Hepatites A, B e C e métodos imunológicos para diagnóstico
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O documento aborda as hepatites A, B e C, detalhando seus agentes etiológicos, modos de transmissão, sinais e sintomas, além dos métodos de diagnóstico. A hepatite A é causada pelo vírus HAV e é transmitida via fecal-oral, enquanto a hepatite B, causada pelo HBV, é adquirida principalmente por contato sexual e uso de agulhas. A hepatite C, provocada pelo HCV, é frequentemente transmitida por transfusões de sangue e também por drogas injetáveis, apresentando formas aguda e crônica semelhantes às das outras hepatites.
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- 1. HEPATITES A, B e C Métodos Parasitológicos e Imunológicos II Paloma Dianas Farmácia Turma VIII UNIFEB
- 3. Agente etiológico Vírus da hepatite A (HAV): vírus RNA, membro da família Picornaviridae.
- 4. Como se transmite? • Via fecal-oral: • água ou alimentos contaminados ; • Contato pessoal íntimo ( domicílios, creches); • via sexual: rara • via parenteral: rara (fase de viremia do período de incubação)
- 5. Sinais e Sintomas Assintomático na maioria das vezes. No entanto, o indivíduo pode desenvolver: febre baixa; dor de cabeça; sensação de fraqueza; falta de apetite; icterícia; fezes esbranquiçadas; urina escura. Incubação: 15 a 50 dias
- 7. Agente etiológico Vírus da hepatite B (HBV)- vírus DNA, membro da família Hepadnaviridae (vírus de DNA hepatotrópicos).
- 8. Como se transmite? • Relações sexuais desprotegidas; • uso de materiais perfurocortantes sem esterilização adequada; • hemodiálise; • compartilhamento de seringas, agulhas ou outros equipamentos; • transfusão de sangue e derivados contaminados ; • transmissão vertical (mãe/filho) e aleitamento materno ; • acidentes perfurocortantes.
- 9. Sinais e Sintomas Infecção aguda • Incubação: 30 a 180 dias. • 90 a 95% dos adultos se curam. • Assintomático ou sintomático. • A evolução consiste de três fases: Prodrômica ou pré- ictérica Ictérica Convalescença • Febre • Astenia • dores musculares ou articulares • Anorexia, náuseas e vômitos • Perversão do paladar • Cefaléia • Repulsa ao cigarro. • Abrandamento dos sintomas digestivos • Icterícia • Colúria • Hipocolia Desaparece a icterícia e retorna a sensação de bem- estar.
- 10. Sinais e Sintomas Forma crônica: Infeção aguda que persiste por mais de 6 meses. Assintomático ou sintomático. Cirrose Icterícia Edema Ascite Varizes de esôfago Alterações hematológicas Hepatocarcinoma
- 11. HEPATITE C (HEV)
- 12. Agente etiológico • Vírus da hepatite C (HCV): vírus RNA, da família Flaviviridae. Fonte: TELELAB
- 13. Como se transmite? Transfusão de sangue e uso de drogas injetáveis Hemodiálise Perfurocortantes Relacionamento sexual (não é o mais frequente) Transmissão vertical e aleitamento materno
- 14. Sinais e Sintomas Forma aguda: Manifestação de sintomas na fase aguda: RARA Quando presentes: quadro semelhante ao das outras hepatites. Forma crônica: Infeção aguda que persiste por mais de 6 meses. Assintomático ou sintomático. ü Cirrose ü Icterícia ü Edema ü Ascite ü Varizes de esôfago ü Alterações hematológicas ü Hepatocarcinoma
- 15. EVOLUÇÃO NATURAL DAS HEPATITES B e C
- 16. DIAGNÓSTICO
- 17. DIAGNÓSTICO CLÍNICO DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL: herpes, dengue, esteatose hepática, etc. DIAGNÓSTICO LABORATORIAL: Inespecíficos: elevação das aminotransferases (ALT/TGP e AST/TGO), bilirrubinas, fosfatase alcalina e linfocitose. Específicos: sorológicos; biologia molecular.
- 18. HEPATITE A
- 19. Fluxograma diagnóstico para hepatite A FONTE: Secretaria de Vigilância em Saúde/MS
- 20. ELISA de captura para imunoglobulina classe- específica Princípio: o teste se baseia na ligação do anticorpo HAV- IgM presente na amostra com o antígeno utilizado no teste, com consequente desenvolvimento de cor >> Detecta infecção aguda INTERFERENTES: ligação do fator reumatóide (IgG/IgM/IgA/ IgE anti-IgG) com o conjugado ou com a IgG específica e depois com o conjugado => resultados falso-positivos; AMOSTRA: soro ou plasma (heparina, citrato de sódio ou EDTA
- 21. ELISA de captura para IgM
- 22. HEPATITE B
- 23. • Detecta HBsAg • Janela diagnóstica: 30 dias • AMOSTRA: soro, plasma ou sangue • INTERFERENTES: medicamentos, lipemia, hemólise, icterícia. Testes rápidos: Imunocromatografia de fluxo lateral
- 24. Testes rápidos: Imunocromatografia de fluxo lateral O método utiliza anticorpos anti-HBsAg, que reagem com antígenos presentes em amostras. Ao adicionar a amostra no dispositivo, havendo a presença de HBsAg, estes se ligam ao conjugado(anticorpos IgG anti- HBsAg) e migram para a área de teste (T), que contém anticorpos anti HBsAg imobilizados. À medida que o complexo antígeno-conjugado se liga na área de teste (T), uma linha visível é formada. Os conjugados que não se ligaram na área teste continuam a migrar até a área do controle (C), onde sempre deve aparecer uma linha colorida.
