Livro introdução à bioquimica básica

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Introdução à
bioquímica
Capítulo
1

1
Introdução à Bioquímica
Objetivos
1 Relacionar a importância da água a suas propriedades físicas e químicas.
2 Definir pH, pK, tampão e seu significado biológico.
3 Descrever as propriedades biologicamente importantes do carbono.
4 Descrever a estrutura tridimensional das moléculas biológicas.
5 Descrever as macromoléculas como polímeros de pequenas moléculas.
6 Descrever as moléculas híbridas como conjugados de diferentes classes de
moléculas biológicas.
7 Diferenciar as células procarióticas das células eucarióticas
A bioquímica estuda as estruturas moleculares, os mecanismos e
os processos químicos responsáveis pela vida. Os organismos vivos
continuamente efetuam atividades que permitem a sua sobrevivência,
crescimento e reprodução. Para realizar as suas funções, os seres
vivos dependem da capacidade de obter, transformar, armazenar e
utilizar energia. Sem energia ocorre a perda da vitalidade e a morte
celular. A maioria dos constituintes moleculares apresenta formas
tridimensionais que executam inúmeras reações químicas entre si
para manter e perpetuar a vida. Em bioquímica, a estrutura, a
organização e as atividades potenciais dessas moléculas são
examinadas na tentativa de elucidar que aspectos promovem as
indispensáveis contribuições à manutenção da vida.
Os organismos vivos são estruturalmente complexos e
diversificados. Todavia, muitas características são comuns a todos
eles. Todos fazem uso das mesmas espécies de moléculas e extraem a
energia do meio ambiente para as suas funções. Quando as moléculas
que compõem os seres vivos são isoladas, estão sujeitas a todas as
leis da química e da física que regem o universo não vivo.
Apesar da grande diversidade dos processos bioquímicos que
envolvem a integração funcional de milhões de moléculas para
manter e perpetuar a vida, a ordem biológica é conservada por vários
processos: (1) síntese de biomoléculas, (2) transporte de íons e
moléculas através das membranas biológicas, (3) produção de energia
e movimento e (4) remoção de produtos metabólicos de excreção e
substâncias tóxicas.

2 • Motta • Bioquímica • Laboratório Autolab Ltda.
A quase totalidade das reações químicas que ocorre nos seres
vivos são catalisadas por enzimas – proteínas com funções catalíticas.
As reações celulares, conhecidas coletivamente como metabolismo,
resultam de atividades altamente coordenadas. Os tipos mais comuns
de reações encontradas nos processos bioquímicos são: (1)
substituição nucleófila, (2) eliminação, (3) adição, (4) isomerização e
(5) oxidação e redução.
Os seres vivos são formados por uma grande variedade de
moléculas, tais como: carboidratos, lipídeos, proteínas, ácidos
nucléicos e compostos relacionados. Além dessas, outras substâncias
estão presentes em pequenas quantidades: vitaminas, sais minerais,
hormônios, etc. Muitos desses compostos se caracterizam por um ou
mais grupos ácidos ou básicos em suas moléculas e ocorrem em
solução aquosa como espécies ionizadas. A ionização tem lugar em
água, sendo este um pré-requisito para muitas reações bioquímicas. O
grau de dissociação ou a extensão da ionização de um grupo químico
em particular e, portanto, a reatividade bioquímica da molécula, é
amplamente influenciada pela concentração do íon hidrogênio da
solução. Isto é aplicável tanto para as vias metabólicas, como
também para os catalisadores biológicos (enzimas), que controlam as
reações celulares.
1.2 Água: o meio da vida
A água compõe a maior parte da massa corporal do ser humano. É
o solvente biológico ideal. A capacidade solvente inclui íons (ex.:
Na+
, K+
e Cl−
), açúcares e muitos aminoácidos. Sua incapacidade
para dissolver algumas substâncias como lipídeos e alguns
aminoácidos, permite a formação de estruturas supramoleculares (ex.:
membranas) e numerosos processos bioquímicos (ex.: dobramento
protéico). Nela estão dissolvidas ou suspensas as moléculas e
partículas necessárias para o bom funcionamento celular. Reagentes e
produtos de reações metabólicas, nutrientes, assim como produtos de
excreção, dependem da água para o transporte no interior das células
e entre as células.
As interações fracas são os meios pelos quais as moléculas
interagem entre si – enzimas com seus substratos, hormônios com
seus receptores, anticorpos com seus antígenos. A força e a
especificidade das interações fracas são grandemente dependentes do
meio onde ocorrem, sendo que a maioria das interações biológicas
tem lugar na água. Duas propriedades da água são especialmente
importantes para a existência dos seres vivos:
• A água é uma molécula polar. A molécula de água é não-linear
com distribuição da carga de forma assimétrica.
• A água é altamente coesiva. As moléculas de água interagem
entre si por meio de pontes de hidrogênio. A natureza altamente
coesiva da água afeta as interações entre as moléculas em solução
aquosa.
A. Estrutura da água
A água é uma molécula dipolar formada por dois átomos de
hidrogênio ligados a um átomo de oxigênio. Cada átomo de

1 Introdução à Bioquímica • 3
hidrogênio possui uma carga elétrica parcial positiva (δ+) e o átomo
de oxigênio, carga elétrica parcial negativa (δ−
). Assim, o
compartilhamento dos elétrons entre H e O é desigual, o que acarreta
o surgimento de dois dipólos elétricos na molécula de água; um para
cada ligação H−O. O ângulo de ligação entre os hidrogênios e o
oxigênio (H−O−H) é 104,3°, tornando a molécula eletricamente
assimétrica e produzindo dipólos elétricos (Figura 1.1). Ao se
aproximarem, as moléculas de água interagem, pois a carga elétrica
parcial positiva do hidrogênio de uma molécula atrai a carga elétrica
parcial negativa do oxigênio de outra molécula de água adjacente,
resultando em uma atração eletrostática denominada ponte de
hidrogênio. Quatro moléculas de água podem interagir produzindo
uma estrutura quase tetraédrica estabilizada por pontes de hidrogênio
(Figura 1.1).
O
H
H
+
104.3º
O
H
H
O
H H
H
H
HO
H H
O
+
B. Interações não-covalentes
As interações não-covalentes são geralmente eletrostáticas; elas
ocorrem entre o núcleo positivo de um átomo e a nuvem eletrônica de
outro átomo adjacente. De modo diferente das ligações covalentes, as
interações não-covalentes são individualmente fracas e facilmente
rompidas (Tabela 1.1). No entanto, coletivamente elas influenciam de
modo significativo as propriedades químicas e físicas da água e as
estruturas, propriedades e funções das biomoléculas (proteínas,
polissacarídeos, ácidos nucléicos e lipídeos) pelo efeito cumulativo
de muitas interações. O grande número de interações não−covalentes
estabiliza macromoléculas e estruturas supramoleculares, de tal modo
que essas ligações sejam rapidamente formadas ou rompidas
permitindo a flexibilidade necessária para manter os processos
dinâmicos da vida. Nos organismos vivos, as interações não-
Figura 1.1
Estrutura da molécula de água.
O ângulo de ligação H-O-H é
104,3
0
e tanto os hidrogênios
como o oxigênio possuem cargas
elétricas parciais criando um
dipolo elétrico. A parte inferior da
figura mostra quatro moléculas de
água interagindo para formar uma
estrutura estabilizada por pontes
de hidrogênio.

covalentes mais importantes são: pontes de hidrogênio, interações
iônicas, interações hidrofóbicas e interações de van der Waals.
Tabela 1.1 – Energia de dissociação de ligação (energia necessária para
romper a ligação) de ligações encontradas nos seres vivos
Tipo de ligação
Energia de dissociação de
ligação (kJ·mol−1
)
Ligações covalentes >210
Ligações não−covalentes
Interações eletrostáticas (ligações iônicas) 4−80
Pontes de hidrogênio 12−30
Interações hidrofóbicas 3−12
Forças de Van der Waals 0,3−9
C. Propriedades solventes da água
A natureza polar e a capacidade de formar pontes de hidrogênio,
torna a água uma molécula com grande poder de interação. A água
solvata facilmente as moléculas polares ou iônicas pelo
enfraquecimento das interações eletrostáticas e das pontes de
hidrogênio entre as moléculas competindo com elas por suas atrações
(efeito hidrofílico, do grego “que gosta de água”).
O
H
H
H
H
+
O
+
H
H
H
H
H
H H
H
H
H
+
++
+
++
O
OO
O O
Figura 1.2
Solvatação de íons. A carga do íon orienta os dipolos das moléculas
da água.
A água dissolve sais como o NaCl por hidratação e estabilização
dos íons Na+
e Cl−
, enfraquecendo as interações eletrostáticas, e
assim impedindo a associação para formar uma rede cristalina.

Figura 1.3
Dissolução de sais cristalinos. A água dissolve o NaCl (e outros sais
cristalinos) por meio da hidratação dos íons Na
+
e Cl
−
. À medida que as
moléculas de água se agrupam ao redor dos íons Cl
−
e Na
+
a atração
eletrostática necessária para a formação da rede cristalina de NaCl é
rompida.
A água dissolve biomoléculas com grupos ionizáveis e muitas
com grupos funcionais polares, porém não−carregadas, por formar
pontes de hidrogênio com os solutos. Essas associações são formadas
entre a água e os grupos carbonila, aldeídico, cetônico e hidroxila dos
álcoois.
As biomoléculas ou grupamentos não-polares são insolúveis em
água, pois as interações entre as moléculas de água são mais fortes
que as interações da água com compostos não−polares. Os compostos
não−polares tendem a se aglomerar em água (efeito hidrofóbico, do
grego “que teme a água”). As interações hidrofóbicas são as
principais forças propulsoras no enovelamento de macromoléculas
(exemplo, proteínas).
D. Moléculas anfifílicas
Um grande número de biomoléculas, denominadas anfifílicas (ou
anfipáticas), contêm tanto grupos polares como grupos não-polares.
Essa propriedade afeta significativamente o meio aquoso. Por
exemplo, os ácidos graxos ionizados são moléculas anfipáticas
porque contêm grupos carboxilatos hidrofílicos e grupos
hidrocarbonetos hidrofóbicos. Quando misturados com a água, as
moléculas anfifílicas se agregam formando estruturas estáveis
chamadas micelas. Nas micelas, as regiões carregadas (grupos
carboxilatos), denominadas cabeças polares, são orientadas para a
água com a qual interage. A cauda hidrocarboneto não-polar tende a
evitar o contato com a água e orienta-se para o interior hidrofóbico.
A tendência das biomoléculas anfipáticas é espontaneamente se
rearranjar em água e é uma característica importante de numerosos
componentes celulares. Por exemplo, a formação de bicamadas por
moléculas de fosfolipídeos é a estrutura básica das membranas
biológicas (Figura 1.4).
Cl
Cl
Cl
Cl
Cl
Cl
Cl
Cl Cl
Cl
Cl
Cl
Cl
Na Na
Na
Na
Na
Na
Na
Na
Na
Na
Na+
Na
Na

Figura 1.4
Bicamada lipídica. Formada na água por moléculas anfifílicas
(fosfolipídeos) com cabeças polares e caudas sinuosas.
E. Pressão osmótica
Osmose é o processo espontâneo no qual as moléculas solventes
atravessam uma membrana semipermeável de uma solução de menor
concentração de soluto para uma solução de maior concentração de
soluto. Poros na membrana são suficientemente amplos para permitir
que as moléculas solventes atravessem nas duas direções mas muito
estreitos para a passagem de grandes moléculas de soluto ou íons. A
pressão osmótica é a pressão necessária para interromper o fluxo
líquido de água por meio da membrana. A pressão osmótica depende
da concentração do soluto.
Figura 1.5
Pressão osmótica. A água difunde do lado A (mais diluído) para o lado B
(mais concentrado). O equilíbrio entre as soluções nos dois lados da
membrana semipermeável é atingido quando não houver mais movimento de
moléculas de água do lado A para o lado B. A pressão osmótica interrompe o
fluxo de água por meio da membrana.
A pressão osmótica cria alguns problemas críticos para os
organismos vivos. As células contêm altas concentrações de alguns
solutos, que são pequenas moléculas orgânicas e sais iônicos, também
como, macromoléculas em baixas concentrações. Conseqüentemente,
as células podem ganhar ou perder água devido a concentração de
Água
Soluto
Membrana
permeável
seletiva
Membrana
permeável
seletiva
Membrana
permeável
seletiva
Hidrofóbico
Hidrofílico
Hidrofílico
Aquoso
Aquoso

soluto em relação ao seu meio. Se as células estão em solução
isotônica (a concentração de soluto e água é a mesma nos dois lados
da membrana plasmática seletivamente permeável) e a célula nem
ganha nem perde água. Por exemplo, os eritrócitos são isotônicos em
solução de NaCl a 0,9%. Quando as células são colocadas em uma
solução com concentração baixa de soluto (solução hipotônica) a
água se move para o interior das células. Os eritrócitos, por exemplo,
se distendem e se rompem em processo chamado hemólise quando
eles são imersos em água pura. Nas soluções hipertônicas, aquelas
com maior concentrações de soluto, as células murcham à medida que
a água flui para a solução. Por exemplo, em solução hipertônica de
NaCl a 3%, os eritrócitos murcham e tornem-se crenados.
Um aumento da osmolaridade no plasma, desencadeia
rapidamente a sede, exigindo a ingestão de água para diluir o Na+
e
reajustar a osmolaridade para baixo.
F. Ionização da água
Pequena proporção de moléculas de água se dissociam para
formar íons hidrogênio (H+) e hidroxila (OH−
):
H2O H+
+ OH−
Para cada mol de H+ , um mol de OH−
é produzido. Devido a
elevada reatividade do íon hidrogênio (ou próton) e o momento
dipolar da molécula de água, o H+ não existe como tal em solução
aquosa, mas reage com uma segunda molécula de H2O para formar o
íon hidrônio (H3O+). O grau de ionização é descrito
quantitativamente pela constante de dissociação (K):
[ ][ ]
[ ]OH
OHH
2
−+
=K
O valor da K para a água é 1,8 x 10−16 a 25°C. A concentração da
água não dissociada pode ser considerada como uma constante (1000
g/18 g/mol = 55,5 M; ou seja, o número de gramas de água em 1000
mL dividido pela molécula-grama da água). Portanto, a quantidade
ionizada de água é insignificante em relação a não ionizada.
Substituindo os valores na equação anterior, tem-se:
[ ][ ] 16
+
108,1
55,5
OHH
K −
−
×==
Desse modo, uma nova constante para a dissociação da água pode
ser definida, Kw, a constante do produto iônico da água:
Kw = Keq × 55,5 = [H+
][OH−]
Kw = (1,8 × 10−16
)(55,5) = 1,0 × 10−14
Assim, a 25 °C o valor de Kw é dado por:
Kw = [H+
][OH−] = (10−7
)(10−7
) = 10−14
Portanto, o valor numérico do produto [H+][OH−
] em soluções
aquosas a 25°C é sempre 1,0 x 10−14. Em água pura [H+] = [OH−
]

tem o valor 1,0 x 10−7 M. Sempre existe equilíbrio entre H2O, H+
e
OH-
em soluções diluídas, independentemente da presença de
substâncias dissolvidas. Ao adicionar qualquer substância, como
ocorre na adição de um ácido ou uma base, alterações concomitantes
devem ocorrer nas concentrações do H+ ou OH−
, para satisfazer à
relação de equilíbrio. Conhecendo-se a concentração de um deles,
facilmente é calculado o teor do outro.
G. Escala de pH
Para evitar o uso de exponenciais para expressar as concentrações
dos íons hidrogênio em soluções emprega-se a escala de pH, um
modo conveniente para expressar a concentração real de íons
hidrogênio de uma solução. O pH de uma solução é definido como o
logaritmo negativo base 10 da concentração de íons hidrogênio:
pH = −log[H+]
Em uma solução aquosa neutra a 25°C, a concentração do íon
hidrogênio (como também a [OH−
]) é 1,0 x 10−7 M ou pH = 7,0:
[H+] = 0,000.000.1 M = 1,0 x 10−7 M
log [H+] = −7
pH = −log[H+] = 7
Soluções com pH menor do que 7 são ácidas, enquanto aquelas
com pH>7 são básicas. A Tabela 1.2 mostra a relação entre a [H+],
[OH−], pH e pOH.

Tabela 1.2 – Relação entre [H+], [OH-], pH e pOH.
[H+] (M) pH [OH−] (M) pOH
1,0 0 1 x 10−14 14
0,1(1 x 10−1
) 1 1 x 10−13 13
1 x 10−2 2 1 x 10−12 12
1 x 10−3 3 1 x 10−11 11
1 x 10−4 4 1 x 10−10 10
1 x 10−5 5 1 x 10−9 9
1 x 10−6 6 1 x 10−8 8
1 x 10−7 7 1 x 10−7 7
1 x 10−8 8 1 x 10−6 6
1 x 10−9 9 1 x 10−5 5
1 x 10−10 10 1 x 10−4 4
1 x 10−11 11 1 x 10−3 3
1 x 10−12 12 1 x 10−2 2
1 x 10−13 13 0,1(1 x 10−1) 1
1 x 10−14 14 1,0 0
É importante frisar que o pH varia na razão inversa da
concentração de H+. Desse modo, o aumento de [H+] reduz o pH
enquanto a diminuição, o eleva. Notar também, que o pH é uma
função logarítmica, portanto, quando o pH de uma solução aumenta
de 3 para 4, a concentração de H+ diminui 10 vezes de 10−3 M a 10−4
M.
Exercício 1.1
Como a água pura tem [H
+
] = 10−7
M, calcular o pH das seguintes soluções:
1. HCl 10−4
M
2. NaOH 10−5
M
A auto-ionização da água apresenta uma contribuição negligenciável
para as concentrações de íons hidrônio e íons hidróxido.
Solução:
1. Para o HCl 10−4
: [H3O
+
] = 10−4
M; portanto pH = 4.
2. Para o NaOH 10−5
: [OH−] = 10−5
M. Como [OH−][H3O
+
] = 1 x 10−14
,
então, [H3O
+
] = 10−9
M; assim, pH = 9
Os pH de diferentes líquidos biológicos são mostrados na
Tabela 1.3. Em pH 7 o íon H+
está na concentração 0,000.000.1 M (1
x 10−7
), enquanto a concentração de outros catíons estão entre 0,001
e 0,10 M. Um aumento no teor de íon H+
de somente 0,000.001 (1 x
10−6
) tem um grande efeito deletério sobre as atividades celulares.

Tabela 1.3 – Valores de pH de alguns líquidos biológicos.
Líquido pH
Plasma sangüíneo 7,4
Líquido intersticial 7,4
Líquido intracelular (citosol hepático) 6,9
Suco gástrico 1,5−3,0
Suco pancreático 7,8−8,0
Leite humano 7,4
Saliva 6,4−7,0
Urina 4,5−8,0
1.3 Ácidos e bases
A concentração do íon hidrogênio, [H+
], afeta a maioria dos
processos nos sistemas biológicos. As definições de ácidos e bases
propostas por Bronsted e Lowry são as mais convenientes no estudo
das reações dos seres vivos:
• Ácidos são substâncias que podem doar prótons.
• Bases são substâncias que podem aceitar prótons.
Por exemplo, a adição de ácido clorídrico (HCl) a uma amostra
de água aumenta a concentração de íon hidrogênio ([H+
] ou [H3O+
])
pois o HCl doa um próton para a água:
HCl + H2O → H3O+
+ Cl−
A H2O atua como uma base que aceita um próton do ácido
adicionado.
Do mesmo modo, a adição da base hidróxido de sódio (NaOH)
aumenta o pH (redução da [H+
]) pela introdução de íons hidróxido
que combinam com os íons hidrogênios existentes:
NaOH + H3O+
→ Na+
+ 2H2O
Na reação, o H3O+
é o ácido que doa um próton para a base
adicionada. O pH final da solução depende o quanto de H+
(por
exemplo, do HCl) foi adicionado ou quanto de H+
foi removido da
solução por sua reação com uma base (por exemplo, íon OH-
do
NaOH).

Quadro 1.1 Força de ácidos
A força de um ácido ou base refere-se a
eficiência com que o ácido doa prótons ou a base
aceita prótons. Com respeito a força, existem duas
classes de ácidos e bases: fortes e fracos. Ácidos e
bases fortes são aqueles que se dissociam quase
completamente em meio aquoso diluído (Ex.: HCl ou
NaOH). Ácidos e bases fracos são os que dissociam
parcialmente em soluções aquosas diluídas (Ex.:
CH3-COOH ou NH3).
A tendência de um ácido fraco não-dissociado
(HA) para perder um próton e formar a sua base
conjugada (A−
) é dada pela equação:
HA H
+
+ A−
Esta reação não ocorre até o final, mas, atinge
um ponto de equilíbrio entre 0 e 100% da reação.
No equilíbrio, a velocidade líquida é zero pois as
velocidades absolutas em ambas as direções são
exatamente iguais. Tal posição é descrita pela
equação:
[ ]HA
AH








=
−+
K
em que K é a constante de equilíbrio da reação
reversível e tem um valor fixo para cada
temperatura. As K para as reações de ionização são
denominadas constantes de dissociação ou de
ionização.
Para os ácidos é usada a designação Ka. Os
ácidos fortes tem valor de Ka elevado, pois
apresentam maior número de prótons liberados por
mol de ácido em solução.
A. Pares ácido-base conjugados
Quando um ácido fraco, como o ácido acético, é dissolvido em
água, obtém-se uma dissociação parcial, estabelecendo um equilíbrio
entre o ácido, o acetato e o íon hidrogênio (próton):
CH3COOH + H2O CH3COO− + H3O+
Ácido Base Base Ácido
conjugado conjugada conjugada conjugado
O ácido acético é um ácido conjugado (doador de prótons). A
forma ionizada do ácido acético, o íon acetato (CH3COO−) é
denominada base conjugada (aceptora de prótons) ou “sal”. Em
reações deste tipo, típicas de todos os equilíbrios ácido-base, o ácido
fraco (CH3COOH) e a base formada na sua dissociação (CH3COO−)
constituem um par ácido-base conjugado.
Tabela 1.4 − Alguns pares ácido-base conjugados de importância nos
sistemas biológicos.
Doador de prótons Aceptor de prótons
CH3−CHOH−COOH H+ + CH3CHOHCOO−
CH3−CO−COOH H+ + CH3CO−COO−
HOOC−CH2−CH2−COOH 2H+ + -OOC−CH2−CH2−COO−
+NH3−CH2−COOH H+ + +NH3−CH2−COO−
A constante de equilíbrio para a dissociação do ácido acético é:
[ ] [ ]
[ ] [ ]OHCOOHCH
OHCOOCH
23
33
−
−
=
+−
K

Como a concentração da água (55,5 M) é pouco alterada pela
constante de dissociação ácida, Ka:
[ ][ ]
[ ]COOHCH
HCOOCH
3
3
−
−
=
+−
aK
O valor de Ka para o ácido acético é 1,74 x 10−5.
A tendência de um ácido conjugado em dissociar é especificada
pelo valor de Ka; em valores baixos, a tendência em liberar prótons é
pequena (menos ácido se dissocia), em valores elevados é maior a
tendência em liberar prótons (mais ácido se dissocia). As constantes
de dissociação são mais facilmente expressas em termos de pKa, que
é definido como:
pKa = –log Ka
ou seja, o pKa de um ácido é o logaritmo negativo da constante de
dissociação do mesmo. Para o ácido acético,
pKa = –log (1,74 x 10−5
) = 4,76
A relação entre pKa e Ka é inversa; o menor valor de Ka fornece o
maior pKa. Os valores de Ka e pKa de alguns ácidos são mostrados na
Tabela 1.4. A água é considerada um ácido muito fraco com pKa = 14
a 25°C.
Tabela 1.5 – Constantes de dissociação e pKa de alguns ácidos fracos
importantes em bioquímica (a 25°C).
Ácido Ka, M pKa
Ácido acético (CH3COOH)
1,74 x 10−5 4,76
Ácido láctico (CH3−CHOH−COOH)
1,38 x 10−4 3,86
Ácido pirúvico (CH3CO−COOH)
3,16 x 10−3 2,50
Glicose−6−PO3H− 7,76 x 10−7 6,11
Ácido fosfórico (H3PO4)
1,1 x 10−2 2,0
Íon diidrogenofosfato ( )H PO2 4
-
2,0 x 10−7 6,8
Íon hidrogenofosfato ( )HPO4
2-
3,4 x 10−13 12,5
Ácido carbônico ( )H CO2 3 1,70 x 10−4 3,77
Íon amônio ( )NH4
+
5,62 x 10−10 9,25
B. Equação de Henderson-Hasselbalch
O pH de uma solução contendo uma mistura de ácido fraco com
sua base conjugada pode ser calculado pela equação de Henderson-
Hasselbach. Para a dissociação do ácido fraco (HA H+
+ A−) a
equação pode ser derivada tomando-se o logaritmo negativo dos dois
lados da equação Ka:
[ ][ ]
[ ]HA
AH
a
−+
=K

Por rearranjo
[ ] [ ]
[ ]−
+
=
H
HA
H aK
Pode-se expressar [H+
] como –log[H+
] e Ka como –log Ka e obter-se
[ ] [ ]
[ ]HA
A
loglogHlog a
−
+
+−=− K
e empregando as definições de pH e pKa
[ ]
[ ]HA
A
logppH a
−
+= K
ou escrita de forma genérica:
[ ]
[ ]conjugadoÁcido
conjugadaBase
logKppH 10
'
a +=
Esta equação apresenta um modo conveniente para o estudo do
inter-relacionamento do pH de uma solução, o pKa do ácido fraco e as
quantidades relativas de ácido conjugado e base conjugada presentes.
Nos casos onde a concentração molar de ácido conjugado é igual a da
base conjugada ([HA] = [A−]), a relação [A−]/[HA] é igual 1. Como
o logaritmo de 1 é zero o pH da solução é igual ao valor do pKa do
ácido fraco.
Exercício 1.2
Calcular a quantidade relativa de ácido acético e de íon acetato presente
quando 1 mol de ácido acético é titulado com 0,3 mol de hidróxido de sódio.
Calcular também o valor do pH da solução final.
Solução:
Ao adicionar 0,3 mol de NaOH, 0,3 mol de ácido acético reage para formar
0,3 mol de íon acetato, deixando 0,7 mol de ácido acético. A composição é
70% de ácido acético e 30% de íon acetato.
[ ]
[ ]acéticoÁcido
Acetato
logpKpH a +=
4,39
0,7
0,3
log4,75pH =+=
1.4 Tampões e tamponamento
A regulação do pH nos líquidos biológicos é atividade essencial
dos organismos vivos. Mesmo pequenas mudanças na concentração
do íon hidrogênio podem afetar grandemente as estruturas e as
funções das biomoléculas. A concentração do H+
é mantida
relativamente constante por meio de soluções-tampões que resistem a

alterações bruscas de pH quando adicionadas quantidades
relativamente pequenas de ácido (H+
) ou base (OH−). São formados
por ácidos fracos e suas bases conjugadas.
Quando um ácido forte como o HCl é adicionado a água pura,
todo o ácido adicionado contribui diretamente para a redução do pH.
No entanto, quando o HCl é adicionado a uma solução contendo um
ácido fraco em equilíbrio com sua base conjugada (A−), o pH não
altera tão dramaticamente, pois parte dos prótons adicionados
combinam com a base conjugada para amenizar o aumento da [H+
]
(Figura 1.6).
HCl → H+
+ Cl−
grande aumento da [H+
]
HCl + A−
→ HA + Cl−
pequeno aumento da [H+
]
Quando uma base forte (como o NaOH) é adicionada a água pura
ocorre grande redução da [H+
]. Se a base for adicionada a uma ácido
fraco em equilíbrio com sua base conjugada (A−), parte dos íons
hidróxidos aceitam prótons do ácido para formar H2O e, portanto, não
contribuem para a redução do [H+
].
NaOH → Na+
+ OH−
grande redução da [H+
]
NaOH + HA → Na+
+ A−
+ H2O pequena redução da [H+
]
O sistema ácido fraco/base conjugada (HA/A−) atua como tampão
para evitar mudanças bruscas do pH quando são adicionados ácidos
ou bases a solução.
Figura 1.6
Capacidade tamponante do par ácido fraco (HA) e sua base conjugada
(A−). O sistema é capaz de absorver tanto H
+
como OH−
por meio da
reversibilidade da dissociação do ácido. O doador de prótons (ácido fraco),
contém uma reserva de H
+
ligado que pode ser liberada para neutralizar a
adição de OH−
ao sistema resultando na formação de água. De forma
semelhante, a base conjugada (A−-
), pode reagir com os íons H
+
adicionados
ao sistema. Assim, o par ácido−base conjugado resiste às variações de pH
quando quantidades relativamente pequenas de ácido ou base são
adicionadas à solução.
A resistência a mudanças no pH de um tampão depende de dois
fatores: (a) a concentração molar do ácido fraco e sua base conjugada
e (b) a relação entre suas concentrações.
pH
Equivalentes de OH
9
8
7
6
5
4
3
2
4
4
4
4
4
4
4
pH = pK
Ação tampão
HA
A
[HA] = [A ]
HA A
H+
OH H O2

Exercício 1.3
Calcular o valor do pH obtido quando 1,0 mL de HCl 0,1 M é adicionado a 99
mL de água pura. Calcular também o pH após a adição de 1,0 mL de NaOH
0,1 M a 99 mL de água pura. (Levar em conta a diluição tanto do ácido como
da base ao volume final de 100 mL)
Solução:
Sobre a diluição, tem-se 100 mL de HCl 0,001 M e 100 mL de NaOH
0,001 M.
Ácido adicionado, [H3O
+
] = 10
-3
, portanto, pH = 3.
Base adicionada,
[0H
-
] = 10
-3
M.
Como [OH
-
][H3O
+
] = 1 x 10
-14
, [H3O
+
] = 10
-11
M; portanto, pH = 11
A capacidade tamponante máxima de um ácido é quando o pH =
pKa do ácido fraco, ou seja, quando a as concentrações molares do
ácido fraco (HA) e sua base conjugada (H−
) são iguais. Na realidade,
a capacidade tamponante é considerável mesmo dentro de uma faixa
de ±1,0 unidade de pH do valor de seu pKa. Fora destes limites a ação
tamponante é mínima. Esse fato está representado na curva de
titulação do ácido acético (Figura 1.7). Para o par ácido
acético/acetato (pKa = 4,76) o tamponamento efetivo situa-se entre
pH 3,76 e 5,76.
Figura 1.7
Curva de titulação do ácido acético por uma base (OH−). No ponto inicial
(antes da adição da base), o ácido está presente na forma CH3COOH. A
adição de base dissocia prótons até atingir o ponto médio da titulação onde o
pH = pK, as concentrações do ácido (CH3COOH) e de sua base conjugada
(CH3-COO
−
) são iguais. A adição de mais base dissocia mais prótons até que
todo o ácido atinja a forma CH3COO
−-
(ponto final). Na região de
tamponamento efetivo (PK ± 1), adições de ácidos ou bases não alteram
grandemente o pH da solução.
A. Ácidos fracos com mais de um grupo ionizável
Algumas moléculas contêm mais de um grupo ionizável. O ácido
fosfórico (H3PO4) é um ácido fraco poliprótico – pode doar três íons
pH
Equivalentes de OH
9
8
7
6
5
4
3
2
-
pH = 4,76 = p ’K
pH = p ’ + 1K
pH = p ’ - 1K

hidrogênio. Durante a titulação com NaOH as ionizações ocorrem em
etapas com a liberação de um próton por vez:
−+=−+=−+=
+ →←+ →←+ →← 3
3
38,12pK2
4
82,6pK
42
15,2pK
43 POHHPOHPOHHPOH 321
Os valores de pK1, pK2 e pK3 representam os pKa de cada grupo
ionizado (Figura 1.8).
Figura 1.8
Curva de titulação do ácido fosfórico (poliprótico). O ácido fosfórico
possui pK múltiplos, um para cada etapa da titulação.
B. Tampões fisiológicos
Os três tampões mais importantes no corpo humano são: tampão
bicarbonato, o tampão fosfato e o tampão protéico. Cada um está
adaptado para solucionar problemas fisiológicos específicos do
organismo.
1. Tampão bicarbonato. Um caso especial de sistema tampão de
grande importância nos mamíferos é o bicarbonato/ácido carbônico.
O dióxido de carbono reage com a água para formar ácido carbônico:
CO2 + H2O H2CO3
O ácido carbônico rapidamente se dissocia para formar íons H+
e
HCO+
:
H2CO3 H+ + HCO3
−
Como a concentração do H2CO3 é muito baixa no sangue, as
equações acima podem ser simplificadas a:
CO2 + H2O H+ + HCO3
−
pH
Quantidade de base (equivalentes)
14
13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
5
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
pH = 2,15 = p ’K1
pH = 6,82 = p ’K2
pH = 12,38 = p ’K3
H PO
PO
3
3
4
H PO2 4
-
HPO4
2-
3-

