elle tend à partir de
0,75mg/ml à stabiliser.

Charlton et al. (2002) expliquent que lorsque il y’a adjonction de polyphénols dans le
milieu il y a formation de liaisons hydrophobes réversibles, en augmentant la
concentration en polyphénols le complexe devient insoluble induisant l’apparition
d’agrégats et par voie de conséquence une précipitation (Mateus et al., 2004 a).

La taille du complexe polyphénols protéines dépend des concentrations et du rapport

protéine/polyphenol, et le fait d’une évolution légère et une stabilisation à un moment
donné s’explique par une saturation des sites actifs présents sur la protéine par les
polyphénols (Bennick, 2002).

61
 Résultats et discussions
III.1.2. Mesure de la densité optique en fonction de la concentration en NaCl
Les résultats de l’influence de la force ionique sur la formation du complexe protéines
polyphénols, sont illustrés dans la figure ci après

3,5

2,5
DO 240 nm

1,5
C.siliqua C.monogyna
1
F.excélsior Q.coccifera
U.dioica
0,5

0
0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12
Conce ntration NaCl (M)

Figure 15. Variation de la densité optique en fonction de la force ionique

* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

Les résultats obtenus de l’évaluation de l’effet de la force ionique sur le complexe

tanin protéine indiquent que la DO est très faible entre 0,01-0,0125M ce qui implique
que la force ionique ne présente aucun effet sur le complexe protéines polyphénols à
faible concentrations en NaCl. À partir de 0,025M la DO augmente légèrement et tend
à se stabiliser. À force ionique élevée la charge globale de la protéine s’élève par les
ions qui réduisent les répulsions électrostatiques entre les protéines, on assiste alors à
un relargage (précipitation des protéines) ce qui par voie de conséquence diminue leur
solubilité (de Freitas et al., 2003 ; Simon, 2003).

III.1.3. Etude de la densité optique en fonction du pH

La complexsation polyphénols protéines peut être éventuellement influencé par le pH.
(Hagerman et al., 1992 ; Haslam, 1998 ; Mateus et al., 2004 b).
Les résultats de l’effet du pH sur le complexe polyphénols proteines sont représentés
dans la figure suivante :

62
 Résultats et discussions

C.siliqua C.m onogyna F.excelsior

3 Q.coccifera U.dioica

2,5
DO 240 nm

1,5

0,5

0 pH

0 2 4 6 8

Figure 16. Variation de la densité optique en fonction du pH

* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

D’après la figure (16), à faible pH (< 3,5) la DO ne varie presque pas pour les plantes
étudiées, à pH >3,5 on décèle une augmentation de la DO à l’exception pour l’espèce
C. siliqua et l’espece Cr. monogyna ou l’élévation débute à partir de 4,5. La DO est
maximum à 5,5 ou l’on observe un pic pour toutes les plantes et elle diminue à partir
de 6,5 à l’exception pour l’espèce U. dioica ou on remarque une légère augmentation.

Hagerman et al. (1981) suggèrent que la SAB, le collagène et la pepsine, sont des
protéines globulaires précipitant à des pH allant de 3 à 5 alors qu’elle est maximale à
des pH supérieur à 8 pour le lysozyme.

Généralement une protéine présente une solubilité minimum au pH isoélectrique de

telles conditions provoqueraient la perte des charges des protéines résultant de la
diminution de la répulsion électrostatique.

III.2. Etude de l’activité antioxydante

L’activité antioxydante exprime l’aptitude d’une molécule donnée à réduire les
radicaux libres.

63
 Résultats et discussions

III.2.1. Activité scavenger au radical DPPH•

La technique du radical DPPH (2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle) est l’une des méthode
la plus couramment employée (Elmastas et al., 2006 ; Lo Scalzo, 2008). Elle est
rapide, facile à mettre en œuvre et s’effectue à température ambiante ce qui permet
l’élimination de tout risque de dégradation thermique des molécules testées (Katalinic
et al., 2005 ; Muchuweti et al., 2006).

