PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.

0 Vaccins pour usage vétérinaire

fins scientifiques, les essais doivent être réalisés de façon à – la date de péremption,
utiliser le moins d’animaux possible et à entraîner le moins de – le nom et la concentration du conservateur antimicrobien,
douleur, souffrance, détresse ou nuisance durable possible. le cas échéant,
Les critères d’évaluation des essais dans les monographies – le nom des antibiotiques, adjuvants, aromatisants et
doivent être mis en application en tenant compte de ces stabilisants présents, le cas échéant, dans le vaccin,
considérations. Par exemple, s’il est indiqué qu’un animal
est considéré positif, infecté, etc., quand apparaissent des – dans les cas appropriés, que le vaccin est adsorbé,
signes cliniques typiques ou en cas de mort de l’animal, – la mention des substances susceptibles de provoquer
alors, dès que l’indication suffisante d’un résultat positif des réactions secondaires, des contre-indications pour
est obtenue, l’animal en question doit être euthanasié ou l’utilisation du vaccin,
recevoir un traitement approprié pour éviter toute souffrance – dans le cas des vaccins cryodesséchés :
inutile. Conformément aux Prescriptions Générales, des – le nom ou la composition et le volume du liquide de
méthodes d’essai de remplacement peuvent être utilisées pour reconstitution à ajouter,
démontrer la conformité à la monographie et l’utilisation de
tels essais est particulièrement encouragée quant elle entraîne – la période pendant laquelle le vaccin doit être utilisé
le remplacement ou la réduction de l’utilisation d’animaux ou après reconstitution.
la réduction de leur souffrance.
ESSAI 01/2017:0062
Les vaccins satisfont aux essais prescrits dans les monographies
spécifiques, y compris dans les cas appropriés, aux essais
figurant ci-après.
pH (2.2.3). Les vaccins liquides, après reconstitution dans les VACCINS POUR USAGE VÉTÉRINAIRE
cas appropriés, satisfont aux limites de pH approuvées pour la
préparation considérée.
Vaccina ad usum veterinarium
Adjuvant. Si le vaccin contient un adjuvant, sa teneur est
déterminée et il est démontré qu’elle est dans les limites Dans le cas des vaccins combinés, pour chacun des composants
acceptables par rapport à la teneur attendue (voir également faisant l’objet d’une monographie de la Pharmacopée, les
les essais de l’aluminium et du calcium ci-dessous). dispositions de cette monographie s’appliquent avec, le cas
Aluminium (2.5.13) : au maximum 1,25 mg d’aluminium échéant, les modifications indiquées dans les chapitres 5.2.6.
(Al) par dose humaine unitaire lorsqu’un adsorbant à base Evaluation de l’innocuité des vaccins et immunosérums
d’aluminium a été utilisé, sauf indication contraire. vétérinaires et 5.2.7. Evaluation de l’efficacité des vaccins et
immunosérums vétérinaires.Si un produit immunologique
Calcium (2.5.14) : au maximum 1,3 mg de calcium (Ca) par pour usage vétérinaire est destiné à un usage mineur, certains
dose humaine unitaire lorsqu’un adsorbant à base de calcium essais peuvent être exclus sous réserve de l’accord de l’Autorité
a été utilisé, sauf indication contraire. compétente(1).
Formaldéhyde libre (2.4.18) : au maximum 0,2 g/L en
formaldéhyde libre dans le lot final lorsque le formaldéhyde a 1. DÉFINITION
été utilisé pendant la préparation du vaccin, sauf indication Les vaccins pour usage vétérinaire sont des préparations
contraire. contenant des substances antigéniques destinées à induire une
Phénol (2.5.15) : au maximum 2,5 g/L dans le produit final immunité active spécifique contre des maladies provoquées
lorsque le phénol a été utilisé pendant la préparation du par des bactéries, des toxines, des virus, des champignons ou
vaccin, sauf indication contraire. des parasites. Ces vaccins, vivants ou inactivés, induisent une
immunité active, qui peut être transmise passivement par les
Eau (2.5.12) : au maximum 3,0 pour cent m/m lorsque le anticorps d’origine maternelle, envers les agents infectieux
vaccin est cryodesséché, sauf indication contraire. qu’ils contiennent, et parfois également envers des organismes
Volume extractible (2.9.17). Sauf exception justifiée et apparentés du point de vue antigénique. Ils peuvent contenir
autorisée, le vaccin satisfait aux exigences relatives au volume des microorganismes vivants ou inactivés (bactéries, virus
extractible. ou champignons), des parasites, des fractions antigéniques
ou des substances élaborées par ces organismes (toxines,
Endotoxines bactériennes. Sauf exception justifiée et
par exemple), rendues inoffensives, mais ayant conservé
autorisée, un essai des endotoxines bactériennes est effectué
tout ou partie de leurs propriétés antigéniques ; les vaccins
sur le produit final. S’il n’est pas spécifié de limite dans
peuvent également être constitués par des mélanges de ces
la monographie spécifique, la teneur en endotoxines
divers composants. Les antigènes peuvent être préparés
bactériennes, déterminée par une méthode appropriée
par la méthode dite de l’ADN recombinant. Des adjuvants
(2.6.14), est inférieure à la limite approuvée pour le produit
appropriés peuvent être incorporés afin d’améliorer les
considéré.
propriétés immunisantes des vaccins.
CONSERVATION Certains termes employés dans les monographies des vaccins
A l’abri de la lumière. Sauf indication contraire, les vaccins pour usage vétérinaire sont définis dans le chapitre 5.2.1.
sont conservés à une température de 5 ± 3 °C et les vaccins 1-1. VACCINS BACTÉRIENS ET ANATOXINES
liquides et adsorbés ne doivent pas être congelés. BACTÉRIENNES
Les vaccins et les anatoxines bactériens sont préparés à partir
ÉTIQUETAGE de cultures en milieux liquides ou solides adéquats, ou par
L’étiquette indique : d’autres procédés appropriés ; cette section ne s’applique
– le nom de la préparation, pas aux vaccins bactériens préparés en cultures cellulaires
– une référence qui identifie le lot final, ou sur animaux vivants. La souche de bactérie utilisée peut
avoir été modifiée par génie génétique. L’identité, l’activité
– la dose humaine recommandée et la voie d’administration, antigénique et la pureté de chaque culture bactérienne utilisée
– les conditions de conservation, sont soigneusement contrôlées.
(1) NOTE : Guideline on data requirements for immunological veterinary medicinal products intended for minor use or minor species/limited markets (EMA/CVMP/IWP/123243/2006,
ainsi que les révisions ultérieures de ce document).

Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes 909
Vaccins pour usage vétérinaire PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0

Les vaccins bactériens contiennent des bactéries vivantes ou 2-1. MATIÈRE PREMIÈRE
inactivées, ou leurs composants antigéniques ; ce sont des Les monographies prescrivent un ensemble de mesures qui,
préparations liquides d’opacité variable ou des préparations appliquées collectivement, apportent un degré acceptable
cryodesséchées. d’assurance quant à l’absence d’agents infectieux étrangers
Les anatoxines bactériennes sont préparées à partir de toxines, dans le produit final. Ces mesures comprennent :
par réduction à un niveau très bas ou neutralisation complète 1. la production dans le cadre d’un système de lots de semence
de leur toxicité par des moyens physiques ou chimiques ; les et d’un système de banques de cellules, dans les cas
moyens mis en oeuvre sont tels qu’ils n’altèrent pas l’activité appropriés ;
immunisante du vaccin. Les toxines sont obtenues à partir de 2. la réalisation sur les lots de semence et les banques de
souches sélectionnées de microorganismes spécifiés, cultivés cellules d’une recherche approfondie des agents étrangers ;
sur des milieux appropriés ou sont obtenues par d’autres 3. l’application d’exigences relatives aux élevages EOPS dont
méthodes appropriées, par exemple la synthèse chimique. proviennent les substrats utilisés pour la production de
Les anatoxines peuvent être : vaccins ;
– liquides, 4. la réalisation d’essais sur les substances d’origine animale,
– précipitées par l’alun ou tout autre agent approprié, qui doivent, chaque fois que possible, faire l’objet d’une
procédure d’inactivation.
– purifiées et/ou adsorbées sur du phosphate d’aluminium,
de l’hydroxyde d’aluminium, du phosphate de calcium ou Les substances d’origine animale utilisées dans la production
tout autre adsorbant spécifié dans les monographies. des vaccins pour usage vétérinaire sont conformes aux
Les anatoxines bactériennes sont des liquides limpides spécifications indiquées dans le chapitre 5.2.5. Les substances
ou légèrement opalescents. Les anatoxines adsorbées se d’autre origine satisfont aux exigences de la Pharmacopée
présentent sous forme de suspensions ou d’émulsions. (lorsqu’une monographie correspondante existe) et sont
Certaines anatoxines peuvent être cryodesséchées. préparées de manière à éviter la contamination du vaccin.
Sauf indication contraire, les dispositions et exigences 2-1-1. Substrats de production. Les cultures cellulaires
mentionnées ci-dessous pour les vaccins bactériens utilisées pour la production de vaccins à usage vétérinaire sont
s’appliquent de la même façon aux vaccins et aux anatoxines conformes aux spécifications reprises dans le chapitre 5.2.4.
bactériennes et aux produits contenant un mélange de cellules Lorsqu’il est fait référence, dans une monographie, à
bactériennes et d’anatoxine. des élevages de poulets exempts de microorganismes
1-2. VACCINS VIRAUX pathogènes spécifiés (EOPS), ces élevages sont conformes aux
spécifications reprises dans le chapitre 5.2.2.
Les vaccins viraux sont préparés par multiplication en cultures
cellulaires appropriées (5.2.4), dans des tissus, dans des Lorsque, dans le cas des vaccins inactivés, l’agent infectieux
microorganismes, dans des oeufs embryonnés ou, lorsqu’il n’y est cultivé dans des oeufs de poule embryonnés, ceux-ci
a aucune autre possibilité, dans un animal vivant, ou par tout proviennent soit d’élevages EOPS (5.2.2) soit d’élevages
autre moyen approprié. La souche de virus utilisée peut avoir non-EOPS sains (5.2.13). Il peut être nécessaire de démontrer
été modifiée par génie génétique. Ce sont des préparations l’efficacité du procédé d’inactivation envers certains
liquides ou cryodesséchées d’un ou de plusieurs virus ou de contaminants potentiels spécifiés. L’utilisation d’oeufs
sous-unités ou peptides viraux. provenant d’élevages EOPS (5.2.2) est obligatoire pour
l’établissement d’une banque de cellules primaire et pour tous
Les vaccins viraux vivants sont préparés à partir de virus de les passages d’un microorganisme jusqu’au lot de semence
virulence atténuée ou de faible virulence naturelle envers de travail compris.
l’espèce cible.
Lorsqu’il n’y a aucune alternative à l’emploi d’animaux ou des
Les vaccins inactivés sont soumis à un procédé validé tissus animaux pour la production d’un vaccin vétérinaire, ces
d’inactivation du virus et peuvent être purifiés et concentrés. animaux seront exempts d’agents pathogènes spécifiés, dont la
1-3. VACCINS UTILISANT DES VECTEURS nature dépend de l’espèce source et de l’espèce cible du vaccin.
Les vaccins utilisant des vecteurs sont des préparations liquides 2-1-2. Milieux utilisés pour la préparation des cultures
ou cryodesséchées d’un ou de plusieurs microorganismes d’ensemencement et pour la production. Les milieux utilisés
vivants (bactéries, virus ou champignons), non ou peu pour la préparation des cultures d’ensemencement et pour la
pathogènes, dans lesquels ont été insérés un ou plusieurs production sont préparés selon une formulation normalisée.
gènes exprimant des antigènes qui suscitent une réponse La composition des milieux est décrite dans le procédé de
immunitaire protectrice vis-à-vis d’autres microorganismes. fabrication. La composition qualitative et quantitative de tous
les milieux utilisés doit être enregistrée. Lorsque les milieux
2. PRODUCTION ou ingrédients sont revendiqués comme propriété industrielle,
Dispositions générales. La production est conçue de manière ceci est indiqué et une description appropriée est enregistrée.
à fournir un produit fini conforme aux exigences approuvées. Pour ce qui est des substances d’origine animale, l’espèce
Cette conformité est démontrée sur des lots lors des études source et le pays d’origine sont spécifiés, et ils satisfont aux
d’innocuité et d’efficacité réalisées en cours de développement, critères indiqués dans la méthode 5.2.5. Les méthodes utilisées
et grâce à la stratégie de contrôle appliquée. Les essais à pour la préparation des milieux, procédés de stérilisation
mettre en œuvre sont précisés ci-après, ainsi que dans les compris, sont consignés.
monographies spécifiques. Conformément aux Prescriptions Lors de la fabrication du produit, l’addition d’antibiotiques
générales, il n’est pas obligatoire pour un fabricant d’effectuer est normalement limitée aux liquides de culture cellulaire
l’ensemble des essais de la monographie pour évaluer la et autres milieux, aux inoculums injectés à des oeufs et aux
conformité à la Pharmacopée avant libération d’un produit. produits récoltés à partir de tissus et d’oeufs embryonnés.
Les essais in vivo utilisés en routine peuvent donc être, à terme,
remplacés conformément aux principes de la Convention 2-1-3. Lots de semence
européenne sur la protection des animaux vertébrés utilisés 2-1-3-1. Lots de semence bactériens
à des fins expérimentales ou à d’autres fins scientifiques, 2-1-3-1-1. Exigences générales. Les bactéries utilisées pour la
si le profil du produit est bien défini par un ensemble de production du vaccin sont caractérisées en termes de genre
paramètres, incluant la teneur en antigène et la qualité de et d’espèce (et le cas échéant de variété). Chaque fois qu’il
l’antigène, établis en vue de vérifier si le procédé de fabrication est possible, les bactéries utilisées pour la production sont
produit de façon reproductible des lots finals équivalents à un cultivées dans un système de lot de semence. Chaque lot de
lot final répondant aux critères de la Pharmacopée. semence primaire est soumis aux essais décrits ci-dessous.