O H2CO3 é um ácido relativamente fraco (pKa = 6,37) e,
consequentemente, um tampão ineficaz no sangue. A relação do
HCO3
−
/CO2 necessária para manter o pH = 7,4 (normal no sangue) é
aproximadamente 11 para 1. Em outras palavras, o tampão
bicarbonato atua no sangue quase no limite de seu poder tamponante.
Além disso, as concentrações de CO2 e HCO3
−
não são
excepcionalmente altas. Apesar dessas dificuldades, o sistema
tamponante do bicarbonato é importante, pois os dois compontes
podem ser regulados. O dióxido de carbono é ajustado por alterações
na velocidade da respiração. Enquanto, o teor de bicarbonato é
regulado pelos rins.
O dióxido de carbono fisicamente dissolvido está em constante
equilíbrio com o ácido carbônico e também com o CO2 alveolar.
Alterações em qualquer dos componentes na fase aquosa, provocam
modificações no equilíbrio; por exemplo, o aumento do CO2 eleva o
H2CO3, que desvia o equilíbrio da reação de dissociação aumentando
o H+. Assim, o CO2 é considerado parte do ácido conjugado e
participa do componente ácido da equação:
[ ][ ]
[ ][ ]232
3
a
COCOH
HCOH −+
=K
Com a inclusão do CO2 o valor de pKa é 6,1. A quantidade de
H2CO3 não-dissociado é menor que 1/700 do conteúdo de CO2 e,
normalmente, é desprezada. É uma prática comum referir-se ao CO2
dissolvido como o ácido conjugado. Existe uma relação direta entre o
pH do sangue e a pressão do gás dióxido de carbono nos pulmões.
Embora o pKa para o sistema HCO3
−
/CO2 seja 1,3 unidades de pH
menor do que o pH extracelular normal de 7,40, este sistema tampona
extremamente bem, porque o CO2 pode ser regulado por alterações da
ventilação alveolar.
2. Tampão fosfato. Consiste de um ácido fraco/base conjugada
H2PO4
−/HPO4
2−
(diidrogeno fosfato/hidrogeno fosfato):
H2PO4
−
H+
+ HPO4
2−
Com pKa 7,2, poderia parecer que o tampão fosfato é uma escolha
excelente para o tamponamento sangüíneo. No entanto, as
concentrações do H2PO4
−
e HPO4
2−
no sangue são muito baixas para
exercer atividade significante. Por outro lado, o sistema fosfato é
fundamental para o tamponamento dos líquidos intracelulares onde
suas concentrações são de, aproximadamente, 75 mEq/L. Os níveis de
fosfato nos líquidos extracelulares como o sangue está ao redor de 4
mEq/L. Como o pH normal dos líquidos extracelulares é cerca de 7,2
(o intervalo é de 6,9 a 7,4) uma mistura equimolecular de H2PO4
−
e
HPO4
2−
está presente. Apesar das células conterem outros ácidos, eles
são de pouca importância pois seus valores de pKa são baixos para o
pH intracelular. Por exemplo, o ácido láctico tem um pKa de 3,86.
3. Tampão de proteínas. As proteínas apresentam uma grande
capacidade tamponante. Composta de aminoácidos ligados entre si
por ligações peptídicas, as proteínas contêm vários grupos ionizáveis
nas cadeias laterais que podem doar ou aceitar prótons. Como as
moléculas de proteínas estão presentes em significantes

concentrações nos organismos vivos, elas são tampões poderosos. Por
exemplo, a hemoglobina é a mais abundante biomolécula nas células
sangüíneas e exerce um importante papel na manutenção do pH no
sangue. Também presentes em altas concentrações e auxiliares na
manutenção do pH são a albumina e outras proteínas séricas.
1.5 Biomoléculas
Os organismos vivos são compostos por milhares de moléculas
inorgânicas e orgânicas diferentes. Contêm cerca de 27 elementos
químicos. O número real depende do tipo de célula e a espécie de
organismo. Acima de 99% da massa da maioria das células, são
compostas por oito elementos denominados elementos principais. Os
outros constituintes são elementos secundários (Quadro 1.1). A
grande maioria dos constituintes moleculares dos sistemas vivos
contém carbonos ligados covalentemente a outros carbonos e a
átomos de hidrogênio, oxigênio e nitrogênio.
A. Carbono
O carbono (número atômico 6, peso atômico 12) é um átomo
pequeno que tem quatro elétrons em seu orbital eletrônico externo
que permite participar no compartilhamento com outros quatro
átomos. Os elétrons externos do carbono estão arranjados ao redor do
núcleo como um tetraedro, uma pirâmide com faces triangulares.
Uma das mais importantes propriedades do átomo de carbono é
sua capacidade para formar ligações covalentes com outros átomos de
carbono e com átomos de hidrogênio, oxigênio, nitrogênio e enxofre
para formar cadeias ou anéis das macromoléculas. As propriedades de
ligação do carbono permitem a produção de inúmeras moléculas. As
ligações necessitam energia, exemplo: a ligação C-H requer 414
kJ·mol−1
; a ligação C-C 343 kJ·mol−1
; a ligação C-O 351 kJ·mol−1
; a
ligação C=C 615 kJ·mol−1
e a ligação C=O 686 kJ·mol−1
.
As ligações simples carbono-carbono podem girar livremente a
menos que estejam restritos por grupos muito grandes ou cargas
elétricas. A rotação permite a uma molécula orgânica assumir
diferentes formas chamadas conformações. As ligações duplas
carbono-carbono:
• São mais curtas que as ligações simples.
• Apresentam rotação limitada.
• São mais rígidas, (propriedade importante em grandes
moléculas).
• Variam o ângulo entre dois elétrons, afetando a conformação da
molécula. Isto tem um grande impacto sobre a atividade biológica
da molécula, que muitas vezes envolve uma interação que
depende da conformação de outras moléculas.
As cadeias e anéis podem apresentar diferentes arranjos em suas
ligações que se alternam dando origem a um sistema de ligação
conjugada. Os elétrons da ligação movem-se no interior da molécula
aumentando a estabilidade da estrutura. Esse fenômeno é chamado
estabilização por ressonância.

Quadro 1.2 Talidomida
Durante o período entre 1957 e 1961,
aproximadamente 10.000 pessoas em todo o mundo
nasceram com membros deformados ou inexistentes
após as mães terem ingerido a droga talidomida, um
sedativo para tratar enjôos e náuseas durante a
gravidez.
A talidomida pode existir em duas formas
enancioméricas. Animais tratados com a
R(+)−talidomida produziam neonatos normais
enquanto aquelas que recebiam o enanciômero S(−)
produziam nascituros deformados.
A talidomida prescrita para humanos era
formada por uma mistura racêmica (mistura que
contêm quantidades iguais de cada enanciômero).
Somente em 1995 foi comprovada que em
humanos há uma rápida interconversão entre os dois
enanciômeros. O equilíbrio é estabelecido entre as
duas formas no sangue, independente de qual
enanciômero foi empregado inicialmente. Isso sugere
que, mesmo utilizando a forma pura r(+)−talidomida,
os defeitos de nascimento em seres humanos seriam
os mesmos.
De modo simplificado, consideram-se as moléculas biológicas
como esqueletos de átomos de carbono ligados covalentemente entre
si para formar cadeias longas, lineares ou ramificadas ou, ainda,
estruturas cíclicas. Os átomos de hidrogênio que estão ligados aos
átomos de carbono podem ser substituídos por N, O e S para formar
uma grande variedade de grupos funcionais, tais como: aminas,
aldeídos, álcoois e sulfidrilas. Isso confere uma grande variedade de
propriedades químicas específicas encontradas nas moléculas e que
determinam as suas funções biológicas específicas. As moléculas
biológicas muitas vezes contêm mais que um grupo funcional e são
denominadas polifuncionais. Por exemplo, os aminoácidos contêm
grupos aminos e grupos carboxílicos.
Tabela 1.6 − Elementos encontrados nas células
Elementos principais Oligoelementos
Elemento Símbolo Elemento Símbolo
Carbono C Arsênico As
Hidrogênio H Boro B
Nitrogênio N Cloro Cl
Oxigênio O Cromo Cr
Fósforo P Fluor F
Enxofre S Iodo I
Cálcio Ca Ferro Fe
Potássio K Magnésio Mg
Manganês Mn
Molibdênio Mo
Níquel Ni
Selênio Se
Silicônio Si
Sódio Na
Estanho Sn
Vanádio V
Zinco Zn

B. Estrutura tridimensional
Os compostos de carbono cujas composições são idênticas, mas
as relações espaciais entre os átomos são diferentes, são denominados
estereoisômeros. O átomo de carbono ligado a quatro substituintes
diferentes é chamado assimétrico. Carbonos assimétricos são centros
quirais indicando que os estereoisômeros podem ocorrer em formas
orientadas à direita ou à esquerda. Os estereoisômeros são imagens
especulares um do outro e não−superponíveis e são chamados
moléculas quirais. Alguns estereoisômeros são enanciômeros e
apresentam atividade óptica, ou seja, giram a luz plano-polarizada
para a direita (dextrógiro) ou para a esquerda (levógiro). Uma
mistura equimolar de dois enanciômeros é opticamente inativa
(mistura racêmica).
As posições dos átomos ou grupos ao redor de um átomo de
carbono quiral não estão relacionados com a direção do desvio da luz
plano-polarizada de uma maneira simples. Emil Fisher em 1891,
arbitrária e corretamente, designou uma das estruturas do
gliceraldeído e chamou de D-gliceraldeído. O isômero levorrotatório
foi chamado L-gliceraldeído. Atualmente, o gliceraldeído permanece
como base da configuração estereoquímica das moléculas biológicas.
Estereoisômeros de todas as moléculas quirais tem configurações
estruturais relacionadas com um dos gliceraldeídos e são designadas
D ou L independente de sua atividade óptica. A atividade óptica é
indicada por (+) para dextrorrotatório e (−) para levórrotatório.
Os centros quirais são de grande importância biológica pois
muitas moléculas são seletivas quanto a quiralidade, por exemplo,
virtualmente todas as proteínas e polissacarídios dos organismos
superiores são compostos por L−aminoácidos e D−monossacarídeos,
respectivamente. Essa seletividade promove estabilidade adicional às
moléculas poliméricas.
C. Macromoléculas
As macromoléculas são construídas pela união química de
precursores relativamente simples (subunidades monoméricas) para
formar polímeros de unidades repetidas. Todos os organismos vivos
têm os mesmos tipos de subunidades monoméricas que além da
formação de macromoléculas exercem, também, várias funções
biológicas. As ligações específicas para cada tipo de macromolécula,
são formadas por reações de condensação com perda de água, em
processos que requerem o fornecimento de energia.

Figura 1.9
As macromoléculas são formadas a partir unidades monoméricas. As
macromoléculas intracelulares são polímeros de elevada massa molecular
formadas com precursores relativamente simples.
O tamanho de uma molécula é dado em termos de massa
molecular. A unidade de massa empregada é o dalton (D) (1000 D = 1
kilodalton = kD) onde 1 D é definido como 1/12 da massa do átomo
de 12
C.
As quatro principais classes de moléculas biológicas são:
1. Proteínas ou polipeptídeos. São longos polímeros formados
por vinte diferentes aminoácidos. Apresentam elevada massa
molecular que variam de centenas a milhões de daltons. Atuam como
elementos estruturais, catalisadores (enzimas), anticorpos,
transportadores, hormônios, reguladores gênicos, toxinas, etc.
2. Carboidratos. São polímeros de açúcares simples, como a
glicose, com elevadas massas moleculares. Liberam e armazenam
energia e também são elementos estruturais extracelulares.
3. Lipídeos. São formados por moléculas relativamente pequenas
(ao redor de 300-1.500 D) que podem se associar para constituir
grandes moléculas que servem, principalmente, como componentes
estruturais das membranas, como forma de armazenamento de energia
e outras funções (hormônios esteróides, vitaminas, proteção, material
isolante).
Unidades monoméricas
Reação de
condensação -( -1)H On
Onde = número de
unidades monoméricas
n
Ligações covalentes
Polímero
2

Quadro 1.3 Sistema RS
O sistema RS de nomenclatura para a
configuração estereoquímica foi desenvolvido em
1956 para superar o principal problema associado
com a nomenclatura DL, que pode ser ambigüa para
compostos com múltiplos centros quirais. O sistema
RS compara os quatro átomos ou grupos ligados ao
átomo de carbono tetraédrico (centro quiral). Cada
grupo ligado ao centro quiral tem uma prioridade. As
prioridades são: SH > OH > NH2 > COOH > CHO >
CH2OH > CH3 > H. A configuração do centro quiral é
visualizada com o grupo de menor prioridade
orientado para longe do observador, exemplo, o H
no gliceraldeído.
Se a ordem dos outros três grupos diminui na
direção horária, a configuração será considerada R
(do latim, rectus, direita). Se a ordem for no sentido
anti-horário, a configuração será considerada S (do
latim, sinistrus, esquerda). Desse modo, o
R−gliceraldeído é sinônimo de D−gliceraldeído. O
sistema RS descreve sem ambigüidades a
configuração estereoquímica de compostos
contendo vários centros quirais, exemplo, (2S, 3R)
−treonina.
4. Ácidos nucléicos (DNA e RNA). São polímeros formados por
nucleotídeos. Armazenam, transmitem e transcrevem a informação
genética. São componentes das organelas celulares.
Na Quadro 1.2 estão destacadas algumas características da
construção das macromoléculas. Como exemplo, os carboidratos
poliméricos são constituídos por monossacarídeos unidos por
ligações glicosídicas para formar oligossacarídeos (2 a 10 unidades)
ou polissacarídeos (mais de 10 unidades). Os oligossacarídeos são
descritos como dissacarídeos, trissacarídeos ou tetrassacarídeos e
assim por diante, de acordo com o número de unidades monoméricas.
Nomenclatura similar é empregada para as proteínas e ácidos
nucléicos. A maioria das macromoléculas contém uma ou poucas
unidades monoméricas diferentes, por exemplo, o glicogênio é
formado por uma única unidade monomérica, denominada glicose; o
ácido desoxirribonucléico (DNA) contém somente quatro diferentes
nucleotídios.
A forma precisa de uma estrutura polimérica é conferida pela
natureza das ligações covalentes e das ligações não-covalentes. As
três ligações não-covalentes fundamentais são: pontes de hidrogênio,
interações eletrostáticas e forças de van der Waals. Elas diferem
quanto à geometria, à força e à especificidade. Além disso, essas
ligações são grandemente afetadas pela presença da água. As ligações
não-covalentes podem ocorrer entre átomos ou grupos funcionais na
mesma cadeia ou entre cadeias adjacentes. A estrutura polimérica
pode ser degradada em suas unidades monoméricas por hidrólise pela
adição de água aos grupos que estão envolvidos nas ligações
covalentes. Nos sistemas biológicos isto é conseguido pela ação
catalisadora de enzimas.
As classes de macromoléculas biológicas não são mutuamente
exclusivas e podem interagir para produzir moléculas híbridas ou
conjugadas. Por exemplo, as proteínas e os carboidratos formam
proteoglicanos ou glicoproteínas. Os proteoglicanos são
fundamentalmente constituídos por polissacarídios (95% da massa da
macromolécula) unidos entre si por ligações covalentes e não-
covalentes às proteínas. As glicoproteínas contêm pequenas
quantidades de carboidratos ligados às cadeias polipeptídicas por
ligações covalentes.
Moléculas híbridas como os glicolipídeos, lipoproteínas e
nucleoproteínas também estão presentes nos organismos vivos.

Quadro 1.2 – Comparação das classes de macromoléculas
Características Carboidratos Proteínas Ácidos nucléicos
Unidades monoméricas Monossacarídeos Aminoácidos Nucleotídeos
Ligação covalente formada por reação de
condensação
Glicosídica Peptídica Fosfodiéster
Nomenclatura de unidades múltiplas:
2-10 unidades Oligossacarídeos Olipeptídeos Oligonucleotídeos
>10 unidades Polissacarídeos Polipetídeos Polinucleotídeos
Ocorrência de pontes de hidrogênio Intra e intermolecular Intra e intermolecular Intra e intermolecular
Enzima hidrolítica Glicosidases Peptidases Nucleases
Finalmente, deve-se notar que a atividade biológica não está
confinada a unidades monoméricas, ou grandes cadeias poliméricas
ou ainda, a moléculas conjugadas. Existem muitos exemplos de
oligômeros biologicamente ativos, como por exemplo, o glutationa
(um tripeptídeo) que atua na manutenção da integridade das
membranas.
1.1 Células: a unidade básica da vida
As células são as unidades estruturais e funcionais de todos os
organismos vivos. Elas diferem amplamente em suas estruturas e
funções, mas todas são circundadas por uma membrana que controla a
troca de substâncias para o interior e para o exterior da célula.
As células são classificadas de acordo com seu tamanho e
complexidade em uma das duas categorias:
• Procarióticas (do grego pro, antes), nas quais, o material
genético não está delimitado em um envelope nuclear. Não
possuem núcleo ou estruturas internas delimitadas por membrana.
A sua estrutura é mantida pela parede celular. São organismos
unicelulares que podem existir em associação, formando colônias
de células independentes.
• Eucarióticas (do grego eu, “verdadeiro”, e karyon, “núcleo”),
contém o material genético organizado em cromossomos dentro
de um envelope nuclear. São organismos complexos e podem ser
unicelulares ou multicelulares. As células eucarióticas possuem
várias organelas limitadas por membranas no seu citoplasma, tais
como, lisossomos, peroxissomos, mitocôndrias, retículo
endoplasmático e aparelho de Golgi (Quadro 1.1).

Quadro 1.4 Célula
A palavra célula foi introduzida na biologia em
1665 por Robert Hooke em sua coleção de desenhos
microscópicos, chamados Micrographia, que inclui
uma fina fatia de cortiça. Ele registrou a estrutura de
favos vazios da cortiça e denominou os
compartimentos de células em analogia a cela de
uma prisão ou mosteiro. O termo, atualmente, não é
empregado para descrever o compartimento vazio
mas o conteúdo vivo existente entre estas paredes
celulares. Hoje, a célula pode ser definida como a
mais simples unidade integrada nos sistemas vivos
capazes de sobreviver independentemente.
No início do século 19, as células foram
reconhecidas como formas vivas e como
pertencentes a organismos multicelulares mais
complexos. Em 1839, Theodor Schwann, um
zoologista, publicou o Mikroskopische
Untersuchungen, que contém figuras desenhadas por
Mathias Schleiden, um botânico, que registrou
semelhanças entre as células vegetais e animais.
Vinte anos após, Rudolf Virchow anunciou ‘omnis
cellula et cellula’, i.e. todas as células são
provenientes de outras células.
O metabolismo celular é compartimentalizado para organizar as
diferentes vias metabólicas como a síntese e degradação, em diversos
compartimentos, para que operem independentemente. Algumas
funções em diferentes organelas são mostradas no Quadro 1.3.
Quadro 1.3 – Resumo das funções das organelas
Organela Função
Núcleo Envolvido com uma membrana nuclear.
Localização do DNA e proteínas (histonas);
sítio da síntese da maior parte do DNA e do
RNA.
Mitocôndria Corpos separados constituídos por membranas
altamente convolutas. Sítio de reações de
oxidação produtoras de energia; possui o seu
próprio DNA. Parte do sistema sintético:
biossíntese e metabolismo energético.
Retículo endoplasmático Membrana citoplasmática contínua com as
membranas nuclear e plasmática; parte rugosa
apresenta com ribossomos ligados
Complexo de Golgi Série de membranas achatadas; envolvido na
secreção de proteínas pela célula e em reações
que ligam açúcares e outros componentes
celulares.
Lisossomos Vesículas envolvidas por membranas contendo
vários tipos de enzimas hidrolíticas. Parte do
sistema sintético (digestivo); hidrólise do
material estranho, lise de células mortas.
Peroxissomos Vesículas que contêm enzimas envolvidas no
metabolismo do peróxido de hidrogênio.
Ribossomos Compostos de partículas nucleoprotéicas (RNA
e proteínas). Sítios da síntese protéica.
Membrana plasmática É uma camada semipermeável contínua ao
redor do citoplasma que separa o seu conteúdo
da circunvizinhança. Contêm transportadores e
receptores. Regula a troca com o meio.

Com base na comparação de moléculas de RNA, Carl Woese
agrupou todos os organismos em três grupos fundamentais chamados
domínios: Eukarya (eucariontes), Bacteria (anteriormente
Eubacteria) e Archaea (anteriormente Archaebacteria). A Eukaria
compreende todos os organismos macroscópicos, incluindo os seres
humanos também como muitos organismos microscópicos
unicelulares como os fungos. Os dois domínios, Bacteria e Archaea,
consistem de procariontes.
Figura 1.10
Árvore filogenética de classificação dos três domínios. O domínio
Eukaria consiste de eucariotos. Os dois domínios, Bacteria e Eukarya,
consistem de procariotos. Na evolução, os três domínios possuem um
ancestral comum.
Resumo
1. A bioquímica é o estudo das estruturas moleculares, dos mecanismos e
dos processos químicos responsáveis pela vida. Os organismos vivos são
mantidos por sua capacidade de obter, transformar, armazenar e utilizar
energia.
2. A água contribui com 50−90% do peso de uma célula. As moléculas de
água são constituídas por dois átomos de hidrogênio e um de oxigênio.
Cada átomo de hidrogênio está ligado ao átomo de hidrogênio por uma
ligação covalente simples. As ligações oxigênio-hidrogênio são polares e
as moléculas de água são dipolos. As moléculas de água podem formar
pontes de hidrogênio entre o oxigênio de uma molécula e o hidrogênio
de outra molécula.
3. As ligações não-covalentes são relativamente fracas e facilmente
rompidas. Exercem papel fundamental na determinação das propriedades
físicas e químicas da água e de biomoléculas. Interações iônicas ocorrem
entre átomos e grupos carregados. O grande número de pontes de
hidrogênio exerce considerável efeito nas moléculas envolvidas.
4. Os pontos de ebulição e fusão da água são excepcionalmente elevados
quando comparados com compostos de estrutura e peso molecular
semelhante. As pontes de hidrogênio são responsáveis por esse
comportamento anômalo.
Escherichia
Salmonella
Bacillus
Homo
Saccharomyces
Zea
Methanocuccus
Archaeoglobus
Halobacterium
Bacteria Eukarya Archaea
Ancestral
comum

5. A estrutura dipolar da água e sua capacidade de formar pontes de
hidrogênio permite a dissolução de muitas substâncias iônicas e polares.
6. As moléculas de água líquida apresentam capacidade limitada de ionizar-
se para formar H+
e OH. Quando uma solução contém quantidades iguais
dos íons H+
e OH−, é considerada neutra. Soluções com excesso de H+
são ácidas, enquanto aquelas com grande número de OH− são básicas.
Como os ácidos orgânicos não se dissociam completamente em água, são
chamados de ácidos fracos. A constante de dissociação de um ácido, Ka,
expressa a força de um ácido fraco. Em geral, o Ka é expresso como pKa
(−log Ka).
7. A concentração do íon hidrogênio é expressa na forma de pH definido
como o logaritmo negativo da concentração do íon hidrogênio (−log
[H+
]).
8. Os ácidos são definidos como doadores de prótons, a as bases como
aceptores de prótons. A tendência de um ácido HA doar prótons é
expressa pela sua constante de dissociação (Ka =[H+
][A−]/[HA]).
9. A regulação do pH é essencial para a atividade dos seres vivos. A
concentração do íon hidrogênio é mantida dentro de estreitos limites. As
soluções tamponadas (par ácido−base conjugado) resistem a mudanças
de pH. A capacidade máxima de tamponamento está situada uma unidade
de pH acima ou abaixo do seu pKa.
10. Várias propriedades físicas da água modificam as moléculas de soluto
dissolvidas. Uma importante modificação é a pressão osmótica, a pressão
que evita o fluxo de água através das membranas celulares.
11. Todos os seres vivos são constituídos de células procarióticas ou células
eucarióticas. As procarióticas o material genético não está delimitado em
um envelope nuclear. As eucarióticas apresentam o material genético
dentro de um envelope nuclear. Essas células contêm núcleo e estruturas
complexas que não são observadas nas procarióticas.
Referências
BLACKSTOCK, J. C, Biochemistry. Oxford: Butterworth, 1998. p. 1-19.
CAMPBELL, M. K. Bioquimica. 3 ed. Porto Alegre: ArtMed, 2000. p. 64-87.
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princípios de bioquímica. 3 ed.
São Paulo: Sarvier, 2002. p. 3-85.

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Aminoácidos e
proteínas
Capítulo
2

29
2
Aminoácidos e Proteínas
Objetivos
1. Descrever as propriedades dos aminoácidos encontrados nas proteínas.
2. Identificar os seguintes grupamentos químicos nas cadeias laterais dos
aminoácidos: hidrofóbicos, alcoólicos, tiólicos, ácidos, básicos e amidas.
3. Descrever a dissociação dos aminoácidos em função da variação do pH.
4. Interpretar a curva de dissociação de um aminoácido neutro, de um
aminoácido ácido e de um aminoácido básico.
5. Calcular o pI de um aminoácido, dados os seus pKs
6. Representar uma ligação peptídica entre dois aminoácidos.
7. Identificar numa cadeia polipeptídica: o amino−terminal, o carbóxi−terminal,
os resíduos de aminoácidos, os radicais e a ligação peptídica.
8. Caracterizar os diferentes níveis estruturais das proteínas e descrever as
forças responsáveis pelos mesmos.
9. Caracterizar a desnaturação protéica como uma modificação das propriedades
físicas, químicas e biológicas das proteínas.
10. Descrever a estrutura, as propriedades e as funções das proteínas globulares
e fibrosas.
As proteínas são as biomoléculas mais abundantes nos seres
vivos e exercem funções fundamentais em todos os processos
biológicos. São polímeros formados por unidades monoméricas
chamadas α-aminoácidos, unidos entre si por ligações peptídicas. As
proteínas são constituídas de 20 aminoácidos-padrão diferentes
reunidos em combinações praticamente infinitas, possibilitando a
formação de milhões de estruturas diversas.
2.1 Aminoácidos
Os α-aminoácidos possuem um átomo de carbono central (α)
onde estão ligados covalentemente um grupo amino primário (−NH2),
um grupo carboxílico (−COOH), um átomo de hidrogênio e uma
cadeia lateral (R) diferente para cada aminoácido (Figura 2.1).
Existem duas exceções, a prolina e hidroxiprolina, que são α-
iminoácidos.

30 • MOTTA • Bioquímica • Laboratorio Autolab Ltda.
Os α−aminoácidos com um único grupo amino e um único grupo
carboxila, ocorrem em pH neutro na forma de íons dipolares
(“zwitterions”) eletricamente neutros. O grupo α−amino está
protonado (íon amônio, +
− 3NH ) e o grupo α−carboxílico está
dissociado (íon carboxilato, –COO−
).
Os aminoácidos apresentam as seguintes propriedades gerais:
• Com exceção da glicina, todos os aminoácidos são opticamente
ativos – desviam o plano da luz polarizada – pois o átomo de
carbono α de tais moléculas é um centro quiral. São átomos de
carbono ligados a quatro substituintes diferentes arranjados numa
configuração tetraédrica e assimétrica. Os aminoácidos com
átomos quirais podem existir como estereoisômeros – moléculas
que diferem somente no arranjo espacial dos átomos.
• Os α−aminoácidos que constituem as proteínas têm a
configuração estereoquímica L. Por convenção, na forma L, o
grupo +
−α 3NH está projetado para a esquerda, enquanto na forma
D, está direcionado para a direita. Os D-aminoácidos são
encontrados em alguns antibióticos: valinomicina e actinomicina
D; e em paredes de algumas bactérias: peptidoglicano. A
designação L ou D de um aminoácido não indica a sua capacidade
para desviar o plano da luz polarizada.
• A cadeia lateral (R) determina as propriedades de cada
aminoácido.
Os α-aminoácidos são classificados em classes, com base na
natureza das cadeias laterais (grupo R). Os 20 tipos de cadeias
laterais dos aminoácidos variam em tamanho, forma, carga,
capacidade de formação de pontes de hidrogênio, características
hidrofóbicas e reatividade química. Os 20 aminoácidos-padrão são
classificados pelos seus grupos R (cadeias laterais):
Aminoácidos com cadeias laterais não-polares e alifáticas
H3N C COO
H
H
Glicina
H3N C COO
CH3
H
Alanina
H3N C COO
CH CH3
CH3
H
Valina
H3N C COO
CH2
CH CH3
CH3
H
Leucina
H3N C COO
CH CH3
CH2
CH3
H
Isoleucina
H2N
COO
+
Prolina
H3N C COO
R
H
Figura 2.1
Estrutura de um α-aminoácido
na forma de íon dipolar
(“zwitterions”).

2 Aminoácidos e proteínas • 31
Aminoácidos com cadeias laterais aromáticas
H3N CH COO
CH2
Fenilalanina
H3N CH COO
CH2
OH
Tirosina
H3N CH COO
CH2
HN
Triptofano
Aminoácidos com cadeias laterais polares não-carregadas
H3N CH COO
CH2
OH
Serina
H3N CH COO
CH OH
CH3
Treonina
H3N CH COO
CH2
SH
Cisteína
H3N CH COO
CH2
CH2
S
CH3
Metionina
H3N CH COO
CH2
C
OH
O
Asparagina
H3N CH COO
CH2
CH2
C
OH
O
Glutamina
Aminoácidos com cadeias laterais carregadas negativamente
(ácidos)
H3N CH COO
CH2
COO
Aspartato
H3N CH COO
CH2
CH2
COO
Glutamato

Aminoácidos com cadeias laterais carregadas positivamente
(básicos)
H3N CH COO
CH2
CH2
CH2
NH
C
NH2
NH2
Arginina
H3N CH COO
CH2
CH2
CH2
CH2
NH3
Lisina
H3N CH COO
CH2
N
NH
Histidina
A. Aminoácidos incomuns em proteínas
Várias proteínas contêm aminoácidos incomuns formados por
modificação de resíduos de aminoácidos existentes na cadeia
polipeptídica após a sua síntese. Entre eles está o ácido
γ−carboxiglutâmico, um aminoácido ligado ao cálcio e encontrado na
protrombina, uma proteína da cascata de coagulação sangüínea. A
hidroxiprolina e a hidroxilisina produtos de hidroxilação da prolina e
lisina, respectivamente, são importantes componentes estruturais do
colágeno (ver adiante). A fosforilação dos aminoácidos contendo
grupos hidroxila, tais como a serina, a treonina e a tirosina é
empregada para regular a atividade das proteínas.
NH2
CH2
CHOH
CH2
CH2
CHNH2
COOH
Hidroxilisina
HC
H2C
N
CH
CH2
OH
COOH
H
Hidroxiprolina
B. Aminoácidos biologicamente ativos
Além da função primária como componentes das proteínas, os
aminoácidos têm vários outros papéis biológicos.
• Vários α-aminoácidos ou seus derivados atuam como
mensageiros químicos entre as células. Por exemplo, glicina,
ácido γ−aminobutírico (GABA, um derivado do glutamato),
serotonina e melatonina (derivados do triptofano) são
neurotransmissores, substâncias liberadas de uma célula nervosa
e que influenciam outras células vizinhas (nervosas ou
musculares). A tiroxina (um derivado da tirosina produzida pela
glândula tireóide) e ácido indolacético (um derivado do
triptofano e encontrado nas plantas) são exemplos de hormônios.

• Os aminoácidos são precursores de várias moléculas complexas
contendo nitrogênio. Exemplos incluem as bases nitrogenadas
componentes dos nucleotídeos e ácidos nucléicos, o heme (grupo
orgânico contendo ferro) e clorofila (pigmento de importância
crítica na fotossíntese).
• Vários aminoácidos-padrão e aminoácidos−não−padrão atuam
como intermediários metabólicos. Por exemplo, arginina,
citrulina e ornitina são aminoácidos−não−padrão componentes do
ciclo da uréia (Capítulo 10). A síntese da uréia – uma molécula
formada no fígado – é o principal mecanismo de excreção do
excesso de nitrogênio proveniente do catabolismo dos
aminoácidos.
C. Titulação dos aminoácidos
Como os α-aminoácidos possuem grupos ionizáveis na molécula,
a forma iônica predominante dessas moléculas em solução depende
do pH. A titulação dos aminoácidos ilustra o efeito do pH sobre sua
estrutura. A titulação é também útil para determinar a reatividade das
cadeias laterais dos aminoácidos.
As cadeias laterais R diferenciam um aminoácido de outro. O
significado funcional da cadeia lateral é enfatizado nas proteínas
onde o grupo α−carboxílico e o grupo α−amino formam ligações
peptídicas e, portanto, não exercem suas propriedades ácidobásicas.
Quando o grupo R é neutro, a sua composição tem pequeno efeito
sobre as propriedades de dissociação dos grupos carboxílicos e
grupos aminos do carbono α. Os aminoácidos com cadeias laterais
ionizáveis apresentam três grupos ácidobásicos. Na Tabela 2.1 estão
relacionados os valores de pK′ e pI dos grupos α−amino,
α−carboxílico além de grupos ionizáveis das cadeias laterais dos
aminoácidos.