Après l’ajout de la solution méthanolique DPPH (fraîchement préparé) après 30mn

une dissipation de la couleur violette a été observée et pratiquement tous les extraits
méthanoliques de plantes ont réagi positivement au test antiradicalaire. Les résultats du
pouvoir antiradicalaire des extraits de plantes étudiées exprimé en pourcentage sont
illustrés dans le tableau ci-dessous :

Tableau IV. Tableau résumant les résultats du test d’inhibition du radical DPPH

Plantes Pouvoir antiradicalaire (%)

C. siliqua e
27,31±0,37

Cr.monogyna c
37,06±0,15

F.excelsior b
60,91±0,55

Q.coccifera e
26,47±0,63

U.dioica b
61,04±0,86

Acide ascorbique a
63,02±1,51

Quercetine d
61,67±0,1

* les valeurs portantes les mêmes lettres ne présentent aucune différence significative (p<0,001)
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

Le pouvoir antiradicalaire des extraits phénoliques des plantes étudiées varis entre
26,47±0,63 à 61,04±0,86%, néanmoins toute les plantes présente la capacité à piéger
le radical DPPH et différent significativement (p<0,001) d’une plante à une autre.
L’acide ascorbique et la quercetine présente les antioxydants synthétique avec les taux
les plus forts à piéger le radical DPPH ils sont suivis par l’espèce U.dioica et l’espèce

64
 Résultats et discussions
F.excelsior en suite et l’espèce Cr.monogyna et enfin les espèces C. siliqua et
Q.coccifera.

III.2.2 Effet de la concentration sur le radical DPPH

Le profil d’activité antiradicalaire de chaque extrait testé vis-à-vis du radical DPPH est
illustré dans la figure 18 (les résultats sont exprimés en pourcentage)

A.ascorbique Quercétine C. siliqua

Cr. monogyna F.excelsior Q.coccifera
70 U.dioica

60
Po uvoir d'inhibition %

50
40

30

20

10

0
87 91 94 97 100
Concentration ug/ml

Figure17. Pouvoir antiradicalaire en fonction des concentrations des extraits de

plantes
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

D’après les résultats obtenus le pouvoir antiradicalaire est proportionnel à la

concentration des extraits cela va de soit pour la quercétine et l’acide ascorbique
(antioxydants de synthèse). Plus en augmente la concentration des extraits plus cette
activité s’élève et cette élévation diffère significativement (p<0,001) d’une plante à
une autre et suit l’ordre décroissant suivant : U.dioica > F.excelsior > Cr.monogyna >
C. siliqua > Q.coccifera.

Dans cette étude, l’espèce U. dioica possède le pouvoir inhibiteur au radical DPPH• le
plus fort par rapport aux autres plantes étudiées mais moins important comparant à la
quercetine et l’acide ascorbique. Ce qui est en accord avec des résultats obtenus par
Gulçin et al. (2004 a) et Pourmorad et al. (2006) sur des études effectuées dans cette
optique ceci reflète une activité antioxydante très attrayante liée éventuellement
d’après ces auteurs aux composés polyphénoliques présents dans cette plante. Des

65
 Résultats et discussions

études antérieures réalisées sur des extraits méthanolique de l’espèce U. dioica

indiquent la présence de certains composés flavoniques (Rutine, isoquercetine, 4-
Methoxy isoquercetin) responsables d’une très grande activité antiradicalaire (Wichtl
et Anton, 2003).

Les résultats obtenus concernant F. excélsior indiquent une activité antiradicalaire

assez importante ce qui est en accord avec ceux établies par Kostova et Iossifova
(2007) qui ont montré au cours de leurs études sur des extraits alcooliques de F.
excélsior une activité antioxydante intéressante. La littérature attribue cette propriété à
leurs compositions en flavonoïdes principalement en fraxine (Whang et al., 2005).

Plusieurs travaux in vitro ont pu démontré l’activité antioxydante des feuilles de

l’espèce Cr. monogyna (Bahorun et al., 1994 ; Zuo et al., 2006) et d’après Bahorun et
al. (1994) l’aubépine d'usage traditionnel est connue par sa richesse en polyphénols
(flavonoïdes, proanthocyanidines, catéchines et acides phénoliques) qui sont
actuellement très étudiés en raison de leur activité antioxydante.
Peu d’études sont réalisés concernant l’activité antioxydante des feuilles de l’espèce C.
siliqua, Makris et Kefalas (2004) en évaluant l’activité antiradicalaire des d’extraits
méthanoliques de cosses de caroube obtiennent un pouvoir antioxydant assez
intéressant.