910 Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde)
PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0 Vaccins pour usage vétérinaire

Un registre de l’origine des bactéries, de la date d’isolement, Des préparations d’anticorps monoclonaux ou polyclonaux
de l’historique des passages (y compris les procédés de contenant des taux élevés d’anticorps dirigés contre le virus
purification et de caractérisation) et des conditions de de semence sont préparées, sous forme de lots, à l’aide d’un
conservation est tenu pour chaque lot de semence primaire. antigène ne dérivant d’aucun des passages de l’isolat de virus
Un code spécifique d’identification est attribué à chaque lot à partir duquel a été préparé le lot de semence primaire.
de semence primaire. Chaque lot de sérum est maintenu à 56 °C pendant 30 min
2-1-3-1-2. Cultures. Le nombre minimal et le nombre afin d’inactiver le complément. Pour chaque lot, l’absence
maximal de subcultures effectuées pour chaque lot de semence d’anticorps dirigés contre les contaminants potentiels du
avant l’étape de production sont spécifiés. Les méthodes virus de semence est établie, de même que l’absence de toute
utilisées pour la préparation des cultures de semence et action inhibitrice non spécifique sur la capacité des virus
celle des suspensions d’ensemencement, les techniques à infecter des cellules (ou, le cas échéant, des oeufs) et à se
d’inoculation des bactéries, le titre et la concentration des multiplier en leur sein. Si un tel sérum ne peut être obtenu,
inoculums et des milieux utilisés sont consignés. Il sera d’autres méthodes sont utilisées pour neutraliser ou éliminer
démontré que les subcultures réalisées ne modifient pas les spécifiquement le virus vaccinal.
caractéristiques de la semence (par exemple, dissociation ou Si le virus du lot de semence est susceptible d’affecter la
propriétés antigéniques). Les conditions de conservation de conduite et la sensibilité de l’essai des virus étrangers, un
chaque lot de semence sont consignées. échantillon du lot de semence primaire est traité avec une
quantité aussi faible que possible de l’anticorps monoclonal ou
2-1-3-1-3. Identité et pureté. Il est établi, pour chaque lot de polyclonal, de façon à neutraliser (autant que possible) ou à
semence primaire, qu’il contient uniquement des bactéries de éliminer le virus vaccinal. Le mélange final virus-sérum aura,
l’espèce et de la souche indiquées. Une description succincte si possible, un titre en virus au moins équivalent à 10 doses
de la méthode employée pour identifier chaque souche de vaccin par 0,1 mL dans le cas des vaccins aviaires et par
d’après ses caractéristiques biochimiques, sérologiques et millilitre dans le cas d’autres vaccins. Dans le cas de vaccins
morphologiques, et la distinguer autant que possible des aviaires, les recherches à effectuer sur les lots de semence
souches apparentées, est enregistrée, ainsi que les méthodes de figurent au chapitre 2.6.24. Dans le cas de vaccins pour
détermination de la pureté de la souche. Si le lot de semence mammifères, une recherche des agents étrangers est effectuée
s’avère contenir des organismes vivants, quels qu’ils soient, comme suit sur le lot de semence ou le mélange de lot de
autres que les bactéries de l’espèce et de la souche indiquées, il semence et d’immunosérum.
est impropre à la production de vaccins.
Le mélange est inoculé à des cultures, de surface au moins
2-1-3-2. Lots de semence de virus égale à 70 cm2, de cellules des types requis. L’inoculation peut
2-1-3-2-1. Exigences générales. Les virus utilisés pour avoir lieu à n’importe quel stade de la croissance correspondant
la production sont multipliés selon un système de lot de à une confluence allant jusqu’à 70 pour cent. Au moins
semence. Chaque lot de semence primaire est soumis aux 1 tapis de chaque type cellulaire est conservé comme témoin.
essais décrits ci-dessous. Un registre de l’origine, la date de Les cultures font l’objet de contrôles quotidiens pendant