Tabela 2.1 – Valores de pK′ e pI para os aminoácidos.
Abreviações pK
Aminoácido Comum Letra α−COOH α−NH3
Outro (R) pI
Alanina Ala A 2,34 9,69 - 6,02
Arginina Arg R 2,17 9,04 12,48 (guanidino) 10,76
Ácido aspártico Asp D 2,09 9,82 3,86 (carboxil) 2,97
Asparagina Asn N 2,02 8,80 - 5,41
Ácido glutâmico Glu E 2,19 9,67 4,25 (carboxil) 3,22
Glutamina Gln Q 2,17 9,13 - 5,65
Cisteína Cys C 1,96 10,28 8,18 (sulfidril) 5,07
Cistina
- - 1,65; 2,26 7,85;
9,85
- 5,06
Fenilalanina Phe F 1,83 9,13 - 5,48
Glicina Gly G 2,34 9,60 - 5,97
Histidina His H 1,82 9,17 6,0 (imidazol) 7,59
Hidroxilisina Hyl - 2,13 8,62 9,67 (ε-amino) 9,15
Hidroxiprolina Hyp - 1,92 9,73 - 5,83
Isoleucina Ile I 2,36 9,68 - 6,02
Leucina Leu L 2,36 9,60 - 5,98
Lisina Lys K 2,18 8,95 10,53 (ε-amino) 9,74
Metionina Met M 2,28 9,21 - 5,75
Prolina Pro P 1,99 10,.60 - 6,30
Serina Ser S 2,21 9,15 - 5,68
Tirosina Tyr Y 2,20 9,11 10,07 (fenol) 5,66
Treonina Thr T 2,63 10,43 - 6,53
Triptofano Trp W 2,38 9,39 - 5,66
Valina Val V 2,32 9,62 - 5,.97
Ao considerar a alanina em solução fortemente ácida (pH 0), tem-
se os grupos ácido e básico da molécula totalmente protonados. Com
a adição de uma base forte tal como NaOH, ocorre inicialmente a
perda de próton do grupo α−COOH e, posteriormente, a perda do
próton do grupo +
−α 3NH .
CH3
CH
COOH
NH3
+
CH3
CH
COO
-
NH3
+
CH3
CH
COO
-
NH2
A curva de titulação da alanina é mostrada na Figura 2.2.

Figura 2.2
Curva de titulação da alanina
O valor de pH no qual o aminoácido fica eletricamente neutro
(igual número de cargas positivas e negativas) corresponde ao ponto
isoelétrico (pI). O valor do pI é uma constante de um composto em
particular em condições específicas de força iônica e temperatura.
Para o aminoácido monoamino e monocarboxílico, o ponto isoelétrico
é calculado:
2
pKpK
p 21 +
=I
em que K são as constantes de dissociação dos grupos ácido e básico.
Para a alanina tem-se:
026
2
699342
p ,
,,
I =
+
=
Um exemplo mais complexo da relação entre a carga elétrica da
molécula e o pH, é a titulação dos aminoácidos monoamino e
dicarboxílicos cujos representantes são o ácido glutâmico e o ácido
aspártico. Os dois aminoácidos possuem em suas cadeias laterais um
segundo grupo carboxílico. Para o ácido aspártico tem-se:
COOH
CH2
CHNH3
+
COOH
COOH
CH2
CHNH3
+
COO
-
COO
-
CH2
CHNH3
+
COO
-
COO
-
CH2
CHNH2
COO
-
A curva de titulação do ácido aspártico é mostrada na Figura 2.3.
pH
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4 pH = 2,34 = p ’K1
pI = 6
pH = 9,69 = p ’K2

Figura 2.3
Curva de titulação do ácido aspártico
Para o ácido aspártico o pK′ do α−COOH é 2,09, o pK′ do grupo
β−COOH é 3,86 e o pK′ do +
−α 3NH é 9,82. O ponto isoelétrico (pI) é
calculado pela fórmula:
972
2
863092
p ,
,,
I =
+
=
A lisina é um exemplo de aminoácido com dois grupos básicos na
molécula. O grupo ε−NH2 da molécula confere basicidade.
NH3
+
(CH2)4
CHNH3
+
COOH
NH3
+
(CH2)4
CHNH3
+
COO
-
NH3
+
(CH2)4
CHNH2
COO
-
NH2
(CH2)4
CHNH2
COO
-
No caso da lisina o pK′ do α−COOH é 2,18 o pK′ da +
−α 3NH e o
pK′ do +
−ε 3NH é 10,53. O ponto isoelétrico é calculado:
749
2
5310958
p ,
,,
I =
+
=
A curva de titulação da lisina é mostrada na Figura 2.4.
pH
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
pH = 2,09 = p ’K1
pI = 2,97
pH = 3,86 = p ’K2
pH = 9,82 = p ’K3

Figura 2.4
Curva de titulação da lisina
Tabela 2.2. Grupos ionizáveis de aminoácidos
Onde o grupo é
encontrado
Forma ácida Forma básica
Resíduo NH2-terminal NH3
+
R R NH2 + H
+
Amônio Amina
Resíduo COOH-terminal R COOH R COO
-
+ H
+
Ácido carboxílico Carboxilato
Arginina
C NH2
+
NH2
NHR C NH
NH2
NHR + H
+
Guanidínio Guanidino
Cisteína SHR S
-
R + H2
Tiol Tiolato
Histidina
CH
C
N
NH
+
CH
R
H
CH
C
N
N
CH
R
H
+ H
+
Imidazólio Imidazol
Tirosina
CHCH
CC
CHCH
R OH
CHCH
CC
CHCH
R O
-
Fenol Fenolato
pH
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4 pH = 2,18 = p ’K1
pI =9,74
pH = 8,95 = p ’K2
pH = 10,53 = p ’K3

2.3 Reações dos aminoácidos
Os aminoácidos com seus grupos carboxílicos, grupos amino
primários e os grupos presentes nas cadeias laterais podem sofrer
diferentes reações químicas. Duas reações – ligação peptídica e a
oxidação da cisteína (formação de pontes dissulfeto) – são de
especial interesse por afetar a estrutura das proteínas.
1. Formação de ligação peptídica. Os polipeptídeos são
polímeros lineares compostos de aminoácidos ligados covalentemente
entre si por ligações amida do grupo α−COOH de um aminoácido
com o grupo α−NH2 de outro, com a remoção da água (reação de
condensação) para formar ligações peptídicas.
C C
O
OH
R1
H
NH2 + C C
O
OH
R2
H
NH2 C C
O
N
R1
H
C
H
C
R2
O
OH
H
NH2
Após incorporação a peptídeos, os aminoácidos individuais são
denominados resíduos de aminoácidos.
A estrutura que contém dois resíduos de aminoácidos é chamada
dipeptídeo; com três aminoácidos tripeptídeo, etc. Quando um grande
número de aminoácidos estão unidos dessa forma, o produto é
denominado polipeptídeo. As proteínas podem conter centenas ou
milhares de resíduos de aminoácidos.
Os polipeptídeos são geralmente representados com o grupo
amino livre chamado aminoterminal ou N−terminal à esquerda e o
grupo carboxílico livre denominado carbóxi−terminal ou C−terminal
à direita.
H N CH C N CH C N CH C N CH C O3
1
N-terminal
R O R O R O R O
C-terminal
2 3 4
H H H
Residuo 1 Residuo 2 Residuo 3 Residuo 4
+
A nomenclatura dos peptídeos pequenos é dada pela seqüência
dos nomes de resíduos de aminoácidos que os formam e inicia a
partir da esquerda com o resíduo que possui o grupo amino−terminal
livre, substituindo−se o sufixo −ina pelo sufixo −il. Assim, são
relacionados todos os aminoácidos que formam o polipeptídeo, com
exceção do que contém o grupo carboxila livre que permanece com o
nome original. Exemplo:
C C N
O H
CHCOOH
CHOH
CH3
N
H
C
O
C
CH2
C
H
NH2
CH
CH
CH
CH
CH
CH
H
CH3
CH3
Tirosilvaliltreonina
As principais características das ligações peptídicas são:

• Os seis átomos que formam a ligação Cα−CO−NH−Cα, estão no
mesmo plano (Cα é o carbono alfa de aminoácidos adjacentes).
• O C=O e N−H da ligação são trans um em relação ao outro.
• A ligação C−N apresenta algumas características de dupla ligação
parcial não podendo girar livremente.
• A livre rotação é possível para as ligações carbono−carbono e
nitrogênio−carbono (não−carbonila), permitindo variações na
conformação.
2. Oxidação da cisteína. O grupo sulfidrílico da cisteína é
reversivelmente oxidado. A oxidação de duas moléculas de cisteína
produz a cistina uma molécula que contém uma ponte dissulfeto. A
síntese da cistina é realizada após a incorporação da cisteína às
proteínas e exerce importante papel na estabilização da conformação
protéica. A ligação covalente pode ocorrer entre cisteínas de uma
única cadeia polipeptídica formando um anel ou entre cadeias
separadas para formar pontes intermoleculares.
SH
CH2
CHNH2
COOH
S
CH2
CHNH2
COOH
S
CH2
CHNH2
COOH
2
Cisteína Cistina
2.4 Peptídeos
Apesar de apresentarem estruturas menos complexas que as
moléculas de proteínas, os peptídeos exercem atividades biológicas
significantes.
O tripeptídeo glutationa (GSH, γ−L−glutamil-L−cisteinilglicina)
contém uma ligação incomum γ−amida (é o grupo γ−carboxílico e não
o grupo α−carboxílico do ácido glutâmico que participa da ligação
peptídica). Encontrada em quase todos os organismos, a glutationa
está envolvida em diferentes processos, tais como, síntese de
proteínas e DNA, transporte de aminoácidos e metabolismo de
fármacos e substâncias tóxicas. A glutationa também atua como
agente redutor e protege as células dos efeitos destrutivos da
oxidação por reação com substâncias como o peróxido (R−O−O−R),
que são metabólitos reativos do O2. Nos eritrócitos, o peróxido de
hidrogênio (H2O2) oxida o ferro da hemoglobina para a forma férrica
(Fe3+
). A metaemoglobina, o produto da reação, é incapaz de ligar o
O2. A glutationa protege contra a formação de metaemoglobina pela
redução do H2O2 em reação catalisada pela enzima
glutationa−peroxidase. No produto oxidado GSSG duas moléculas de
GSH estão unidas por uma ponte dissulfeto entre seus grupos
sulfidríla.
2 GSH + H2O2 → GSSG + H2O
A enzima γ−glutamil-transpeptidase participa do metabolismo da
glutationa e é empregada como marcador para algumas hepatopatias,
como carcinoma hepatocelular e hepatopatias por alcoolismo.

Quadro 2.1 Cromatografia de troca iônica
A cromatografia de troca iônica utiliza colunas
cromatográficas que separam as moléculas com
base na sua carga líquida. São usados compostos
com grupamentos funcionais positiva ou
negativamente carregados, tais como, dietilaminoetil
ou carboximetila, covalentemente ligados a uma
matriz sólida porosa (ex.: resinas à base de acrílico,
agarose, sílica ou estireno divinilbenzeno) para
formar trocadores de cátions ou ânions.
Quando uma solução contendo proteínas com
cargas positivas e negativas é aplicada à coluna
contendo um trocador de cargas de sinal contrário,
as moléculas carregadas ligam-se por meio de
interações iônicas a trocadores de cátions e ânions.
Moléculas neutras ou carregadas com as mesmas
cargas, movem-se através da coluna sem serem
captadas. A separação das moléculas carregadas é
usualmente realizada em solução-tampão com
concentrações de íons salinos e pH apropriados
(determinam os estados de ionização da molécula)
que progressivamente, vão enfraquecendo as
ligações iônicas.
Alguns peptídeos atuam como moléculas de sinalização usadas
para coordenar o imenso número de processos bioquímicos em
organismos multicelulares. Os exemplos incluem o apetite, pressão
sangüínea e a percepção da dor. O papel de alguns desses peptídeos
são descritos brevemente.
Os estudos de regulação da ingestão de alimentos e do peso
corporal tem revelado várias moléculas de sinalização no cérebro.
Entre elas, estão os peptídeos estimulantes do apetite como o
neuropeptídeo Y (NPY) e a galanina, e peptídeos inibidores do
apetite como colecistocinina e hormônio estimulador α−melanócito
(α−MSH). Evidências recentes sugerem que a leptina, um
polipeptídeo produzido primariamente pelos adipócitos, exerce seus
efeitos sobre o peso corporal e atua sobre o neuropeptídeo Y, a
galanina e várias outras moléculas sinalizadoras para reduzir a
ingestão de alimentos e aumentar o gasto calórico.
A pressão sangüínea – a força exercida pelo sangue contra as
paredes dos vasos – é influenciada pelo volume sangüíneo e pela
viscosidade. Dois peptídeos afetam o volume sangüíneo: a
vasopressina e o fator natriurético atrial. A vasopressina, também
chamada hormônio antidiurético (ADH), é sintetizada no hipotálamo
e contêm nove resíduos de aminoácidos. O ADH estimula os rins a
reter água. A estrutura do ADH é bastante similar a outro peptídeo
produzido pelo hipotálamo chamado oxitocina, uma molécula de
sinalização que estimula a liberação do leite pelas glândulas
mamárias e influencia o comportamento sexual, maternal e social. A
oxitocina produzida no útero estimula a contração uterina durante o
parto. O fator natriurético atrial (FNA) – um peptídeo produzido por
células atriais cardíacas em resposta a distensão – estimula a
formação de urina diluída, um efeito oposto ao da vasopressina. O
FNA exerce seus efeitos, em parte, pelo aumento da excreção de Na+
pela urina, um processo que causa o aumento da excreção da água e a
inibição da secreção de renina pelo rim.

8-Arginina vasopressina (Hormônio antidiurético)
A met−encefalina e a leu−encefalina pertencem a um grupo de
peptídeos chamados peptídeos−opiáceos, encontrados
predominantemente nas células do tecido nervoso. Os peptídeos
opiáceos são moléculas que atenuam a dor e produzem sensações
agradáveis. Os pentapeptídeos leu−encefalina e met−encefalina
diferem entre si somente pelos resíduos de aminoácidos dos
C−terminais. A substância P e a bradiquinina estimulam a percepção
de dor e apresentam efeitos opostos aos peptídeos opiáceos.
Um importante dipeptídeo comercial sintético é o adoçante
artificial aspartame (éster metílico de L−aspartil−L−fenilalanina).
2.5 Proteínas
As proteínas são componentes essenciais à matéria viva. Atuam
como catalizadores (enzimas), transportadores (oxigênio, vitaminas,
fármacos, lipídeos, ferro, cobre, etc.), armazenamento (caseína do
leite), proteção imune (anticorpos), reguladores (insulina, glucagon),
movimento (actina e miosina), estruturais (colágeno), transmissão
dos impulsos nervosos (neurotransmissores) e o controle do
crescimento e diferenciação celular (fatores de crescimento)
Além das resumidas acima, citam-se algumas funções de grande
importância fisiológica das proteínas: manutenção da distribuição de
água entre o compartimento intersticial e o sistema vascular do
organismo; participação da homeostase e coagulação sangüínea;
nutrição de tecidos; formação de tampões para a manutenção do pH,
etc.
Baseado na sua composição, as proteínas são divididas em
simples, que consistem somente de cadeias polipeptídicas, e
conjugadas que, além das cadeias polipeptídicas também possuem
componentes orgânicos e inorgânicos. A porção não-peptídica das
proteínas conjugadas é denominada grupo prostético. As mais
importantes proteínas conjugadas são: nucleoproteínas, lipoproteínas,
fosfoproteínas, metaloproteínas, glicoproteínas, hemoproteínas e
flavoproteínas.
As proteínas variam amplamente em suas massas moleculares.
Algumas atingem valores acima de um milhão de daltons. O limite
mínimo é mais difícil de definir mas, em geral, considera-se que uma
proteína quando existir pelo menos 40 resíduos de aminoácidos. Isso
representa o ponto de demarcação no tamanho entre um polipeptídeo
e uma proteína, entretanto deve-se enfatizar que essa é uma definição
de conveniência, pois não existem diferenças marcantes nas
propriedades dos polipeptídeos grandes e proteínas pequenas.
As propriedades fundamentais das proteínas permitem que elas
participem de ampla variedade de funções:
• As proteínas são polímeros constituídos por unidades
monoméricas chamadas α−aminoácidos.
+H N Cys Tyr Phe Glu Asp Cys Pro Arg Gly C3
O
NH2
S S
1 2 3 4 5 6 7 8 9

Quadro 2.2 Cromatografia de filtração em gel
A cromatografia de filtração em gel separa as
moléculas de acordo com seu tamanho e forma.
Utiliza esferas porosas de um polímero insolúvel mas
muito hidratado, como a agarose, dextrana ou
poliacrilamida. As esferas são contêm poros de
diferentes tamanhos. A separação acontece quando
as moléculas de diferentes tamanhos são passadas
através da coluna contendo as esferas porosas. As
moléculas pequenas se distribuem dentro dos poros,
enquanto as moléculas grandes não entram nos
poros e passam rapidamente através da coluna.
Assim, moléculas de diferentes massas
moleculares podem ser separadas quando passam
pela coluna (“peneira molecular”). A resolução
depende do tamanho da partícula, tamanho do poro,
velocidade do fluxo, comprimento e diâmetro da
coluna e o volume da amostra.
A técnica é aplicada no fracionamento de
proteínas e polissacarídeos, determinação da massa
molecular de proteínas e a purificação de ácidos
nucléicos.
• As proteínas contêm vários grupos funcionais.
• As proteínas podem interagir entre si ou com outras
macromoléculas para formar associações complexas.
• Algumas proteínas são bastante rígidas, enquanto outras
apresentam flexibilidade limitada.
2.6 Estrutura das proteínas
A estrutura das proteínas é extraordinariamente complexa e seu
estudo requer o conhecimento dos vários níveis de organização. A
distinção dos níveis de organização é realizada em termos de natureza
das interações necessárias para a sua manutenção. Destingem-se
quatro níveis de organização existentes nas proteínas. Os conceitos a
seguir destinam-se fundamentalmente a melhor compreensão das
estruturas protéicas, pois existem casos de sobreposição entre os
diferentes níveis de organização. As quatro estruturas são:
1. Primária: número, espécie e a seqüência dos aminoácidos
unidos por ligações peptídicas e pontes dissulfeto. É especificada por
informação genética.
2. Secundária: arranjos regulares e recorrentes da cadeia
polipeptídica (α−hélice e folha β pregueada).
3. Terciária: pregueamento não periódico da cadeia
polipeptídica, formando uma estrutura tridimensional estável.
4. Quaternária: arranjo espacial de duas ou mais cadeias
polipeptídicas (ou subunidades protéicas) com a formação de
complexos tridimensionais.
A. Estrutura primária
Cada cadeia polipeptídica tem uma seqüência específica de
aminoácidos determinada por informação genética. A estrutura
primária descreve o número de aminoácidos, a espécie, a seqüência
(ordem) e a localização das pontes dissulfeto (cistina) de uma cadeia
polipeptídica. A estrutura é estabilizada pelas ligações peptídicas e
pontes dissulfeto. Polipeptídeos com funções e seqüências de
aminoácidos similares são denominados homólogos.

O conhecimento das seqüências de aminoácidos em proteínas é
importante por várias razões:
• Compreender como as proteínas realizam suas ações moleculares.
• Compreender os efeitos das mutações resultantes da substituição
ou deleções de um ou mais aminoácidos nas proteínas.
• Verificar como proteínas similares em diferentes organismos
podem contribuir com informações acerca das vias evolutivas.
• Comparar seqüências específicas de proteínas com funções
similares em espécies diferentes.
• Identificar a presença de repetições de seqüências em diferentes
proteínas para agrupá-las em famílias.
• Estudar da constituição de proteínas desconhecidas.
Atualmente são conhecidas as estruturas primárias de numerosas
proteínas. A primeira a ser determinada foi a insulina (Sanger, 1953)
que possui duas cadeias polipeptídicas: cadeia A (21 aminoácidos) e
B (30 aminoácidos) que estão unidas entre si por duas pontes
dissulfeto (Cys−S−S−Cys):
B. Estrutura secundária
As proteínas apresentam arranjos tridimensionais com
dobramentos regulares denominados estruturas secundárias das
proteínas. Esta estrutura é estabilizada por pontes de hidrogênio entre
o oxigênio carbonil de uma ligação peptídica e o hidrogênio amida de
uma outra ligação peptídica próxima (−NH⋅⋅⋅⋅O=C−). A presença de
numerosas pontes de hidrogênio entre as ligações peptídicas tem
grande significado na estabilização da estrutura secundária. Existem
dois tipos de estruturas secundárias: α−hélice e folha β pregueada.
α−Hélice
Na estrutura α-hélice, a molécula polipeptídica se apresenta
como uma hélice orientada para a direita como se estivesse em torno
de um cilindro, mantida por pontes de hidrogênio arranjadas entre os
grupos C=O e o H−N das ligações peptídicas. Cada volta da hélice
corresponde a 3,6 resíduos de aminoácidos (Figura 2.5). A distância
que a hélice aumenta ao longo do eixo por volta é de 54 nm. As
cadeias laterais R dos aminoácidos projetam-se para fora da hélice.
Gly
Phe
Cys Cys Cys Cys Asn
Cys Cys Ala
S
S
S S
A
B
S
S

Quadro 2.3 Resina trocadora de íons
Diferentes trocadores de íons estão disponíveis
para suprir necessidades específicas. A seleção do
trocador de íon apropriado depende das
propriedades das moléculas de interesse. Com
moléculas anfotéricas, a estratégia de separação
está baseada no pI e na estabilidade da molécula em
diferentes valores de pH. Em pHs maiores que o pI,
a molécula estará negativamente carregada; em pHs
abaixo do pI estará positivamente carregada.
Assim, se a molécula é estável acima de seu
valor de pI, um trocador de ânion é usado ou, ao
contrário, se é estável abaixo do seu valor de pI, um
trocador de cátion é empregado.
A cromatografia de troca iônica é usada em
várias separações e purificações de moléculas
biológicas, ex.: proteínas, peptídeos, aminoácidos,
nucleotídeos e isoenzimas. É também utilizada na
deionização da água ou em soluções de substâncias
não-iônicas e na ultra-purificação de tampões,
reagentes iônicos etc.
A presença dos aminoácidos prolina e hidroxiprolina, cujas
estruturas cíclicas relativamente rígidas não se encaixam à hélice,
forçam a cadeia a dobrar-se rompendo a estrutura secundária regular.
Esses dois aminoácidos, também como a glicina, favorecem a
formação de conformação folha β pregueada (ver adiante).
Seqüências polipeptídicas com grande número de aminoácidos com
carga (ex.: ácido aspártico, ácido glutâmico) e grupos R volumosos
(ex.: triptofano) são incompatíveis com a estrutura helicoidal pelos
efeitos provocados por suas cadeias laterais.
Figura 2.6
Estrutura helicoidal de um segmento polipeptídeo mostrando os locais das
pontes de hidrogênio intracadeia (C=O---H−N).
C
N
C
N
N
C
C
N
C
C
C
C
N
CC
C
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
C
N
N
C
N
0,54 nm de passo
(3,6 resíduos)
0,15 nm

Quadro 2.4 Cromatografia de afinidade
A cromatografia de afinidade envolve a
propriedade de algumas proteínas de se ligarem por
interações não-covalentes. Um ligante se liga
covalentemente a uma matriz inerte, exemplo,
agarose (uma matriz de resina sólida) que é
colocada em uma coluna. Uma mistura de
biomoléculas é passada através da coluna.
As substâncias sem afinidade pelo ligante
passam pela coluna e são lavadas por um tampão. A
proteína desejada liga-se ao ligante de forma
específica de modo não-covalente. A proteína ligada
pode ser eluída por solução de ligantes livres ou
aplicando solventes orgânicos ou, ainda, por
soluções de pH ou força iônica diferente.
Folha β pregueada
A estrutura de folha β pregueada resulta da formação de pontes
de hidrogênio entre duas ou mais cadeias polipeptídicas adjacentes.
As pontes de hidrogênio ocorrem entre os grupos C=O e N–H de
ligações peptídicas pertencentes a cadeias polipeptídicas vizinhas em
vez de no interior da cadeia (Figura 2.7). Cada segmento
polipeptídico individual é denominado folha β. Diferentemente da
α−hélice compacta, as cadeias polipeptídicas da folha β estão quase
inteiramente estendidas.
Os segmentos polipeptídicos na folha β pregueada são alinhados
no sentido paralelo ou antiparalelo em relação às cadeias vizinhas:
• Estrutura folhas β paralelas é formada por cadeias polipeptídicas
com os N−terminais alinhados na mesma direção.
• Estrutura folhas β antiparalelas, os N−terminais de cada cadeia
polipeptídica estão alinhados em direções opostas.
Ocasionalmente, misturas de cadeias paralelas e antiparalelas são
observadas.

N
C
CO
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
H
O
H
O
H
O
H
O
H
N
C
CO
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
H
O
H
O
H
O
H
O
H
N
C
CO
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
H
O
H
O
H
O
H
O
H
Paralela
N
C
CO
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
H
O
H
O
H
O
H
O
H
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
O
O
O
H
H
N
C
CO
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
N
C
C
H
O
H
O
H
O
H
O
H
H
H
H
O
O
Anti-paralela
Figura 2.7
Estrutura de folha β pregueada entre cadeias polipeptídicas.
A representação esquemática das ligações intermoleculares e das
cadeias paralelas dispostas em estrutura de folha pregueada são
mostradas na Figura 2.7. Nessas estruturas as cadeias laterais (R) são
projetadas para cima e para baixo aos planos formados pelas pontes
de hidrogênio entre as cadeias polipeptídicas.
Estrutura secundária irregular
As α−hélices e as folhas β pregueadas são classificadas como
estruturas secundárias regulares, pois seus componentes exibem
conformações estruturais periódicas. Dependendo da natureza das
cadeias laterais dos aminoácidos presentes, as α−hélices e as folhas β
pregueadas podem se apresentar levemente distorcidas em sua
conformação específica.
Muitas proteínas apresentam combinações de estruturas α−hélice
e de estruturas folha β pregueada em proporções variadas. As
combinações produzem vários arranjos denominados de estruturas
supersecundárias ou motivos cujas variações são:
• Motivo βαβ, em que duas folhas β pregueadas paralelas estão
conectadas a uma α−hélice.
• Motivo β meandro, onde duas folhas β pregueadas antiparalelas
estão conectadas por aminoácidos polares e glicina que efetuam
uma mudança brusca de direção da cadeia polipeptídica.
• Motivo αα, onde duas α−hélices antiparalelas consecutivas estão
separadas por uma alça ou segmento não-helicoidal.
• Barris β, são formados quando várias folhas β pregueadas
enrolam-se sobre si mesmas.

Figura 2.8
Algumas estruturas supersecundárias (motivos-proteína). As setas
indicam as direções das cadeias polipeptídicas. (a) Motivo βαβ, (b)
motivo grampo, (c) motivo β meandro, (d) motivo chave grega e (e) β
sanduíche.
As estruturas secundárias e supersecundárias de grandes
proteínas, geralmente, são organizadas como domínios – regiões
compactas semiindependentes ligadas entre si por uma cadeia
polipeptídica.
C. Estrutura terciária
A estrutura terciária descreve a conformação específica da cadeia
polipeptídica secundária que resulta numa estrutura mais compacta
onde os átomos ocupam posições específicas. O dobramento protéico
é um processo no qual uma molécula não organizada, nascente
(recentemente sintetizada) adquire uma estrutura altamente
organizada como conseqüência de interações entre as cadeias laterais
presentes na sua estrutura primária. A estrutura terciária apresenta
várias características importantes:
• Muitos polipeptídeos dobram de modo que os resíduos de
aminoácidos que estão distantes um do outro na estrutura
primária podem estar próximos na estrutura terciária.
• Devido ao empacotamento eficiente pelo dobramento da cadeia
polipeptídica, as proteínas globulares são compactas. Durante o
processo, a maioria das moléculas de água são excluídas do
interior da proteína tornando possível interações entre grupos
polares e não−polares.
• Algumas cadeias polipeptídicas dobram-se em duas ou mais
regiões compactas conectadas por um segmento flexível de cadeia
polipeptídica. Essas unidades globulares compactas, chamadas
domínios, são formadas por 30 a 400 resíduos de aminoácidos.
Dominios são segmentos estruturalmente independentes que têm
(b) Grampo(a) Unidade (c) Meandro
(d) Chave grega (e) Sanduíche

funções específicas. Por exemplo, o receptor protéico CD4, que
permite a ligação do vírus da imunodeficiência humana (HIV)
com a célula do hospedeiro, é formado por quatro domínios
similares de aproximadamente 100 aminoácidos cada. As
pequenas proteínas possuem, geralmente, apenas um domínio.
A estrutura terciária tridimensional das proteínas é estabilizada
por interações entre as cadeias laterais:
1. Interações hidrofóbicas. São as forças não-covalentes mais
importantes para a estabilidade da estrutura enovelada. As interações
são resultantes da tendência das cadeias laterais hidrofóbicas –
presentes na alanina, isoleucina, leucina, fenilalanina e valina – de
serem atraídas umas pelas outras para agruparem-se em áreas
específicas e definidas para minimizar seus contatos com a água.
Quando circundados por moléculas de água, os grupos hidrofóbicos
são induzidos a juntarem-se para ocupar o menor volume possível.
Assim, as moléculas de água altamente ordenadas são liberadas do
interior, aumentando a desordem do sistema (entropia). O aumento da
entropia é termodinamicamente favorável e dirige o dobramento
protéico.
2 Interações eletrostáticas (ligações iônicas). Grupos
carregados positivamente como os grupos ε-amino, ( +
− 3NH ), nas
cadeias laterais de resíduos de lisina podem interagir com grupos
carregados negativamente, como o grupo carboxila (−COO−
) do ácido
glutâmico ou ácido aspártico. Cerca de dois terços dos resíduos de
aminoácidos com cargas nas proteínas formam pares iônicos (ou
pontes salinas: associação de dois grupos iônicos de cargas opostas).
3. Ligações covalentes. O único tipo de ligação covalente
presente na manutenção da estrutura terciária é a ponte dissulfeto
formada de dois grupos sulfidrila de cadeias laterais de duas cisteínas
(Cys−S−S−Cys) para produzir uma cistina. As pontes dissulfeto
separadas uma da outra na estrutura primária (intracadeia) ou entre
duas cadeias polipeptídicas (intercadeias) formam-se à medida que a
proteína se dobra para adquirir a sua conformação nativa. No meio
extracelular, essas ligações protegem parcialmente a estrutura das
proteínas de modificações adversas de pH e das concentrações de
sais. As proteínas intracelulares raramente contêm pontes dissulfeto
devido às altas concentrações citoplasmáticas de agentes redutores.
4. Pontes de hidrogênio. Grande número de pontes hidrogênio
são formadas no interior e na superfície das proteínas (são pontes
diferentes daquelas envolvidas na manutenção de α−hélice ou folha β
pregueada). Além de formar pontes de hidrogênio entre si, os grupos
polares das cadeias laterais dos aminoácidos podem interagir com a
água ou com o esqueleto polipeptídico. As pontes de hidrogênio
contribuem moderadamente para direcionar o enovelamento.
5. Forças de van der Waals. É uma força de atração inespecífica
que ocorre quando dois átomos quaisquer estão próximos. Podem
existir entre unidades de fenilalanina e tirosina próximas umas das
outras ou entre resíduos vizinhos de serina. As forças de van der
Waals são também proeminentes entre as cadeias laterais envolvidas
nas interações hidrofóbicas. Apesar dessas forças serem
comparativamente fracas (Tabela 2.3), o efeito acumulativo de

numerosos sítios de interação tem substancial influência para a
estabilidade da estrutura enovelada.
Figura 2.9
Ligações ou interações que estabilizam a estrutura terciária das proteínas.
Os íons metálicos também podem formar ligações cruzadas
internas nas proteínas. Exemplo, os domínios contendo ligações
cruzadas chamadas dedos de zinco são comuns em proteínas ligadoras
de DNA. Essas estruturas consistem de 20-60 resíduos com um ou
dois íons Zn2+
. Os íons Zn2+
são coordenados em um tetraedro pelas
cadeias laterais de Cys e/ou His e, algumas vezes, Asp ou Glu. Os
domínios são muito pequenos para assumir uma estrutura terciária
estável na ausência de Zn2+
. O zinco é um íon ideal para estabilizar
proteínas; ele pode interagir com vários ligantes (S, N ou O)
provenientes de vários aminoácidos.
D. Estrutura quaternária
Muitas proteínas são multiméricas, ou seja, são compostas por
por duas ou mais cadeias poliptídicas. As cadeias individuais de
polipeptídeos − chamadas protômeros ou subunidades − estão
associadas por interações não−covalentes: efeitos hidrofóbicos,
pontes de hidrogênio e interações eletrostáticas. O arranjo espacial
das subunidades é conhecido como estrutura quaternária das
proteínas. As proteínas multiméricas em que algumas ou todas as
subunidades são idênticas, denominam-se oligômeros. Os oligômeros
são compostos de protômeros, que podem consistir de uma ou mais
subunidades. Grande quantidade de proteínas oligoméricas contêm
duas ou quatro subunidades protoméricas, e são chamadas de
diméricas ou tetraméricas, respectivamente.
Existem várias razões para a existência de proteínas
multissubunidades:
CH2 CH2 CH2 CH2
CH2
Cys Ile Val Trp Tyr Ser Glu
CH2
O
C O
Cys Ala Phe Leu His Asp Arg
(CH )2
NH
3
C
H N2 NH2
+
CH2 CH2 CH2
C OH
O
O
H
O
H
N
N
CH
CH3CH3
N
CH
CH3CH3
CH2
CH
CH3 CH2
CH3
CH3CH2
S
S
Ligação
covalente
Interações
hidrofóbicas
Ligações
eletroestáticas
Pontes de
hidrgênio