L’espèce U. dioica possède le potentiel antiradicalaire le plus important alors qu’elle

ne représente pas le taux le plus accru en polyphénols totaux par rapport à l’espèce C.
siliqua qui en contre partie dispose d’une teneur très élevée mais un pouvoir
d’inhibition assez faible.

D’après les résultats obtenus ce n’est pas forcement la plante qui dispose d’une
quantité importante en polyphénols totaux qui détient le pouvoir antioxydant le plus
fort. La corrélation entre les teneurs en polyphénols totaux et le pouvoir antiradicalaire
est présentée en figure 18.

66
 Résultats et discussions

70
p< 0,05

P o uv oir an tira dic a lai re%

60
r = -0,863
50

40

30

20
10

0
0 50 100 150 200 250 300 350 400
Polyphénols totaux mg/g MS

Figure 18. Corrélation entre la teneur en composés phénoliques totaux et l’activité

antiradicalaire des extraits de plantes

D’après la figure ci-dessus un facteur de corrélation négatif est obtenu (r= -0,863). De
nombreux chercheurs soutiennent l’hypothèse d’une éventuelle relation entre l’activité
antioxydante et les composés phénoliques, décrivant ainsi le rapport probable
structure-activité entre eux (Velioglu et al., 1998 ; Pulido, et al., 2000 ; Katalinic et al.,
2006) alors que certains auteurs avancent d’autres hypothèses (Heinonen et al., 1998 ;
Javanmardi et al., 2003 ; Matkowski et Piotrowska, 2006).

Kahkonen et ses collaborateurs en (1999) ont montré au cours de leurs travaux

effectués sur l’évaluation de l’activité antioxydante de 92 extraits de plantes contenant
des composés polyphénols une corrélation très faible. L’explication la plus rationnelle
à cette anomalie est l’éventuelle appartenance de ces molécules à de différentes classes
de polyphénols. Ces classes possèdent probablement des forces antioxydantes
variables ainsi qu’un effet synergique émanant des liaisons existantes entre eux et/ou
des composants présents dans les extraits de plantes pouvant contribuer à cette activité
(Muchewuti et al., 2006). Ainsi, l'activité antioxydante d'un extrait ne peut être prévue
sur la base de son contenu phénolique total.

III.2.3. Pouvoir réducteur

Afin de mieux rationaliser cette activité, et confirmer, le potentiel antioxydant des
plantes étudiées, un autre test a été utilisé, la réduction du ferricyanure de potassium.
Les courbes obtenus montrent, que l’absorbance augmente avec l’élévation des
67
 Résultats et discussions

Concentrations cela peut s’explique par la présence probable de composés

(antioxydants) pouvant alloué des électrons réduisant ainsi le Fe 3+en Fe2+. La couleur
jaune du ferricyanure de potassium vire vers une couleur bleu vert dont l’intensité est
attribuable au pouvoir réducteur de chaque extrait de plante.

En étudions le pouvoir réducteur de certaines plantes, plusieurs auteurs confirment

l’élévation de ce potentiel avec l’augmentation des concentration des échantillons à
analysé (Gulçin et al., 2005).

La figure ci contre représente le pouvoir réducteur des extraits méthanoliques et de la

quercétine BHA et acide ascorbique en fonction de leurs concentrations

0,6 BHA A.as corbique Quercétine

Quercus c Cerato nia s Crataegus m
Urtica d Fraxinus e
0,5
Absorba nce à 70 0nm

0,4

0,3

0,2

0,1

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Concentration ug/ml

Figure 19. Pouvoir réducteur des extraits méthanoliques des plantes

* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)

Le pouvoir réducteur des extraits méthanoliques et de la quercétine, BHA et l’acide

ascorbique (antioxydants de synthèse) s’élevé avec l’augmentation des concentrations
et l’analyse statistique révèle un potentiel réducteur qui différent significativement
entre les plantes (p<0,001)

L’analyse de la figure indique que le pouvoir réducteur des extraits de plantes suit
l’ordre croissant suivant : Q.coccifer < C. siliqua < Cr.monogyna < F.excelsior <
U.dioica.

68
 Résultats et discussions

Les espèces U. dioica, F. excelsior et Cr. monogyna détiennent un pouvoir réducteur

important par rapport aux autres plantes étudiées mais moins important comparant à la
quercetine, l’acide ascorbique et le BHA. Ce qui indique une activité antioxydante très
opérante des plantes étudiées par leur neutralisation des radicaux libres et formation de
composés plus stables.