l’isolement, l’historique des passages (y compris les procédés une semaine. Elles sont ensuite congelées et décongelées à
de purification et de caractérisation) et des conditions de 3 reprises, puis centrifugées de façon à éliminer les débris
conservation est tenu pour chaque lot de semence. Un de cellules et réinoculées à des cellules du même type que
code d’identification est attribué à chaque lot de semence. précédemment. Cette opération est répétée à 2 reprises.
Normalement, le virus utilisé pour la production d’un vaccin Le nombre de cellules obtenu au dernier passage, dans des
n’aura pas subi plus de 5 passages à partir du lot de semence récipients appropriés, devra être suffisant pour la réalisation
primaire. Sauf indication contraire, les essais portant sur le lot des essais ci-dessous.
de semence primaire qui sont décrits ci-dessous sont conduits Une recherche des agents cytopathogènes et hémadsorbants
sur des organismes n’ayant pas subi, en début d’essai, plus de est effectuée selon les méthodes décrites dans le chapitre
5 passages depuis le lot de semence primaire. 5.2.4. Des techniques telles que l’immunofluorescence sont
Lorsque le lot de semence primaire de virus se présente sous la employées pour la détection d’agents de contamination
forme d’une banque de cellules primaire porteuse du virus, les spécifiques dans les cultures cellulaires. Le lot de semence
essais suivants sont effectués sur un volume approprié de virus primaire est inoculé à :
obtenu par lyse des cellules de la banque de cellules primaire. – des cellules primaires de l’espèce dont provient le virus,
Lorsque les essais appropriés ont été effectués sur des cellules – des cellules sensibles aux virus pathogènes pour les espèces
lysées pour valider la banque de cellules primaire, il n’est pas auxquelles le vaccin est destiné,
nécessaire de les répéter.
– des cellules sensibles aux pestivirus.
2-1-3-2-2. Multiplication. La multiplication du virus au
Si le lot de semence primaire s’avère contenir des organismes
stade du lot de semence primaire et pour tous les passages
vivants de quelque sorte que ce soit, autres que le virus
ultérieurs est effectuée en culture cellulaire, dans des oeufs
appartenant à l’espèce et à la souche indiquées, ou des
embryonnés ou chez des animaux dont il a été établi qu’ils
antigènes viraux étrangers, il est impropre à la production de
sont appropriés à la production de vaccin (voir plus haut). Si
vaccins.
des substances d’origine animale sont utilisées, elles satisfont
aux spécifications prescrites dans le chapitre 5.2.5. 2-2. CHOIX DE LA COMPOSITION VACCINALE ET CHOIX
DE LA SOUCHE VACCINALE
2-1-3-2-3. Identification. Une méthode permettant d’identifier
la souche vaccinale et de la distinguer autant que possible des Lors du choix de la composition vaccinale et du choix de
souches apparentées est utilisée. la souche, parmi les éléments importants à évaluer figurent
l’innocuité, l’efficacité et la stabilité.
2-1-3-2-4. Contamination bactérienne et fongique. Le lot de
semence primaire satisfait à l’essai de stérilité (2.6.1). 2-2-1. Etudes d’innocuité et d’efficacité réalisées en
cours de développement. Les prescriptions décrites par les
2-1-3-2-5. Mycoplasmes (2.6.7). Le lot de semence primaire méthodes 5.2.6 et 5.2.7 concernent respectivement l’évaluation
satisfait à l’essai des mycoplasmes (méthode par culture et de l’innocuité et l’évaluation de l’efficacité ; ces indications
méthode d’épifluorescence en culture cellulaire). peuvent être explicitées ou complétées par les exigences des
2-1-3-2-6. Absence de virus étrangers. Les monographies monographies spécifiques.
peuvent contenir des spécifications relatives à l’absence 2-2-1-1. Activité et pouvoir immunogène. Les essais intitulés
d’agents étrangers ; dans le cas contraire, ce sont les Activité et Pouvoir immunogène dans les monographies ont
spécifications ci-après qui s’appliquent. un double objectif :

Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes 911
Vaccins pour usage vétérinaire PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0