• A síntese isolada de subunidades é mais eficiente que aumentos
de tamanho da cadeia polipeptídica única.
• Em complexos supramoleculares como as fibrilas do colágeno, a
reposição de pequenos componentes defeituosos é um processo
mais eficiente.
• As interações complexas de múltiplas subunidades ajudam a
regular as funções protéicas.
Um exemplo de estrutura quaternária é a hemoglobina formada
por quatro subunidades, ligadas entre si numa configuração
específica (oligômero). Cada uma das subunidades é caracterizada
por sua própria estrutura secundária e terciária. As interações dos
polipeptídeos ocorrem entre os grupos desprotegidos que não
participam do enovelamento da cadeia (estrutura terciária) (ver
Proteínas globulares). Por outro lado, a enzima α−quimotripsina não
possui estrutura quaternária apesar de ser formada por três cadeias
polipeptídicas, já que essas subunidades estão unidas entre si por
ligações covalentes.
E. Proteínas chaperones
É uma família de proteínas que previnem a agregação de
proteínas recém-sintetizadas antes que elas assumam sua forma ativa,
sem alterar o resultado final do processo de enovelamento. As
proteínas de choque térmico (hsp, heat shock protein) cuja síntese é
aumentada em temperaturas elevadas, é um exemplo de chaperones
que se liga a polipeptídeos à medida que são sintetizadas nos
ribossomos. Existem duas classes principais de chaperones: a família
hsp70, de proteínas de peso moleculares 70 kD, e as chaperoninas.
F. Dinâmica protéica
Apesar da importância das forças que estabilizam as estruturas,
deve-se reconhecer que as funções das proteínas exigem um certo
grau de flexibilidade. O significado da flexibilidade conformacional
(flutuações contínuas e rápidas na orientação dos átomos na proteína)
foi demonstrado nas interações proteínas-ligantes. A função protéica
muitas vezes envolve a rápida abertura e fechamento de cavidades na
superfície da molécula. A velocidade com que as enzimas catalisam
reações está limitada em parte pela rapidez com que o produto é
liberado do sítio ativo. A transferência de informações entre
biomoléculas é acompanhada por modificações na estrutura
tridimensional. Por exemplo, a conformação das subunidades das
moléculas de hemoglobina sofre modificações estruturais específicas
com a ligação e liberação do oxigênio da molécula.
2.7 Desnaturação e renaturação
A desnaturação ocorre pela alteração da conformação
tridimensional nativa das proteínas (estrutura secundária, terciária e
quaternária) sem romper as ligações peptídicas (estrutura primária).
Como a estrutura tridimensional específica das proteínas é
fundamental para o exercício de suas funções, alterações estruturais

provocadas pela desnaturação ocasionam a perda parcial ou completa
das suas funções biológicas.
Muitas vezes, em condições fisiológicas, as proteínas recuperam
a conformação nativa e restauram atividade biológica quando o
agente desnaturante é removido em processo denominado
renaturação.
A desnaturação ocorre nas seguintes condições:
1. Ácidos e bases fortes. Modificações no pH resultam em
alterações no estado iônico de cadeias laterais das proteínas, que
modificam as pontes de hidrogênio e as pontes salinas (associação de
grupos iônicos de proteínas de carga oposta). Muitas proteínas
tornam-se insolúveis e precipitam na solução.
2. Solventes orgânicos. Solventes orgânicos solúveis em água
como o etanol, interferem com as interações hidrofóbicas por sua
interação com os grupos R não−polares e forma pontes de hidrogênio
com a água e grupos protéicos polares. Os solventes não-polares
também rompem interações hidrofóbicas.
3. Detergentes. As moléculas anfipáticas interferem com as
interações hidrofóbicas e podem desenrolar as cadeias polipeptídicas.
4. Agentes redutores. Em presença de reagentes como a uréia e
β−mercaptoetanol ocorre a conversão das pontes dissulfeto em grupos
sulfidrílicos. A uréia rompe pontes de hidrogênio e interações
hidrofóbicas.
5. Concentração de sais. A ligação de íons salinos a grupos
ionizáveis das proteínas enfraquecem as interações entre grupos de
cargas opostas da molécula protéica. As moléculas de água solvatam
os grupos protéicos. Com a adição de grandes quantidades de sal às
proteínas em solução, formam-se precipitados. As moléculas de água
competem pelo sal adicionado tornando a quantidade de solvente
muito pequena e, com isso, promovendo a agregação de moléculas
protéicas e a sua precipitação. Esse efeito é chamado salting out.
6. Íons de metais pesados. Metais pesados como o mercúrio
(Hg2+
) e chumbo (Pb2+
) afetam a estrutura protéica de várias formas.
Podem romper as pontes salinas pela formação de ligações iônicas
com grupos carregados negativamente. Os metais pesados também se
ligam com grupos sulfidrílicos, um processo que pode resultar em
profundas alterações das estruturas e funções protéicas. Por exemplo,
o chumbo liga-se aos grupos sulfidrílicos de duas enzimas da via
sintética da hemoglobina causando anemia severa (na anemia o
número de eritrócitos ou da concentração de hemoglobina no sangue
estão abaixo dos valores de referência).
7. Alterações na temperatura. Com o aumento da temperatura, a
velocidade de vibração molecular aumenta. Eventualmente,
interações fracas como as pontes de hidrogênio são rompidas
promovendo alterações na conformação das proteínas.
8. Estresse mecânico. Agitação e trituração rompem o delicado
equilíbrio de forças que mantém a estrutura protéica. Por exemplo, a
espuma formada quando a clara do ovo é batida vigorosamente
contém proteína desnaturada.

Figura 2.10
Desnaturação de proteínas
2.8 Proteínas fibrosas
As proteínas fibrosas tipicamente contêm altas proporções de
estruturas secundárias regulares, como α−hélices ou folha β
pregueadas. Compõem os materiais estruturais de órgãos e tecidos,
dando a eles elasticidade e/ou resistência. Em geral, são pouco
solúveis em água pela presença de teores elevados de aminoácidos
hidrófobos tanto no interior como no exterior das cadeias
polipeptídicas helicoidais reunidas em feixes. São exemplos
característicos da relação entre a estrutura protéica e a função
biológica. As principais proteínas fibrosas são: o colágeno, as
α−queratinas e a fibroína da seda.
A. Colágeno
O colágeno é a proteína mais abundante em vertebrados sendo
componente essencial do tecido conjuntivo que, numa variedade de
formas geneticamente distintas, se distribui pela matriz óssea, pele,
tendões, cartilagens, córnea, vasos sangüíneos, dentes e outros
tecidos. É sintetizado pelas células do tecido conjuntivo e secretada
para o espaço extracelular para fazer parte de uma rede complexa de
macromoléculas localizadas na matriz extracelular.
s
s
s
s
Nativa Desnaturada

Quadro 2.5 Osteogenesis imperfecta
A osteogenesis imperfecta, também conhecida
como doença dos ossos quebradiços, é um grupo de
pelo menos quatro doenças clínica, genética e
bioquimicamente distintas com prevalência de
1:10.000. A gravidade da doença varia de moderada
a letal e depende da natureza e da posição da
mutação. Nas formas mais severas, mais de 100
fraturas in útero foram relatadas com o resultante
parto de natimorto.
O defeito fundamental são mutações nos genes
do procolágeno Tipo I. Na maioria das mutações
ocorre a substituição de uma única base no códon
para a glicina, resultando na distorção da hélice
tríplice do colágeno.
A estabilidade da estrutura do colágeno é
reduzida pelo rompimento da ponte de hidrogênio N–
H do esqueleto de cada alanina (normalmente
glicina) ao grupo carbonila da prolina adjacente da
cadeia vizinha.
A posição da aberração está relacionada com a
gravidade da doença. Mutações próximas do C-
terminal são mais severas que as mais próximas do
N-terminal. Isso porque a formação da hélice tríplice
inicia a partir do C-terminal e progride em direção ao
N-terminal. A gravidade da doença também esta
relacionada com as propriedades do aminoácido que
substitui a glicina.
O colágeno é uma proteína extracelular pouco solúvel em água e
organizada em fibras de grande resistência. Cada molécula de
colágeno é constituída de três cadeias polipeptídicas (uma tripla
hélice) enroladas uma em torno da outra e orientadas para a direita
com cerca de 1.000 resíduos de aminoácidos cada uma.
A estrutura primária das cadeias polipeptídicas do colágeno (com
exceção de 15 a 25 aminoácidos nos terminais −NH2 e −COOH) é
constituída de glicina (~33% do total), de prolina (~10%) e
4−hidroxiprolina (~10%), constituindo tripletes da seqüência repetida
(Gly−X−Y)n, em que X e Y são freqüentemente prolina e
hidroxiprolina. A 5−hidroxilisina e a 3−hidroxiprolina também estão
presentes em pequenas quantidades. Alguns resíduos de hidroxilisina
do colágeno estão ligados a carboidratos simples por meio de sua
hidroxila formando glicoproteínas. Os componentes carboidratos do
colágeno são necessários para a fibrilogênese, associação de fibras de
colágeno em suas localizações extracelulares, como os tendões e
ossos.
As três cadeias polipeptídicas entrelaçam-se para formar uma
tríplice hélice à direita estabilizada por pontes de hidrogênio
formadas entre as cadeias polipeptídicas individuais (entre o NH da
glicina de uma cadeia e a C=O da prolina ou de outro aminoácido em
outra cadeia) constituindo o módulo estrutural básico do colágeno,
chamado tropocolágeno.
A síntese do colágeno ocorre inicialmente no retículo
endoplasmático, depois no aparelho de Golgi e, finalmente, no espaço
extracelular. A cadeia nascente polipeptídica, chamada
pré−procolágeno, sofre modificação pós−transducional fornecendo o
procolágeno. Modificações pós-translacionais adicionais envolvem a
hidroxilação, a oxidação, a condensação aldólica, redução e
glicolisação. Pela ação de hidrolases (prolil−hidroxilase e
lisil−hidroxilase) são adicionados grupos hidroxila aos resíduos de
prolina e lisina da cadeia em reações que requerem ácido ascórbico
(vitamina C).
Na deficiência de vitamina C, o tropocolágeno não forma as
ligações cruzadas covalentes. O resultado é o escorbuto, uma doença
nutricional cujos sintomas são: descolorações da pele, fragilidade dos
vasos sangüíneos, hemorragia gengival e, em casos extremos, a
morte.

Quadro 2.6 Príon proteína
A encefalopatia espongiforme bovina (“doença
da vaca louca”), “scrapie” em ovelhas, a síndrome de
Creutzfeldt−Jacob e a kuru em humanos – são
doenças causadas por uma proteína conhecida como
príon−proteína celular (PrPC). A príon−proteína
(agentes infecciosos proteináceos) é componente
das células cerebrais normais onde se encontra
fundamentalmente na conformação α−hélice. Em
tecidos doentes, a forma infecciosa da proteína príon
apresenta-se como uma mistura de α−hélice e folhas
β pregueadas (PrPSc), produzindo agregados
fibrosos que danificam as células cerebrais. As
doenças por príons derivados de PrPSc podem ser
de origem genética ou infecciosa.
A proteína é encontrada principalmente na
superfície externa de neurônios, mas sua função
ainda é desconhecida.
Mutações nos genes humanos PrPc parecem ser
responsáveis por doenças inerentes da
príon−proteína, por exemplo, a doença de
Gerstmann−Sträussler−Scheinker e insônia familiar
fatal. Mais de 18 diferentes mutações já foram
identificadas.
O príon foi descoberto pelo Dr. Stanley B.
Prusiner, o qual recebeu o Prêmio Nobel de
Fisiologia em 1997.
Figura 2.11
Representação do modelo de colágeno
As ligações cruzadas covalentes formadas dentro e entre as
hélices do tropocolágeno, aumentam a resistência tensional dessas
estruturas. As ligações cruzadas são obtidas a partir da lisina em duas
fases:
• O grupo ε−amino da lisina ou da hidroxilisina é oxidado pela
lisil-oxidase para formar alisina um aminoácido contendo o
grupo R aldeído.
• O grupo aldeído da alisina reage com o grupo ε-amino de outro
resíduo de lisina de um filamento adjacente para produzir uma
ligação cruzada estável. Alternativamente, dois resíduos de
alisina reagem por condensação aldólica para formar outra
ligação cruzada.
A biossíntese das cadeias de tropocolágeno e sua associação em
microfibrilas do colágeno ocorre a partir de moléculas precursoras
chamadas pró-colágenos que são processadas pela remoção dos
aminoterminais e carboxi-terminal por meio de proteólise seletiva.
As três cadeias polipeptídicas que compõem o colágeno são
denominadas cadeias α. Essas cadeias combinadas em uma estrutura
em tripla hélice formam os vários tipos de colágeno presentes nos
tecidos. O colágeno tipo I, o mais abundante (90% do colágeno total),
é formado por duas cadeias polipeptídicas α1 e uma cadeia α2 que
formam uma hélice tríplice. Alguns tipos de colágeno são mostrados
na Tabela 2.3.
Fibras de colágeno

Tabela 2.3 Alguns tipos de colágeno mais abundantes
Tipo Composição Distribuição nos tecidos
I (α1)2 α2 Tendões, pele, ossos, córnea, vasos sangüíneos
II (α1)3 Cartilagem, disco intervertebral, humor vítreo
III (α1)3 Pele fetal, vasos sangüíneos, órgãos internos
IV (α1)2 α2 Membrana basal
V (α1)2 α2 Pele, placenta, vários tecidos
B. α-Queratinas
As α−queratinas são proteínas constituídas quase exclusivamente
de α−hélices compostas de três cadeias polipeptídicas enroladas em
forma de corda helicoidal resistente ao estiramento. São ricas em
resíduos de cisteína que formam pontes covalentes de dissulfeto que
estabilizam as cadeias polipeptídicas adjacentes. Apresentam também
teores importantes de resíduos de aminoácidos hidrofóbicos alanina,
valina, isoleucina, fenilalanina e metionina.
As α−queratinas formam a proteína da pele, cabelo, unhas,
chifres, penas e lã. O cabelo é constituído de células mortas.
C. Fibroína da seda
Muitos insetos e aranhas produzem seda, uma estrutura que
consiste da proteína fibrosa fibroína embebida em uma matriz
amorfa. Na fibroína, considerada uma β−queratina, as cadeias
polipeptídicas são arranjadas na conformação de folhas
β−antiparalela. As folhas β são formadas porque a fibroína tem
elevado conteúdo de aminoácidos com grupos R relativamente
pequenos como a glicina, alanina ou serina. A seda é uma fibra
resistente por estar quase completamente distendida. Para esticá-la
mais, seria necessário romper as ligações covalentes de suas cadeias
polipeptídicas. No entanto, a flexibilidade da seda é ocasionada pelo
deslizamento das folhas β adjacentes que estão associados por forças
de van der Waals.
2.9 Proteínas globulares
As proteínas globulares possuem cadeias polipeptídicas
enoveladas firmemente em estruturas tridimensionais compactas com
forma esférica ou elipsóide. Suas massas moleculares são variáveis
enquanto a solubilidade em água é relativamente elevada pois as
cadeias laterais hidrofóbicas (insolúveis em água) dos aminoácidos
(fenilalanina, leucina, isoleucina, metionina e valina) estão
orientados para o interior das estruturas, enquanto os grupos polares
hidrófilos (arginina, histidina, lisina, ácido aspártico e ácido
glutâmico) estão situados na área externa. Os aminoácidos com
grupos polares não−carregados (serina, treonina, asparagina,
glutamina e tirosina) estão tanto na superfície externa da proteína,
como no interior da molécula. As proteínas globulares exercem
diferentes tipos de atividades biológicas, tais como: enzimas,

transportadores e moduladores fisiológicos e genéticos. Os exemplos
típicos são: a mioglobina, a hemoglobina e os anticorpos.
Proteína globular com estrutura α-hélice e folha β pregueada.
A. Mioglobina
A mioglobina presente no citosol das células musculares, é uma
proteína transportadora e armazenadora de oxigênio nos músculos
esqueléticos e cardíacos dos vertebrados. A mioglobina liga o
oxigênio liberado pela hemoglobina nos capilares e posteriormente
difundido através das membranas celulares. Formada por uma única
cadeia polipeptídica de 153 resíduos de aminoácidos e um grupo
prostético heme (anel heterocíclico porfirínico contendo quatro anéis
pirrólicos e um átomo de Fe2+
). Não possui resíduos de cisteína e,
portanto, não apresenta ligações dissulfeto. As características
fundamentais da estrutura da mioglobina são:
• É uma proteína globular com dimensões aproximadas de 4,5 x 3,5
x 2,5 nm.
• A superfície da molécula é polar e seu interior apolar. Os
aminoácidos polares da cadeia polipeptídica contribuem para a
alta solubilidade da molécula.
• O interior da molécula é compacto e consiste quase inteiramente
de resíduos de aminoácidos não-polares (leucina, valina,
metionina e fenilalanina) e é desprovido de resíduos de
aminoácidos com carga, tais como, aspartato, glutamato, lisina e
arginina. Os únicos resíduos polares no interior são dois resíduos
de histidina, que atuam na ligação do ferro e oxigênio.
• Resíduos de aminoácidos polares e não-polares (ex.: treonina e
tirosina) estão orientados com sua porção não-polar para o
interior da molécula.
• Composta por oito regiões α-hélice conectadas por dobras
formadas por aminoácidos desestabilizadores designados A–H ,
que constituem 75% da cadeia. Cada aminoácido da cadeia é

codificado, ex.: His F8 refere-se ao oitavo resíduo da hélice F
(Figura 2.12).
• A cadeia contém um total de sete segmentos não-helicoidais:
cinco deles no interior das regiões helicoidais e designados de
acordo com as hélices que eles interrompem.
• A ocorrência de prolina interrompe as α−hélice. Existem quatro
resíduos de prolina na mioglobina.
Figura 2.12
Estrutura da molécula de mioglobina. O esqueleto peptídico é
constituído por oito α-hélices marcadas por letras, de A a H.
B. Hemoglobina
A hemoglobina é uma proteína tetramérica presente nas hemáceas
cuja principal função é o transporte do oxigênio dos pulmões aos
tecidos periféricos. A hemoglobina também transporta CO2 e prótons,
dos tecidos periféricos aos pulmões, para subseqüente excreção.
A hemoglobina normal de adulto, a HbA consiste de quatro
cadeias polipeptídicas: duas α (cada uma com 141 resíduos de
aminoácidos) e duas β (cada uma com 146 resíduos de aminoácidos)
representada por α2β2 e estabilizadas por pontes de hidrogênio e
interações eletrostáticas. Outra forma encontrada em baixos teores (1
a 3,5% do total) no adulto é a HbA2 composta por cadeias α2δ2. A
HbF formada por α2γ2 predomina no feto, em 60 a 90% no recém-
nascido e <1% após um ano. A hemoglobina H formada por quatro
cadeias β, produzida quando faltam cadeias α para a síntese de HbA.
A hemoglobina de Bart constituída de tetrâmero de γ, formada
quando faltam cadeias α para a síntese de HbF no feto; apresenta-se
em <2% no recém-nascido normal.
Cada uma das cadeias de hemoglobina contém um grupo
prostético, o heme (molécula de protoporfirina IX contendo um
átomo de Fe2+
). Nas cadeias α, o heme está encaixado entre a His−58

e a His−87, enquanto nas cadeias β, o encaixe ocorre entre a His−63 e
His−92.
Com respeito à estrutura secundária, cada cadeia de
hemoglobina consiste de várias regiões α−hélice separadas umas das
outras por segmentos não−helicoidais. A estrutura terciária envolve
várias voltas e espirais, tendo cada cadeia uma forma esferóide.
Apesar das estruturas primárias das cadeias α e β da hemoglobina
diferirem significativamente daquela da mioglobina, as conformações
secundária e terciária são bastante semelhantes.
As principais características da molécula de hemoglobina são:
• Não existem ligações covalentes entre as quatro cadeias
polipeptídicas, apesar da existência de dois resíduos de cisteína
em cada subunidade α e um resíduo por subunidade β.
• Entre as subunidades idênticas (αα ou ββ), existem poucas
interações eletrostáticas e algumas pontes de hidrogênio.
• Entre as subunidades α e β existem extensas regiões de
interações eletrostáticas que produzem dois dímeros idênticos,
α1β1 e α2β2, que se movimentam juntos.
Figura 2.13
Grupo heme. O grupo heme está presente na mioglobina, hemoglobina e
em hemoproteínas.
• Entre os dímeros estão presentes uma rede de interações
eletrostáticas e pontes de hidrogênio que se rompem e são
substituídas pela formação de novas ligações no decorrer da
oxigenação reversível da hemoglobina. Na oxigenação não
ocorrem alterações na estrutura terciária de cada subunidade, mas
as cadeias α e β sofrem alterações rotacional e posicional de
N N
N N
A B
CD
O
O
Fe(II)
N
CH2
C
H
CN
H
O
HN
CHH C CH
CH
CH
CH
CH CH COOOOC CH CH
2
3
2 22 2
32
H C3
H C3

diferentes magnitudes causando um novo empacotamento das
subunidades.
Figura 2.13
Estrutura da hemoglobina.
Em presença de oxigênio, os átomos de ferro da
desoxihemoglobina se dirigem ao plano do anel heme. Esse
movimento é transmitido à histidina proximal (F8), que se move em
direção ao plano do anel e aos resíduos ligados. (Figura 2.14).
C
N
CH
HC
N
Hélice F
Fe
Plano da
porfirina
+O2
C
CH
N
N
Hélice F
Fe
HC
O
O

Figura 2.14
O átomo de ferro se dirige para o plano do heme oxigenado. A histidina
F8 é atraída junto com o átomo de ferro.
Enquanto a mioglobina apresenta grande afinidade pelo oxigênio,
a hemoglobina demonstra uma afinidade inicial lenta que se torna
progressivamente mais rápida. Esse fenômeno é conhecido como
interação cooperativa, uma vez que a ligação do primeiro O2 à
desoxi−hemoglobina facilita a ligação de O2 às outras subunidades na
molécula. De modo inverso, a dissociação do primeiro O2 da
hemoglobina completamente oxigenada, Hb(O2)4, tornará mais fácil a
dissociação de O2 das outras subunidades da molécula. A oxigenação
da hemoglobina é acompanhada por mudanças conformacionais nas
proximidades do grupo heme. A estrutura quaternária da hemoglobina
desoxigenada (desoxi−Hb) é descrita como estado conformacional T
(tenso) e aquela da hemoglobina oxigenada (oxi−Hb) como estado
conformacional R (relaxada). A afinidade do O2 é mais baixa no
estado T e mais alta no estado R.
Em função da cooperatividade em associação e dissociação do
oxigênio, a curva de saturação de oxigênio para a hemoglobina difere
da observada para a mioglobina (Figura 2.15)
Figura 2.15
Curva de ligação da mioglobina e hemoglobina pelo oxigênio. A forma
hiperbólica da curva de ligação da mioglobina representa a ligação simples
de uma molécula pequena a uma proteína. A ligação do oxigênio à
hemoglobina segue uma curva sigmóide característica de uma interação
cooperativa entre os sítios de ligação.
Além das modificações estruturais de proteínas causadas pela
oxigenação/desoxigenação, a ligação do O2 à hemoglobina é afetada
por substâncias chamadas efetores alostéricos (ver Capítulo 3:
Enzimas): CO2, H+
e 2,3−bifosfoglicerato (2,3−BPG).
1. Efeito do 2,3−bifosfoglicerato (2,3−BPG). O 2,3−BPG,
sintetizado a partir de um intermediário da via glicolítica (o
1,3−bifosfoglicerato), é um importante modulador da ligação do
100
80
60
40
20
0 20 40 60 80 100 120
Hemoglobina
Mioglobina
Pressão
venosa
Pressão
arterial
Pressão parcial de oxigênio (mm Hg)

oxigênio à hemoglobina. Nos tecidos periféricos, a deficiência de
oxigênio determina acúmulo de 2,3−DPG. Nos eritrócitos, o 2,3−BPG
liga-se fortemente a desoxiemoglobina e fracamente a oxiemoglobina
atuando como um efetor alostérico negativo. Assim, o BPG reduz a
afinidade da hemoglobina pelo oxigênio através da ligação com a
desoxiemoglobina, mas não à oxiemoglobina.
C
O
OPO3
CH OH
CH2OPO3
2-
2-
2,3-Bifosfoglicerato
A concentração do 2,3−BPG nos eritrócitos é sensível a várias
condições fisiológicas e patológicas. Os níveis de 2,3−BPG estão
elevadas na privação crônica de O2 nos tecidos como acontece em
algumas anemias, insuficiências cardíacas e na adaptação a altitudes
elevadas. Desse modo, ocorre a maior estabilização do estado T
desoxigenado, provocando a liberação de mais oxigênio para os
tecidos hipóxicos. (Figura 2.16).
Figura 2.16
Efeito do BPG sobre a ligação do oxigênio à hemoglobina. A
hemoglobina sem BPG tem maior afinidade pelo O2 do que a hemoglobina
com BPG.
2. Efeito de Bohr. A combinação da hemoglobina com O2
também depende do pH, um fenômeno conhecido como efeito de
Bohr. Teores elevados de íon hidrogênio (pH reduzido) favorecem a
liberação de O2; o inverso também é verdadeiro. O efeito de Bohr
possui considerável importância fisiológica no transporte de O2 dos
pulmões para os tecidos e no transporte do CO2 dos tecidos
periféricos para os pulmões. À medida que o sangue atinge os
tecidos, o CO2 difunde-se para os eritrócitos, reduzindo o pH e a
afinidade da hemoglobina pelo O2, realizando a reação H+
+ HbO2 →
O2 + HHb+
. Nos pulmões, a perda de CO2 eleva o pH e aumenta a
afinidade da hemoglobina pelo O2.
P O (torr)
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
20 40 60
Sem
BPG
Com BPG
2
y
a

Figura 2.17
Efeito de Bohr. O CO2 produzido nos tecidos periféricos se combina com a
água com a formação de ácido carbônico que se dissocia nos íons
bicarbonato e hidrogênio. A hemoglobina desoxigenada funciona como
tampão se ligando a prótons e os liberando nos pulmões. Nos pulmões, o
oxigênio ligado à hemoglobina provoca a saída dos prótons da hemoglobina.
Os prótons se combinam com o íon bicarbonato produzindo ácido carbônico
que, em presença de anidrase carbônica, produz o dióxido de carbono,
posteriormente exalado pelos pulmões. A afinidade da hemoglobina pelo
oxigênio aumenta com o aumento do pH.
3. Efeito do CO2. Células metabolicamente ativas produzem
elevados teores de CO2. Concentrações elevadas de CO2 reduzem a
afinidade da hemoglobina pelo O2. O CO2 reage transitoriamente com
grupos α−amino N−terminais das cadeias polipeptídicas da
hemoglobina para formar carbamino−hemoglobina que transporta o
CO2 para os pulmões para a sua eliminação.
Hemoglobinopatias
Mais de 600 variantes genéticas da seqüência dos aminoácidos da
hemoglobina de adultos normais (HbA) foram relatadas. Essas
moléculas, em cerca de 95% dos casos, são resultado da substituição
de um único aminoácido nas cadeias α ou β durante o processo de
síntese protéica. Outras variantes podem ser devidas a inserção ou
deleção de um ou mais nucleotídeos que modificam a matriz de
leitura dos códons durante a síntese protéica. Algumas hemoglobinas
variantes causam doenças debilitantes dependendo da natureza e
posição da substituição. Várias mutações desestabilizam as estruturas
terciárias e quaternárias modificando a afinidade da hemoglobina
pelo O2.
Exalado
2CO +2H O
2CO +2H O
2
2
2
2
2H CO
2H CO
2
2
3
3
Anidrase
carbônica
2HCO +2H3
+
4O2
Pulmões
Hb 4O
2
Hb 2H+
(Tampão)
4O
2
2H + 2HCO+
3
Tecidos
periféricos
Anidrase
carbônica
Gerado pelo
ciclo de Krebs

Quadro 2.7 Anemia falciforme
A anemia falciforme é uma síndrome falcêmica
caracterizada pela presença de hemoglobina S nos
eritrócitos. Na hemoglobina S (de Silckle), é uma forma
variante da hemoglobina adulta normal (HbA1) em que
ocorre a substituição do glutamato, na posição 6 da
cadeia β de HbA1 pela valina. Ou seja, o glutamato de
cadeia lateral polar é substituído pela valina apolar. O
novo arranjo permite a interação hidrofóbica com a
fenilalanina β
85
e leucina β
88
de uma desoxi HbS
adjacente. As moléculas se agregam com a formação de
polímeros com outras moléculas de conformação desoxi
da HbS, produzindo longos precipitados fibrosos (280
milhões em cada eritrócito) que, por sua vez, deformam
os eritrócitos (forma de foice), resultando em alta
velocidade de hemólise. Apenas indivíduos
homozigóticos para HbS apresentam a doença. Em
indivíduos com duas cópias do gene mutante
(homozigóticos), os drepanócitos interagem para formar
agregados que podem obstruir os vasos capilares
reduzindo o fluxo normal de sangue. O bloqueio da
microcirculação ocorre em qualquer parte do organismo;
nos glomérulos, causam glomerulite focal e hematúria. A
remoção aumentada de eritrócitos falciformes promove
anemia. A expectativa de vida de um homozigótico é
menor que 30 anos.
A mutação, entretanto, confere maior resistência dos
eritrócitos com HbS ao Plasmodium falciparum
(protozoário transmitido por mosquito e responsável pela
malária) que necessita dos eritrócitos do hospedeiro
durante parte do seu ciclo de vida. Células falciformes,
devido a sua fragilidade, são removidas da circulação
sangüínea mais rapidamente que as hemácias normais e
o parasito não completa esse estágio do seu
desenvolvimento. Parasitas existentes nessas células
são também destruídos pela atividade esplênica.
As anormalidades da síntese da hemoglobina são as doenças
genéticas mais comuns em todo o mundo e são divididas em três
grupos:
• Hemoglobinopatias estruturais. São defeitos genéticos em que há
troca de aminoácidos na seqüência das cadeias globínicas da
hemoglobina. Ex.: hemoglobina S (caracteriza a anemia de
células falciformes), microdrepanocitose, hemoglobinopatia SC,
hemoglobinopatia C, hemoglobinopatia D, hemoglobinopatia E
hemoglobinas instáveis.
• Talassemias. Defeitos genéticos em que há redução da síntese de
uma ou mais cadeias globínicas. Ex.: α−talassemias,
β−talassemias, talassemia do recém-nascido e δβ−talassemia.
• Persistência hereditária da hemoglobina fetal. Síntese de
hemoglobina fetal durante a idade adulta. Há formas
homozigóticas e heterozigóticas. Os homozigóticos têm 100% de
HbF, pois não sintetizam cadeias β e δ.
C. Anticorpos
Os anticorpos ou imunoglobulinas compõem uma família de
glicoproteínas produzidas pelos linfócitos B em resposta à presença
de moléculas estranhas conhecidas como antígenos (resposta
imunitária humoral). As características estruturais fundamentais das
imunoglobulinas são:
• As moléculas de anticorpo são glicoproteínas com quatro cadeias
polipeptídicas. Cada molécula tem estrutura em Y contendo duas
unidades idênticas chamadas cadeias pesadas (H) e duas

unidades idênticas entre si, porém de menor tamanho,
denominadas cadeias leves (L).
• A estrutura primária das cadeias pesadas, denominadas cadeias γ,
µ, α, δ e ε, é a base da classificação das imunoglobulinas em
cinco classes: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. A IgG
humana pode ser subdividida em quatro subclasses: IgG1, IgG2,
IgG3 e IgG4, enquanto a IgA em duas classes.
• As cadeias leves de cada molécula de imunoglobulina são
formadas por apenas dois tipos κ e λ.
• As quatro cadeias são covalentemente interconectados por pontes
dissulfeto. No interior de cada cadeia da molécula, ligações
dissulfeto intercadeias dobram a molécula em uma estrutura mais
compacta.
• Cada cadeia polipeptídica consiste de duas regiões região
variável (V) e região constante (C) quanto à seqüência de
aminoácidos, (estrutura primária). A região variável da cadeia
leve (VL) é, aproximadamente, 50% do comprimento da cadeia
enquanto a região variável da cadeia pesada (VH) é
aproximadamente 25% do comprimento da cadeia.
A digestão pela papaína fornece dois fragmentos principais
chamados fragmento Fab, que retém a capacidade de ligar o antígeno
da molécula intacta, e o fragmento Fc, que é cristalizável.
2.10 Proteínas como eletrólitos
As proteínas apresentam características ácido−base semelhantes
aquelas dos aminoácidos. Com exceção dos aminoácidos N−terminal
e C−terminal, os grupos α−amino e α−carboxílicos estão
comprometidos nas ligações peptídicas. Os polipeptídeos possuem
cargas elétricas devido principalmente aos grupos ionizáveis das
cadeias laterais (R) dos resíduos de aminoácidos. Os valores de pK
desses grupos nas proteínas diferem daqueles apresentados para os
aminoácidos livres, pois são influenciados pela natureza dos outros
resíduos presentes na vizinhança.
O pK dos grupos ionizáveis dos resíduos de aminoácidos numa
cadeia polipeptídica são mostrados na Figura 2.18.

