Model ?
On travaille sur géne connu ou pas, on connait pas tt les génes
responsable de maladies (monogéniques), donc on cherche les gens
responsables d’une multitudes, on cherche le gêne par faire des mutations
ou autres outils.
Now, ou le géné est active ? intrac ou extra et quand (ex pendant dev de
la c) il se passe quoi si y a pas assez d’expression ? ex tuer la c ? ou
développe une tumeur ?
Lignés c ?
Ont travaille sur des c immortalisé (pas nos c primaires on le fait mais y a
des limites donc on trouve des info limites).
Etudier une protéine dans une c ? on en fait pas dans ces cours
Comment une protéine fonctionne (gêne)
On fait avec la microscopie électronique, puis on color la protéine
par TFP ou protéine de fusion.
LES MODES DIFF DONNE DES RESULATT DIFF
Comment et pq on fait des modification sur des protéines ?
Ex production de l’insuline , produire AC , SUJET ORAL
Etudier un modèle dans un organisme ? faut définir le but de l’étude,
puis on commence avec ….
Maladie : multiple endocrine neiplasia type 1 : gêne est découvert
10 plus tard de recherche
Fait des cancers endocrines, maladie monogênique , c’est un gêne
unique qu’on trouve pas en copie
On a trouvé des organismes qui possède ce géne qui peuvent servir
comme modèle de recherche, on commence de manière simple donc
un organisme eucaryote (levure qui se reproduit sans modification
donc immortel).
- Nemostella vectensis : notre gêne est conservé dans cet animal
- caenorhabditis elegans (on connait chaque c sur cette
organisme) on a utilisé cet verre sur pls d’étude
- escargot « aplysia » qui a des neurones qu’on peut manipuler on
a étudier la mémoire courte et longue sur cet animal supprimer le
gêne de ment1 annule le fonctionnement des neurones et aussi
les patients ont des comportements pas adapté et on croit que
les neurones sont touchés
- grenouille :
- Mouche : ORAL
- Poisson : PARFAIT , mais présente aussi cancer de TAIL ‘singe ?
- Souris : gêne facilement modifiable, gêne comparable à nos
gênes ya qua 1 aa qui se distingue ; supprimer le gêne (ou
éteindre une copie de gêne cause même maladie chez nous, mais
elle est aussi important dans le dvp embryonnaire)
- Poulet : modèle important pour faire des étude sur fonctionne des
protéine (ex pour la pharmacie)
- Plante : ex la stabilité de l’ADN chez nous ou maïs pour les
éléments mobiles, la séquençage du blé est plus compliqué que
le notre
ARN interférence ; (ARN i est introduit dans le plasmide et on l’a
injecté sur une plante ce qui a fait éteindre l’expression des
gênes.
1) On veut découvrir des nouveaux gênes
Généralement les maladies préviennent de gênes qui sont
supprimés, pas des gênes qui ne sont pas assez produits, on
casse le gêne par knokout ou encore l’arrêter ; crisspr cas 9
B-gala
8 sep
Cours 2
Modification de protéine :
Les deux technologies, Zn finger et TALEN, sont des outils de
modification du génome utilisés en biologie moléculaire. Cependant, ils ont
des différences fondamentales :
1. La technologie Zn finger utilise des protéines de liaison à l'ADN
appelées zinc fingers pour cibler des séquences spécifiques d'ADN et
induire des modifications génétiques. Ces protéines sont conçues pour
reconnaître des séquences d'ADN spécifiques et s'y lier pour permettre
une modification précise du génome.
2. La technologie TALEN utilise des protéines de liaison à l'ADN dérivées de
bactéries du genre Xanthomonas appelées TALE (Transcription Activator-
Like Effector). Ces protéines sont également conçues pour reconnaître des
séquences d'ADN spécifiques et induire des modifications génétiques
précises.
3. Les TALEN sont généralement plus faciles à concevoir et à utiliser que
les Zn finger en raison de leur structure et de leur mécanisme d'action
simplifiés.
En résumé, la principale différence entre les technologies Zn finger et
TALEN réside dans les protéines utilisées pour cibler les séquences d'ADN
et induire des modifications génétiques. Les deux technologies, Zn finger
et TALEN, sont des outils de modification du génome utilisés en biologie
moléculaire. Cependant, ils ont des différences fondamentales :
1. La technologie Zn finger utilise des protéines de liaison à l'ADN
appelées zinc fingers pour cibler des séquences spécifiques d'ADN et
induire des modifications génétiques. Ces protéines sont conçues pour
reconnaître des séquences d'ADN spécifiques et s'y lier pour permettre
une modification précise du génome.
2. La technologie TALEN utilise des protéines de liaison à l'ADN dérivées de
bactéries du genre Xanthomonas appelées TALE (Transcription Activator-
Like Effector). Ces protéines sont également conçues pour reconnaître des
séquences d'ADN spécifiques et induire des modifications génétiques
précises.
3. Les TALEN sont généralement plus faciles à concevoir et à utiliser que
les Zn finger en raison de leur structure et de leur mécanisme d'action
simplifiés.
Ex : Une protéine de adh chque doit de zin reconnait 3aa,
La protéine reconnait un barin et l’autre on le fait par combinaison, leur
combinaison augmente la septicité, interaction difficile parfois ne
fonctionne pas bien.
Crisbr 9 qui se fait sur ARN est plus facile à manipuler, la bactérie
constrait une mémoire de défense contre une séquence. Quand le
promoteur est activer par l’inffection on aura la protéine cas9
Faut une plasmide qui produit cas 9 et autre qui produit ARN, la
reconnissance de séq n’est pas alératoire les 3 er base de cas9
« n’importe quoi et le reste est de N »
Comment modif le gène après le clivage
- Rien : car c’est cassé soit ça meurt soit se prépare , on fait sinon
réparation d’urgence
Cassure sur double brin (nucléase enlève bous de qq bases) et on
cherche par hasard une attache de double brin puis sera reconnu
par ADN polymérase, cette réparation est nécessaire
C’est pas dans mm cadre de lecure y aura de décalage de cadre de
lécture donc la protéine va pas s’exister (on attend à 2/3 de
mutation que 2/3 de cellules ne marche pas).
- On a cassé ces doubles brins : on ajout un morceau d’ADN que la
C va utiliser comme exemple pour faire la RH ( y a aussi la partie
qu’on veut ajouter)
- Combinaison de deux cas 9 qui fait que on casse un brin , pour
augmenter la spécificité
On induit la reverse transcriptase pour avoir l’ADNc puis on aura une
réparation avec 50% de mutation qu’on cherche à produire
On cherche à modifier un gène :
La situation : y a des logiciels pour de cas9 modifiés,