– la section Activité sert à établir, par un essai bien contrôlé conservateurs antimicrobiens ne sont pas incorporés dans les
réalisé dans des conditions expérimentales, l’activité préparations cryodesséchées ; cependant, en fonction de la
minimale acceptable d’un lot de vaccin, qui doit être période maximale d’utilisation recommandée du vaccin après
garantie pendant toute la durée de validité, reconstitution, ils peuvent être incorporés dans le diluant
– les essais réalisés dans des conditions expérimentales des préparations multidoses cryodesséchées. Sauf exception
contrôlées font normalement partie de la démonstration justifiée et autorisée, il n’est pas acceptable d’incorporer un
globale de l’efficacité du vaccin (voir chapitre 5.2.7) ; la conservateur antimicrobien dans les préparations liquides
méthode mentionnée dans l’essai Pouvoir immunogène unidoses mais l’ajout d’un conservateur antimicrobien peut
(en règle générale, la section Activité renvoie à cet essai) être acceptable, par exemple lorsque le même vaccin est réparti
convient pour une part à ce type de contrôle. en récipients unidoses et multidoses et lorsqu’il est utilisé
pour des espèces qui ne sont pas destinées à la production
2-2-1-2. Informations liées à la réalisation des études alimentaire. Dans le cas de préparations multidoses liquides,
d’innocuité et d’efficacité. la nécessité d’un conservateur antimicrobien est évaluée,
Lors du développement d’un vaccin, l’innocuité et le pouvoir compte tenu de la possibilité de contamination pendant
immunogène sont démontrés pour chacune des voies et des l’utilisation du vaccin et de la période maximale d’utilisation
méthodes d’administration qui seront recommandées. Les recommandée du récipient entamé.
principales voies d’administration utilisées sont les suivantes, Au cours des études de développement, l’efficacité du
mais cette liste n’est pas exhaustive : conservateur antimicrobien pendant toute la période de
– intramusculaire, validité sera démontrée de manière à satisfaire l’Autorité
– sous-cutanée, compétente.
– intraveineuse, L’efficacité du conservateur antimicrobien est évaluée comme
il est décrit au chapitre 5.1.3 et, en outre, des échantillons
– ophtalmique, sont prélevés à intervalles appropriés pour contrôler les
– orale, effets du conservateur antimicrobien sur la durée proposée
– nasale, de conservation après ouverture. Dans des cas justifiés,
lorsque ni les critères A, ni les critères B ne peuvent être
– transfixion dans les pattes,
respectés, les critères suivants s’appliquent aux vaccins à usage
– transfixion, vétérinaire : bactéries, pas d’augmentation de 24 h à 7 jours,
– intradermique, réduction de 3 log10 à 14 jours, pas d’augmentation à 28 jours ;
– intrapéritonéal, champignons, pas d’augmentation à 14 jours ni à 28 jours.
– in ovo. L’addition d’antibiotiques en tant que conservateurs
antimicrobiens n’est généralement pas acceptable.
Les principales méthodes d’administration utilisées sont les
suivantes, mais cette liste n’est pas exhaustive : 2-2-3. Stabilité. La durée de validité proposée sera justifiée
par les résultats d’études de stabilité, qui comprennent des
– injection, déterminations soit du titre en virus, soit du nombre de
– eau de boisson, bactéries, soit de l’activité, effectuées à intervalles réguliers,
– pulvérisation, jusqu’à 3 mois au-delà de la date de péremption, sur au moins
3 lots successifs et représentatifs du vaccin conservés dans les
– collyre, conditions recommandées et, le cas échéant, des mesures de la
– scarification, teneur en humidité (dans le cas de produits cryodesséchés),
– implantation, des essais physiques sur les adjuvants, des essais chimiques
sur les constituants des adjuvants et les conservateurs, et des
– immersion.
mesures de pH.
Il est parfois spécifié dans les monographies qu’un essai donné La stabilité du vaccin reconstitué, dans les cas appropriés, est
est à effectuer pour chaque catégorie d’animaux de l’espèce évaluée par rapport au mode d’emploi recommandé.
cible pour lequel le produit est recommandé ou peut être
recommandé. Les principales catégories à prendre en compte La variation des résultats obtenus lors de l’étude de stabilité est
sont les suivantes, mais cette liste n’est pas exhaustive : prise en compte pour définir la formulation et les spécifications
de libération appropriées afin d’assurer la conformité du
– Mammifères : produit jusqu’à la date de péremption revendiquée.
– animaux gestants/animaux non gestants,
2-2-4. Formulation. La teneur minimale en antigène, le
– animaux principalement destinés à la reproduc- titre minimal en virus ou le nombre minimal de bactéries
tion/animaux principalement destinés à la production acceptable du point de vue de l’efficacité (donnant des résultats
alimentaire, satisfaisants à l’essai d’activité et aux autres études d’efficacité)
– animaux de l’âge (ou de la taille) minimal(e) est établi lors des études de développement. La formulation
recommandé(e) pour la vaccination. de l’antigène, la formulation de l’adjuvant le cas échéant, et
– Espèces aviaires : les spécifications de libération sont établies sur la base de
cette valeur minimale et sur la base des résultats des études
– oiseaux principalement destinés à la production de stabilité.
d’oeufs/oiseaux principalement destinés à la production
de viande, Une teneur maximale en antigène, un titre maximal en virus
ou un nombre maximal de bactéries acceptable du point de
– oiseaux avant ponte/oiseaux après le début de la ponte. vue de l’innocuité est établi lors des études de développement.
– Poissons : Dans le cas de vaccins vivants, ce titre est aussi considéré
– poissons reproducteurs/poissons essentiellement comme le maximum acceptable lors de la libération de chaque
destinés à la production alimentaire. lot de vaccin.
2-2-2. Conservateurs antimicrobiens. Les conservateurs 2-3. PRÉPARATION DU VACCIN
antimicrobiens sont employés pour empêcher l’altération Les méthodes de préparation, qui varient selon le type de
de la préparation ou éviter des effets indésirables suite à vaccin considéré, sont propres à assurer le maintien de
une contamination microbienne du vaccin se produisant l’intégrité et le pouvoir immunogène de l’antigène, à exclure
pendant son utilisation, qui ne doit normalement pas toute contamination par des agents étrangers et à assurer une
dépasser 10 h après que le récipient a été entamé. Les production de lots de vaccins de qualité reproductible.

912 Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde)
PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0 Vaccins pour usage vétérinaire

