Proprits physicochimiques des acides
amins
Introduction :
Les aa sont des molcules
organiques possdant un squelette
carbon et deux fonctions: une
amine NH2 et une acide carboxylique
COOH , constituant les units
structurales de base des protines
Les aa ont des proprits physico
chimiques dont linteret majeur
detude est leur evaluation
qualitative et quantitative
Proprits physiques:
Isomerie optique
Notion de carbone asymetrique C*
Les aa lexception du glycocolle sont
dous dactivit optique appele
galement pourvoir rotatoire
Devient la lumiere droite ou a
gauche du plan de la lumiere polarise
Le pouvoir rotatoire est de signe et de
valeur absolue
Il est mesur dans les conditions
exprimentales 20 C et
longueur donde dans la raie D
du sodium soit 546,1 nm
Cette activit optique signe la
prsence dans la molcule daa
sauf pour le glycocolle dau
moins un atome de carbone
substitu asymtriquement
Chaque aa possde 2 isomres
optiques
Ces deux molcules d'alanine sont l'image l'une de l'autre
dans un miroir et ne sont pas identiques car non
superposables: ce sont des nantiomres
Reprsentation de Fischer
On applique aux aa la
reprsentation de Fischer
comme pour les oses , le
groupement NH2 jouant le
rle de groupement OH
En fonction du groupement NH2
port par le C on dfinit deux
sries daa
Serie L: NH2 gauche
Serie D: NH2 droite
Sachant que lappartenance la
srie ne dfinit pas le sens du
pouvoir rotatoire indiqu par + pour
dviation droite et pour
dviation a gauche
Certains de ces aa comme la
thronine possde un 2eme
carbone asymtrique dans ce
cas le compos naturel est
appel L ,les deux autres stroisomres dont les positions
relatives des substituants sont
diffrents sont appels Allo
Les aa L reprsentent la
grande majorit des aa qui se
trouvent dans les protines
Les aa D se rencontrent dans
certaines protines produites
par les organismes exotiques
(ex: mollusques) ce sont des
composs abondants des parois
cellulaires des bactries
Dans le sang ,lisomere le plus
frquent est allo-isoleucine
Racemisation: cest la
transformation de laa de la
serie D la serie L ou le
contraire par des isomerarses
Aucun aa nabsorbe dans le spectre
visible
Tous les aa absorbent dans lUV lointain
Le dimre de cystine, cystine absorbe
240 nm
Phnylalanine absorbe 260 nm
Tyrosine et tryptophane ont un
maximum dabsorption dans lUV 280
nm du fait de la prsence de leur noyau
aromatique , cette proprit
intressante est utilise pour une
valuation quantitative des protines au
spectrophotomtre dans la bande des
280 nm
Solubilit et point de
fusion:
Les aa sont trs solubles dans les solvants
polaires ,ex: eau , alcool
A moindre degr dans les solvants
apolaires
Cette solubilit est dpendante des
proprits de la chaine latrale R
Elle diminue avec le nbe datomes de C du
radical
Augmente si ce radical est porteur de
fonctions polaires NH2 COOH ou hydrophile
OH
Point de fusion est lev > 200 c
Ionisation:
Composs amphotres: les acides amins
contiennent un groupement COOH acide et un
groupement amine NH2 basique
En solution , ces groupement existent sous 2
formes ,lune charge et lautre neutre
R-COOH
R-COO- + H+
\ R-NH3
R-NH2 + H+
Ces aa sont appels pour cette structure di
ioniques
amphoteres
Lionisation varie avec le pH:
En milieu acide: la fonction amine sionise
en captant un proton, laa se trouve sous
forme de cation
En milieu basique: la fonction acide
sionise en librant un proton ,laa se
trouve sous forme danion
Le pH: par le quel les deux dissociation
seffectuent est appel point isolectrique
pHi
Definition du pHi: cest le pH pour lequel
on a un ion dipolaire ou zwitterion de
De part et dautre du pHi ,on definit
des pH , qui correspondent une
demi dissociation de COOH et NH3+
ainsi que pour le groupement R
ionisable , ce sont les pK
pK1: pour COOH
pK2: pour NH3+
pKR: pour radical
pHi des aa: tableau
titration des aa
les aa ont des courbes de titration
caracteristiques
la titration implique laddition ou
lelimination graduelle de protons
aa neutre
les aa avec un seul
groupement
amin ,un
seul groupement
carboxylique et un
groupement R qui ne sionise
pas possdent des courbes de
titration proches celle de la
glycine
Equilibre dionisation glycine ( suivre au tableau)
ce groupe daa neutres est
caractris par le fait quils ont
des valeurs Pk1 du groupement
COOH et Pk2 du groupement
NH3+
la reprsentation comporte 2
tapes distinctes, chacune