- 26. Testes moleculares- PCR em tempo real (qPCR) Diagnóstico precoce Detecta ácido nucléico viral (HBV-DNA) Princípio: por meio dessa técnica, é possível amplificar uma região de interesse em uma molécula de DNA utilizando um par de sequências curtas de nucleotídeos que se localizam nos flancos dessa região, em conjunto com uma enzima DNA polimerase termorresistente. Na qPCR, o resultado é visualizado imediatamente, dispensando a eletroforese. Isto é possível pelas marcações fluorescentes nos próprios nucleotídeos. a fuorescência liberada é detectada por um equipamento específico.
- 27. Interferentes: contaminação por fenóis; contaminação por DNA externo; Temperatura de ciclagem errada; primers não- específicos, proteínas. Amostra: sangue, urina Testes moleculares- PCR em tempo real (qPCR)
- 28. Imunoensaios Diferentes estágios da infecção pelo HBV Infecção aguda ou crônica Resposta vacinal Ausência de contato prévio com o vírus.
- 29. Interpretação dos resultados sorológicos (Ag-Ab) para hepatite B
- 30. ELISA sanduíche para pesquisa de antígeno HbsAg Princípio: Nesse teste, uma enzima é covalentemente ligada a um anticorpo específico que reconhece o antígeno alvo. Caso ocorra esse reconhecimento, a enzima irá reagir com um substrato incolor para produzir um produto colorido. Ø INTERFERENTES: Hemólise e/ou lipemia. Anticorpos reagentes ( anticorpos heterofílicos; anticorpos antianimais; autoanticorpos contra o analito; fator reumatóide e outras proteínas) Ø AMOSTRA: soro ou plasma
- 31. OBS: janela diagnóstica do HBsAg 30 dias após infecção
- 32. ELISA de captura para imunoglobulina classe- específica: anti-HBc IgM OBS.: Anti-HBc IgM --> 30 dias após infecção, sendo substituído por Anti-HBc IgG 6 a 8 meses após a infecção
- 33. ELISA Competitivo para anti-HBc total Princípio: competição dos anticorpos na amostra com o anticorpo específico do conjugado pela ligação com o antígeno adsorvido à fase sólida; quando a amostra é reagente a ligação do conjugado não acontece, não há ação da enzima sobre o substrato e, conseqüentemente, não há desenvolvimento de cor. Interpretação do resultado: ausência de cor -> amostra reagente presença de cor -> amostra não reagente.
- 34. ELISA Competitivo para anti-HBc total Ø INTERFERENTES: Hemólise e/ou lipemia. Anticorpos reagentes, doenças auto-imunes, hipergamaglobulinemia, mononucleose. Ø AMOSTRA: soro ou plasma
- 35. ELISA Indireto para anti-HBs • Princípio: identificação de anticorpos por anticorpos marcados com uma enzima, de maneira que esta enzima age sobre um substrato e a reação faz com que o cromógeno mude de cor. Ø INTERFERENTES: Hemólise e/ou lipemia intensa; anticorpos reagentes, fator reumatoide e outras proteínas. Ø AMOSTRA: soro ou plasma
- 36. ELISA Indireto para anti-HBs
- 37. HEPATITE C
- 38. Testes rápidos: Imunocromatografia de fluxo lateral Detecta anti- HCV Princípio: a fase sólida é composta por uma membrana de conjugado de antígenos sintéticos e recombinantes com ouro coloidal. Havendo anticorpos anti-HCV na amostra adicionada com o diluente ao poço, eles se ligam ao conjugado e fluem pela membrana . Ao atingir a área que contém antígeno do HCV imobilizados, formarão uma linha rosa na área de teste (T). Os reagentes continuam fluindo pela membrana até formarem uma linha visível (rosa) na área de controle (C).
- 39. • AMOSTRA: soro, plasma ou sangue • INTERFERENTES: medicamentos, lipemia, hemólise, icterícia. Testes rápidos: Imunocromatografia de fluxo lateral
- 40. Diagnóstico precoce; carga viral Detecta ácido nucléico viral (HCV-RNA) Mesmo princípio da qPCR, porém há ação da enzima transcriptase reversa, que a partir do RNA sintetiza uma cadeia de DNA complementar (chamado agora de cDNA). Testes moleculares- RT-PCR: Reverse Transcription PCR
- 42. Identificação do anticorpo anti-HCV • ELISA indireto ou quimioluminescência • Princípio da Quimioluminescência >> identificação de anticorpos por anticorpos marcados com enzima (ex. peroxidase) que atuará sobre o substrato quimioluminescente (luminol, polifenóis) com consequente emissão de luz. Ø INTERFERENTES: Hemólise e/ou lipemia intensa. Anticorpos reagentes fator reumatoide e outras proteínas. Ø AMOSTRA: soro, plasma ou sangue total
- 43. Immunoblot (RIBA)- confirmatório • Detecção do anti- HCV • Princípio: a amostra contendo anticorpos é incubada com a membrana de nitrocelulose contendo as proteínas previamente separadas por tamanho molecular. É adicionado o conjugado enzimático anti-Ig humana, que se fixa à imunoglobulina da amostra. É adicionado o substrato cromogênico para o desenvolvimento de cor insolúvel, como no dot-ELISA. A interpretação do resultado é feita pela análise da presença de bandas, que revelam a presença de anticorpos específicos.
- 44. AMOSTRA: soro, plasma ou sangue INTERFERENTES: medicamentos, lipemia, hemólise, Anticorpos reagentes, outras proteínas. Immunoblot (RIBA)- confirmatório