Un coefficient de corrélation négatif (r=-0,816) est obtenu entre cette classe

d’antioxydants et leur pouvoir réducteur figure (20).
0,45
0,4 P< 0,05
0,35 r = - 0,816
Po uvo i r réducteur

0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 50 100 150 200 250 300 350 400
Polyphénols totaux mg/g MS

Figure 20. Corrélation entre la teneur en composés phénoliques totaux et le pouvoir

réducteur des extraits de plantes

Certains auteurs signalent qu’un pouvoir réducteur accru émane d’autres composés
n’appartenant pas à la classe des polyphénols pouvant eux aussi contribuer à
l’augmentation de cette activité tels l’acide ascorbique, les tocophérols, les vitamines,
(Pulido et al., 2000 ; Javanmardi et al., 2003) ainsi que les groupements glycosylés
substantiels des flavonoides qui eux en revanche détiennent un potentiel antioxydant
moins important comparé aux aglycones (Kahkonen et al., 1999 ; Heim et al., 2002 ;
Cai et al., 2006)

Plusieurs techniques ont été répertoriées afin d’évaluer cette activité elles sont fondées
sur la détermination des produits résultant de l’oxydation, ou au contraire par la

69
 Résultats et discussions

mesure de l’efficacité d’une substance à piéger les radicaux, souvent en donnant une
forme H• (Kahkonen et al., 1999 ; Marc et al., 2004 ).
Une corrélation significative (r= 0,94) figure (21) est obtenu entre le procède de
l’inhibition du radical DPPH et celui du pouvoir réducteur ce qui peut s’expliqué par la
présence d’antioxydants putatifs ayant à la fois un potentiel réducteur et une activité
antiradicalaire.

0,5
Pouvoir réducteur(700 nm)

p<0,05
0,4 r = 0,949

0,3

0,2

0,1

0
0 10 20 30 40 50 60 70

Pouvoir antiradicalaire (%)à 517nm

Figure 21. Corrélation entre le pouvoir réducteur et antiradicalaire des extraits de

plantes

III.4 Etude de l’activité antibactérienne

Plusieurs techniques peuvent être employé afin d’évaluer in vitro l’activité
antibactérienne, dans cette étude la méthode utilisée est celle des disques. Elle est
basée sur la diffusion des extraits à partir des disques sur un milieu solide, la présence
d’un halo au tour des disques reflète le degré d’inhibition, plus la zone d’inhibition est
grande plus la sensibilité des souches est élevée.

Les résultats de la recherche in vitro de l’activité antibactérienne des extraits de

plantes, vis-à-vis des souches bactériennes sélectionnées, sont représentés en
photographie annexe (4), le tableau représente les résultas des effets antibactériens des
extraits de plantes.

70
 Résultats et discussions

Tableau V. Activité antibactérienne déterminée par la méthode des disques

E. coli : Escherichia coli, S. aureus : Staphylococcus aureus, K. pneumoniae : Klebsiella pneumoniae, P. aeruginosa : Pseudomonas
aeruginosa

Plantes Diamètre de la zone d’inhibition en (mm) a

C. siliqua Cr.monogyna F.excelsior Q.coccifera U.dioica
Bactéries
E. coli 3,66±0,235b 6,16±0,235a 2,66±0,471c 1,16±0,235d 3,16±0,235c

S. aureus 0,33±0,471c 5,83±0,623a 2,16±0,235b 0,83±0,235c 5,66±0,471a

K. pneumoniae 1,16±0,235c 5,16± 0,235 a 1,16±0,235c 2,16±0,235b 7±0,408a

c a c c a
P. aeruginosa 0,66±0,235 5,66±0,471 2,66±0,471 0,83±0,235 6±0,408

* les valeurs portantes les mêmes lettres ne présentent aucune différence significative (p<0,05) *
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3) *
a : Le diamètre d’inhibition obtenu (à 2mg/ml) sans inclure celui du disque en papier (6mm)

La sensibilité des souches varie d’une plante à une autre et les proportions des
diamètres d’inhibitions oscillent entre 0,5 et 6mm.

D’prés les résultats les plantes étudiées présentent toutes un effet inhibiteur vis-à-vis
d’E. Coli, et K. pneumoniae, en revanche l’inhibition contre S.aureus et P.aerugenosa
n’est observé que chez Cr.monogyna, F. excelsior et U. dioica, et l’analyse statistique
révèle une différence significative (p<0,05).