correspondant lelimination dun
H+ de la glycine
au point median du 1er stade de titration dans le
quel le grpment COOH perd son H+,et des
concentrations equimolaires de donneurs de
protons NH3+-CH2-COOH et accepteur de H+
NH3+-CH2-COO- sont presents pH =Pk1 du
groupement COOH = 2,34
lorsque la titration est poursuivie ,un autre point
est atteint pH = 5,97
point dinflexion,lelimination du 1er proton est
pratiquement complete, ce pH la glycine est sous
forme dion dipolaire pHi
le second stade de titration correspond
lelimination dun proton partir NH3+ un
pH=pk2=9,6 ou existe un equilibre entre les deux
formes NH3+-CH2-COO-/ NH2-CH2-COOla titration est complete un pH=12 , ce point la
forme predominante est NH2-CH2-COO-
les aa avec un
groupement
ionisable
ont des courbes de titration plus
complexes avec 3 etapes
correspondant aux 3 possibilts
detapes dionisation,ils possedent
ainsi 3 valeurs de pK: PK1 ,PK2 ,PKR
aa dicarboxylique
exemple glutamate
relation et courbe de titration
aa basique
exemple: histidine
Conclusion 1ere partie (ppte
physiques des aa):
Les aa sont des molcules organiques
constituant lunit de base des
protines ,sont solubles dans les solvants
polaires , dous dactivit optique
,absorbent dans lUV et possdant un
caractre amphotre , chaque aa
possde une courbe de titration qui le
caractrise en fonction de la fonction
amine, carboxylique et du radical R
Proprits chimiques
Groupements chimiques fonctionnels dun acide amin
Proprits lies la prsence de
la fonction carboxylique ( COOH)
Amidification (amidation)
Formation de sels
Estrification
dcarboxylation
Mmes ractions quun acide
organique ordinaire
Peu ractif au pH
physiologique ,car fortement
stabilis par rsonnance
Amidification
Application/interet :
Asparagine
Glutamine
Liaison peptidique : synthse
des protines
Formation de sels
Action dune base dont le pH doit
tre suprieur au pHi de lAA (en
raison de la faible dissociation du
carboxyle)
Application/ intrt :
Titration des acides amins
Estrification par un alcool
APP; intrt
Protection temporaire de la fonction
COOH : synthse protique
Sparation des AA en phase gazeuse
et liquide, en produisant des drivs
esters butyliques, qui sont des
liquides distillables
Dcarboxylation
Possible par voie chimique ou
enzymatique :
Chimique : en prsence de Barithe :
chauffage
Ba (OH)2
Enzymatique : catalyse par les
carboxylases qui ncessitent le
phosphate de pyridoxal comme
coenzyme
Intrt
:
Formation de corps proprits
particulires :
Histidine : histamine (vasodilatateur)
Tyrosine : tyramine
Dosage des aa par la mesure de CO2
dgag (ancien procd)
Proprits lies la
prsence de fonction
amine (-NH2)
Ce sont des ractions gnrales damines
primaires
Trs ractifs : le doublet lectronique de
lazote est un puissant nuclophile
Cette ractivit a t utilise dans
lidentification des AA et llucidation des
Amidification
Formation de sels
N-Alkylation et N-Arylation
Raction avec les aldhydes
Carbamylation
Formations de composs fluorescent
Dansylation
Action de la fluorescamine
Dsamination
Amidification :idem COOH
Formation de sels
Application/interet :
In vitro ,cette proprit est
utilise pour bloquer la fonction
amine : blocage de la synthse
protique
Alkylation et N-Arylation (Raction de Sa
Les H peuvent tre remplacs par des
radicaux
Aliphatiques, obtention des drivs Nmthyls , N-dimethyls et Ntrimethyls
Aromatiques ,tels que les drivs
dinitrophnyls (DNP)
1-Fluoro-2,4-dinitrobenzne (FDNB)
La substitution dun H de la fonction NH2
par un groupement aryle (aromatique)
conduit une fonction amine secondaire
Le 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzne
(FDNB)=ractif de SANGER ragit en
milieu alcalin et chaud avec les
fonctions amines par substitution
nuclophile,
Le N-2,4-dinitrophenyl est un
Compos jaune
Absorbe en UV (365 nm)
Application/ interet
Dosage des AA
Identification de lN de lAA
terminal dans les proteines
Elle a permis FREDERICK SANGER
(1953) dlucider la structure I aire de
linsuline
Raction avec les
aldhydes (formation
dimines: base de schiff)
Les fonctions amines ragissent
rversiblement avec les aldhydes
pour donner des bases de Schiff
qui sont labiles
La proline qui contient une
fonction amine secondaire ne
ragit pas avec les aldhydes
Reaction avec un ose : Raction de
Maillard
App/interet :
In vitro : dtection des AA
Carbamylation ( action de
PITC : ractif dEDMAN )
PITC
+
PTH AA
AA
