Imunodiagnóstico
ELISA, Imunocromatografia e
Imunofluorescência
Imunodiagnóstico - ELISA, Imunocromatografia e Imunofluorescência | Imunologia Clínica Ricardo Riccio
Questão de Concurso
Treinando...
(AERONÁUTICA - 2014) O teste de imunofluorescência é muito utilizado no diagnóstico de laboratório para
a pesquisa de anticorpos e, com anticorpos monoclonais, para a pesquisa de micro-organismos e seus
componentes em espécies clínicas. Esse teste baseia-se na capacidade das moléculas de:
a) Antígenos não ligadas a anticorpos se ligarem covalentemente e
especificamente a fluorocromos.
b) Antígenos se ligarem covalentemente a fluorocromos, perdendo sua
capacidade de se ligar a anticorpos.
c) Anticorpos liberarem uma quantidade de energia luminosa quando
estão ligados covalentemente a antígenos.
d) Anticorpos se ligarem covalentemente a fluorocromos, sem perder sua
reatividade específica com o antígeno.
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Introdução
O imunodiagnóstico deveria fornecer o resultado real de uma determinada condição.
Desempenho dos testes de imunodiagnóstico:
Sensibilidade: informa o quanto o teste é bom para identificar os indivíduos com
a doença
Especificidade: informa o quanto o teste é bom para identificar os indivíduos
sem a doença
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Introdução
Principais métodos utilizados no imunodiagnóstico:
ELISA
Imunocromatografia
Imunofluorescência
Western Blotting
Citometria de fluxo
Aglutinação
Hemaglutinação
Floculação
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ELISA
Ensaio imunoenzimático usado na pesquisa de antígenos ou anticorpos
Um dos componentes é fixado em uma fase sólida (placa) e a detecção
realizada com conjugado com enzima
Tipos de ELISA mais utilizados:
Testes para captura de antígenos
Testes para captura de anticorpos
Testes para captura de anticorpos e antígenos
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Testes para Captura de Antígenos
ELISA de captura ou ELISA sanduíche
lavagem
lavagem
lavagem
Anticorpo Antígeno (amostra) Antiantígeno marcado Substrato cromogênico
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Testes para Captura de Antígenos
ELISA de competição com antígeno marcado
lavagem
lavagem
Antígeno marcado e não
Anticorpo Substrato cromogênico
marcado (amostra)
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Testes para Captura de Antígenos
ELISA de competição com anticorpo marcado
lavagem
lavagem
Antígeno (amostra) +
Antígeno Substrato cromogênico
anticorpo marcado
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Testes para Captura de Anticorpos
ELISA indireto
lavagem
lavagem
lavagem
Anticorpo Antiimunoglobulina
Antígeno Substrato cromogênico
(amostra) marcada
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Testes para Captura de Anticorpos
ELISA de captura de IgM com antígeno marcado
IgM (amostra)
Lavagem Lavagem Substrato
cromogênico
Antígeno
Anti-IgM marcado
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Testes para Captura de Anticorpos
ELISA de captura de IgM com anticorpo marcado
IgM (amostra)
Lavagem Lavagem Lavagem
Substrato
cromogênico
Antígeno
Anticorpo específico
Anti-IgM marcado
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Testes para Captura de Anticorpos e Antígenos
Diagnóstico de infecção pelo HIV
Primeira geração – ELISA indireto com uso de antígenos obtidos por lise viral
Segunda geração – ELISA indireto com uso de antígenos recombinantes ou
sintéticos
Terceira geração – Antígeno na fase sólida e como revelador. Detecção de
diferentes isotipos
Quarta geração – Detecta simultaneamente anticorpos e antígeno P24 do
vírus
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Testes para Captura de Anticorpos e Antígenos
Diagnóstico de infecção pelo HIV
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Imunocromatografia
Os testes que utilizam esta metodologia são conhecidos popularmente como
testes rápidos
São testes que não precisam de reagentes adicionais e podem ser feitos fora
do ambiente laboratorial
Exemplos: teste rápido para HIV, teste de gravidez, teste rápido para
diagnóstico da malária
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Imunocromatografia
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Imunofluorescência
Usado na pesquisa de antígenos ou anticorpos
Baseia-se na capacidade dos anticorpos conjugarem-se a fluorocromos,
que são detectados através de microscópio de fluorescência
anticorpo
conjugado
antígeno antígeno
conjugado
(amostra)
ETAPA 1 ETAPA 2 ETAPA 3 ETAPA 1 ETAPA 2 ETAPA 3 ETAPA 4
Imunofluorescência Direta Imunofluorescência Indireta
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Imunofluorescência
FAN: autoanticorpos pesquisados por imunofluorescência indireta em células Hep-2
Principais padrões de fluorescência
Nuclear homogêneo Citoplasmático pontilhado reticulado
Nucleolar homogêneo Aparelho mitótico: centríolo
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Questão de Concurso
Agora ficou fácil!
(AERONÁUTICA - 2014) O teste de imunofluorescência é muito utilizado no diagnóstico de laboratório para
a pesquisa de anticorpos e, com anticorpos monoclonais, para a pesquisa de micro-organismos e seus
componentes em espécies clínicas. Esse teste baseia-se na capacidade das moléculas de:
a) Antígenos não ligadas a anticorpos se ligarem covalentemente e
especificamente a fluorocromos.
b) Antígenos se ligarem covalentemente a fluorocromos, perdendo sua
capacidade de se ligar a anticorpos.
c) Anticorpos liberarem uma quantidade de energia luminosa quando
estão ligados covalentemente a antígenos.
d) Anticorpos se ligarem covalentemente a fluorocromos, sem perder sua
reatividade específica com o antígeno.
Comentário: Apesar das reações de imunofluorescência serem capazes de detectar antígenos ou
anticorpos, o seu princípio baseia-se na capacidade de anticorpos ligarem-se a covalentemente a
fluorocromos sem, no entanto, perderem sua capacidade de ligação aos antígenos.
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Questão de Concurso
(FUNDAÇÃO SAÚDE – RJ - 2011)
Os imunoensaios enzimáticos quantitativos usando enzimas como marcadores forneceram muitos formatos
novos de testes diagnósticos com diferentes graus de rapidez, sensibilidade, simplicidade e precisão. Com
relação a essas metodologias, uma característica que pode ser considerada uma desvantagem na técnica é:
a) Múltiplos ensaios podem ser realizados simultaneamente.
b) A atividade da enzima pode ser afetada por constituintes plasmáticos.
c) Há riscos de radiação durante a marcação ou eliminação de resíduos.
d) Os reagentes são relativamente baratos e podem ter prazos de validade longos.
Comentário: Os ensaios imunoenzimáticos, como o ELISA, apresentam diversas vantagens e
constituíram um avanço no imunodiagnóstico desde a sua implementação. Dentre as principais
desvantagens está a possibilidade de interferência por elementos da própria amostra analisada.
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