Les travaux menés par Gulçin et al. (2004a) concordent avec les résultats obtenus dans
cette étude indiquant que, l’extrait methanolique de l’espèce U. dioica possède une
activité antibactérienne vis-à-vis de Staphylococcus aureus et E. coli, en revanche peu
de travaux ont été réalisés concernant son activité contre Klebsiela pneumoniae,
Pseudomonas aerugenosa, dont l’activité est non négligeable.

La majorité des travaux réalisés sur cette plante indiquent qu’elle est très riche en
flavonoides (quercétine, rutine) (Konrad et al., 2000 ; Chrubasic et al., 2007) et

71
 Résultats et discussions

d’après certains auteurs ces composés interviennent généralement pour protéger les
plantes vis-à-vis de nombreux parasites et microorganismes pathogènes (Cushnie et
al., 2003 ; Kintzios et Barberaki, 2004).

Les résultats obtenus concernant l’espèce C. siliqua sont en parfait accord avec ceux
obtenus par Kivakc et al. (2002) ces auteurs avaient montré que l’extrait méthanolique
de cette plante ne possède pas une activité antibactérienne importante vis-à-vis de E.
coli alors qu’elle est presque absente chez Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus
aureus. Très peu de travaux sont réalisés concernant l’activité antibactérienne de Cr.
monogyna, F. excelsior et Q. coccifera.

La sensibilisation des bactéries vis-à-vis des plantes dans cette étude varie d’une
souche à une autre et d’une plante à une autre, la variation de la composition chimique
des plantes étudiées explique probablement les fluctuations observées concernant cette
activité.

72
 Conclusion

Les plantes sont depuis toujours une source essentielle de substances naturelles

bioactives tels les polyphénols, ces molécules suscitent actuellement l’intérêt de

plusieurs chercheurs en raison des bénéfices santé qu'ils pourraient procurer à
l’homme. La présente étude s’est attelée à l’investigation phytochimique de quelques
plantes de la région de Bejaia, par la détermination de leurs teneurs en polyphénols et
par l’évaluation de certaines de leurs activités biologiques.

Les résultats obtenus indiquent qu’approximativement la moitié des feuilles des

plantes fraîches sont constituées par l’eau. Les rendements en extraction sont assez
élevés pour toutes les plantes et varient de 32 à 47%.

L’étude phytochimique indique la richesse des feuilles des espèces Ceratonia siliqua
et Quercus coccifera en composés phénoliques totaux par rapport aux autres plantes
étudiées. La teneur en polyphénols polaires est plus importante que la teneur des
polyphénols apolaires. Les espèces Urtica dioica et Fraxinus excelsior possèdent un
taux appréciable en flavonoide et les résultats de la quantification des tanins révèlent
une teneur plus élevée au niveau des feuilles des espèces Quercus coccifera et
Ceratonia siliqua.

Le test biologique réalisé sur les cinq extraits de plantes en vue d’évaluer leur activité
antioxydante par la méthode DPPH indique la capacité des plantes étudiées à piéger le
radical dont les pourcentages d’inhibition oscillent de 26 à 61 %. L’espèce Urtica
dioica détient le pouvoir inhibiteur le plus important similaire à celui de la quercétine
et l’acide ascorbique. Les plantes étudiées présentent toutes un pouvoir réducteur
appréciable, ce potentiel s’élevé avec l’augmentation des concentrations des extraits de
plantes ce qui peut refléter la quantité d’antioxydants présents dans les différents
échantillons. L’analyse des résultats de l’évaluation de l’activité antioxydante on fait
ressortir dans un ordre croissant les plantes possédant une meilleure activité :
Q.coccifer < C. siliqua < Cr.monogyna < F.excelsior < U.dioica.

73
Un cœfficient de corrélation négative est obtenu entre la teneur en composés

phénoliques totaux des plantes et leur activité antiradicalaire (r= -0,863) ainsi que leur
pouvoir réducteur (r=-0,816). Ce qui indique que ce n’est pas forcement l’échantillon
qui détient une teneur importante en polyphénols qui présente une activité
antioxydante meilleur.

