Bioinform´atica aplicada nas an´alises da
microbiota do r´umen
Leandro Nascimento Lemos
Doutorando em Biologia na Agricultura e no Ambiente
Supervisor: Profa. Dra. Tsai
Junho/2016
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Ciˆencia de Dados (Data Science)
Gerac¸˜ao de dados massivos em Biologia Molecular;
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Ciˆencia de Dados (Data Science)
Sequenciamento massivo gera muitos dados!
Illumina Hiseq: sequenciamento de at´e 2.000 genomas
microbianos em uma ´unica corrida.
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Bioinform´atica
O que ´e: Aplicac¸˜ao da Ciˆencia
de Dados na resoluc¸˜ao de
problemas biol´ogicos;
Desafio: processar uma
avalanche de dados gerados por
sequenciadores de nova gerac¸˜ao;
Solu¸c˜ao: Produzir novas
ferramentas computacionais.
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Bioinform´atica
Ferramentas de
Processamento:
Ferramentas de
Visualiza¸c˜ao:
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Bioinform´atica: Human Microbiome Project
Explorar as relac¸˜oes entre doenc¸as humanas e alterac¸˜oes na
microbiota;
Desenvolvimento de novas ferramentas de Bioinform´atica
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Bioinform´atica: Human Microbiome Project
Desenvolvimento de novas ferramentas de Bioinform´atica
(IMG/M)
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Bioinform´atica: Computadores de alto desempenho
Alta capacidade de
processamento,
armanezamento e mem´oria;
Illumina Hiseq
(18.000.000/reads por
amostra);
128 processadores e 2 TB
de mem´oria ram.
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Linux
Sistema operacional livre.
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Estudos de comunidades microbianas (ou de microbiomas)
T´ecnicas independentes de cultivo de microrganismos
Perfil de 16S rDNA; Metagenˆomica; Metatranscritˆomica
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Perfil de 16S rDNA
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Perfil de 16S rDNA: Pipelines
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Perfil de 16S rDNA
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Perfil de 16S rDNA. (4) Qualidade de
sequenciamento/Remoc¸˜ao de sequˆencias de baixa
qualidade
Qualidade do sequenciamento
Software: FastQC
(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc)
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Perfil de 16S rDNA. (5) Remoc¸˜ao de sequˆencias de baixa
qualidade
Remover as sequˆencias dos adaptadores, primers e barcodes;
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Perfil de 16S rDNA. (5) Remoc¸˜ao de sequˆencias de baixa
qualidade
Remover as sequˆencias de baixa qualidade (Phred Score).
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Perfil de 16S rDNA. (5) Detecc¸˜ao e remoc¸˜ao de sequˆencias
quim´ericas
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Perfil de 16S rDNA. (7a) Agrupamento de OTUs -
Operational Taxonomic Units
Agrupamento de sequˆencias por n´ıvel de identidade (e.g., 97%);
Eliminac¸˜ao de dados redundantes (repetidos) e reduc¸˜ao da complexidade
computacional;
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Perfil de 16S rDNA. (7b) Identificac¸˜ao taxonˆomica
Afiliac¸˜ao taxonˆomica com base no n´ıvel de similaridade com sequˆencias
depositadas em bancos de dados p´ublicos;
Softwares: RDP Classifier; Usearch; BLAST.
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Perfil de 16S rDNA. Exemplo de estudo
Qual ´e a influˆencia da idade no desenvolvimento da microbiota do rumen
em bovinos?
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Metagenˆomica
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Metagenˆomica
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Metagenˆomica: Pipelines
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
MG-RAST: plataforma online de processamento de dados
metagenˆomicos
Acesso: http://metagenomics.anl.gov
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MG-RAST: plataforma online de processamento de dados
metagenˆomicos
Reconstruc¸˜ao do potencial metab´olico.
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Metagenˆomica . Exemplo de estudo
27.755 genes CAZy e montagem do genoma de 15 bact´erias
n˜ao-cultiv´aveis.