Quadro 2.8 Eletroforese das proteínas
As proteínas nos líquidos biológicos são
moléculas anfóteras que podem ser separadas em
frações quando aplicadas sobre um suporte poroso e
submetidas a um campo elétrico em processo
denominado eletroforese. A migração ocorre de
acordo com o grau de ionização, tamanho e forma da
molécula protéica, também como das características
da solução tampão onde se realiza o processo; da
força do campo elétrico; da porosidade, viscosidade
e temperatura do suporte.
As frações nas quais predominam as cargas
negativas, a proteína se dirige para o ânodo (pólo
positivo) e as positivas, migram para o cátodo (pólo
negativo). Como a carga da proteína depende da
concentração do íon hidrogênio da solução, o pH
deve ser especificado e mantido constante durante o
procedimento.
A eletroforese é empregada em laboratório
clínico para a separação das frações protéicas do
soro sangüíneo (ou urina, líquido cefalorraquidiano
ou outros líquidos biológicos). O soro é aplicado num
suporte (papel de filtro, acetato de celulose,
poliacrilamida, gel de agarose, etc) cujas
extremidades estão mergulhadas numa solução
tampão com pH 8,6 (neste pH predominam cargas
negativas nas proteínas) que estão sob diferença de
potencial elétrico. As proteínas migram e são
separadas em frações.
Após a migração o suporte é corado e tornam-se
visíveis seis frações: a albumina e as globulinas α1,
α2, β1, β2, e γ.
O suporte corado é submetido à leitura
densitométrica e é representada na forma de gráfico.
CNH2
CH2
O
N
H
C
H
CH2
COO
-
C
O
N
H
C
CH2
CH2
CH2
CH2
NH3
+
H
C
O
N
H
C
H
CH2
CH2
COO
-
C
O
N
H
C
H
CH2
CH2
CH2
NH
C
NH2 NH2
+
C
O
N
H
C
H
CH2
C
O
N
H
C
H
CH3
COO
-
C
NH
+
CH
CH
NH
Figura 2.18
Cadeia polipeptídica hipotética contendo alguns grupos que contribuem com
cargas elétricas nas proteínas.
A carga líquida de uma proteína depende do número de cadeias
ionizáveis, o valor do pK e o pH do meio. O pH onde a soma cargas
negativas é igual a das cargas positivas é denominado ponto
isoelétrico (pI) da proteína. Quando submetida a um campo elétrico
como na eletroforese, uma proteína em seu pI não migra em qualquer
direção. O pI varia de uma proteína para outra e depende dos valores
individuais de pK de todos os grupos ionizáveis presentes nas cadeias
laterais dos aminoácidos e dos extremos das cadeias polipeptídicas.
Os pI das proteínas estão, geralmente, entre 4 e 7 apesar de algumas
apresentarem valores fora desses limites como no caso da pepsina (pI
= 1) e histona (pI = 10). Os valores de pI de algumas proteínas são
mostrados na Tabela 2.4.

Tabela 2.4
Valores de pI de algumas proteínas
Proteína pI
Pepsina 1,0
Haptoglobina 4,1
Lipoproteína α1 5,5
Globulina γ1 5,8
Fibrinogênio 5,8
Hemoglobina 7,2
Citocromo c 10,0
Em pH maior do que o pI a proteína tem carga negativa efetiva.
Em pH menor do que o pI a proteína tem carga positiva efetiva. A
magnitude da carga elétrica efetiva de uma proteína e função da
distância entre o pH e o pI. A albumina plasmática humana contém
585 resíduos de aminoácidos e tem pI de 4,9 (pH onde a carga líquida
é zero). Em pH 8,6 vários grupos estão titulados em sua forma básica
com carga líquida de −20. Por outro lado, em pH 3 a carga elétrica
líquida da molécula de albumina em solução é +60.
Resumo
1. As proteínas apresentam uma elevada gama de funções nos seres vivos.
Além de servir como material estrutural, as proteínas estão envolvidas na
regulação metabólica, transporte, defesa e catálise. Os polipeptídeos são
polímeros de aminoácidos. As proteínas consistem de uma ou mais
cadeias polipeptídicas.
2. Cada aminoácido contém um átomo de carbono central (o carbono α) no
qual estão ligados um grupo amino, um grupo carboxílico, um átomo de
hidrogênio e um grupo R. Além de formar proteínas, os aminoácidos tem
outros papéis biológicos. De acordo com sua capacidade de interagir com
a água, os aminoácidos são separados em quatro classes: (1) não−polar
ou neutra, (2) polar e neutra, (3) ácida e (4) básica.
3. A titulação de aminoácidos e peptídeos ilustra o efeito do pH sobre suas
estruturas. O pH em que a molécula não apresenta carga elétrica líquida
é chamado ponto isoelétrico.
4. Os aminoácidos sofrem duas reações de particular importância: a
formação da ligação peptídica e a oxidação da cisteína.
5. As proteínas também são classificadas de acordo com sua conformação e
composição. As proteínas fibrosas (exemplo, o colágeno) são longas,
moléculas enoveladas insolúveis em água e fisicamente rígidas. As
proteínas globulares (exemplo, a hemoglobina) são moléculas compactas
e esféricas quase sempre solúveis em água.
6. Existem quatro níveis estruturais das proteínas. A estrutura primária é a
seqüência de aminoácidos determinada por informação genética. Os
arranjos regulares e recorrentes da cadeia polipeptídica constituem a
estrutura secundária das proteínas. O pregueamento não−periódico da
cadeia polipeptídica forma a estrutura tridimensional das proteínas. As
proteínas que consistem de dois ou mais polipeptídeos formam
complexos tridimensionais denominados estruturas quaternárias. Várias
condições físicas e químicas podem romper a estrutura das proteínas.
Agentes desnaturantes incluem ácidos ou bases fortes, agentes redutores,
metais pesados, mudanças da temperatura e estresse mecânico.

Referências
CAMPBELL, M. K. Bioquímica. 3 ed. Porto Alegfre: ArtMed, 2000. p. 94-155.
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of live. 3 ed.
New York: McGraw-Hill, 2003. p. 108-160.
MOTTA, V. T. Bioquímica clínica para o laboratório: princípios e
interpretações. 4 ed. Porto Alegre: Editora Médica Missau, 2003. p. 75-103.

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Enzimas
Capítulo
3

69
3
Enzimas
Objetivos
1. Compreender a sistematização da nomenclatura enzimática.
2. Descrever as classes enzimáticas: hidrolase, transferase, isomerase, liase,
ligase e oxirredutase.
3. Descrever a função de coenzimas e co-fatores na biocatálise.
4. Conceituar energia livre de ativação e correlacionar com a atividade
enzimática.
5. Conceituar sítio ativo de uma enzima e correlacionar com atividade enzimática.
6. Conceituar número de renovação (turnover) e reconhecer sua significação
biológica.
7. Conceituar especificidade enzimática e reconhecer sua significação biológica.
8. Descrever o efeito da temperatura e pH sobre a velocidade da reação
enzimática.
9. Descrever o efeito da variação da concentração do substrato na velocidade da
reação enzimática e indicar o significado do Km.
10. Descrever as semelhanças e diferenças entre inibição enzimática competitiva,
não-competitiva e incompetitiva ao nível de sítio ativo.
11. Descrever a regulação alostérica e seus efeitos.
12. Reconhecer que o caráter sigmoidal da curva de substrato de uma proteína
alostérica, depende da interação entre as subunidades e é modificado pela
interação da proteína com o efetor.
A vida depende de uma bem orquestrada série de reações
químicas. Muitas delas, entretanto, ocorrem muito lentamente para
manter os processos vitais. Para resolver esse problema, a natureza
planejou um modo de acelerar a velocidade das reações químicas por
meio da catálise. As ações catalíticas são executadas por enzimas que
facilitam os processos vitais em todas as suas formas, desde os vírus
até os mamíferos superiores.

70 • MOTTA • Bioquímica
Quadro 3.1 Natureza química das enzimas
A palavra enzima foi introduzida por Kuhne em
1878 para designar a ocorrência no levedo de algo
responsável pela sua atividade fermentativa.
Berzelius, 50 anos antes, tinha reconhecido a
presença de fermentos de ocorrência natural que
promoviam reações químicas e antecipou o conceito
de catalisadores biológicos. Berzelius classificou os
fermentos em “organizados” e “não-organizados” com
base na presença ou ausência de microorganismos
intactos. Kuhne aplicou a palavra enzima aos
fermentos derivados de extratos de levedos, i.e.
“fermentos não-organizados”.
Em 1897, Büchner preparou um filtrado de
extratos de levedo que foi o primeiro extrato
enzimático removido de células vivas que pode
catalisar a fermentação.
A natureza química das enzimas permaneceu
controversa. Em 1926, Sumner cristalizou a urease a
partir de extratos de feijão, no entanto, a preparação
tinha pequena atividade catalítica e outros
investigadores atribuíram o efeito catalítico a
contaminantes e não à proteína. Willstätter, por outro
lado, prurificou a peroxidase com elevada
capacidade catalítica e ausência de outras proteínas.
No início dos anos 30, Northrop e cols. cristalizaram
a pepsina e a tripsina demonstrando definitivamente
que as enzimas eram proteínas.
As enzimas são proteínas com a função específica de acelerar
reações químicas que ocorrem sob condições termodinâmicas
não−favoráveis. Elas aceleram consideravelmente a velocidade das
reações químicas químicas em sistemas biológicos quando
comparadas com as reações correspondentes não−catalisadas. Para ser
classificada como enzima, uma proteína deve:
• Apresentar extraordinária eficiência catalítica.
• Demonstrar alto grau de especificidade em relação a seus
substratos (reagentes) e aos seus produtos.
• Acelerar a velocidade das reações em 106
a 1012
vezes mais do
que as reações correspondentes não-catalisadas.
• Não ser consumida ou alterada ao participar da catálise.
• Não alterar o equilíbrio químico das reações.
• Ter sua atividade regulada geneticamente ou pelas condições
metabólicas.
Tabela 3.1 – Velocidade de reações não−catalisadas e catalisadas por
enzimas
Enzima
Não−catalisada
(s−1
)
Catalisada
(s−1
)
Aumento
da
velocidade
Anidrase carbônica 1,3 x 10−1
1.000.000 7,7 x 106
Adenosina−deaminase 1,8 x 10−10
370 2,1 x 1012
Nuclease estafilocócica 1,7 x 10−13
95 5,6 x 1014
Triose−fosfato−isomerase 4,3 x 10−6
4.300 1,0 x 109
Quimiotripsina 1,0 x 10−9
190 1,7 x 1011
Orotidina−descarboxilase 2,8 x 10−16
39 1,4 x 1017

3 Enzimas • 71
s-1
= unidade da constante de velocidade de reação de primeira ordem
Quadro 3.2 Uso industrial das enzimas
A indústria biotecnológica produz várias enzimas
para diferentes usos.
O uso de proteases em detergentes melhora a
remoção de manchas de origem biológica, como o
sangue e molhos. O termo “biológico” empregado nas
embalagens de sabão em pó reflete a presença de
proteases. As proteases são também utilizadas em
restaurantes para amaciar a carne, por cervejeiros
para eliminar a turvação nas cervejas, por padeiros
para melhorar a textura do pão e em indústrias de
luvas para amaciar o couro.
Outras enzimas também apresentam uso
industrial. Por exemplo, a lipase é adiconada a
líquidos detergentes para degradar graxas (lipídeos)
e em alguns queijos para desenvolver aroma. A
pectinase é usada na indústria de geléias para
promover a máxima extração de líquido das frutas.
As amilases são empregadas para degradar o amido
em certos removedores de papel de parede para
facilitar a sua retirada.definitivamente que as
enzimas eram proteínas.
As proteínas não são únicas substâncias com propriedades
catalíticas nos sistemas biológicos. Alguns RNA, denominados
ribozimas, também executam essa função.
A reação catalisada por enzima pode ser esquematizada como
segue:
(P)Produto(S)Substrato (E)Enzima
 →
A molécula sobre a qual a enzima atua é o substrato (S) que se
transforma em produto (P) da reação. Na ausência de enzima pouco
produto (ou nenhum) é formado, mas em presença da mesma, a reação
se processa em alta velocidade. Como a maioria das reações é
reversível, os produtos da reação numa direção tornam-se substratos
para a reação inversa.
As enzimas são os catalisadores mais específicos que se conhece,
tanto para o substrato como para o tipo de reação efetuada sobre o
substrato. A especificidade inerente da enzima, reside em uma
cavidade ou fenda de ligação do substrato, que está situada na
superfície da proteína enzimática. A cavidade, denominada sítio
ativo, é um arranjo de grupos presentes em cadeias laterais de certos
aminoácidos que ligam o substrato por ligações não-covalentes.
Muitas vezes, os resíduos de aminoácidos que formam o sítio ativo
ficam em regiões distantes, na seqüência primária, mas próximos no
sítio ativo, pelo enovelamento de cadeia polipeptídica (estrutura
terciária).
Algumas enzimas têm outra região na molécula, o sítio
alostérico, afastada do sítio ativo. No sítio alostérico moléculas
pequenas específicas se ligam e causam alterações na conformação
protéica que afetam o sítio ativo, aumentando ou reduzindo a
atividade enzimática.
A maioria das enzimas necessitam de moléculas orgânicas ou
inorgânicas pequenas, essenciais à sua atividade e denominadas
coenzimas e co-fatores.

3.1 Classificação das enzimas
Com a descoberta de grande número de enzimas, houve a
necessidade de sistematização da nomenclatura. A União
Internacional de Bioquímica e Biologia Molecular (IUBMB) adotou
um sistema racional e prático de nomenclatura identificando as
enzimas em seis classes, de acordo com a natureza da reação química
que catalisam. Para cada enzima, são atribuídos dois nomes e um
número de classificação de quatro dígitos que identificam as classes,
as subclasses e as sub-subclasses.
Na classificação internacional sistemática, as enzimas são
divididas em seis grupos de acordo com o tipo de reação catalisada
(Tabela 3.1).
Tabela 3.1 – Classificação das enzimas
Classe da enzima Tipo de reação catalisada
Oxidorredutases Reações de oxidação−redução
Transferases Transferência de grupos funcionais
Hidrolases Reações de hidrólise
Liases Remoção de grupos para formar ligações duplas
Isomerases Isomerização
Ligases Formação de ligações entre duas moléculas
Por exemplo, a enzima glicose−6−fosfatase (nome trivial), tem
como nome sistemático D-Glicose−6−fosfato fosfohidrolase e número
de classificação EC 3.1.3.9. Os números representam a classe (3,
hidrolase), subclasse (1, atua sobre ligações éster), sub−subclasse (3,
fosforil monoéster hidrolase) e seu número de série dentro da sub-
subclasse (9). A sigla “EC” é a abreviatura de Enzyme Comission).
Muitas enzimas de uso rotineiro são designadas pelo nome
alternativo ou trivial. Por exemplo, algumas são denominadas pela
incorporação do sufixo −ase ao nome do substrato sobre os quais elas
atuam; por exemplo, a enzima que hidrolisa a uréia é denominada
urease; o amido, a amilase; ésteres do fosfato, as fosfatases. Outras
são designadas pelo tipo de ação catalítica que realizam, tais como,
anidrase carbônica; D−amino oxidase; lactato desidrogenase.
Algumas levam nomes vulgares como a tripsina, pepsina, emulsina,
etc.

3 Enzimas • 73
Quadro 3.3 Enzimas usadas como agentes terapêuticos
Algumas enzimas são empregadas como agentes
terapêuticos no tratamento de diferentes doenças. As
proteases, amilases e lípases são usadas para
auxiliar a digestão.
A asparaginase é usada no tratamento da
leucemia linfocítica aguda. As células normais são
capazes de sintetizar asparagina enquanto certas
células tumorais, inclusive as leucêmicas, não
produzem o derivado do aminoácido. A administração
intravenosa de asparaginase reduz o nível
plasmático de asparagina e, assim, diminui o
desenvolvimento de células leucêmicas.
A desoxiribonuclease (DNase) é útil no
tratamento da fibrose cística. A principal
característica da fibrose cística são as infeções
respiratórias recorrentes, particularmente devido a
Pseudomonas aeroginosa, o que resulta em grandes
quantidades de DNA proveniente das bactérias
destruídas e morte das células fagocíticas do sistema
imune. O DNA contribui para a viscosidade do muco
que provoca sintomas aflitivos. A DNase é usada
para degradar o DNA e diluir o muco.
A estreptocinase é empregada na remoção de
coágulos sangüíneos no infarto do miocárdio e nas
extremidades dos membros inferiores. Ativa a
transformação da proenzima fibrinolítica
plasminogênio à plasmina, uma enzima que quebra a
fibrina insolúvel do coágulo sangüíneo.
3.2 Co-fatores metálicos e coenzimas
Algumas enzimas são proteínas simples consistindo inteiramente
de cadeias polipeptídicas, como as enzimas hidrolíticas pepsina,
tripsina, lisozima e ribonuclease. Entretanto, a maioria das enzimas
somente exercem sua atividade catalítica em associação com
co−fatores metálicos e coenzimas.
1. Co-fatores metálicos. Os metais importantes nos organismos
vivos são classificados em dois grupos: metais de transição
(exemplo, Fe2+
, Zn2+
e Cu2+
) e metais alcalinos e alcalinos terrosos
(exemplo, Na+
, K+
, Mg2+
e Ca2+
). Devido a sua estrutura eletrônica,
os metais de transição estão freqüentemente envolvidos na catálise.
Várias propriedades dos metais de transição os tornam essenciais
para a catálise. Os íons metálicos apresentam um grande número de
cargas positivas especialmente úteis na ligação de pequenas
moléculas. Os metais de transição atuam como ácidos de Lewis
(aceptores de pares eletrônicos), e são eletrófilos efetivos. Como suas
valências permitem interagirem com dois ou mais ligantes, os íons
metálicos participam na orientação apropriada do substrato para a
reação. Como conseqüência, o complexo substrato-íon metálico
polariza o substrato e promove a catálise. Exemplo, quando o Zn2+
,
co−fator da anidrase carbônica, polariza uma molécula de água,
forma-se um grupo OH ligado ao Zn2+
(função de ácido de Lewis do
zinco). O grupo OH ataca nucleofilicamente o CO2, convertendo-o em
HCO3
-
.
Finalmente, como os metais de transição têm dois ou mais estados
de oxidação, eles podem mediar reações de oxidação−redução. Por
exemplo, a oxidação reversível do Fe2+
para formar Fe3+
é importante
na função do citocromo P450, uma enzima microssomal que processa
substâncias tóxicas.

2. Coenzimas. São moléculas orgânicas pequenas,
frequentemente derivadas de vitaminas. Existem também certos
nutrientes análogos às vitaminas (exemplo, ácido lipóico e ácido
p−aminobenzóico) que são sintetizados em pequenas quantidades e
que facilitam os processos catalisados por enzimas. Na Tabela 3.1 são
listadas as coenzimas, as reações que elas participam e as fontes
vitamínicas que dão origem as coenzimas.
A enzima é cataliticamente ativa quando forma um complexo
denominado holoenzima. O componente protéico do complexo é
designado de apoenzima.
Holoenzima (ativa) co−fator + apoenzima (inativa)
Quadro 3.2 – Coenzimas/co-fatores metálicos e enzimas
Coenzimas e co-fatores Enzima
Coenzima
Pirofosfato de tiamina (TTP) Piruvato−desidrogenase
Flavina adenina dinucleotídeo (FAD) Monoaminooxidase
Nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD) Lactato−desidrogenase
Piridoxal fosfato Glicogênio−fosforilase
Coenzima A (CoA) Acetil−CoA−carboxilase
Biotina Piruvato−carboxilase
Tetraidrofolato Timidilate−sintase
Co-fator metálico
Zn2+
Anidrase−carbônica
Zn2+
Carboxipeptidase
Mg2+
Hexocinase
Quadro 3.1 – Algumas coenzimas, as reações que promovem e as vitaminas precursoras
Coenzima Reação Fonte vitamínica
Biocitina Carboxilação Biotina
Coenzima A Transferência de grupos acila Ácido pantotênico
Cobalamina Alquilação Cobalamina (B12)
Flavina Oxidação−redução Riboflavina (B2)
Ácido lipóico Transferência de grupo acila -
Nicotinamida Oxidação –redução Nicotinamida (niacina)
Fosfato de piridoxal Transferência de grupo amino Piridoxina (B6)
Tetraidrofolato Transferência de grupos de
1−carbono
Ácido fólico
Pirofosfato de tiamina Transferência de grupo aldeído Tiamina (B1)
Retinal Visão, crescimento e reprodução Vitamina A
1, 25-diidroxicolecalciferol Metabolismo do cálcio e fósforo Vitamina D

3 Enzimas • 75
Ni2+
Uréase
Mo Nitrato−redutase
Se Glutationa−peroxidase
Mn2+
Superóxido−dismutase
K+
Propionil−CoA−carboxilase
3.3 Reações catalisadas por enzimas
Para reagir, as moléculas presentes em uma solução devem colidir
com orientação apropriada e com a quantidade de energia que lhes
permitam formar o complexo ativado, denominado estado de
transição que representa os reagentes em seu estado ativado. Para
atingir o estado de transição, necessita-se de uma quantidade de
energia definida como energia de ativação (Ea) ou mais comum em
bioquímica energia livre de ativação, ∆G╪
(o símbolo (╪) indica o
processo de ativação). Sob condições fisiológicas, a velocidade das
reações pode ser aumentada pela redução da energia livre de ativação
conseguida pela ação de enzimas.
A comparação do perfil energético das reações catalisadas e não-
catalisadas é mostrada na Figura 3.1 para a reação:
A + B C + D
No gráfico, o estado de transição corresponde ao ponto de mais
alta energia da reação não-catalisada e é a medida da energia livre de
ativação, ∆G╪
. Ou ainda, ∆G╪
é a energia livre do estado de transição
subtraída da energia livre dos reagentes. No complexo ativado (estado
de transição do sistema), os reagentes estão em forma intermediária
de alta energia e não podem ser identificados nem como reagentes
nem como produtos. O complexo do estado de transição pode ser
decomposto em produtos ou voltar aos reagentes.

Figura 3.1
Diagrama energético de reação catalisada e de reação não-catalisada.
∆G
╪
= energia livre de ativação, ∆G
0
= variação de energia livre. A diferença
entre os valores da energia de ativação de uma reação catalisada e de uma
reação não-catalisada, indica a eficiência do catalisador.
A velocidade de uma reação é inversamente proporcional ao valor
de sua energia livre de ativação. Quanto maior o valor de ∆G╪
, menor
será a velocidade da reação. Os catalisadores aumentam a velocidade
da reação reduzindo a energia livre de ativação. A velocidade de
uma reação pode aumentar na ordem de 106
a 1012
vezes mais do que
a reação correspondente não-catalisada.
Três propriedades distintas das enzimas permitem que elas
exerçam papel central na promoção e regulação dos processos
celulares, caracterizando-as como componentes vitais aos sistemas
vivos:
• Elevada especificidade da reação. Como regra geral, cada reação
sob condições apropriadas é catalisada por uma enzima
específica. Diante de várias rotas potencialmente possíveis, a
enzima escolhe a com menor energia livre de ativação.
• Condições reacionais mais brandas. A atividade de cada enzima é
dependente do pH, da temperatura, da presença de vários co-
fatores e das concentrações de substratos e produtos.
• Capacidade de regulação da concentração e da atividade.
Permite o ajuste fino do metabolismo em diferentes condições
fisiológicas.
Energiadosistema
Progresso da reação
Estado de transição
Não-catalisada
Catalisada
Reagentes A, B
(Estado inicial)
Produtos C, D
(Estado final)
AGº
AG
AG Em ausência
de enzima
=
=

3 Enzimas • 77
3.4 Sítio ativo catalítico
Sítio ativo é a região na superfície da enzima onde ocorre a
catálise. O substrato liga-se ao sítio ativo por ligações
não−covalentes (interações eletrostáticas, pontes de hidrogênio,
interações de van der Waals e interações hidrofóbicas). Os grupos que
participam das ligações são: a carboxila do ácido glutâmico ou do
ácido aspártico, o grupo ε-amino da lisina, o imidazol da histidina, a
hidroxila da serina, etc.
Somente uma pequena porção do substrato onde ocorre
transformação está ligada à enzima. Isso não implica, entretanto, que
os aminoácidos no sítio ativo estejam um ao lado do outro na
estrutura primária da proteína. Em conseqüência das dobras e
enovelamento da enzima (estrutura secundária e terciária), certos
resíduos de aminoácidos podem estar distantes um do outro na
seqüência primária, ainda que juntos no sítio ativo da proteína
completa.
A especificidade da ligação enzima-substrato depende do arranjo
precisamente definido de átomos no sítio ativo. Uma das explicações
para a elevada especificidade das enzimas é que suas estruturas
tridimensionais permitem um perfeito encaixe com o substrato. Dois
modelos foram propostos para explicar a especificidade enzimática, o
modelo chave-fechadura e o modelo do encaixe induzido.
1. Modelo chave−fechadura. Muitas enzimas contêm fendas com
dimensões fixas que permitem a inserção somente de compostos com
uma dada configuração. O substrato se ajusta a esse sítio de ligação
como uma chave se ajusta à sua fechadura. Substâncias que não se
encaixam na fenda para formar o complexo enzima−substrato (ES),
não reagem, mesmo possuindo grupos funcionais idênticos ao do
substrato verdadeiro. Esse conceito é chamado modelo
chave−fechadura proposto por Fisher em 1890.
E + S ES (ES - EP) E + P
+
Figura 3.2
Modelo chave-fechadura. A interação entre a enzima (com estrutura rígida)
e seu substrato.
2. Modelo do encaixe induzido. Um modelo mais flexível de
interação enzima-substrato é o encaixe induzido (induced−fit)
proposto por Koshland em 1958. Os sítios ativos dessas enzimas não
estão completamente pré-formados e a interação inicial do substrato
com a enzima induz uma alteração conformacional na enzima. Isso
promove o reposicionamento dos aminoácidos catalíticos para formar

o sítio ativo e a estrutura correta para interagir com os grupos
funcionais do substrato (Figura 3.3).
Figura 3.3
Modelo do encaixe induzido. A ligação inicial do substrato à enzima induz
uma mudança conformacional na enzima produzindo um melhor encaixe.
3.5 Mecanismos catalíticos
As reações químicas envolvidas na transformação dos substratos
variam com os mecanismos de ação das enzimas. Os principais tipos
de mecanismos catalíticos que as enzimas utilizam são: (1) efeitos de
proximidade e orientação, (2) catálise eletrostática, (3) catálise ácido-
básica e (4) catálise covalente.
1. Efeitos de proximidade e orientação. Os substratos se
aproximam dos grupos funcionais catalíticos da enzima em uma
orientação espacial apropriada para que a reação possa ocorrer. Após
o correto posicionamento do substrato, uma modificação na
conformação da enzima resulta em um complexo enzima−substrato
orientado. Essa orientação leva o complexo enzima−substrato ao
estado de transição.
2. Catálise por íons metálicos. A força das interações
eletrostáticas está relacionada com a capacidade das moléculas
solventes vizinhas em reduzir os efeitos de atração entre os grupos
químicos. Como a água é excluída do sítio ativo quando o substrato
se liga, a constante dielétrica local é muitas vezes baixa. A
distribuição de cargas nos sítios ativos das enzimas pode influenciar a
reatividade química do substrato. Uma ligação mais eficiente do
substrato reduz a energia livre do estado de transição, que acelera a
reação.
3. Catálise ácido-básica geral. Os grupos químicos podem se
tornar mais reativos pela adição ou remoção de prótons. Os sítios
ativos das enzimas contêm cadeias laterais que podem atuar como
doadores ou receptores de prótons. Esses grupos são denominados
ácidos gerais ou bases gerais. Por exemplo, a cadeia lateral da
histidina (grupo imidazol) muitas vezes atua como catalisador ácido
e/ou básico em concerto porque tem pKa na faixa de pH fisiológico.
4. Catálise covalente. Acelera a velocidade da reação pela
formação de uma ligação covalente transitória entre a enzima e o
substrato. Um grupo nucleofílico da cadeia lateral do catalisador
E + S ES
+

3 Enzimas • 79
forma uma ligação covalente instável com um grupo eletrofílico do
substrato. O complexo enzima−substrato então forma o produto.
A. Mecanismo de ação da lisozima
O mecanismo de ação da lisozima emprega tanto a distorção da
cadeia polissacarídica como a catálise ácido-básica geral. A lisozima
é uma enzima com cadeia polipeptídica única com 129 resíduos de
aminoácidos. A lisozima, uma glicosidase, destrói as paredes das
células bacterianas ao hidrolisar a ligação glicosídica entre o
N−acetilmuramato e N−acetilglicosamina. A molécula da lisozima tem
uma fenda, à qual os substratos se ligam por ligações pontes de
hidrogênio e forças de van der Waals. O mecanismo catalítico da
lisozima envolve o ácido glutâmico 35, na sua forma não-carregada,
que atua como catalisador ácido para clivar o substrato
polissacarídico pela doação de um H+
ao oxigênio da ponte entre os
anéis D e E. O C1 do anel D fica, então, com carga positiva O íon
axônio resultante carregado positivamente e planar, é
eletrostaticamente estabilizado pelo aspartato 52 na sua forma de
carboxilato. A reação é facilitada pela distorção do resíduo D na
conformação planar de meia-cadeira, o que permite que a carga
positiva seja compartilhada entre o C-1 e o átomo de oxigênio do
anel.
Figura 3.4
Estrutura da lisozima.

B. Mecanismo de ação das serino−proteases
As enzimas serino−proteases empregam a catálise ácido−básica
geral e a catálise covalente para a sua ação. As serino−proteases são
um grupo de enzimas proteolíticas que incluem a quimotripsina,
tripsina, elastase, trombina, plasmina, e são assim chamadas por
utilizar um único resíduo serina ativada no sítio ativo. As
serino−proteases utilizam o grupo −CH2−OH da serina como um
nucleofílico para hidrolisar cataliticamente ligações peptídicas.
Formam um intermediário covalente acil−enzima, no qual o grupo
carboxila do substrato é esterificado com a hidroxila da serina 195
(catálise covalente). O caráter nucleófilo da −OH é bastante
acentuado pela histidina 57, que recebe um próton da serina (catálise
ácido-básica geral). A histidina resultante com carga positiva é
estabilizada pela interação eletrostática com a carga negativa do
aspartato 102. A segunda etapa, o intermediário acil−enzima é
deacilado pelo reverso das etapas anteriores.
Outras serino-proteases existem na forma precursora inativa,
denominadas zimogênios, que são ativadas por clivagem catalítica de
uma ligação poliptídica específica por outras serino-proteases.
A atividade das proteases é limitada por inibidores sintetizados
pelo pâncreas e fígado. Por exemplo, se enzimas pancreáticas forem
prematuramente ativadas ou liberadas do pâncreas após um trauma,
elas são rapidamente inativadas por inibidores da protease. Os
inibidores passam por substratos da protease, mas não são
completamente hidrolizados. O desequilíbrio entre a atividade das
proteases e a atividade de inibidores da protease pode provocar
doenças, por exemplo, enfisema.
3.6 Fatores que influenciam a atividade
enzimática
Vários fatores influenciam a atividade enzimática, incluindo a
temperatura, pH, concentração do substrato, tempo e produto da
reação.
A. Temperatura
As reações químicas são afetadas pela temperatura. Quanto maior
a temperatura, maior a velocidade da reação. A velocidade aumenta
porque mais moléculas adquirem energia suficiente para atingir o
estado de transição. Em reações catalisadas por enzimas, a velocidade
é acelerada pelo aumento da temperatura até atingir uma temperatura
ótima na qual a enzima opera com a máxima eficiência. Como as
enzimas são proteínas, os valores de temperatura ótima situam-se
entre 40 e 45 °C e dependem do pH e da força iônica. Acima dessa
temperatura, a atividade das enzimas declina adruptamente por
desnaturação protéica. Sob condições de hipotermia, a atividade
enzimática é deprimida. As relações acima descritas são mostradas na
Figura 3.5.