Plusieurs facteurs semblent moduler l’interaction polyphénols protéines, à savoir le

pH du milieu, la force ionique et la concentration des polyphénols.
Les résultats obtenus lors de la variation des concentrations des polyphénols indiquent
une évolution proportionnelle de la turbidité en fonction des concentrations.
L’interaction polyphénols protéines est très peu influencée par la force ionique. Les
résultats indiquent également que le complexe protéine polyphénols est fortement
gouverné par le pH.

À la lueur de l’évaluation de l’activité antibactérienne des plantes étudiées, certaines

espèces telles U. dioica s’avère très efficace contre Staphylococcus aureus, Klebsiella
pneumoniae, et Pseudomonas aeruginosa, alors que Cr.monogyna en plus des
bactéries citées précédemment inhibe la croissance d’Escherichia coli. Ce qui indique
que cette inhibition varie selon la plante et la souche bactérienne.

L’ensemble des résultats obtenus dans cette étude in vitro ne constitue qu’une

ébauche dans la recherche de molécules naturelle biologiquement active présentes

dans les végétaux, il serait nécessaire d’étayer ce travail par l’isolement et
l’identification des substances polyphénoliques responsables de l’activité antioxydante
et antibactérienne et d’étudier l’influence de la température dans l’interaction
polyphénols protéine. De les analyser qualitativement et quantitativement par des
techniques plus performantes tels, RMN, HPLC et GC-MS et de réaliser d’autres tests
in vivo complémentaires.

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 Glossaire


Accoutumance: Phénomène au cours duquel un organisme s'habitue progressivement
à un médicament, une drogue.

Akène: Fruit sec indéhiscent contenant qu’une graine

Analgésique: Antidouleur

Anémie: Etat caractérisé par une baisse d’hémoglobine

Astringent: Qui resserre et raffermit les tissus

Corolle: Ensemble des pétales d’une fleur.

Créatinine: Constituant azoté dont la teneur est très fixe dans le sang, résultant d'un
effort musculaire.

Décoction: Mettre la plante dans de l’eau (froide, tiède, ou déjà bouillante selon les
cas) pendant un certain temps.

Dépurative : Tous ce qui purifie l’organisme, éliminer les toxines

Diurétique : Substance qui a pour effet d’augmenter la production d’urine

Énurésie : Incontinence d’urine (en général nocturne) qui fait que les enfants
mouillent leur lit

Eczéma: Dermatose allergique très fréquente, accompagnée le plus souvent par une
rougeur et des démangeaisons.

Gastro-entérite: Infection inflammatoire caractérisée par l'émission brutale et
fréquente de selles liquides et abondantes

Goutte : Inflammation articulaire très douloureuses siégeant au niveau du g

Hémostatique : Qui a la vertu d’arrêter les hémorragies

Histamine: Médiateur chimique libéré lors des réactions d’hypersensibilité.

Inflammation: ensemble de phénomènes réactionnels se produisant

Infusion: Méthode d'extraction des principes actifs d'une préparation végétale par
dissolution dans un liquide initialement bouillant.

Laxatif: Accélère l’évacuation intestinale, purgatif léger.

Lithiase: Affection caractérisée par l'apparition dans un conduit de l'organisme d'une
masse minérale.

Macération : Mise en contact des parties actives, avec des solvants pendant un
certain temps, à température ambiante, et sous agitation.

Névralgie: Douleur spontanée ou provoquée (par une lésion ou une irritation)
localisée sur le trajet d'un nerf.

Œdème: Hyperhydratation extracellulaire provoquée par une rétention de sodium et
l’eau dans les espaces interstitiels.

Périarthrite: Affection s'exprimant par une douleur des tissus péri- articulaires,
comprenant les muscles, les tendons, les ligaments, etc.

Pharmacopée: Recueil à caractère officiel et réglementaire des matières premières
autorisées dans un pays pour la fabrication des médicaments.

Pharmacothérapie: Correspond à l'utilisation optimale des médicaments qui sont
reconnus comme efficaces dans le traitement ou la prévention d’une maladie.

Phyto oestrogène: Substance naturellement présente dans les plantes, possédant une
structure chimique proche de l'oestradiol, principales hormones sexuelles de la femme.

Phytostérol: Analogues structuraux du cholestérol, permettant, la diminution de
l'absorption du cholestérol alimentaire.

Radical libre: Espèce chimique possédant un électron non apparié.