Express˜ao de 90 candidatos (57% apresentaram atividade enzim´atica);
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Metagenˆomica - Banco de dados
Carbohydrate-Active enZYmes Database (http://www.cazy.org/)
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Metatranscritˆomica
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Metatranscritˆomica: Pipeline
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Metatranscritˆomica: Exemplo de estudo
Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
Onde aprender?
Coursera: https://www.coursera.org
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Onde aprender?
Coursera: https://www.coursera.org
Gut Check: Exploring Your Microbiome
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Obrigado pela aten¸c˜ao!
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Bioinformática aplicada nas análises da microbiota do rúmen

  • 1. Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen Leandro Nascimento Lemos Doutorando em Biologia na Agricultura e no Ambiente Supervisor: Profa. Dra. Tsai Junho/2016 Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
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  • 7. Bioinform´atica: Human Microbiome Project Desenvolvimento de novas ferramentas de Bioinform´atica (IMG/M) Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 8. Bioinform´atica: Computadores de alto desempenho Alta capacidade de processamento, armanezamento e mem´oria; Illumina Hiseq (18.000.000/reads por amostra); 128 processadores e 2 TB de mem´oria ram. Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 9. Linux Sistema operacional livre. Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 10. Estudos de comunidades microbianas (ou de microbiomas) T´ecnicas independentes de cultivo de microrganismos Perfil de 16S rDNA; Metagenˆomica; Metatranscritˆomica Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 11. Perfil de 16S rDNA Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 12. Perfil de 16S rDNA: Pipelines Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
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  • 14. Perfil de 16S rDNA. (4) Qualidade de sequenciamento/Remoc¸˜ao de sequˆencias de baixa qualidade Qualidade do sequenciamento Software: FastQC (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc) Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 15. Perfil de 16S rDNA. (5) Remoc¸˜ao de sequˆencias de baixa qualidade Remover as sequˆencias dos adaptadores, primers e barcodes; Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 16. Perfil de 16S rDNA. (5) Remoc¸˜ao de sequˆencias de baixa qualidade Remover as sequˆencias de baixa qualidade (Phred Score). Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 17. Perfil de 16S rDNA. (5) Detecc¸˜ao e remoc¸˜ao de sequˆencias quim´ericas Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 18. Perfil de 16S rDNA. (7a) Agrupamento de OTUs - Operational Taxonomic Units Agrupamento de sequˆencias por n´ıvel de identidade (e.g., 97%); Eliminac¸˜ao de dados redundantes (repetidos) e reduc¸˜ao da complexidade computacional; Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 19. Perfil de 16S rDNA. (7b) Identificac¸˜ao taxonˆomica Afiliac¸˜ao taxonˆomica com base no n´ıvel de similaridade com sequˆencias depositadas em bancos de dados p´ublicos; Softwares: RDP Classifier; Usearch; BLAST. Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 20. Perfil de 16S rDNA. Exemplo de estudo Qual ´e a influˆencia da idade no desenvolvimento da microbiota do rumen em bovinos? Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 21. Metagenˆomica Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 22. Metagenˆomica Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 23. Metagenˆomica: Pipelines Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 24. MG-RAST: plataforma online de processamento de dados metagenˆomicos Acesso: http://metagenomics.anl.gov Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 25. MG-RAST: plataforma online de processamento de dados metagenˆomicos Reconstruc¸˜ao do potencial metab´olico. Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 26. Metagenˆomica . Exemplo de estudo 27.755 genes CAZy e montagem do genoma de 15 bact´erias n˜ao-cultiv´aveis. Express˜ao de 90 candidatos (57% apresentaram atividade enzim´atica); Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 27. Metagenˆomica - Banco de dados Carbohydrate-Active enZYmes Database (http://www.cazy.org/) Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 28. Metatranscritˆomica Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 29. Metatranscritˆomica: Pipeline Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 30. Metatranscritˆomica: Exemplo de estudo Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 31. Onde aprender? Coursera: https://www.coursera.org Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 32. Onde aprender? Coursera: https://www.coursera.org Gut Check: Exploring Your Microbiome Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen
  • 33. Obrigado pela aten¸c˜ao! Leandro Nascimento Lemos Bioinform´atica aplicada nas an´alises da microbiota do r´umen