Pour chaque produit, des contrôles appropriés effectués en 2-3-2-3-3. Vaccins viraux. La méthode d’essai choisie
cours de fabrication et sur les produits finis sont mis en place sera appropriée au virus considéré et comprendra au
pour vérifier le procédé de production et la qualité du produit moins 2 passages sur cultures cellulaires, dans des oeufs
d’un lot à l’autre. Les résultats obtenus se situent dans les embryonnés ou, s’il n’y a aucune autre méthode de sensibilité
limites approuvées pour le produit considéré. appropriée, chez des animaux. La quantité de cellules, d’oeufs
2-3-1. Multiplication et récolte des antigènes bactériens et ou d’animaux utilisés sera suffisante pour que l’essai soit
viraux. Chaque souche d’un vaccin multivalent est cultivée suffisamment sensible. Pour les essais sur cultures cellulaires,
et récoltée séparément. un tapis de 150 cm2 au moins de cultures cellulaires sont
inoculées avec 1,0 mL de récolte inactivée. Aucun virus ou
Les semences de travail sont multipliées sur des autre microorganisme vivant n’est détecté.
milieux/substrats de production appropriés. Les conditions
de ces étapes de propagation sont décrites et surveillées 2-3-3. Vrac final et lot final. Le vrac final est préparé par
en enregistrant des paramètres appropriés, comme la mélange d’un ou de plusieurs lots d’antigène, qui satisfont
température, le pH, la durée, la turbidité, la saturation en à tous les essais pertinents, avec des substances auxiliaires
oxygène. Les résultats se situent dans les limites approuvées telles que des adjuvants, des stabilisants, des conservateurs
pour le produit considéré. antimicrobiens et des diluants.
En cours de production et si cela est possible, le taux de Le mélange du vaccin est effectué selon une formulation
croissance est surveillé par des méthodes appropriées et les définie.
valeurs obtenues sont enregistrées et se situent dans les limites Sauf indication contraire dans la monographie spécifique
approuvées et définies pour le produit considéré. L’antigène ou exception justifiée et autorisée, le vrac final est réparti
peut ensuite être inactivé et/ou purifié et/ou concentré. aseptiquement, avec ou sans cryodessiccation, dans des
2-3-2. Inactivation. Les vaccins inactivés sont soumis récipients stériles à fermeture inviolable. Ces récipients sont
à un procédé validé d’inactivation. L’essai de cinétique ensuite fermés de façon à empêcher toute contamination et
d’inactivation décrit ci-dessous est effectué une seule fois pour constituent le lot final.
un procédé de production donné. Les autres essais décrits
2-4. ESSAIS DU FABRICANT
ci-dessous sont à effectuer à chaque cycle de production. Lors
des essais d’inactivation, il est indispensable de tenir compte 2-4-1. Teneur en antigène. La formulation du vaccin est
du fait que dans les conditions de fabrication, les organismes basée, dans la mesure du possible, sur la teneur en antigène
peuvent être protégés physiquement de l’agent d’inactivation. déterminée sur la récolte avant ou après l’inactivation et/ou en
2-3-2-1. Cinétique d’inactivation. Il sera démontré que l’agent aval du procédé de fabrication le cas échéant.
et le procédé d’inactivation employés assurent effectivement 2-4-2. Activité du lot. Les méthodes d’essai décrites sous
l’inactivation du microorganisme vaccinal dans les conditions Activité ou Pouvoir immunogène ne sont généralement pas
de fabrication. Des données appropriées seront établies quant à adaptées aux contrôles de routine des lots de vaccin.
la cinétique d’inactivation. Normalement, le temps nécessaire
à l’inactivation ne dépassera pas 67 pour cent de la durée de Si l’essai décrit sous Activité n’est pas utilisé pour les contrôles
l’étape d’inactivation. Le titre maximal en microorganisme de routine, un essai d’activité à effectuer sur chaque lot
vaccinal pouvant être inactivé par la méthode choisie est établi est établi lors du développement. L’objectif de cet essai est
sur la base des données de cinétique d’inactivation. d’assurer que chaque lot du vaccin satisferait à l’essai décrit
sous Activité ou Pouvoir immunogène si celui-ci lui était
2-3-2-2. Résidus d’agents d’inactivation. Des essais sont appliqué. Les critères d’acceptation de l’essai d’activité effectué
effectués permettant de démontrer que l’agent d’inactivation sur chaque lot sont par conséquent établis par corrélation avec
est éliminé soit totalement soit jusqu’à un taux résiduel l’essai décrit sous Activité. Lorsqu’un essai d’activité effectué
acceptable. sur chaque lot est décrit dans une monographie, il est donné
Si l’agent d’inactivation employé est un dérivé de l’aziridine, il à titre d’exemple de méthode considérée comme appropriée
est possible de le neutraliser par le thiosulfate puis de mettre après établissement de la corrélation avec l’essai d’activité.
en évidence la présence de thiosulfate résiduel dans la récolte D’autres modèles d’essai peuvent également être utilisés.
inactivée après l’étape d’inactivation. Pour les vaccins vivants, la détermination du titre en virus
Si l’agent d’inactivation employé est du formaldéhyde, un ou du nombre de bactéries constitue généralement un essai
essai de détection du formaldéhyde libre est effectué comme approprié d’activité du lot.
prescrit sous 3. Essais effectués sur chaque lot.
Pour les vaccins inactivés, le développement de méthodes in
vitro est recommandé, sous réserve que :
2-3-2-3. Bactérie/virus vivant(e) résiduel(le) et/ou essai de – des paramètres clés de contrôle en cours de production
détoxication. Un essai permettant de confirmer l’inactivation soient définis et documentés,
et/ou la détoxication est effectué immédiatement après l’étape
d’inactivation et/ou de détoxication et, dans les cas appropriés, – des essais de contrôle en cours de production (notamment
après la neutralisation ou l’élimination des résidus de l’agent la quantification de l’antigène après inactivation et/ou
d’inactivation ou de détoxication. La validation de l’essai concentration, le cas échéant) et la formulation ciblée du
des virus/bactéries vivant(e)s résiduel(le)s ou de l’essai de produit final aient été réalisés.
détoxication porte principalement sur le niveau de détection Teneur en antigène. La teneur en antigène approprié par
des virus/bactéries vivant(e)s ou des toxines. dose, déterminée par une méthode appropriée, n’est pas
2-3-2-3-1. Vaccins bactériens. La méthode d’essai choisie significativement inférieure à la teneur d’un lot de vaccin ayant
sera appropriée aux bactéries considérées et comprendra donné des résultats satisfaisants à l’essai décrit sous Activité.
au moins 2 passages sur les milieux utilisés en production Adjuvant. Si la détermination de la teneur en antigène est
ou, si la production est effectuée sur milieu solide, dans réalisée et si le vaccin contient un adjuvant, l’identité de
un milieu liquide approprié ou sur les milieux prescrits celui-ci est vérifiée à l’aide de méthodes chimiques appropriées
dans les monographies. Le produit est conforme si aucun et l’adjuvant est soumis aux contrôles décrits dans la section
microorganisme vivant n’est détecté. 3. Essais effectués sur chaque lot. La qualité et la quantité de
2-3-2-3-2. Anatoxines bactériennes. L’essai choisi sera l’adjuvant ne diffèrent pas significativement de celles observées
approprié à la toxine ou aux toxines présentes et le plus sur un lot de vaccin ayant donné des résultats satisfaisants à
sensible des essais disponibles. l’essai décrit sous Activité.

Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes 913
Vaccins pour usage vétérinaire PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0

2-5. STABILITÉ EN COURS DE PRODUCTION 3-1. Identification. L’antigène est identifié par des méthodes
Pendant la production de vaccins, les produits intermédiaires appropriées, comme des techniques d’amplification des
obtenus à différents stades peuvent être conservés. Les acides nucléiques (2.6.21). Pour les vaccins inactivés, l’essai
conditions et la durée de conservation prévues sont définies d’identification peut être combiné à l’essai d’activité effectué
au vu des données de stabilité. sur chaque lot.
3-2. Essais physiques. Les vaccins à adjuvant huileux sont
soumis à un essai de viscosité, par une méthode appropriée ;
la viscosité doit se situer dans les limites approuvées pour le
produit. La stabilité de l’émulsion sera démontrée.
3. ESSAIS EFFECTUÉS SUR CHAQUE LOT
3-3. Essais chimiques. Il est démontré par des essais
Les monographies spécifiques indiquent également les essais à appropriés que la concentration de certaines substances, telles
effectuer pour chaque vaccin considéré. que l’aluminium et les conservateurs antimicrobiens, est
conforme aux limites définies pour le produit.
Certains essais peuvent être effectués sur le vrac final plutôt
que sur le lot final ou les lots finals qui en sont dérivés ; 3-4. pH. Le pH des produits liquides et des diluants est mesuré
parmi ces essais figurent la détermination des teneurs en si possible ; il est démontré que les mesures sont conformes
conservateur antimicrobien et en formaldéhyde libre, et la aux limites de pH définies pour le produit.
détermination d’activité des vaccins inactivés. 3-5. Eau. Dans les cas appropriés, le procédé de
cryodessiccation est vérifié par mesure de la teneur en eau qui
Dans certaines circonstances (modifications significatives doit se situer dans les limites approuvées pour le produit.
du procédé de fabrication, signalement d’effets indésirables
inattendus observés sur le terrain ou signalement d’un 3-6. Formaldéhyde (2.4.18 ; utilisez le Procédé B si du
lot final non conforme aux données initialement fournies métabisulfite de sodium a été ajouté au vaccin pendant la
lors de l’enregistrement), il peut être nécessaire d’effectuer préparation pour neutraliser un excès de formaldéhyde).
ponctuellement d’autres essais, y compris des essais sur Les préparations traitées par le formaldéhyde contiennent
animaux ; ces essais sont effectués à la demande de l’Autorité au maximum 0,5 g/L de formaldéhyde libre, sauf s’il a été
compétente ou avec son accord. Pour les essais d’innocuité, démontré qu’une teneur plus élevée est bien tolérée.
un ou plusieurs essais parmi ceux décrits dans le chapitre 5.2.6 3-7. Phénol (2.5.15). Si le vaccin contient du phénol, sa teneur
peuvent être effectués. n’est pas supérieure à 5 g/L.
Seul un lot final qui est conforme à chacune des spécifications 3-8. Contamination bactérienne et fongique. Le vaccin
prescrites ci-dessous, complétées ou modifiées par des satisfait à l’essai de stérilité (2.6.1). Si le volume de liquide
spécifications prescrites dans les monographies spécifiques contenu dans le récipient est supérieur à 100 mL, il est
concernées, peut être libéré. recommandé d’utiliser, si possible, la technique de filtration
sur membrane. Si la technique de filtration sur membrane
Essais sur animaux. Conformément aux dispositions de ne peut pas être employée, la méthode d’inoculation directe
la Convention européenne sur la protection des animaux peut être utilisée. Lorsque le volume de liquide contenu dans
vertébrés utilisés à des fins expérimentales ou à d’autres fins chaque récipient est d’au moins 20 mL, la prise d’essai à
scientifiques, les essais doivent être réalisés de façon à utiliser utiliser pour chaque milieu est de 10 pour cent de ce volume
le moins d’animaux possible et à entraîner le moins de douleur, au minimum, mais de 5 mL au maximum. Le nombre d’unités
souffrance, détresse ou nuisance durable possible. Les critères à examiner (2.6.1) est de 1 pour cent du lot, avec un minimum
d’évaluation des essais dans les monographies doivent être de 4 et un maximum de 10.
mis en application en tenant compte de ces considérations.
Par exemple, s’il est indiqué qu’un animal est considéré Dans le cas de vaccins bactériens vivants et dans le cas des
comme positif, infecté, etc. quand apparaissent des signes vaccins fongiques vivants, l’absence de microorganismes
cliniques typiques, alors, dès qu’il apparaît clairement que le autres que la souche vaccinale est démontrée par des méthodes
résultat ne sera pas affecté, il convient d’euthanasier l’animal appropriées telles que l’examen microscopique et l’inoculation
en question ou de lui administrer un traitement approprié de milieux de culture appropriés.
pour lui éviter toute souffrance inutile. Conformément aux Dans le cas de vaccins viraux vivants aviaires congelés
Prescriptions générales, il est admis d’utiliser des méthodes ou cryodesséchés produits sur des oeufs embryonnés, et
d’essai de remplacement pour démontrer la conformité à la administrés uniquement par voie non parentérale, l’essai
monographie, et l’utilisation de tels essais est particulièrement de stérilité est généralement remplacé par une spécification
encouragée quand elle entraîne le remplacement ou la d’absence de microorganismes pathogènes et une limite de
réduction de l’utilisation d’animaux ou la réduction de leur 1 microorganisme non pathogène par dose de vaccin.
souffrance.
3-9. Agents étrangers. Les vaccins viraux vivants aviaires
Compte tenu des systèmes qualité en place, de l’évolution satisfont aux essais des agents étrangers dans les lots de
des connaissances et de la compréhension scientifiques des produit final (2.6.25).
produits, des procédés de fabrication et de leurs contrôles,
le choix des essais à effectuer peut être reconsidérée lors Les vaccins viraux vivants destinés à des mammifères sont
de l’évaluation de la conformité aux monographies de la soumis à une recherche de virus étrangers selon une méthode
Pharmacopée, conformément aux Prescriptions générales. appropriée.
Au cas par cas, sous réserve de l’autorisation de l’Autorité En cas de doute, les essais destinés au lot de semence d’un
compétente, la nécessité et le choix de certains essais sur le vaccin vivant peuvent également être appliqués au produit
produit final peuvent être reconsidérés si des essais réalisés final. Si un agent étranger est détecté lors d’un tel essai, le
en cours de fabrication donnent une garantie au moins vaccin ne satisfait pas à la monographie.
équivalente de la conformité du lot (par rapport aux essais
effectués sur le lot final) ou si d’autres essais validés par 3-10. Bactérie/virus vivant(e) résiduel(le) et/ou essai
rapport à l’essai de la Pharmacopée ont été effectués. de détoxication. Dans le cas de vaccins inactivés et dans
le cas d’anatoxines bactériennes, les essais décrits dans la
Dans les essais de contrôle qualité, si des oeufs de poule, des section 2-3-2-3 sont effectués. Si les substances auxiliaires
poulets ou des cultures de cellules de poulets sont employés, interfèrent avec l’essai d’inactivation et/ou de détoxication,
ils proviennent d’un élevage EOPS (5.2.2). l’essai est effectué pendant la préparation du vrac final, après