-----------------
(PITC: phnylisothiocyanate
Elle a lieu avec un isocyanate
(PITC: phnylisothiocyanate)
En milieu alcalin on obtient un
driv N-phnyl thiocarbamyl
En milieu acide ce dernier se
cyclise en donnant un phnylthiohydantoine amine acide (PTHAA)
Le PTH-AA rsultant est un :
Composs caractristique de
chaque aa (nature du R)
Stable
Dtectable dans lUV ( 245254nm)
App/interet :
PTH est identifiable par HPLC
-dosage des aa
le PITC est spcifiquement utilis
pour dterminer lenchainement
des aa dans les chaines
peptidiques (squenage)
Formation de composs
fluorescents
Dansylation
Le chlorure de dansyle= 1dimthylamino-naphtalene-5sulphonique ragit facilement
avec les fonctions amines
---- drivs sulfonamides
dansyls fluorescents
chlorure de dabsyle les mmes proprits
App/ intrt :
Identification de lN de laa
terminal dans les protines
A supplant la mthode de
SANGER car plus sensible
Action de la fluorescamine
La fluorescamine ragit en milieu
aqueux et pH = 8-9 pour former
des substances fortement
App /intrt :
Technique trs sensible car permet la
dtection de quantits daa de
lordre de ng
Analyse squentielle des peptides uss
pour la rvlation des aa en
chromatographie sur couche mince
samination par lacide nitreux :
ormation dun deriv diazoique instable
La mesure de lazote dgag dans
un appareil gazomtrique permet
le dosage des aa mthode
Van Slyke
Proprits lies la
prsence simultane des
fonctions carboxylique et
amine
arboxylation et dsamination oxyda
tion avec la NINHYDRINE
La ninhydrine :
Compos aromatique
Oxydant
Rvlateur des aa
Chauff en exces avec les aa ,il
conduit un chromophore= pourpe de
RUHEMANN (bleu-violet)
Tous les acides amins sont colors en
pourpre de ruhenmann , sauf la
proline,en jaune
Proprits lies la prsence
des chaines latrales
Seules les proprits
caractristiques de la chaine
latrale rgissent la ractivit des
AA incorpors dans les protines
3raisons justifient letude de ces
ractivits :
Les protines peuvent tre
chimiquement modifies en tenant
compte de la ractivit de
certaines chaines latrales
La dtection et la quantification
des AA dpendent de ractions
spcifiques 1 ou plusieurs AA
Les fonctions biologiques des
protines dpendent de la nature
et de la ractivit des chaines
Les chaines latrales non
ractives :
Les AA concerns sont : Ala ,
Val (aliphatique) et Phe
Chaines latrales carboxyle
Les aa acides ,ASPARTATE , GLUTAMATE
sont transforms en amides
,ASPARAGINE ,GLUTAMINE
Les chaines latrales amines :
Le groupement amin de la LYSINE ,par
sa ractivit et son accessibilit
lextremit de la chaine latrale, est
lorigine de :
Condensation des aldoses et ctoses
sur les protines: glycation des
protines (Raction de MAILLARD)
La fixation des coenzymes
prosthtiques sur leurs apoprotines
Letablissement de liaisons
covalentes entre molcules de
Les chaines latrales
Soufres :
a. Le groupement Thiol (SH) de la
cysteine
b. Le groupement Thioester de la
methionine
a.Le groupement Thiol (SH) de
la cystine
. Nuclophile apte ragir comme
groupement amine : alkylation,
acylation et sulfonylation
. Son oxydation permet la formation
de ponts disulfure (Protines)
-CH2-SH + SH-CH2 -- CH2-S-S-CH2
b. Le groupement Thioester de la
mthionine :
In vitro, le bromure de cyanogne
(CNBr) ragit avec le soufre dune
mthionine et coupe la chaine
polypeptidique cet endroit
Les chaines latrales alcools et
amides :
Peu ractifs
La serine intervient dans des
mcanismes de catalyse
enzymatique
La ser , la thr et la tyr sont des
sites potentiels de phosphorylation
La ser ,la thr et lAsn sont des sites
potentiels de N- et O-glycosylation
Lhydroxyle de la tyrosine donne au
noyau phnyle une ractivit assez
Les chaines latrales
Aromatiques :
Le gpt phnolique comporte un
oxygne trs ractif
,il peut tre :
Aryl, acyl, sulfonyl
Il peut subir egalement des reactions
de :
Nitration
Phosphorylation
Iodation enzymatique : etape
importante de la biosynthese des
Conclusion :
La ractivit chimique des AA est en
relation directe avec la ractivit chimique
de ces diffrents gpts fonctionnels
5 ractions fondamentales, directement
dpendantes des proprits chimiques de
NH2 (4dentre elles) et du COOH
(ninhydrine) sont fondamentales pour
lanalyse quantitative des AA , il sagit de
l'action de FDNB, DNS-Cl ,PITC,
Fluorescamine , ninhydrine
Les chaines latrales (R) et leur
fonctionnalit associe dterminent les
proprits biochimiques des AA a linterieur