Scavenger : Terme anglais signifiant piégeur.

Stress oxydant: Situation où la cellule ne contrôle plus la présence excessive de
radicaux oxygénés toxiques.

Urémie: Accumulation de substance toxique dans le sang.

Urticaire: Eruption cutané mobile et fugace.

Vasoconstricteur: Toute substance qui agit de façon à rétrécir les vaisseaux
sanguins.
Matériel végétal utilisé

Plante Date Lieu Partie

utilisée
Ceratonia siliqua Avril- 2007 Gouraya (Bejaia) Feuille

Crataegus monogyna Mars- 2007 Gouraya (Bejaia) Feuille

Fraxinus excelsior Mai- 2007 Gouraya (Bejaia) Feuille

Quercus coccifera Février- 2007 Gouraya (Bejaia) Feuille

Urtica dioica Mars- 2007 Aoukas (Oud Feuille

djamaa)
 Courbes d’étalonnages

0,7 1,2
0,6
y = 0,0048x + 0,0111 y = 0,0129x + 0,0158

Abso rba nce à 75 0nm

0,5 0,9
R2 = 0,9981 R2 = 0,9991
A bs orb a nce 74 0 nm

0,4
0,6
0,3

0,2 0,3

0,1
0
0
0 20 40 60 80
0 20 40 60 80 100 120 140
Concentration en acide gallique ug/ml
Concentration acide gallique ug/ml

1) 2)

1
0,7

0,8 y = 0,0462x + 0,0157 0,6y = 0,0119x + 0,0061

R2 = 0,999
Absorbace à 430 nm

0,5 R2 = 0,999
0,6
0,4

0,4 0,3

0,2
0,2
0,1

0 0
0 5 10 15 20 25 0 20 40 60
Concentration en quercetine ug/ml C o nc e nt ra t i o n e n a c i d e t a nni q ue ug / ml

3) 4)

1 : Courbe d’étalonnage pour dosage des polyphénols totaux

2 : Courbe d’étalonnage pour dosage des polyphénols polaires
3 : Courbe d’étalonnage pour dosage des flavonoides
4 : Courbe d’étalonnage pour dosage des tanins
 Plantes
Paramètres
C. siliqua Cr. monogyna Q.coccifera F.excelsior U.dioica

Rendement en extraction (%) m/m 47,5 42,5 45 32,5 34

a b d b c
Polyphénols totaux (mg/g) MS 369,76 1,318 258,63 2,598 180,85 3,404 288,76 1,209 220,51 5,847
a c e b d
Polyphénols Polaires (mg/g) MS 186,95 0,132 147,67 0,068 116,53 0,110 162,66 0,260 137,980,025

Polyphénols Apolaires (mg/g) MS 174,9 128,23 64,74 136,54 100,38

c b a d a
Flavonoïdes (mg/g) MS 32,01 0,126 36,35 0,111 49,73 0,196 25,6 0,313 50,56 0,418
b c d a d
Tanins (mg/g) MS 26,95 1,350 10,73 1,476 6,06 1,932 36,05 2,692 6,44 3,383

Teneurs en composés phénoliques des différents extraits de plantes

*Les valeurs portant les mêmes lettres ne présentent aucune différence significative (p<0,001)
* Chaque valeur représente la moyenne± écart type (n = 3)
Activité antibactérienne des extraits phénoliques de plantes étudiées

b)
a)

c) d)

a : Effet antibactérien des extraits de plantes contre Escherichia coli

b : Effet antibactérien des extraits de plantes contre Klebsiella pneumoniae
c : Effet antibactérien des extraits de plantes contre Pseudomonas aeruginosa
d : Effet antibactérien des extraits de plantes contre Staphylococcus aureus
 Matériels et réactifs
A) Matériels
Agitateur magnétique
Bain marie (MEMMERT)
Balance analytique (SARTORUIS)
Balance de précision BP310P
Broyeur électrique IKA-WORKS, TYPE A11
Centrifugeuse PHYWE
Etuve (BINDER, BD 53)
pH mètre (HANNA, pH 210)
Rotavapor (BUCHI R-200)
Spectrophotomètre (UV mini 1240, SHIMADZU)
Tamiseur RETSCH