3 Enzimas • 81
Figura 3.5
Efeito da temperatura sobre a velocidade de uma reação catalisada por
enzima.
B. pH
A concentração de íons hidrogênio afeta as enzimas de vários
modos. Primeiro, a atividade catalítica das enzimas está relacionada à
ionização de aminoácidos no do sítio ativo.. Por exemplo, a atividade
catalítica de certas enzimas necessita a forma protonada da cadeia
lateral do grupo amino. Se o pH torna-se suficientemente alcalino de
tal modo que o grupo perde seu próton, a atividade da enzima pode
ser reduzida. Além disso, os substratos podem também serem
afetados. Se um substrato contém um grupo ionizável, as mudanças
no pH afetam a capacidade de ligação ao sítio ativo. Segundo,
alterações nos grupos ionizáveis podem modificar a estrutura terciária
das enzimas. Mudanças drásticas no pH promovem a desnaturação de
muitas enzimas.
Apesar de algumas enzimas tolerar grandes mudanças no pH, a
maioria delas são ativas somente em intervalos muitos estreitos. Por
essa razão, os organismos vivos empregam tampões que regulam o
pH. O valor do pH no qual a atividade da enzima é máxima é
chamado pH ótimo. O pH ótimo das enzimas varia consideravelmente.
Por exemplo, o pH ótimo da pepsina, enzima proteolítica produzida
no estômago é, aproximadamente, 2. Para a quimotripsina, que digere
as proteínas no intestino delgado, o pH ótimo é, aproximadamente, 8.
O efeito do pH sobre a atividade das enzimas é esquematizado na
Figura 3.6.
Velocidade
Temperatura em ºC

Velocidade
pH
Figura 3.6
Atividade enzimática versus pH (considerando-se os outros fatores
constantes)
C. Concentração da enzima
A velocidade máxima da reação é uma função da quantidade de
enzima disponível, aquela aumenta proporcionalmente pela
introdução de mais enzima ao sistema. Assim, a velocidade inicial da
reação enzimática é diretamente proporcional à concentração de
enzima (existindo substrato em excesso) (Figura 3.7).
Figura 3.7
Efeito da concentração da enzima sobre a velocidade inicial (v0). A
concentração do substrato está acima da necessária para atingir a velocidade
máxima.
D. Concentração do substrato
Para atender as necessidades do organismo, as reações
bioquímicas devem ocorrer em velocidade compatível. A velocidade
de uma reação bioquímica é expressa em termos de formação de
produto ou pelo consumo do reagente por unidade de tempo. Ao
considerar uma reação unimolecular (que envolve um único
reagente):
A → P
Velocidadeinicialν0
Concentração de enzima

3 Enzimas • 83
O progresso da reação é descrita pela equação da velocidade na
qual a velocidade é expressa em termos da constante de velocidade
(k) e a concentração do reagente [A]:
[ ] [ ]Ak
t
A
Velocidade =
∆
∆−
=υ=
onde [A] = concentração do substrato, t = tempo e k = constante de
proporcionalidade designada constante de velocidade (sua unidade é
o recíproco do tempo, s−1
) que depende das condições da reação
(temperatura, pH e força iônica). O sinal negativo para as variações
da [A] indica que A está sendo consumido na reação. A equação
mostra que a velocidade da reação é diretamente proporcional a
concentração do reagente A. O processo exibe cinética de primeira
ordem (Figura 3.8).
Quando a adição de mais reagente não aumenta a velocidade, a
reação exibe cinética de ordem zero (Figura 3.8). A expressão da
velocidade para a reação A → P é
Velocidade = k[A]0
= k
A velocidade é constante porque não depende da concentração
dos reagentes, mas de outros fatores. A quantidade de reagente é o
suficiente grande para saturar todos os sítios catalíticos das moléculas
enzimáticas. Assim, o reagente só existe na forma de complexos
enzima−substrato (ES). Como a curva velocidade-substrato é
hiperbólica, a fase de ordem zero atinge uma velocidade máxima,
Vmax.
Figura 3.8
Efeito da concentração do substrato sobre a velocidade inicial (ν0) em
reações catalisadas por enzimas.
Uma reação bimolecular ou de segunda ordem pode ser escrita:
A + B → C
Sua equação de velocidade é
Concentração de substrato [S]
Cinética de primeira ordem
Cinética de ordem zero

[ ] [ ] [ ][ ]BAk
t
B
t
A
Velocidade =
∆
∆
−=
∆
∆
−=
O k é a constante de velocidade de segunda ordem e tem como
unidade M−1
⋅s−1
. A velocidade de uma reação de segunda ordem é
proporcional ao produto da concentração dos dois reagentes ([A][B]).
3.7 Cinética enzimática
O estudo da velocidade das reações enzimáticas ou cinética
enzimática, envolve informações indiretas sobre o mecanismo de ação
catalítica, especificidade das enzimas, alguns fatores que afetam a
velocidade das reações e a determinação quantitativa de seus efeitos.
Apesar de catalisarem uma grande variedade de reações por
diferentes mecanismos, as enzimas podem ser analisadas quanto as
suas velocidades para quantificar as suas eficiências.
Quando o substrato S liga o sítio ativo de uma enzima E, um
complexo enzima−substrato (ES) é formado em processo rápido e
reversível antes da formação do produto. Após um breve tempo, o
produto se dissocia da enzima conforme a equação:
E + S ES → P
onde
k1 = constante de velocidade para a formação do complexo ES
k2 = constante de velocidade para a dissociação de ES em P
k3 = constante de velocidade para a formação de produto e liberação
do sítio ativo.
A relação quantitativa entre a velocidade de reação enzimática e a
concentração do substrato é definida pela equação de
Michaelis−Menten (Leonor Michaelis e Maud Menten em 1913). No
desenvolvimento da equação deve-se supor que (1) o k2 é
negligenciável quando comparado com k1 e (2) a velocidade de
formação de ES é igual a velocidade de sua degradação não sofrendo
alterações durante a medida da velocidade (postulado do estado
estacionário):
]ES[k
t
P
Velocidade 3=
∆
∆
=
Para ter utilidade, a velocidade de uma reação deve ser definida
em termos de [S] e [E]. A velocidade de formação de ES é igual a
k1[E][S], enquanto a velocidade de dissociação de ES é igual a (k2 +
k3)[ES]. O postulado do estado estacionário iguala as duas
velocidades:
K1[E][S] = (k2 + k3)[ES]
[ ] [ ] [ ]
( ) 132 kkk
SE
ES
+
=
Michaelis e Menten introduziram uma nova constante, Km

3 Enzimas • 85
1
32
m
k
kk
K
+
=
assim, a expressão de velocidade pode ser obtida após manipulação
algébrica adequada:
[ ]
[ ]S
S
m
max
+
⋅
=ν
K
V
o
Essa é a equação de Michalis−Menten que relaciona a velocidade
inicial (νo, mudança na concentração de reagente ou produto durante
os primeiros poucos segundos da reação) de uma reação catalisada
por enzima com a concentração do substrato. As duas constantes
nessa equação, a velocidade máxima (Vmax, velocidade atingida sob
condições de saturação da enzima em condições específicas de
temperatura, pH e força iônica) e Km são específicas para cada
enzima sob condições específicadas de pH e temperatura. Para
aquelas, onde k3<<k2, a Km torna-se a recíproca da constante de
ligação enzima-substrato:
K
K
m
a
=
1
e a Vmax reflete a fase catalítica do mecanismo enzimático conforme
sugere a equação 3.1. Em outras palavras, nesse modelo simples da
atividade da enzima distingue-se duas fases: inicialmente a ligação do
substrato seguida pela modificação química do mesmo.
Se for permitido à velocidade inicial de reação, ν0, ser igual a
metade da velocidade máxima (v0 = ½ Vmax) na equação 3.3, o Km será
igual a [S]:
[ ]
[ ]S
S
2
1
m
max
max
+
⋅
=
K
V
V
Dividindo por Vmax, obtém-se
[ ]
[ ]S
S
2
1
m +
=
K
Reorganizando a equação:
Km + [S] = 2[S]
Km = [S]
O valor do Km (constante de Michaelis) é numericamente igual à
concentração do substrato (mol/L) na qual a velocidade inicial da
reação corresponde à metade da velocidade máxima. Ou seja, na
concentração de substrato em que [S] = Km, a equação de
Michaelis−Menten torna-se ν0 = Vmax/2. A concentração da enzima
não afeta o Km.

Figura 3.9
Determinação do Km pelo gráfico de velocidade inicial (v0) versus
concentração do substrato, [S]. O Km é a concentração do substrato (mol
por litro) na qual a velocidade inicial da reação é metade da velocidade
máxima.
Valores pequenos de Km refletem afinidade elevada da enzima
pelo substrato e, portanto, atingirá a máxima eficiência catalítica em
baixas concentrações de substrato. Valores grandes de Km refletem
baixa afinidade da enzima pelo substrato.
Tabela 3.2 – Valores do Km para algumas enzimas
Enzima Substrato Km (µM)
Anidrase−carbônica CO2 8.000
Arginina−tRNA−sintetase Arginina
tRNA
ATP
3
0,4
300
β−Galactotidase Lactose 4.000
Lisozima Hexa−N−acetilglicosamina 6
Penicilase Benzilpenicilina 50
Piruvato−carboxilase Piruvato
HCO3
-
ATP
400
1.000
60
Quimiotripsina Acetil−1−triptofanamida 5.000
Treonina−desaminase Treonina 5.000
A. Constante catalítica (kcat)
As enzimas nas células e fluídos do corpo normalmente não
atuam em concentrações saturadas de substrato. Para avaliar a
eficiência catalítica de uma enzima, define-se a constante catalítica,
kcat também conhecida como número de reciclagem (turnover
number):
Concentração de substrato [S]

3 Enzimas • 87
[ ]total
max
cat
E
V
k =
kcat representa o número de moléculas de substrato convertidos em
produto por segundo por molécula de enzima (ou por mol de sítio
ativo nas enzimas oligoméricas) sob condições de saturação. Em
outras palavras, o Kcat indica o número máximo de moléculas
convertidas em produto por segundo por cada sítio ativo. [E]total =
concentração total da enzima.
Tabela 3.3 – Constantes catalíticas de algumas enzimas
Enzima Kcat (s−1
)
Nuclease estafilicócica 95
Citidina−deaminase 299
Triose−fosfato−isomerase 4.300
Ciclofilina 13.000
Cetoesteróide−isomerase 66.000
Anidrase−carbônica 1.000.000
B. Constante de especificidade (kcat/Km)
A relação kcat/Km é chamada constante de especificidade e
relaciona a eficiência catalítica da enzima com a sua afinidade pelo
substrato. A velocidade da reação varia diretamente com a freqüência
de colisões entre as moléculas de enzima e as de substrato na solução.
A decomposição do complexo ES em E + P não pode ocorrer mais
velozmente que o encontro de E e S para formar ES.
A relação kcat/Km é, em geral, o melhor parâmetro cinético para
comparações de eficiência catalítica entre diferentes enzimas. Valores
baixos da relação indicam pouca afinidade da enzima pelo substrato.
Por exemplo, a acetilcolinoestarase tem valor de kcat/Km de 1,5 x 108
s−1
M−1
mostrando alta eficiência, enquanto a urease o valor é 4 x 105
s−1
M−1
descreve uma menor eficiência.
Tabela 3.4 – Constante de especificidade, kcat/Km, de algumas enzimas
Enzima kcat/KM (s−1
M−1
)
Acetilcolinesterase 1.6 × 108
Anidrase−carbônica 8.3 × 107
Catalase 4 × 107
Crotonase 2.8 × 108
Fumarase 1.6 × 108
Triose−phosphate−isomerase 2.4 × 108
β−Lactamase 1 × 108
Superoxide−dismutase 7 × 109

C. Gráfico de Lineweaver-Burk
Os valores do Km e da Vmax de uma enzima são determinados pela
medida das velocidades iniciais para várias concentrações de
substrato. Pela construção do gráfico mostrado na Figura 3.6 só é
possível calcular valores aproximados de Km e da Vmax. A
determinação mais acurada desses valores é possível pela
modificação algébrica da equação de Michaelis−Menten:
[ ]
[ ]SK
SV
m
max
o
+
⋅
=ν
utilizando o inverso da equação:
[ ]
1 1 1
0v
K
V S V
m
max max
= × +
A representação gráfica da recíproca de velocidade inicial, 1/ν0,
versus a recíproca da concentração do substrato, 1/[S], fornece uma
linha reta com inclinação Km/Vmax em um gráfico duplo-recíproco ou
Lineweaver−Burk. O ponto onde essa linha intercepta a ordenada é
igual a 1/Vmax, e o ponto de intersecção na abscissa é igual a-1/Km
(Figura 3.10). A utilização do gráfico permite calcular com precisão
Vmax e Km pela medida da inclinação e do intercepto.
Figura 3.10
Determinação da Vmax e Km a partir do gráfico duplo-recíproco de
Lineweaver-Burk. O gráfico 1/ν0 versus 1/[S] derivado de medidas das
velocidades iniciais em várias concentrações diferentes de substratos. A linha
reta obtida pela ligação de pontos individuais é ampliada para interceptar a
ordenada e abscissa. Os valores de Km e Vmax são determinados pela medida
das inclinações e intersecções.
D. Reações com multissubstratos
Mais da metade das reações bioquímicas envolvem dois
substratos, em lugar de reações simples com um único substrato e que
-1/Km 0 1/[S]
1/ν0
Inclinação = K /Vm max
1/Vmax

3 Enzimas • 89
obedecem o modelo de Michaelis−Menten. As reações com
multissubstratos podem proceder por diferentes mecanismos:
1. Mecanismo ordenado. Os substratos, S1 e S2, devem associar-se à
enzima com uma ordem obrigatória antes que a reação possa
ocorrer. A ligação do primeiro substrato é necessária para que a
enzima forme o sítio de ligação para o segundo substrato. Muitas
desidrogenases nas quais o segundo substrato é uma coenzima
(NAD+
, FAD etc.) são exemplos desse mecanismo.
2. Mecanismo aleatório. Os dois substratos, S1 e S2, podem se ligar
à enzima em qualquer ordem. A hexocinase transfere um grupo
fosfato do ATP para a glicose por esse mecanismo, apesar da
glicose tender ligar inicialmente a molécula de ATP.
3. Reações de dupla−troca (pingue−pongue). Um ou mais produtos
são liberados antes que os outros substratos se liguem à enzima
modificada. As reações catalisadas pela UDP−glicose−1−fosfato
uridiltransferase, piruvato−carboxilase e acetil−CoA−carboxilase
são exemplos desse mecanismo.
3.8 Inibição enzimática
Inibidores são substâncias que reduzem a atividade das enzimas e
incluem fármacos, antibióticos, preservativos de alimentos e venenos.
São importantes por várias razões: (1) Os inibidores enzimáticos
atuam como reguladores das vias metabólicas. (2) Muitas terapias por
fármacos são baseadas na inibição enzimática. Por exemplo, muitos
antibióticos e fármacos reduzem ou eliminam a atividades de certas
enzimas. O tratamento da AIDS inclui inibidores das proteases,
moléculas que inativam a enzima necessária para produzir novos
vírus. (3) Desenvolvimento de técnicas para demonstrar a estrutura
física e química, e as propriedades funcionais das enzimas.
Distinguem-se dois tipos de inibição: reversível e irreversível,
segundo a estabilidade da ligação entre o inibidor e a molécula de
enzima. Na inibição reversível ocorre interações não-covalentes entre
o inibidor e a enzima, enquanto na inibição irreversível envolve
modificações químicas da molécula enzimática, levando a uma
inativação definitiva. Na inibição reversível, a enzima retoma sua
atividade após dissociação do inibidor. Três classes de inibidores
reversíveis são descritos: competitivo, não−competitivo e
incompetitivo.

A. Inibição competitiva
Inibidores competitivos são substâncias que competem
diretamente com o substrato normal pelo sítio ativo das enzimas. São
moléculas estruturalmente semelhantes ao substrato. O inibidor (I)
competitivo reage reversivelmente com a enzima para formar um
complexo enzima−inibidor (EI) análogo ao complexo
enzima−substrato, mas cataliticamente inativo:
E + I EI + S → Não há reação
A atividade da enzima declina por não ocorrer a formação do
complexo enzima−substrato durante a existência do complexo EI. A
ação do inibidor pode ser revertida aumentando-se a quantidade de
substrato. Em altas [S], todos os sítios ativos estão preenchidos com
substrato e a velocidade da reação atinge o mesmo valor que o
observado sem o inibidor.
Como o substrato e o inibidor competem pelo mesmo sítio de
ligação na enzima, o Km para o substrato mostra um aumento aparente
em presença do inibidor. Ou seja, mais substrato é necessário para
atingir a metade da Vmax. Não há alteração na Vmax quando a
concentração do substrato é suficientemente elevada.
Um exemplo clássico de inibição competitiva envolve a enzima
succinato−desidrogenase uma enzima do ciclo do ácido cítrico que
converte o succinato a fumarato pela remoção de dois átomos de
hidrogênio:
COOH
CH2
CH2
COOH
COOH
CH
CH
COOH
+ H2
O malonato é análogo em sua estrutura ao succinato e liga-se ao
sítio ativo da enzima mas não é convertido a produto.
Quadro 3.4 Inibidores de enzimas do HIV
O vírus da imunodeficiência humana (HIV) leva à
síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS)
infectando as células do sistema imune. Nas
primeiras etapas da infecção, o HIV fixa-se à célula-
alvo e injeta o seu material genético (RNA em vez de
DNA) na célula hospedeira. O RNA viral é transcrito
em DNA por uma enzima viral conhecida como
transcriptase reversa. A seguir, o DNA é integrado no
genoma do hospedeiro, e a célula pode produzir mais
RNA viral e proteínas para empacotá-los em novas
partículas virais.
Vários inibidores da transcriptase reversa foram
desenvolvidos. O arquétipo é o AZT (3’-azido-3’-
desoxitimidina; Zidovudina), o qual é absorvido pelas
células, fosforilado e incorporado nas cadeias de
DNA sintetizadas pela transcriptidase reversa a partir
do molde do HIV. Uma vez que o AZT não possui o
grupo 3’-OH, ele funciona como um terminador de
cadeia, da mesma maneira que os
didesoxinucleotídeos utilizados no sequenciamento
do DNA. A maioria das DNA-polimerases celulares
tem baixa afinidade pela AZT fosforilado, mas a
transcriptidase reversa tem uma alta afinidade por
essa droga, o que torna o AZT efetivo contra a
replicação.

3 Enzimas • 91
COOH
CH2
COOH
Produto
O mecanismo da inibição competitiva é mostrado na Figura 3.11.
S
I
+ Substrato
Enzima
I
Inibidor
ν Inibidor
competitivo
+
(-Inibido) (+Inibido)
[S]
Sem inibidor
Inibida
Não inibida
1/[S]
1
0ν
Figura 3.11
Inibição competitiva. Gráficos de vo versus concentração de substrato para
uma reação de Michaelis–Menten na presença de um inibidor competitivo. A
segunda figura mostra o mesmo tipo de inibição em um gráfico de
Lineweaver−Burk.
B. Inibição não-competitiva
O inibidor não-competitivo se liga tanto à enzima como ao
complexo ES em um sítio diferente do sítio de ligação do substrato. A
ligação do inibidor não bloqueia a ligação do substrato, mas provoca
uma modificação da conformação da enzima que evita a formação de
produto:
E + I EI + S EIS → Não há reação
E + S ES + I EIS → Não há reação
A inibição não reverte pelo aumento na concentração do
substrato. O inibidor reduz a concentração da enzima ativa e, assim,
diminui a Vmax aparente. Nesses casos, o inibidor não afeta o Km para
o substrato. O inibidor não-competitivo não apresenta semelhança
estrutural com o substrato. Os metais pesados, Hg2+
e Pb2+
, que
ligam-se aos grupos sulfidrílicos e modulam a conformação da
enzima, são exemplos de inibidores não-competitivos

S
I
+
I
ν
Inibidor não-
competitivo
+
(S)
Sem inibidor Inibida
Não inibida
1/[S]
0
1
ν
Figura 3.12
Inibição não-competitiva. A. Efeito da concentração do substrato sobre a
velocidade inicial na presença de um inibidor não-competitivo. B. Gráfico de
Lineweaver-Burk para a reação mostrada em A.
C. Inibição incompetitiva
O inibidor incompetitivo liga-se apenas ao complexo ES da
enzima originando um complexo inativo, ESI. O inibidor não se
combina com a enzima livre.
E + S ES + I EIS → Não há reação
A inibição não é revertida pelo aumento na concentração do
substrato. O resultado é a modificação aparente do Km e Vmax. (Figura
3.14).
Inibida
Não inibida
1/[S]
1
0ν
Figura 3.13
Gráfico de Lineweaver-Burk para um inibidor incompetitivo.
D. Inibição irreversível
A inibição irreversível envolve modificação covalente e
permanente do grupo funcional necessário para a catálise, tornando a
enzima inativa. È classificado como um inativador. Alguns pesticidas
inibem o sítio ativo da acetilcolina−esterase, o que impede a hidrólise
ν Inibidor
competitivo
+
(-Inibido) (+Inibido)
[S]
Sem inibidor

3 Enzimas • 93
da acetilcolina na sinapse, resultando, no homem, paralisia dos
músculos respiratórios e edema pulmonar.
E. Fármacos que atuam como inibidores enzimáticos
Muitos fármacos modernos atuam como inibidores da atividade
enzimática. Esse mecanismo é encontrado com antivirais,
antitumorais e antibacterianos. Os compostos com diferentes
estruturas em relação ao substrato natural que atuam como inibidores
são conhecidos como antimetabólitos. Entre os quais citam-se, as
sulfas (a sulfanilamida compete com o ácido p−aminobenzóico
necessário para o crescimento bacteriano), o metotrexato (compete
com o diidrofolato e é usado no tratamento da leucemia infantil),
substratos suicidas (geram uma espécie altamente reativa que reage
de forma irreversível com o sítio ativo, exemplo, o Omeprazol usado
no tratamento de excessiva acidez estomacal), fluorouracil (inibidor
irreversível da timidilato−sintetase) e 6−mercaptopurina (compete
com a adenina e guanina e é efetiva no tratamento de leucemias
infantis).
3.9 Regulação da atividade enzimática
Além da influência exercida sobre a atividade enzimática de
diversos fatores, tais como: concentração do substrato e enzima, pH,
temperatura e presença de co−fatores, tem-se também, a integração
das enzimas nas vias metabólicas e a interrelação dos produtos de
uma via com a atividade de outras vias. As vias metabólicas não
operam em capacidade máxima o tempo todo. De fato, muitos
processos podem ser interrompidos, inibidos ou ativados, durante
certas fases no ciclo de vida da célula. Se assim não fosse, a célula
teria um crescimento descontrolado e antieconômico.
A regulação das vias metabólicas ocorre por meio da modulação
da atividade de uma ou mais enzimas-chave do processo. A etapa de
maior energia de ativação é denominada etapa de comprometimento
(geralmente uma reação irreversível). Comumente, enzima-chave que
catalisa a etapa comprometida serve como válvula de controle do
fluxo de moléculas no percurso metabólico.

A regulação das vias bioquímicas envolve mecanismos
sofisticados e complexos. É conseguida principalmente pelo ajuste
das concentrações e atividades de certas enzimas. O controle é
atingido por: (1) controle genético, (2) modificação covalente, (3)
regulação alostérica e (4) compartimentalização.
A. Controle genético
A quantidade das enzimas disponíveis nas células depende da
velocidade de sua síntese e da velocidade de sua degradação. A
síntese de enzimas em resposta às mudanças das necessidades
metabólicas é um processo conhecido como indução enzimática, que
permite a resposta celular de maneira ordenada às alterações no meio.
A síntese de certas enzimas pode ser especificamente inibida por
repressão. O produto final de uma via bioquímica pode inibir a
síntese de uma enzima-chave da mesma via.
B. Regulação por modificação covalente
A atividade de algumas enzimas que modulam o fluxo das vias
metabólicas, é regulada por modificações covalentes reversíveis, em
reações catalisadas por outras enzimas. Isso resulta na ativação ou
inibição da atividade enzimática. Freqüentemente, a modificação
envolve a fosforilação e defosforilação da enzima por adição ou
remoção de grupos fosfato ou, por modificações covalentes de outro
tipo. As fosforilação e defosforilação são catalisadas por
proteínas−cinases e proteínas−fosfatases, respectivamente. Como
exemplo do processo regulador, tem-se a enzima glicogênio
fosforilase que catalisa o desdobramento do glicogênio. A enzima se
apresenta na forma fosforilada (ativa) e desfosforilada (inativa) em
processo de interconversão cíclica entre as duas formas. O
mecanismo geral de regulação por modificação covalente está
intimamente associado à ação hormonal.
Quadro 3.5 Inibidores irreversíveis
Inibidores enzimáticos irreversíveis são
geralmente substâncias tóxicas. Podem ser
substâncias naturais ou sintéticas.
Os compostos organofosforados como o
diisopropilfosfofluoridato (DIFP), formam ligações
covalentes com o grupo OH de resíduos de serina
195 da acetilcolinesterase (enzima que catalisa a
hidrólise da acetilcolina), inativando-a. A
iodoacetamida, reage com o grupo SH de resíduos de
cisteína. Esses inibidores são bastante tóxicos para
os organismos, não só pela irreversibilidade de sua
ligação às enzimas, mas também devido à sua
inespecificidade.
Outro exemplo de inibidor irreversível é a
aspirina (ácido acetil-salicílico), porém com
propriedades farmacológicas (antiinflamatório,
antipirético e analgésico). A aspirina transfere
irreversivelmente seu grupo acetil para o grupo OH
de um resíduo de serina da molécula de
cicloxigenase, inativando-a. Essa enzima é
responsável pela catálise da primeira reação da
síntese de prostaglandinas (substâncias reguladoras
de muitos processos fisiológicos).
A penicilina liga-se especificamente às enzimas
da via de síntese da parede bacteriana, inibindo-as
irreversivelmente.

3 Enzimas • 95
Outros exemplos de modificações covalentes reversíveis incluem
acetilação−desacetilação, adenilação−desadenilação,
uridinilação−desuridililação e metilação−desmetilação.
C. Regulação alostérica
As enzimas reguladas por moduladores ligados a sítio(s)
adicional(is) e que sofrem mudanças conformacionais não-covalentes
são denominadas alostéricas. A afinidade da ligação enzima-substrato
das enzimas alostéricas é modificada por ligantes denominados
efetores ou moduladores alostéricos, unidos reversível e
não−covalentemente a locais específicos da estrutura tridimensional
protéica e nominados sítios alostéricos, que são diferentes e distantes
dos sítios ativos específicos para os substratos. Os efetores são
pequenas moléculas orgânicas, por exemplo, o ATP (trifosfato de
adenosina), proteínas de baixo peso molecular, substratos ou produtos
da reação. A maioria das enzimas sujeitas a esses efeitos são
decisivas na regulação do metabolismo intermediário.
Os efetores podem ser:
• Efetor alostérico positivo – aumenta a afinidade da enzima pelo
substrato e, assim, eleva a velocidade da reação.
• Efetor alostérico negativo – reduz a afinidade da enzima pelo
substrato e, assim, diminui a velocidade da reação.
A maioria das enzimas alostéricas é oligomérica; ou seja, são
compostas de várias subunidades polipeptídicas, cada uma com um
sítio ativo. Em algumas enzimas, o sítio alostérico e o sítio ativo
estão localizados na mesma subunidade (ex.: piruvato−carboxilase);
em outras, estão localizados em subunidades diferentes (ex.:
aspartato−carbamoiltransferase). Em conseqüência da natureza
oligomérica das enzimas alostéricas, a ligação do substrato a uma
subunidade pode afetar a ligação de outras moléculas de substrato aos
outros sítios ativos. Cooperatividade é a influência que a união de um
ligante a uma protômero tem sobre a união de ligante a outro
protômero numa proteína oligomérica. A interação estabelecida entre
os sítios ativos é evidenciada pela cinética da catálise: o gráfico de νo
versus a concentração de substrato [S] é uma curva sigmóide, em
lugar da curva hiperbólica de Michaelis−Menten (Figura 3.14).
Quanto a cooperatividade as reações podem ser:
• Positivamente cooperativa onde a ligação do primeiro substrato
aumenta a afinidade de substratos adicionais por outros sítios
ativos.
• Negativamente cooperativa em que a ligação do primeiro
substrato reduz a afinidade por substratos adicionais.