914 Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde)
PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 9.0 Vaccins pour usage vétérinaire

mélange des différents lots d’antigènes mais avant addition de La date de péremption est alors calculée à partir de la
substances auxiliaires ; l’essai d’inactivation ou de détoxication date à laquelle le vaccin a été conservé dans les conditions
peut alors ne pas être effectué sur le vrac final et le lot final. mentionnées sur l’étiquette.
L’essai des bactéries/virus vivant(e)s résiduel(le)s peut ne pas La date de péremption s’applique aux vaccins conservés dans
être effectué préalablement à la libération des lots sous réserve les conditions prescrites.
que :
1. un titrage ait été effectué sur chaque récolte avant 5. ÉTIQUETAGE
l’inactivation et que le titre obtenu ne soit pas supérieur L’étiquette indique :
au titre maximal établi sur la base des études de cinétique – que le vaccin est à usage vétérinaire,
d’inactivation,
– le volume de préparation et le nombre de doses contenus
2. une sensibilité appropriée de l’essai des bactéries/virus dans le récipient,
vivant(e)s résiduel(le)s ait été démontrée,
– la voie d’administration,
3. l’essai des bactéries/virus vivant(e)s résiduel(le)s soit
effectué sur chaque récolte avec des résultats satisfaisants. – le ou les types de bactéries (et dans les cas appropriés, les
composants antigéniques) ou de virus utilisés et, pour les
S’il existe un risque de réversion à la toxicité, l’essai de vaccins vivants, le nombre minimal et maximal de bactéries
détoxication effectué au stade le plus avancé du procédé de vivantes ou le titre minimal et maximal en virus,
production où la sensibilité de l’essai n’est pas compromise
(par exemple après le mélange des différents lots d’antigènes, – dans le cas des vaccins inactivés, l’activité minimale en
mais avant l’addition de substances auxiliaires) est important Unités Internationales lorsqu’elles existent,
pour démontrer l’absence de réversion à la toxicité. – dans les cas appropriés, le nom de tout conservateur
3-11. Mycoplasmes (2.6.7). Les vaccins viraux vivants antimicrobien ou autre substance ajoutés au vaccin,
satisfont à l’essai des mycoplasmes (méthode par culture). – le nom de toute substance susceptible de provoquer des
3-12. Activité. Le vaccin satisfait aux exigences du Pouvoir réactions indésirables,
immunogène (voir section 2-2-1-1) lorsqu’il est administré – pour les vaccins cryodesséchés :
par une voie et une méthode recommandées. – le nom (ou la composition) et le volume du liquide à
ajouter pour reconstituer le vaccin,
4. CONSERVATION
– la période pendant laquelle le vaccin peut être utilisé
A l’abri de la lumière et à une température de 5 ± 3 °C,
après reconstitution,
sauf indication contraire. Sauf indication contraire, les
préparations liquides ne doivent pas être congelées. – pour les vaccins à adjuvant huileux, le fait qu’en cas
Date de péremption. Sauf indication contraire, la date de d’injection accidentelle du vaccin à l’homme, une
péremption est calculée à partir du début de l’essai de titrage intervention médicale d’urgence est nécessaire,
du virus ou du dénombrement bactérien (pour les vaccins – l’espèce animale à laquelle le vaccin est destiné,
vivants) ou au début de l’essai d’activité (pour les autres – les indications du vaccin,
vaccins). Pour les vaccins combinés, la date de péremption – le mode d’emploi,
correspond à celle du composant qui sera périmé en premier.
Pour les vaccins conservés par le fabricant à une température – les contre-indications à l’utilisation du vaccin, y compris
inférieure à la température de conservation prescrite au tout avertissement nécessaire concernant les dangers de
niveau de l’étiquetage, la stabilité sur l’ensemble de la période l’administration d’une surdose,
de conservation a été démontrée par une étude appropriée. – les doses recommandées pour les différentes espèces.

Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes 915