B) Réactifs
Acide acétique glacial (PROLABO)
Acide ascorbique (PROLABO)
Acide gallique (PROLABO)
Acide tannique (SIGMA)
Acide trichloracétique (PROLABO)
Carbonate de sodium (PROLABO)
Chlorure ferrique FeCl3 (SIGMA)
DPPH (SIGMA)
Ferricyanure de potassium [K3Fe (CN) 6] (PROLABO)
Folin- Ciocalteu (2N) (PROLABO)
HCl 36% (PROLABO)
Méthanol pur (PROLABO)
Na Cl (PROLABO)
NaH2PO4 (PROLABO)
Na2HPO4 (PROLABO)
Na OH (PROLABO)
Quercetine (SIGMA)
Sérum Albumine Bovine (FISHER LABOSI)
SDS (PROLABO)
Trichlorure d’aluminium (PROLABO)
Triéthanolamine (PROLABO)
 Rutine Vitexine R= H
Vitexine2-rhanoside R=Rha

Catéchine R=OH, R' =H Epicatechine

Procyanidine Isoquercétine

Composition phytochimique des feuilles de Cr. monogyna (Zhang, 2002)

R1: H, OMe R1: H, OH
R2: Me
R2: OH, OGle, OMe R3: Me, Oleuropeine, ligstroside,
R3: OH, Ogle, OMe 10-Hydroxyligstroside,
R4: H, OMe, OH Excelsioside/formoside

Coumarines Secoiridoides

R1: OH
R2: H,
R3: Rha
R4: Caff
R5: H

Phenylethanoides glucosides

Flavonoïdes
Catéchine Epicatechine

Constituants phytochimiques de F. exlésior (Kostova et Iossifova, 2007)

 Ceramide P- hydroxybenzaldehyde

Acide α-dimorphénolique
Scopolétine

Alcool homovanillyle Enantiomer neoollivile

Β-sitosterole R= H
Acide linoléique Daucosterle R= Glc
Glc= Β-D-glucopyranosyle

Figure illustrant quelques constituants de la feuille d’U. dioica L (Zhang, 2002)

 Résumé

Résumé
L’intérêt grandissant porté pour les plantes provient du fait de la présence de substances actives
présentant de nombreuses actions biologiques bénéfiques. Dans la présente étude cinq plantes (C.
siliqua, Cr. monogyna, F. excelsior, Q. coccifera et U. dioica) ont été utilisées afin d’extraire les
composés phénoliques et tester certaines de leurs activités biologique (antioxydante, antibactérienne et
interaction avec les protéines). Les résultats de l’étude phytochimique révèlent la richesse de ces
plantes en polyphénols totaux, une teneur plus au moins importante en flavonoides et en tanins.
Plusieurs facteurs semblent gouverner l’interaction polyphénols protéines, à savoir le pH du milieu, la
force ionique et la concentration des polyphénols. L’activité antioxydante totale des cinq plantes a été
estimée par la mesure de l’activité antiradicalaire par et par le pouvoir réducteur du fer. Les résultats
obtenus indiquent que dans l’ensemble, les plantes présentent un fort pouvoir réducteur mais
également une capacité à inhiber activité le radical DPPH. L’évaluation de l’activité antibactérienne
indique que les plantes étudiées sont habiles à inhiber les bactéries et cette inhibition varie selon la
plante et la souche bactérienne.

Mots clés : Polyphénols, activité antioxydante, activité antibactérienne, interaction polyphénols

protéines.

Abstract
The growing interest related to the plants comes because the presence from active substances
presenting from many beneficial biological actions. In the present study five plants (C siliqua, Cr
monogyna, F excelsior, Q will coccifera and U dioica) were used in order to extract the phenolic
compounds and to test some their activities biological (antioxydant, antibacterial activity, and
interaction with proteins). The results of phytochemical study reveal the richness of these total
polyphenol plants, a content at least important of flavonoides and tanins. Several factors seem to
control interaction polyphenols proteins, namely the pH medium, the ionic force and the concentration
of polyphenols. The total antioxydant activity of the five plants was estimated by the measurement of
DPPH free radical scavenging effect and the reducing power. The results obtained indicate that in the
unit, the plants present a strong reduction but also appreciable free radical scavenging. Evaluation of
the antibacterial activity indicates plants are skilful to inhibit growth of bacteria and this inhibition
varies according to the plant and the bacterial.
Key words: polyphenols,antioxydant activity, antibacterial activity, interaction polyphenols proteins

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