Figura 3.14
Velocidade inicial da reação versus a concentração de substrato (S)
para enzimas alostéricas comparadas com enzimas não−alostéricas.
As enzimas alostéricas podem exercer diferentes efeitos:
• Interações homotrópicas. A união do ligante a um protômero
pode afetar a união de ligantes aos outros protômeros do
oligômero.
• Interações heterotrópicas. É o efeito de um ligante sobre a
ligação de um ligante diferente; o efeito pode ser tanto positivo
como negativo.
Algumas enzimas alostéricas têm dois ou mais efetores e podem
ser reguladas por efetores positivos e negativos que poderão estar
presentes em diferentes concentrações.
Figura 3.15
Modelos de sistemas de enzimas alostéricas. (a) Modelo de uma enzima
monomérica. A ligação de um efetor alostérico positivo (A) ao sítio ativador, j,
induz a uma nova conformação da enzima, com maior afinidade pelo substrato. A
ligação de um efetor alostérico negativo ao sítio inibidor, i, resulta numa
conformação da enzima com afinidade diminuída pelo substrato (S). (b) Modelo
de uma enzima alostérica polimérica. A ligação de um efetor alostérico positivo
(A) no sítio j, causa uma mudança alostérica na conformação do protômero ao
qual o efetor se liga que é transmitida a um segundo protômero por meio de
interações cooperativas protômero−protômero. A afinidade pelo substrato
(a)
(b)
ν0
[S]

3 Enzimas • 97
aumenta nos dois protômeros. Um efetor negativo diminui a afinidade pelo
substrato nos dois protômeros.
Dois modelos explicam o comportamento de enzimas alostéricas
com curvas sigmoidais v0 versus [S] que refletem as interações
cooperativas entre as subunidades oligoméricas:
1. Modelo concertado (ou de simetria). Proposto por Monod,
Wyman e Changeux, onde as subunidades estão todas na forma
inativa (T, tenso) ou todas na forma ativa (R, relaxado). Os estados T
e R estão em equilíbrio. Ativadores e substratos favorecem o estado
R. Inibidores favorecem o estado T. Uma mudança conformacional
num protômero causa uma mudança correspondente em todos os
protômeros.
2. Modelo seqüencial. Proposto por Koshland, Némethy e Filmer
as subunidades podem sofrer a mudança conformacional
individualmente. A ligação do substrato aumenta a probabilidade da
mudança conformacional. A mudança em uma subunidade faz ocorrer
uma mudança similar na subunidade adjacente, vizinho do protômero
contendo o ligante unido, assim como torna mais provável a ligação
de uma segunda molécula de substrato.
Figura 3.16
Comportamento das enzimas alostéricas. No modelo concertado, todas as unidades são
convertidas do estado T (baixa afinidade) para o estado R (alta afinidade) simultaneamente. No
modelo seqüencial, as subunidades sofrem mudanças conformacionais progressivamente com
as ligações do substrato.
D. Zimogênios
Muitas enzimas são sintetizadas como precursores inativos e,
subsequentemente, ativadas pela clivagem de uma ou mais ligações
peptídicas específicas. O precursor inativo é chamado zimogênio (ou
proenzima). Não é necessária uma fonte de energia (ATP) para a
clivagem.
Modelo concertado
+
+
Modelo seqüencial
+
+ + +
++
Estado T Estado R Substrato

As formas zimogênios são geralmente designadas pelo sufixo
−ogênio depois do nome da enzima; a forma zimogênio da
quimotripsina é denominada quimotripsinogênio. Algumas vezes, a
forma zimogênio é referida pró-enzima; a forma zimogênio do
colágeno é o pro−colágeno.
A proteólise específica é um meio comum de ativação de enzimas
e outras proteínas nos sistemas biológicos. Exemplos:
• As enzimas digestivas que hidrolisam proteínas são sintetizadas
como zimogênios no estômago e pâncreas (Quadro 3.3).
• A coagulação sangüínea é mediada por uma cascata de ativadores
proteolíticos que asseguram uma rápida e amplificada resposta a
lesão celular. Os zimogênios são sintetizados nas células do
fígado e são secretados no sangue para subseqüente ativação por
serino-proteases.
• Alguns hormônios protéicos são sintetizados como precursores
inativos. Por exemplo: a insulina é derivada da pró−insulina pela
remoção proteolítica de um peptídeo.
• A proteína fibrosa colágeno, o maior constituinte da pele e ossos,
é derivado do pro−colágeno, um precursor solúvel.
• Muitos processos de desenvolvimento são controlados pela
ativação de zimogênios. Por exemplo, parte do colágeno é
desdobrado no útero dos mamíferos após o parto. A conversão da
pró−colagenases em colagenases, a protease ativa, é realizado no
momento apropriado dentro do processo.
• A apoptose ou a morte celular programada é mediada por
enzimas proteolíticas denominadas captases e sintetizadas na
forma de precursor pró−caspases. Quando ativadas por vários
sinais, as caspases atuam na morte celular. A apoptose promove
um meio de esculpir as formas de parte do corpo no curso do
desenvolvimento e um meio de eliminar células produtoras de
auto-anticorpos ou infectadas com patógenos também como,
células contendo uma grande quantidade de DNA lesado.
Quadro 3.3 – Zimogênios gástricos e pancreáticos
Local de síntese Zimogênio Enzima ativa
Estômago Pepsinogênio Pepsina
Pâncreas Quimiotripsinogênio Quiniotripsina
Pâncreas Tripsinogênio Tripsina
Pâncreas Pró−carboxipeptidase Carboxipeptidase
Pâncreas Proelastase Elastase
E. Isoenzimas
Outro fenômeno de regulação metabólica e que depende da
estrutura quaternária das proteínas enzimáticas são as isoenzimas. As
isoenzimas ou isozimas são formas moleculares múltiplas de uma

3 Enzimas • 99
enzima, que realizam a mesma ação catalítica e ocorrem na mesma
espécie animal. O exemplo clássico é a lactato−desidrogenase (LDH)
um tetrâmero formado por duas espécies diferentes de cadeias
polipeptídicas, denominadas M (músculo) e H (coração). Essas
subunidades são codificadas por genes diferentes. A combinação das
duas cadeias produz cinco isoenzimas que podem ser separadas
eletroforeticamente (Quadro 3.4).
Quadro 3.4 – Composição das subunidades da lactato-desidrogenase e
suas principais localizações
Tipo Composição Localização
LDH−1 HHHH Miocárdio e eritrócitos
LDH−2 HHHM Miocárdio e eritrócitos
LDH−3 HHMM Cérebro e fígado
LDH−4 HMMM -
LDH−5 MMMM Músculo esquelético e fígado
A lactato desidrogenase catalisa a redução reversível do piruvato
a lactato. Desse modo, no músculo esquelético a isoenzima LDH−5
apresenta Vmax elevada para o piruvato e, portanto, converte
rapidamente o piruvato a lactato. No caso da LDH−1, encontrada no
coração a Vmax é relativamente baixa para o piruvato, não favorecendo
a formação do lactato. O excesso de piruvato inibe a isoenzima
LDH−1. O músculo cardíaco, um tecido essencialmente aeróbico,
metaboliza a glicose a piruvato e, a seguir, a CO2 e H2O, produzindo
pouco lactato. Entretanto, em situações de déficit de oxigênio, o
piruvato pode ser convertido a lactato como medida de emergência.
Assim, as características cinéticas distintas das duas enzimas
determinam o tipo de metabolismo em cada tecido.
Foram estudadas isoenzimas de várias enzimas diferentes, sendo
as mais importantes, do ponto de vista clínico, além da lactato
desidrogenase, a creatina cinase e a fosfatase alcalina.
3.10 Aplicações clínicas das enzimas
Muitas das enzimas presentes no plasma, líquido
cefalorraquidiano, urina e exudatos, são provenientes,
principalmente, do processo normal de destruição e reposição celular.
Entretanto, certas enzimas se apresentam, nesses líquidos, em teores
elevados após lesão tecidual provocadas por processos patológicos
com o aumento na permeabilidade celular ou morte prematura da
célula. Nos casos de alteração da permeabilidade, as enzimas de
menor massa molecular aparecem no plasma. Quanto maior o
gradiente de concentração entre os níveis intra e extracelular, mais
rapidamente a enzima difunde para fora. As enzimas citoplasmáticas
surgem no plasma antes daquelas presentes nas organelas
sub−celulares. Quanto maior a extensão do tecido lesado, maior o
aumento no nível plasmático. As enzimas não específicas do plasma

são clarificadas em várias velocidades, que dependem da estabilidade
da enzima e sua susceptibilidade ao sistema reticuloendotelial.
Algumas enzimas tem sua atividade no próprio plasma; por
exemplo, as enzimas associadas a coagulação sangüínea (trombina),
dissolução de fibrina (plasmina) e clareamento de quilomicrons
(lipase lipoprotéica). As enzimas mais ensaiadas no laboratório
clínico são mostradas na Quadro 3.5.
Quadro 3.5 – Enzimas rotineiramente ensaiadas no laboratório clínico
Enzimas Órgão ou tecido afetado
Aldolase Músculo, coração
Amilase Pâncreas
Creatina−cinase (CK ou CPK) Coração, músculo, cérebro
Fosfatase ácida Próstata (carcinoma)
Fosfatase alcalina Fígados, ossos
Lactato−desidrogenase (DHL) Fígado, coração, eritrócitos
Lipase Pâncreas
γ-Glutamil−transpeptidase Fígado
Glicose 6−P−desidrogenase Eritrócitos (doença genética)
Transaminase−oxalacética (OT) Fígado, coração
Transaminase−pirúvica (PT) Fígado, coração
Resumo
1. As enzimas são catalisadores biológicos. Elas aumentam a velocidade da
reação pois seguem uma via alternativa que necessita menos energia que
a reação não-catalisada. As enzimas são específicas para o ripo de reação
que catalisam. Cada tipo de enzima possui um local específico em sua
superfície denominado sítio ativo, que é uma pequena fenda onde se liga
o substrato. No modelo chave−e−fechadura, a fenda do sítio ativo e o
substrato são complementares. No modelo do encaixe-induzido á
proteína é mais flexível e se adapta ao substrato.
2. Cada enzima é classificada de acordo com o tipo de reação que catalisa.
Existem seis tipos de categorias enzimáticas: oxidorredutases,
transferases, hidrolases, liases, isomerases e ligases.
3. A cinética enzimática é o estudo quantitativo da catálise por enzimas. De
acordo com o modelo de Michaelis−Menten, quando o substrato S liga-se
ao sítio ativo de uma enzima E, um complexo de estado de transição é
formado. Durante o estado de transição, o substrato é convertido em
produto. Após algum tempo, o produto se dissocia da enzima.
4. O número de renovação (Kcat) é a medida do número de moléculas de
substrato convertidos em produto por unidade por uma enzima quando
ela está saturada de substrato. O termo Kcat/Km descreve a eficiência da
enzima.
5. A inibição enzimática pode ser reversível ou irreversível. Os inibidores
irreversíveis geralmente ligam-se covalentemente às enzimas. Na
inibição reversível, o inibidor pode dissociar-se da enzima. Os tipos mais

3 Enzimas • 101
comuns de inibição reversível são a competitiva, não−competitiva e a
incompetitiva.
6. As propriedades cinéticas das enzimas alostéricas não são explicadas
pelo modelo de Michaelis−Menten. A maioria das enzimas alostéricas são
proteínas multi-subunidades. A ligação do substrato ou efetor a uma
subunidade afeta as propriedades de ligação dos outros protômeros.
7. As enzimas empregam os mesmos mecanismos dos catalizadores não-
enzimáticos. Vários fatores contribuem para a catálise enzimática:
efeitos de proximidade e orientação, efeitos eletrostáticos, catálise
ácido−base e catálise covalente. A combinação desses fatores afetam os
mecanismos enzimáticos.
8. As cadeias laterais de aminoácidos presentes nos sítios ativos são os
principais responsáveis pela transferência de prótons e substituições
nucleófilas. Co-fatores não−protéicos (metais e coenzimas) são usados
pelas enzimas para catalisar vários tipos de reações.
9. As enzimas são sensíveis aos fatores ambientais como a temperatura e
pH. Cada enzima tem uma temperatura ótima e um pH ótimo.
10. As reações químicas nas células vivas são organizadas em uma série de
vias bioquímicas. As vias são controladas principalmente pelo ajuste das
concentrações e atividades das enzimas por meio do controle genético,
modificação covalente, regulação alostérica e compartimentalização.

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Introdução ao
Metabolismo
Capítulo
4

103
4
Introdução ao Metabolismo
Objetivos
1. Aplicar as leis da termodinâmica às reações bioquímicas.
2. Conceituar entalpia, entropia e energia livre.
3. Identificar o sentido de uma reação enzimática em função do valor da energia
livre padrão ou da constante de equilíbrio químico.
4. Descrever as reações acopladas.
5. Conceituar os compostos ricos em energia.
6. Descrever as propriedades do ATP e seu papel no metabolismo.
7. Interrelacionar o anabolismo e catabolismo.
8. Discutir as estratégias intracelulares de regulação do metabolismo.
9. Discutir o controle extracelular do metabolismo em relação a influência
hormonal sobre o metabolismo celular.
10. Discutir a produção e o papel dos segundos mensageiros na transdução de
sinal.
11. Discutir o mecanismo de ação dos hormônios hidrofóbicos.
Os processos físicos e químicos realizados pelas células vivas
envolvem a extração, a canalização e o consumo de energia. Os
mamíferos empregam energia química extraída das moléculas de
nutrientes (carboidratos, proteínas e lipídeos não-esteróides) para
realizar suas funções. Os processos químicos celulares são
organizados em forma de uma rede de reações enzimáticas
interligadas, nas quais, as biomoléculas são quebradas e sintetizadas
com a geração e gasto de energia, respectivamente. Estão
relacionadas com:
• A energia liberada nos processos de quebra de moléculas
nutrientes orgânicos é conservada na forma de ATP (trifosfato de
adenosina) e NADPH (nicotinamida adenina dinucleotídeo
fosfato).

104 • MOTTA – Bioquímica
Quadro 4.1 Fotossíntese
Os processos fotossintéticos utilizam a energia
luminosa captada por moléculas de clorofila para
sintetizar carboidratos a partir do dióxido de carbono
e água. A clorofila e outros pigmentos das plantas
absorvem fótons de limitados comprimentos de onda.
Quando um fóton é absorvido pela clorofila, os
elétrons passam por uma série de transportadores
que promovem a sua excitação. A energia dos
elétrons excitados é transformada em energia
química armazenada nas moléculas de ATP e
NADPH formados nas reações de luz da fotossíntese.
O ATP e o NADH reduzem então o CO2 e o
convertem a 3-fosfoglicerato por uma série de
reações “no escuro” (ciclo de Calvin). Formam-se
hexoses a partir do 3-fosfoglicerato. As hexoses são
armazenadas nos vegetais em duas formas
principais: amido e sacarose (açúcar de mesa).
A relação matemática entre o comprimento de
onda (λ), freqüência da radiação (ν) e energia dos
fótons, E, é
E = hc/λ = hν
onde h é a constante de Planck (6,63 x 10
-34
J·s)
e c é a velocidade da luz no vácuo (2,998 x 10
8
m·s
-
1
). As plantas utilizam a energia do sol para
transformar o dióxido de carbono e água em glicose
(C6H12O6), oxigênio e calor. A energia química é
armazenada na forma de ligações, por exemplo, as
ligações glicosídicas β(1→ 4) entre os monômeros de
glicose na celulose e nas ligações entre os átomos
da própria glicose.
• Biossíntese de macromoléculas a partir de precursores mais
simples (unidades monoméricas). Ácidos nucléicos, proteínas,
lipídeos e polissacarídeos são sintetizados a partir de
nucleotídios, aminoácidos, ácidos graxos e monossacarídios,
respectivamente.
• Transporte ativo de moléculas e íons através das membranas em
direção contrária a gradientes de concentrações.
• Movimento de células ou de suas partes componentes.
A demanda por energia e a formação de biomoléculas variam
conforme a natureza do organismo, do tipo de célula, do interior da
célula, de seu estado nutricional e de seu estágio de desenvolvimento.
A atividade metabólica celular é regulada de tal modo que as
concentrações dos compostos−chave são mantidas dentro de estreitos
limites. Em células saudáveis, a biossíntese restaura, em velocidade
apropriada, os compostos consumidos. O balanço é atingido pela
síntese de enzimas necessárias para a via ou, de modo mais imediato,
pela regulação da atividade das enzimas já existentes.
4.1 Ciclo do carbono
A fonte primária de energia empregada pelos seres vivos é a fusão
termonuclear dos átomos de hidrogênio para formar hélio que ocorre
na superfície solar de acordo com a equação: 4H → 1He + 2 positrons
+ energia. (Um positron é uma partícula com a mesma massa de um
elétron, mas com carga positiva). A energia radiante da luz solar
(radiação eletromagnética) é transportada para a Terra e convertida
em energia química por organismos fotoautotróficos (plantas verdes e
certos microorganismos) através da fotossíntese. A energia química é
armazenada na forma de compostos ricos em energia como
carboidratos que são sintetizados pela transferência de elétrons da
molécula de água para o CO2. Durante o processo, a maioria dos
organismos fotossintéticos libera O2 na atmosfera.
Os organismos heterotróficos, grupo que inclui os animais,
diretamente ou indiretamente, obtém todo o material estrutural e a

4 Introdução ao metabolismo • 105
energia a partir de compostos orgânicos produzidos pelos
fotoautotróficos. Os produtos da fotossíntese são vitais para os
organismos aeróbicos que não contém o aparato molecular para a
transformação de energia da luz solar. Esses organismos obtêm
energia por meio da oxidação de compostos orgânicos (carboidratos,
lipídeos e proteínas) e produzem, entre outros compostos, o CO2 que
retorna à atmosfera para ser, subseqüentemente, utilizado na
fotossíntese. Esse ciclo de eventos é denominado ciclo do carbono.
4.2 Vias metabólicas
As características dos organismos vivos – sua organização
complexa e sua capacidade de crescimento e reprodução – são
resultantes de processos bioquímicos coordenados. O metabolismo é a
soma de todas as transformações químicas que ocorrem nos
organismos vivos. São milhares de reações bioquímicas catalisadas
por enzimas. As funções básicas do metabolismo celular são: (1)
obtenção e utilização de energia, (2) síntese de moléculas estruturais
e funcionais, (3) crescimento e desenvolvimento celular e (4)
remoção de produtos de excreção.
Conforme os princípios termodinâmicos, o metabolismo é
dividido em duas partes:
1. Anabolismo. São os processos biossintéticos a partir de
moléculas precursoras simples e pequenas. As vias anabólicas são
processos endergônicos e redutivos que necessitam de fornecimento
de energia.
2. Catabolismo. São os processos de degradação das moléculas
orgânicas nutrientes e dos constituintes celulares que são convertidos
em produtos mais simples com a liberação de energia. As vias
catabólicas são processos exergônicos e oxidativos.
O catabolismo ocorre em três estágios:
• Primeiro estágio: as moléculas nutrientes complexas (proteínas,
carboidratos e lipídeos não−esteróides) são quebradas em
unidades menores: aminoácidos, monossacarídeos e ácidos graxos
mais glicerol, respectivamente.
• Segundo estágio: os produtos do primeiro estágio são
transformados em unidades simples como a acetil−CoA (acetil
coenzima A) que exerce papel central no metabolismo.
• Terceiro estágio: a acetil−CoA é oxidada no ciclo do ácido cítrico
a CO2 enquanto as coenzimas NAD+
e FAD são reduzidas por
Nutriente
Produto de excreção
Catabolismo
ADP + Pi
ATP
Produto
Anabolismo
Precursor

quatro pares de elétrons para formar três NADH e um FADH2. As
coenzimas reduzidas transferem seus elétrons para o O2 através
da cadeia mitocondrial transportadora de elétrons, produzindo
H2O e ATP em um processo denominado fosforilação oxidativa.
Carboidratos
Hexoses
Acetil-CoA
Proteínas
Aminoácidos
Oxaloacetato
Lipídios
Ácidos Graxos
CitratoUréia
Excreção
CO + H O2 2
Excreção
NH3
Piruvato-Cetoácidosα
-Cetoglutaratoα
Ciclo do
ácido cítrico
Figura 4.1
Visão geral do catabolismo. Aminoácidos, hexoses e ácidos graxos são formados
pela hidrólise enzimática de seus respectivos polímeros (proteínas, carboidratos e
lipídeos). Os monômeros são desdobrados em intermediários de dois e três
carbonos, como o acetil−CoA e o piruvato que, por sua vez, também são
precursores de outros compostos biológicos. A completa degradação dessas
moléculas produzem NH3, CO2, e H2O.
A energia livre liberada nas reações catabólicas (exergônicas) é
utilizada para realizar processos anabólicos (endergônicos). O
catabolismo e o anabolismo estão freqüentemente acoplados por meio
do ATP (trifosfato de adenosina) e NADPH (nicotinamida adenina
dinucleotídeo fosfato, forma reduzida). O ATP é o doador de energia
livre para os processos endergônicos. O NADPH é o principal doador
de elétrons nas biossínteses redutoras.

Produção de energia
Carboidratos
Lipídios
Proteínas
Catabolismo
Utilização de energia
ATP
NADP+
ADP + Pi
Figura 4.2
Relação entre a produção de energia e a utilização de energia. ATP
(trifosfato de adenosina), NADPH (nicotinamida adenina dinucleotídeo
fosfato, forma reduzida).
A capacidade dos organismos vivos em regular os processos
metabólicos, apesar da variabilidade do meio interno e externo é
chamada homeostase.
4.3 Termodinâmica e metabolismo
O estudo dos efeitos da energia que acompanham as mudanças
físicas e químicas sobre a matéria é conhecido como termodinâmica.
As leis da termodinâmica são usadas para avaliar o fluxo e o
intercambio de matéria e energia. A bioenergética, um ramo da
termodinâmica, é o estudo de como as reações metabólicas produzem
e utilizam energia nos seres vivos e é especialmente útil na
determinação da direção e da extensão de cada reação bioquímica. As
reações são afetadas por três fatores. Dois deles, a entalpia (conteúdo
em calor total) e a entropia (medida da desordem), estão relacionados
com a primeira e segunda lei da termodinâmica, respectivamente. O
terceiro fator, chamado energia livre (energia capaz de realizar
trabalho útil), é derivada da relação matemática entre entalpia e
entropia.
As células dos organismos vivos operam como sistemas
isotérmicos (funcionam à temperatura constante) que trocam energia
e matéria com o ambiente. Em termodinâmica, um sistema é tudo que
está dentro de uma região definida no espaço (exemplo, um
organismo). A matéria no restante do universo é chamada de meio
circundante, circunvizinhança ou ambiente. Os organismos vivos são
sistemas abertos que jamais estão em equilíbrio com o meio ambiente.

Quadro 4.2 Sistema e meio circundante
Os princípios de termodinâmica estão baseados no
conceito de um sistema e seu meio circundante. O sistema
pode ser uma reação química, uma célula ou um organismo
para os quais os meios circundantes são o solvente da
reação, o líquido extracelular (ou matriz) ou o meio ambiente
no qual o organismo sobrevive, respectivamente. Trocas de
energia e/ou matéria entre o sistema e o meio circundante
depende se o sistema é fechado, isolado ou aberto. Em um
sistema fechado, não há troca de matéria ou energia entre o
sistema e o meio circundante.
No sistema isolado, somente energia pode ser trocada
entre o sistema e o meio circundante. No sistema aberto,
ocorre troca de matéria e energia com o meio circundante e
mas nunca está em equilíbrio com o mesmo.
Os organismos vivos trocam matéria (ex.: dióxido de
carbono e oxigênio) e energia (derivada do metabolismo na
forma de calor) com seu meio circundante. As células vivas
e os organismos são exemplos de sistemas abertos.
As leis da termodinâmica descrevem as transformações de
energia. As duas primeiras são especialmente úteis na investigação
das mudanças nos sistemas vivos.
1. Primeira lei da termodinâmica. Em qualquer mudança física
ou química, a quantidade de energia total do sistema e seu meio
circundante permanece constante. Esta lei estipula que a energia
pode ser convertida de uma forma para outra, mas não pode ser criada
nem destruída. As células são capazes de interconverter energia
química, eletromagnética, mecânica e osmótica com grande
eficiência. Por exemplo, no músculo esquelético, a energia química
do ATP é convertida em energia mecânica durante o processo de
contração muscular. É importante reconhecer que a troca de energia
de um sistema depende somente dos estado inicial e final e não do
mecanismo da equação.
2. Segunda lei da termodinâmica. Para formular a segunda lei é
necessário definir o termo entropia (do grego, en, dentro de + trope,
curva). A entropia (S) é a medida ou indicador do grau de desordem
ou casualidade de um sistema, ou a energia de um sistema que não
pode ser utilizada para realizar trabalho útil.
A entropia é definida em termos de número de arranjos possíveis nas
moléculas. A equação para a entropia é
S = kB ln W
Em que kB é a constante de Boltzmann (1,381 × 10−23
mol–1
), ln é
o logaritmo natural e W o número de arranjos na molécula. A S
(entropia) é dada em J·K−1
.
De acordo com a segunda lei, as reações espontâneas tendem a
progredir em direção ao equilíbrio. Ao atingir o equilíbrio, a
desordem (entropia) é a máxima possível sob as condições existentes.
A menos que o processo receba energia adicional de uma fonte
externa ao sistema, não ocorrerá nenhuma outra mudança
espontaneamente.
A. Energia livre
Os organismos vivos necessitam de continuo aporte de energia
livre para três processos principais: (1) realização de trabalho
mecânico na contração muscular e outros movimentos celulares, (2)
transporte ativo de moléculas e íons e (3) síntese de macromoléculas
e outras biomoléculas a partir de precursores simples.

A energia livre de Gibbs (G) de um sistema é a parte da energia
total do sistema que está disponível para realizar trabalho útil, sob
temperatura e pressão constantes. A variação de energia livre de
Gibbs (∆G) nas condições existentes nos sistemas biológicos é
descrita quantitativamente pela equação:
∆G = ∆H – T∆S
onde ∆G é a variação de energia livre de Gibbs que ocorre enquanto o
sistema se desloca de seu estado inicial para o equilíbrio, sob
temperatura e pressão constantes, ∆H é a variação de entalpia ou do
conteúdo em calor do sistema reagente, T a temperatura absoluta e ∆S
a variação de entropia do sistema reagente. As unidades de ∆G e ∆H
são joules·mol−1
ou calorias mol−1
(uma caloria é igual a 4,184 J). As
variações da energia livre são acompanhadas pelas concomitantes
modificações da entalpia e entropia.
Para a maioria dos casos, o valor de ∆G é obtido medindo-se a
variação de energia livre dos estados inicial e final do processo:
∆G = G(produtos) – G(reagentes)
O mecanismo de reação não afeta a ∆G, ou seja, a variação de
energia independe da via pela qual ocorre a transformação. A
velocidade de uma reação depende do mecanismo da reação e está
relacionada com a energia livre de ativação (∆G≠
) e não com a
variação de energia livre (∆G). Ou seja, a ∆G não fornece
informações sobre a velocidade da reação.
A variação de energia livre (∆G) de um processo pode ser
positiva, negativa ou zero e indica a direção ou espontaneidade da
reação:
• Reações de equilíbrio. Os processos que apresentam ∆G igual 0,
(∆G = 0, Keq = 1,0), não há fluxo em nenhuma direção de reação
(as reações nos dois sentidos são iguais).
• Reações exergônicas. São os processos que apresentam ∆G
negativo (∆G < 0, Keq > 1,0) indicando que são energeticamente
favoráveis e procederão espontaneamente até que o equilíbrio
seja alcançado.
• Reações endergônicas. São os processos que apresentam ∆G
positivo (∆G > 0, Keq < 1,0) o que significa que há absorção de
energia e são não-espontâneos (energeticamente não-favoráveis).
O processo ocorrerá espontaneamente na direção inversa à
escrita.
B. Relação da ∆G com a constante de equilíbrio
Para uma reação em equilíbrio químico, o processo atinge um
ponto no qual, o sistema contém tanto produtos como reagentes.
Assim, para a reação:
aA + bB cC + dD
onde a, b, c e d são os números de moléculas de A, B, C e D que
participam da reação. O composto A reage com B até que as
quantidades específicas de C e D sejam formadas. Assim, as
concentrações de A, B, C e D não mais se modificam, pois as

velocidades das reações em um ou outro sentido são exatamente
iguais. As concentrações dos reagentes e produtos no equilíbrio nas
reações reversíveis estão relacionadas pela constante de equilíbrio,
Keq:
[ ] [ ]
[ ] [ ]ba
dc
eq
BA
DC
K =
onde [A], [B], [C] e [D] são as concentrações molares dos
componentes da reação no ponto de equilíbrio. A Keq varia com a
temperatura.
A variação na energia livre real, ∆G, de uma reação química em
temperatura e pressão constantes está relacionada com a constante de
equilíbrio dessa reação e, portanto, dependem das concentrações de
reagentes e produtos:
[ ] [ ]
[ ] [ ]ba
dc
BA
DC
lnRTGG +∆=∆ o
∆G° é a variação de energia livre padrão, quando todos os
reagentes e produtos da reação estão no estado-padrão: concentração
inicial de 1,0 M, temperatura de 25°C e pressão de 1,0 atm. O R é a
constante dos gases (8,315 J⋅mol−1
K−1
), T é a temperatura absoluta
em graus Kelvin (°C + 273) e 1n é o logaritmo natural. ∆G° é uma
constante com valor característico e invariável para cada reação.
Como o valor de ∆G é zero, não existe variação líquida de
energia e a expressão é reduzida
[ ] [ ]
[ ] [ ]ba
dc
BA
DC
lnRTG0 +∆= o
A equação pode ser reescrita
∆G° = –RT ln Keq
O 1n pode ser convertido em log na base 10, pela multiplicação
por 2,3. Então
∆G° = –2,3RT log Keq
Como a maioria das reações bioquímicas ocorre in vivo em pH ao
redor de 7,0, a variação de energia livre padrão é designada ∆G°′ com
a inclusão de apóstrofo e nomeada “linha”. A relação quantitativa
entre ∆G°′ e a constante de equilíbrio a 25°C é apresentada na Tabela
4.1.

Tabela 4.1 – Relação quantitativa entre os valores da constante de
equilíbrio (Keq) e as variações de energia livre padrão (∆G°’
) em pH 7,0 e
25
0
C′
K
’
eq ∆G°’
(kJ·mol
−1
) Direção da reação
1000 −17,1 Ocorre de forma direta
100 −11,4 “
10 −5,7 “
1 0 Equilíbrio
0,1 +5,7 Ocorre de forma inversa
0,01 +11,4 “
0,001 +17,1 “
Quando os reagentes e produtos estão presentes em concentrações
iniciais de 1,0 M cada um e temperatura de 37°C, o cálculo da energia
livre padrão é dado por
,
eq
'
Klog3,2310315,8G ××−=∆ o
,
eq
'
Klog925.5G −=∆ o
A variação de energia livre real, ∆G, observada para uma dada
reação química, é uma função das concentrações e da temperatura
existentes durante a reação. A 37°C tem-se:
[ ]
[ ]reagentes
produtos
log925.5GG '
+∆=∆ o
Os [produtos] e [reagentes] referem-se às concentrações iniciais
reais e não devem ser confundidas com as encontradas no equilíbrio
ou em condições padrão.
Sob condições apropriadas, a reação pode ser espontânea (∆G <0)
mesmo quando a variação de energia livre padrão (∆G°′) é positiva.
Por exemplo, se K′ para a reação S P for 0,1, então ∆G°′ a 37 °C
será +5.925 kJ mol–1
. Entretanto, a reação terá uma ∆G negativa se as
concentrações iniciais de S e P forem 0,1 M e 0,001 M,
respectivamente:
1,0
001,0
log3,2925.5G RT++=∆
( )( ) 1
molJk925.52925.5925.5G −
⋅−=−++=∆
Portanto, o critério de espontaneidade para uma reação é ∆G, e
não a ∆G°′.
4.4 Compostos de “alta energia”
As células obtêm a energia necessária para a sua manutenção e
crescimento pela degradação de vários nutrientes, tais como, glicose
(carboidrato), aminoácidos (proteínas) e ácidos graxos (lipídeos não–
esteróides). Por exemplo, a energia livre padrão liberada durante a
oxidação da glicose até CO2 e H2O é:

C6H12O6 + 602 → 6CO2 + 6H2O ∆G°′ = –2870 kJ⋅mol–1
Em condições aeróbicas, a energia liberada na reação acima é
utilizada na síntese de, aproximadamente, 32 moléculas de ATP
(trifosfato de adenosina) para cada molécula de glicose. O ATP é um
carreador ou transportador de energia livre. Outros compostos
fosforilados e tioésteres também têm grandes energias livre de
hidrólise e, juntamente com o ATP, são denominados de compostos de
“alta energia” (ou “ricos em energia”) (Tabela 4.1). Basicamente, a
energia livre liberada pela degradação de nutrientes é convertida em
compostos de “alta energia” cuja hidrólise liberam energia livre
utilizadas pelas células para exercer suas funções.
Tabela 4.2 – Valores da energia livre padrão (∆G°′) de hidrólise de alguns
compostos de “alta energia”.
Composto ∆G°
’
(kJ·mol
-1
)
Fosfoenolpiruvato -61,9
Carbamoil−fosfato -51,4
1,3−Difosfoglicerato -49,3
Creatina−fosfato -43,1
Acetil−fosfato -42,2
Acetil−CoA -31,4
ATP (→ADP + Pi) -30,5
ATP (→AMP + PPi) -32,2
Glicose−1−fosfato -20,9
Glicose−6−fosfato -13,8
Os valores negativos de ∆G°′ da hidrólise dos compostos
apresentados na Tabela 4.2 são denominados de potencial de
transferência de grupos fosfato e são medidas da tendência dos
grupos fosforilados em transferir seus grupos fosfato para a água. Por
exemplo, o ATP tem um potencial de transferência de 30,5
comparados com 13,8 para a glicose–6–fosfato. Isso significa que a
tendência do ATP em transferir um grupo fosfato é maior que o da
glicose 6-fosfato.
Alguns autores representam as ligações de “alta energia” pelo til
(~). Deve-se salientar, no entanto, que a energia não reside na ligação
específica hidrolisada mas resulta dos produtos de reação que têm
menor conteúdo de energia livre que aquele dos reagentes.
A. Trifosfato de adenosina (ATP)
A energia livre liberada pelas reações de degradação de moléculas
combustíveis em processos exergônicos, é conservada na forma de
intermediários de “alta energia”. O intermediário central de “alta
energia” é a trifosfato de adenosina (ATP) cuja hidrólise exergônica
impulsiona processos endergônicos.
O ATP é um nucleotídio formado por uma unidade de adenina,
uma de ribose e três grupos fosfato seqüencialmente ligados por meio
de uma ligação fosfoéster seguida de duas ligações fosfoanidrido. As
formas ativas do ATP e ADP estão complexadas com o Mg2+
ou outros
íons. Estrutura de ATP:

As ligações fosfoanidrido (fosfato−oxigênio) do ATP tem alta
energia livre de hidrólise. Ocorrem dois tipos de clivagem do ATP: a
ortofosfato (ATP → ADP + Pi):
O
OH
CH2OP
O
O
-
OP
O
-
O
OP
O
-
O
O
-
OH
N
N
N
N
NH2
+ H2O
Trifosfato de adenosina (ATP)
O
OH
CH2OP
O
O
-
OP
O
-
O
O
-
OH
N
N
N
N
NH2
+ OHP
OH
O
O
-
Difosfato de adenosina (ADP) Fosfato inorgânico (Pi)
e a pirofosfato (ATP → AMP + PPi):
H
HO
O
H
H
H
OH
O P O P O P O CH
O
2
N
N
O
O
N
Adenosina
NH2
N
O
O O
AMP
ADP
ATP
Ligações
fosfoanidrido
Ligação
fosfoéster

O
OH
CH2OP
O
O
-
OP
O
-
O
OP
O
-
O
O
-
OH
N
N
N
N
NH2
+ H2O
Trifosfato de adenosina (ATP)
O
OH
CH2OP
O
O
-
O
-
OH
N
N
N
N
NH2
+ OP
O
-
O
OH P OH
O
-
O
Adenosina monofosfato (AMP) Pirofosfato (PPi)
O elevado potencial de transferência de grupos fosfato do ATP é
explicada por várias razões:
• Repulsões eletrostáticas mútuas. Na faixa de pH fisiológico, o
ATP tem 4 cargas negativas (o ADP tem 3) que se repelem
vigorosamente. Por hidrólise, o ATP produz ADP e Pi que é mais
estável pela redução da repulsão eletrostática em relação ao ATP.
Os íons Mg2+
neutralizam parcialmente as cargas negativas do
ATP tornando a sua hidrólise menos exergônica.
• Estabilização por ressonância. Os produtos de hidrólise do ATP –
o ADP ou o AMP – são mais estáveis que o ATP pela capacidade
de rapidamente oscilar entre diferentes estruturas. O ADP tem
maior estabilidade por ressonância da ligação fosfoanidro que o
ATP.
• Energia de solvatação do anidrido fosfórico. A menor energia de
solvatação do anidrido fosfórico quando comparada aos seus
produtos de hidrólise, fornece a força termodinâmica que
impulsiona a sua hidrólise.
A variação de energia livre (∆G°′) de hidrólise do ATP a ADP e
fosfato é –30,5 kJ⋅mol–1
em condições padrão (1,0 M para o ATP,
ADP e Pi). Entretanto, intracelularmente, não são encontradas
concentrações padrão e sim quantidades reais. Nessas condições, a
variação de energia livre de hidrólise do ATP depende em parte da
concentração dos reagentes e produtos na célula como também do pH
e da força iônica. No entanto, para simplificar os cálculos, será
empregado o valor –30,5 kJ⋅mol–1
para a hidrólise do ATP, mesmo
reconhecendo, que este é um valor mínimo.

Quadro 4.3 Creatina−fosfato
A creatina−fosfato tem energia livre padrão de hidrólise
−43,1 kJ·mol
-1
, portanto, mais negativa que o ATP. O
músculo esquelético dos vertebrados emprega a
creatina−fosfato como um veículo para o transporte de
energia da mitocôndria para as miofibrilas. Quando a
concentração mitocondrial de ATP está elevada (célula em
repouso), a enzima creatino−cinase cataliza a fosforilação
reversível da creatina pelo ATP. A creatina−fosfato
resultante difunde da mitocôndria para as miofibrilas onde a
enzima creatino−cinase opera na direção
termodinamicamente favorável para gerar ATP. Durante o
exercício muscular, quando o teor de ATP é baixo, ocorre a
síntese de ATP a partir de creatina−fosfato e de ADP.
Creatina-fosfato + ADP + H
+
ATP + creatina
O músculo esquelético em repouso possui
creatina−fosfato suficiente para suprir as necessidades de
energia por alguns minutos. No entanto, sob condições de
máximo esforço, esse período é reduzido para apenas
alguns segundos.
Energia
Segundos Minutos Horas
ATP
Metabolismo
anaeróbico
Creatina-fosfato
Metabolismo
aeróbico
Fontes de ATP durante o exercício. Nos segundos
iniciais, o exercício é mantido pelos compostos fosforilados
de “alta” energia (ATP e creatina−fosfato).
Subsequentemente, o ATP é regenerado pelas vias
metabólicas.
O ATP pode ser regenerado por dois mecanismos:
• Fosforilação ao nível do substrato. É a transferência direta do
grupo fosfato (Pi) para o ADP (ou outro nucleosídeo 5’–difosfato)
para formar ATP, empregando a energia livre proveniente de
processos exergônicos.
• Fosforilação oxidativa. O processo no qual os elétrons liberados
durante a oxidação de substratos (reações de degradação) são
transferidos para a cadeia mitocondrial transportadora de
elétrons através de coenzimas reduzidas (NADH e FADH2) para o
oxigênio molecular. A energia livre liberada promove a síntese de
ATP a partir de ADP e Pi. (Ver Capítulo 8).
B. Outros nucleotídeos 5’-trifosfatos
Outros nucleotídeos 5’–trifosfatos (NTPs) apresentam energia
livre de hidrólise equivalente ao ATP. Suas concentrações
intracelulares são baixas o que restringe a sua função. Vários
processos biossintéticos, como a síntese de glicogênio, proteínas e
ácidos nucléicos necessitam de outros trifosfatos de nucleosídeos. A
enzima inespecífica nucleosídeo−difosfato−cinase catalisa a síntese
(fosforilação) de NTPs (CTP, GTP, TTP, UTP) a partir do ATP e dos
NDPs (nucleosídeos difosfatos) correspondentes:
ATP + NDP ADP + NTP
A energia livre padrão liberada é -218 kJ⋅mol–1
na transferência
de um par de elétrons do NADH até o oxigênio molecular na cadeia
respiratória mitocondrial. A energia liberada é suficiente para
sintetizar três ATP a partir de 3ADP e 3Pi (3 x 30,5 = 91,5 kJ⋅mol–1
).

4.5 Reações acopladas
Reações termodinamicamente desfavoráveis são impulsionadas
por reações exergônicas à qual estão acopladas. As reações
exergônicas fornecem energia que dirigem as reações endergônicas. A
interconexão entre reações endergônicas e exergônicas é chamada
acoplamento.
Podem ocorrer duas formas de acoplamento:
1. Através de um intermediário comum. A energia gerada por
uma reação biológica ou processo muitas vezes impulsiona uma
segunda reação que não ocorre espontaneamente. O acoplamento
pode ocorrer através de um intermediário comum (BX):
AX + B → A + BX
BX + C → B + CX
A soma das variações de energia livre deve ser negativa para o
desenvolvimento das reações. O fluxo de energia no metabolismo de
muitas reações está acoplado com o ATP que atua como intermediário
carreador de energia:
APi + ADP → A + ATP (espontânea)
ATP + C → ADP + CPi (não espontânea)
Assim, uma reação termodinamicamente desfavorável
(endergônica) torna-se altamente favorável pelo acoplamento à
hidrólise de moléculas de ATP.
2. Através da transferência de grupos químicos. Os carreadores
mais importantes são: (a) o ATP (e outros nucleosídeos 5´–trifosfatos)
na transferência de grupos fosfato; (b) tioésteres como a coenzima A
(CoA–SH) que carreiam o grupo acetil na forma de acetil-CoA –
produto comum do catabolismo de carboidratos, de ácidos graxos e de
aminoácidos – e de outros grupos acila; (c) o NAD(P)H que
transporta íons hidrogênio e elétrons provenientes das reações de
oxidação (catabólicas).
Resumo
1. Todos os organismos vivos necessitam de energia. Através da
bioenergética – estudo das transformações de energia – a direção e a
extensão pela qual as reações bioquímicas são realizadas podem ser
determinadas. A entalpia (uma medida do conteúdo calórico) e a entropia
(uma medida de desordem) estão relacionadas com a primeira e a
segunda lei da termodinâmica, respectivamente. A energia livre (a fração
da energia total disponível para a realização de trabalho) está
relacionada matematicamente com a entalpia e a entropia.
2. As transformações de energia e calor ocorrem em um “universo”
composto de um sistema e de seu meio circundante. Em um sistema
aberto, matéria e energia são intercambiáveis entre o sistema e seu meio
circundante. O sistema é denominado fechado quando a energia mas não
a matéria é trocada com o meio circundante. Os organismos vivos são
sistemas abertos.
3. A energia livre representa o máximo de trabalho útil obtido em um
processo. Processos exergônicos, onde a energia livre diminui (∆G < 0)
são espontâneos. Se a variação de enrgia livre é positiva (∆G < 0), o

processo é chamado endergônico. Um sistema está em equilíbrio quando
a variação de energia livre é zero. A energia livre padrão (∆G°) é
definida para reações a 25°C, pressão de 1 atm e concentrações de 1 M.
O pH padrão na bioenergética é 7. A variação de energia livre padrão
∆G°′ em pH 7 é normalmente empregada nos textos bioquímicos.
4. A hidrólise do ATP fornece a maioria da energia livre necessária para os
processos da vida.
Referências
LEHNINGER, A. L. Princípios de bioquímica. 2 ed. São Paulo: Sarvier, 1995.
p. 269-96.
STRYER, L. Bioquímica. 4 ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 1996. p.
419-36.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioquímica. Porto
Alegre: Artmed, 2000. p. 353-81.

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Carboidratos
Capítulo
5

119
5
Carboidratos
Objetivos
1. Classificar um monossacarídeo por meio do número de carbonos de sua
molécula.
2. Identificar se um monossacarídeo pertence à série D ou L pela sua estrutura
acíclica.
3. Identificar os isômeros α e β na estrutura cíclica dos monossacarídeos.
4. Compreender a estrutura da glicose na sua forma monomérica e polimérica.
5. Identificar os tipos de ligações existentes entre os monossacarídeos nos
oligossacarídeos e polissacarídeos.
6. Identificar as estruturas da maltose, sacarose e lactose, indicando-lhes a
nomenclatura.
Os carboidratos (glicídeos ou sacarídeos) são as principais fontes
alimentares para produção de energia além de exercerem inúmeras
funções estruturais e metabólicas nos organismos vivos. São
substâncias que contêm carbono, hidrogênio e oxigênio de acordo
com a fórmula geral [CH2O]n onde n ≥ 3 e ocorrem como compostos
simples e complexos. São poliidroxialdeídos ou poliidroxicetonas, ou
ainda, substâncias que por hidrólise formam aqueles compostos. São
classificados como: monossacarídeos, dissacarídeos,
oligossacarídeos e polissacarídeos de acordo com o número de
unidades de açúcares simples que contém. Os carboidratos ligados
covalentemente a proteínas e lipídeos são denominados
glicoconjugados e estão distribuídos em todos os seres vivos, mais
notadamente entre os eucariontes. Alguns carboidratos (ribose e
desoxirribose) fazem parte da estrutura dos nucleotídeos e dos ácidos
nucléicos.

120 • Motta • Bioquímica
Os carboidratos também participam de vários processos
biológicos como a transdução de sinal, interações célula−célula e
endocitose que envolvem tanto os glicoconjugados como as
glicoproteínas, os glicolipídeos ou as moléculas de carboidratos
livres.
5.1 Monossacarídeos
Os monossacarídeos (oses ou açúcares simples) são as unidades
básicas dos carboidratos. São constituídos por uma unidade de
poliidroxialdeído ou de poliidroxicetona contendo três a nove átomos
de carbono, sendo o principal combustível para a maioria dos seres
vivos. Os monossacarídeos mais simples são as trioses (três átomos
de carbono): gliceraldeído e diidroxiacetona.
C1
C2
CH2OH3
O
OH
H
H
CH2OH1
C2
CH2OH3
O
Gliceraldeído Diidroxiacetona
Os monossacarídeos são classificados de acordo com a natureza
química do grupo carbonila e pelo número de seus átomos de
carbono. Os que têm grupos aldeídicos são aldoses e os que têm
grupos cetônicos, formam as cetoses. Os monossacarídeos com quatro
átomos de carbono são denominados tetroses; com cinco, pentoses;
com seis hexoses etc. Por exemplo, o gliceraldeído é uma aldotriose e
a diidroxiacetona, uma cetotriose. De modo geral, diferenciam-se os
nomes próprios das cetoses pela inserção de ul aos nomes das aldoses
correspondentes, como, por exemplo, tetrulose, pentulose, hexulose
etc.
A. Configuração dos monossacarídeos
Com exceção da diidroxiacetona, todos os monossacarídeos
possuem átomos de carbono assimétricos (quirais). Para o
gliceraldeído, o C2 é o centro assimétrico que origina dois
estereoisômeros: o D−gliceraldeído e L−gliceraldeído. São
enatiômeros (imagens especulares) um do outro:
CHO
C
CH2OH
H OH
CHO
C
CH2OH
OH H
D-Gliceraldeído L-Gliceraldeído
As outras aldoses são série D e L com respeito ao D−gliceraldeído
e o L-gliceraldeído. Isto significa que todos os açúcares com a mesma
configuração do D−gliceraldeído e, portanto, com a mesma
configuração no centro assimétrico mais afastado do grupo carbonila,
são da série D. As aldoses que representam a configuração do L-
gliceraldeído são da série L. O mesmo ocorre com as cetoses com
mais de quatro átomos de carbonos. Em geral, as moléculas com n
centros assimétricos podem ter 2n
estereoisômeros. As aldoses com

5 Carboidratos • 121
seis carbonos têm quatro centros de assimetria e assim há 24
= 16
estereoisômeros possíveis (oito na série D e oito na série L). As
Figuras 5.1 e 5.2 mostram as relações estereoquímicas das D-aldoses
e D−cetoses conhecidas como projeções de Fisher. Nessas estruturas,
o esqueleto dos carboidratos está orientado verticalmente com o
carbono mais oxidado geralmente no topo.
As aldoses e cetoses da série L são imagens especulares de seus
correspondentes da série D:
CHO
C
C
C
C
CH2OH
OHH
HOH
OH
OH
H
H
CHO
C
C
C
C
CH2OH
HOH
OHH
H
H
OH
OH
D-Glicose L-Glicose
As propriedades ópticas dos monossacarídeos são designadas
pelos sinais (+), dextrorrotatória e (−), levorrotatória.
Estereoisômeros que não são enantiômeros são chamados
diastereoisômeros. Os açúcares D−ribose e D−arabinose são
diastereoisômeros por serem isômeros mas não imagens especulares.
Os diastereoisômeros que diferem na configuração ao redor de um
único C são denominados epímeros. A D–glicose e a D–galactose são
epímeros porque diferem somente na configuração do grupo OH no
C4. A D–manose e a D–galactose não são epímeros pois suas
configurações diferem em mais de um carbono.

C
C
CH2OH
O
OH
H
H
D–Gliceraldeído
C
C
C
O
OH
H
H
CH2OH
H OH
C
C
C
O
H
H
OH
CH2OH
H OH
D–Eritrose D–Treose
C
C
C
O
OH
H
H
C
CH2OH
H
H
OH
OH
C
C
C
O
H
H
OH
C
CH2OH
H
H
OH
OH
C
C
C
O
OH
H
H
C
CH2OH
H
OH
OH
H
C
C
C
O
H
H
OH
C
CH2OH
H
OH
OH
H
D–Ribose D–Arabinose D–Xilose D–Lixose
C
C
C
O
OH
H
H
C
C
H
H
OH
OH
CH2OH
H OH
C
C
C
O
H
H
OH
C
C
H
H
OH
OH
CH2OH
H OH
C
C
C
O
OH
H
H
C
C
H
OH
OH
H
CH2OH
H OH
C
C
C
O
H
H
OH
C
C
H
OH
OH
H
CH2OH
H OH
C
C
C
O
OH
H
H
C
C
OH
H
H
OH
CH2OH
H OH
C
C
C
O
H
H
OH
C
C
OH
H
H
OH
CH2OH
H OH
C
C
C
O
OH
H
H
C
C
OH
OH
H
H
CH2OH
H OH
C
C
C
O
H
H
OH
C
C
OH
OH
H
H
CH2OH
H OH
D-Alose D–Altrose D–Glicose D–Manose D–Gulose D–Idose D–Galactose D–Talose
Figura 5.1
Relações estereoquímicas das D-aldoses com três a seis átomos de carbono. As D-aldoses contêm
grupamentos aldeído no C1 e têm a configuração do D–gliceraldeído no seu centro assimétrico mais afastado do
grupo carbonila. A configuração em torno do C2 distingue os membros de cada par.

CH2OH
C
CH2OH
O
Diidroxiacetona
CH2OH
C
C
O
CH2OH
H OH
D–Eritrulose
CH2OH
C
C
O
C
H OH
CH2OH
H OH
CH2OH
C
C
O
C
OH H
CH2OH
H OH
D–Ribulose D–Xilulose
CH2OH
C
C
O
C
H OH
C
H OH
CH2OH
H OH
CH2OH
C
C
O
C
OH H
C
H OH
CH2OH
H OH
CH2OH
C
C
O
C
H OH
C
OH H
CH2OH
H OH
CH2OH
C
C
O
C
OH H
C
OH H
CH2OH
H OH
D–Psicose D–Frutose D–Sorbose D–Tagatose
Figura 5.2
Relações estereoquímicas das D-cetoses com três a seis átomos de
carbono. As D–cetoses contêm grupamentos cetônicos no C2 e têm a
configuração do D−gliceraldeído no seu centro assimétrico mais afastado do
grupo carbonila. A configuração em torno do C3 distingue os membros de
cada par.
B. Ciclização de monossacarídeos
Em solução aquosa menos de 1% das aldoses e cetoses se
apresentam como estruturas de cadeia aberta (acíclica) mostradas nas
Figuras 5.1 e 5.2. Os monossacarídeos com cinco ou mais átomos de
carbono ciclizam-se, formando anéis pela reação de grupos alcoólicos
com os grupos carbonila dos aldeídos e das cetonas para formar
hemiacetais e hemicetais, respectivamente. A reação de ciclização
intramolecular torna os monossacarídeos espécies mais estáveis
Por ciclização, os monossacarídeos com mais de cinco átomos de
carbono não apresentam o grupo carbonila livre, mas ligado

covalentemente com uma das hidroxilas presentes ao longo da sua
cadeia. O aldeído em C1 na forma em cadeia aberta da glicose reage
com a hidroxila em C5, produzindo um anel com seis átomos (5
carbonos e 1 oxigênio), denominado de piranose devido à sua
analogia ao pirano. As aldopentoses (ribose) e cetohexoses (frutose)
formam anéis pentagonais (4 carbonos e 1 oxigênio) chamados de
furanose em analogia com o furano (Figura 5.3 e 5.4).
As estruturas piranose e furanose são hexágonos e pentágonos
regulares conhecidas como fórmulas em perspectiva de Haworth. O
anel heterocíclico é representado perpendicular ao plano do papel,
enquanto os grupos presentes nas fórmulas lineares à direita estão
projetados “abaixo” do plano do anel e os que estão à esquerda ficam
“acima”. Ocorrem exceções, como a observada com o H do C5 que
está abaixo do plano do anel devido à torção necessária para fechá-lo.

Figura 5.3
Ciclização da D-glicose com formação de duas estruturas cíclicas de
glicopiranose. A projeção de Fisher (no alto à esquerda) é rearranjada em uma
representação tridimensional (no alto à direita). A rotação da ligação entre C4 e C5
aproxima o grupo hidroxila em C5 do grupo aldeído em C1 para formar uma ligação
hemiacetal, produzindo dois estereoisômeros, os anômeros α e β que diferem na
posição da hidroxila do C1 (no anômero α o grupo OH é representado para baixo e
no anômero β o grupo OH é representado para cima). As formas glicopiranosídicas
são mostradas como projeção de Haworth, nas quais as ligações mais escuras do
anel são projetadas à frente do plano do papel e as ligações mais claras do anel
são projetadas para trás.
O carbono carbonila (C1 das aldoses ou o C2 das cetoses) do
monossacarídeo cíclico é designado carbono anomérico e constitui
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
H
OH
14
- -Glicopiranose
(Projeção de )
D
Haworth
C
H
O
C
HOH
H OH
C
C
H
HO
C
H
CH OH2
OH
4
1
3 2
6
H
O
C
HOH
H OH
C
C
H
HO
C
CH OH2
H
4
1
3 2
6
5
H
ou
O
C
H+
5
α
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
OH
H
14
5
βα - -Glicopiranose
(Projeção de Haworth)
D
ou
C
H C OH
H O
H C OH
HO C H
CH OH2
H C OH
1
2
3
4
5
6
D-Glicose
(Projeção de Fisher)
β

um centro de assimetria adicional com duas configurações possíveis.
No caso da glicose, as duas formas resultantes são α−D−glicose e
β−D–glicose (Figura 5.3). No anômero α, o grupo OH ligado ao
carbono anomérico (C1) está abaixo do plano do anel; no anômero β
está projetado acima do plano do anel. As formas α e β são
anômeras.
Quando em solução aquosa, a α–D–glicose e β–D–glicose se
interconvertem livremente para atingir uma mistura de equilíbrio que
contém 63,6% do anômero β, 36,4% do anômero α e 1% da forma
aberta linear. A interconversão é detectada por alterações na rotação
óptica e é chamada mutarrotação. Esse fenômeno também é
observado em outras pentoses e hexoses.
Nas estruturas cíclicas dos monossacarídeos os átomos de
carbono anoméricos (C1 nas aldoses e C2 nas cetoses) são
susceptíveis de oxidação por vários agentes oxidantes contendo íons
cúpricos (Cu2+
), como as soluções de Fehling ou Benedict. Assim, os
monossacarídeos com átomos de carbonos anoméricos livres, são
designados açúcares redutores; os envolvidos por ligações
glicosídicas, são chamados açúcares não–redutores.
Os monossacarídeos como a frutose e a ribose ciclizam-se para
formar estruturas furanóscas.
CH2OH1
C2
C3
C4
C5
CH2OH6
OH H
H
H
OH
OH
O O
C2
C3
C5
C4
H
CH2OH6
OH
OH
H
H
OH
CH2OH1 O
C
C
C
CH
CH2OH
OH
OH
H
H
CH2OH
OH
D−Frutose α−D−Frutose β−D−Frutose
C1
C2
C3
C4
CH2OH5
H OH
H
H
OH
OH
OH
O
C1
C2
C4
C3
H
CH2OH5
OH
H
OH
H
OH
H O
C
C
C
CH
CH2OH
OH
H
OH
H
H
OH
D−Ribose α−D−Ribofuranose β−D−Ribofuranose
Figura 5.4
Ciclização da frutose e da ribose

Tanto as hexoses como as pentoses podem assumir as formas de
piranose ou de furanose nas fórmulas em perpectiva de Haworth. No
entanto, o anel da piranose pode assumir uma corformação de cadeira
ou de barco:
C. Derivados de monossacarídeos
Os açúcares simples podem ser convertidos em compostos
químicos derivados. Muitos deles são componentes metabólicos e
estruturais dos seres vivos.
1. Ácidos urônicos. Os ácidos urônicos são formados quando o
grupo terminal CH2OH dos monossacarídeos são oxidados. Dois
ácidos urônicos são importantes nos mamíferos: o ácido
d−glicurônico e seu epímero, o ácido L−idurônico. Nos hepatócitos, o
ácido glicurônico combina-se com moléculas de esteróides, certos
fármacos e bilirrubina (um produto de degradação da hemoglobina)
para aumentar a solubilidade em água. O processo permite a remoção
de produtos do corpo. Tanto o ácido glicurônico como o ácido L–
idurônico são carboidratos abundantes no tecido conjuntivo.
CC
CC
OCH
OH
OH
OH
OHH
H
H
COOH
H
CC
CC
OCH
OH
OH
OH
OHH
H
H
H
COOH
Ácido α-D-glicurônico Ácido β-L-idurônico
2. Aminoaçúcares. Nos aminoaçúcares um grupo hidroxila (mais
comumente no carbono 2) é substituído por um grupo amino. Esses
compostos são constituintes comuns dos carboidratos complexos
encontrados associados a lipídeos e proteínas celulares. Os mais
freqüentes são: a D−glicosamina e a D−galactosamina. Os
aminoaçúcares muitas vezes estão acetilados. O ácido
N−acetilneuramínico (a forma mais comum de ácido siálico) é um
produto de condensação da N-acetilmanosamina e do ácido pirúvico.
Os ácidos siálicos são cetoses contendo nove átomos de carbonos que
podem ser amidados com ácido acético ou glicolítico (ácido
hidroxiacético). São componentes das glicoproteínas e glicolipídeos.
OH
H
O
H
H
CH OH
H
OH
OH
2
HO
Projeção de haworth
6
4 1
3 2
5
H
H
OH
HO 4
12
H
O
H
CH OH2
6
5
HO
H
3
H
OH
H
OH
HO 4 1
2
H
O
H
CH OH2
6
5
HO
H
3
H
HO
2
Conformação de cadeira Conformação de barco

CC
CC
OCHH
OH
OH
OH
NH2H
H
H
CH2OH
CC
CC
OCHOH
H
OH
OH
NH2H
H
H
CH2OH
α−D−Glicosamina α−D−Galactosamina
COOH
C
C
C
C
C
C
C
CH2OH
O
H H
H OH
HNHCCH3
O
HOH
OH
OH
H
H
Ácido siálico (ácido N−acetilneuramínico)
3. Desoxiaçúcares. Nos desoxiaçúcares um grupo −OH é
substituído por H. Dois importantes desoxiaçúcares encontrados nas
células são: a L−fucose (formado a partir da D−manose por reações de
redução) e a 2−desoxi−D−ribose. A fucose é encontrada nas
glicoproteínas que determinam os antígenos do sistema ABO de
grupos sangüíneos na superfície dos eritrócitos. A desoxirribose é
componente do DNA.
CC
CC
OCH
OH
H
OH
HOH
OH
H
H
CH3
O
C
C
C
CH
CH2OH
OH
H
H
H
H
OH
β-L-Fucose β-D-Desoxirribose
5.2 Dissacarídeos e oligossacarídeos
Quando ligados entre si por uma ligação O−glicosídica, (formada
por um grupo hidroxila de uma molécula de açúcar com o átomo de
carbono anomérico de outra molécula de açúcar) os monossacarídeos
formam uma grande variedade de moléculas. Os dissacarídeos são
glicosídeos compostos por dois monossacarídeos (como a maltose, a
lactose e a sacarose). Os oligossacarídeos são polímeros
relativamente pequenos que consistem de dois a dez (ou mais)
monossacarídeos. Os átomos de carbonos anoméricos quando
participantes de ligações glicosídicas não são oxidados pelos íons
cúpricos.

A. Dissacarídeos
1. Maltose. A maltose é obtida de hidrólise do amido e consiste
de dois resíduos de glicose em uma ligação glicosídica α(1→4) onde
o C1 de uma glicose liga-se ao C4 de outra glicose. O segundo
resíduo de glicose da maltose contém um átomo de carbono
anomérico livre (C1), capaz de existir na forma α ou β−piranosídica,
sendo assim, um açúcar redutor, além de apresentar atividade óptica
(mutarrotação).
O
OH
OH
OH
CH2OH
O
OH
OH
CH2OH
OH
O
1 4
Maltose, ligação α(1→4)
A isomaltose é um dissacarídio onde a ligação é formada entre o
C1 de um resíduo de glicose e o C6 de outra, constituindo uma
ligação glicosídica α(1→6). A isomaltose também contém átomo de
carbono anomérico livre.
O
OH
OH
OH
CH2
O
OH
OH
OH
CH2OH
H
O
1
6
Isomaltose, ligação α(1→6)
2. Sacarose. A sacarose (açúcar comum extraído da cana) é
constituída pela união de uma α-D-glicose com a β−D−frutose, pela
ligação glicosídica α,β(1→2) indicando que a ligação ocorre entre os
carbonos anoméricos de cada açúcar (C1 na glicose e C2 na frutose).
A sacarose é um açúcar não-redutor por não ter terminação redutora
livre. Não apresenta, também, atividade óptica (mutarrotação), pois
não contém carbono anomérico livre.
3. Lactose. A lactose é encontrada apenas no leite, sendo formada
pela união do C1 da β−D−galactose com o C4 da D−glicose, numa
OH
H
O
H
H
CH OH
H
OH
H
2
HO
H
OH
O
HOCH
HO
H
H
O
2
CH OH2
Glicose Frutose
6
4 1 2 5
6
3 2 3 4
1
Sacarose
α( ) ( )β
5

ligação glicosídica β(1→4). Apresenta mutarrotação e capacidade
redutora por possuir carbono anomérico livre na glicose.
O
OH
OH
OH
CH2OH
O
OH
OH
CH2OH
OH
O1 4
Lactose, ligação β(1→4)
B. Oligossacarídeos
Os oligossacarídeos são pequenos polímeros muitas vezes
encontrados ligados a polipeptídeos e a glicolipídeos. Existem duas
classes de oligossacarídeos: os N−ligados e os O−ligados. Os
oligossacarídeos N−ligados estão unidos a polipeptídeos por uma
ligação N−glicosídica com o grupo amino da cadeia lateral do
aminoácido asparagina. Os oligossacarídeos O−ligados estão unidos
pelo grupo hidroxila da cadeia lateral do aminoácido serina ou
treonina nas cadeias polipeptídicas ou pelo grupo hidroxila dos
lipídeos de membrana.
5.3 Polissacarídeos
Os polissacarídeos (ou glicanos) são formados por longas cadeias
de unidades de monossacarídeos unidas entre si por ligações
glicosídicas. São insolúveis em água e não tem sabor nem poder
redutor. São classificados como:
• Homopolissacarídeos (homoglicanos) contêm apenas um único
tipo de monossacarídeo, por exemplo, amido, glicogênio e
celulose.
• Heteropolissacarídeos (heteroglicanos) contêm dois ou mais tipos
diferentes de monossacarídeos, por exemplo, ácido hialurônico,
condroitina sulfato, dermatana sulfato e heparina.
A. Homopolissacarídeos
São polímeros de carboidratos formados apenas por um único tipo
de monossacarídeo.
1. Amido. O amido é um homopolissacarídeo depositado nos
cloroplastos das células vegetais como grânulos insolúveis. É a forma
de armazenamento de glicose nas plantas e é empregado como
combustível pelas células do organismo. É constituído por uma
mistura de dois tipos de polímeros da glicose:
• Amilose. São polímeros de cadeias longas de resíduos de
α−D−glicose unidos por ligações glicosídicas α(1→4).

• Amilopectina. É uma estrutura altamente ramificada formada por
resíduos de α−D−glicose unidos por ligações glicosídicas
α(1→4), mas, também, por várias ligações α(1→6) nos pontos de
ramificação, que ocorrem entre cada 24-30 resíduos. Esses
polímeros têm tantas extremidades não-redutoras quantas
ramificações, porém apenas uma extremidade redutora.
2. Glicogênio. É a mais importante forma de polissacarídio de
reserva da glicose das células animais. A estrutura do glicogênio
assemelha-se à da amilopectina, exceto pelo maior número de
ramificações que ocorrem em intervalos de 8−12 resíduos de glicose
(na amilopectina os intervalos das ramificações são de 24-30 resíduos
de glicose). Essa estrutura altamente ramificada, torna suas unidades
de glicose mais facilmente mobilizáveis em períodos de necessidade
metabólica. O glicogênio está presente principalmente no músculo
esquelético e no fígado, onde ocorre na forma de grânulos
citoplasmáticos.
OH
H
O
H
H
CH OH
H
OH
H
2
O
Glicose
-Amilose
OH
H
O
H
H
CH OH
H
OH
H
2
O
Glicose n
α
OH
H
O
H
H
CH OH
H
OH
H
2
O
O
CH2
OH
H
O
H
H
H
OH
O O
Amilopectina
(1 6) ponto de
ramificação
α
H

Tabela 5.1 – Comparação da amilose, amilopectina e glicogênio
Amilose Amilopectina Glicogênio
Unidades monoméricas D-glicose D-glicose D-glicose
Peso molecular 4.000 → 500.000 50.000 → 16 x 106
50.000 → n x 106
Tipo de polímero Linear Ramificado Ramificado
Pontos de ramificação − 24−30 resíduos de glicose 8−12 resíduos de glicose
Ligações glicosídicas α(1→4) α(1→4), α(1→6) α(1→4), α(1→6)
3. Celulose. É uma seqüência linear de unidades de D−glicose
unidas por ligações glicosídicas β(1→4). É o principal componente
das paredes celulares nos vegetais e um dos compostos orgânicos
mais abundantes na biosfera. A hidrólise parcial da celulose produz o
dissacarídio redutor celobiose:
Os vertebrados não têm celulases e, portanto, não podem
hidrolisar as ligações β(1→4) da celulose presentes na madeira e
fibras vegetais. Entretanto, alguns herbívoros contêm microrganismos
produtores de celulases, razão pela qual podem digerir celulose.
4. Quitina. É o principal componente estrutural do exoesqueleto
de invertebrados como insetos e crustáceos. A quitina é constituída de
resíduos de N−acetilglicosamina em ligações β(1→4) e forma longas
cadeias retas que exerce papel estrutural. Se diferencia quimicamente
da celulose quanto ao substituinte em C2, que é um grupamento
amina acetilado em lugar de uma hidroxila.
OH
H
O
H
H
CH OH
H
OH
H
2
O
Glicose Glicose
Celulose
OH
H
O
H
H
CH OH
H
OH
H
2
O
n

B. Heteropolissacarídeos
São polímeros de carboidratos formados por mais de um tipo de
carboidratos. Os principais exemplos são os glicosaminoglicanos e os
peptídeoglicanos.
1. Glicosaminoglicanos (GAG). São polissacarídeos lineares
constituídos por resíduos repetitivos de dissacarídeos de ácido
urônico (geralmente o ácido D−glicurônico ou o ácido L−idurônico) e
de N−acetilglicosamina ou N−acetilgalactosamina. Em alguns
glicosaminoglicanos uma ou mais das hidroxilas do açúcar aminado
estão esterificadas com sulfatos. Os grupos carboxilato e os grupos
sulfato contribuem para a alta densidade de cargas negativas dos
glicosaminoglicanos. Tanto a carga elétrica como a estrutura
macromolecular, colabora para o seu papel biológico de lubrificar e
manter tecido conjuntivo. Esses compostos formam soluções de alta
viscosidade e elasticidade pela absorção de grandes quantidades de
água. Atuam assim, na estabilização e suporte dos elementos fibrosos
e celulares dos tecidos, também como contribuem na manutenção do
equilíbrio da água e sal do organismo.
CC
CC
OCHH
OH
OH
OH
NHH
H
H
CH2OH
C CH3O
CC
CC
OCHOH
H
OH
OH
NHH
H
H
CH2OH
C CH3O
N−Acetil−D−glicosamina N−Acetil−D−galactosamina
Na síntese dos glicosaminoglicanos, os grupos sulfato são
introduzidos em posições específicas da cadeia polissacarídica por
um doador de sulfato ativo, o 3´−fosfoadenosilfosfosulfato (PAPS) em
reação catalisada por sulfotransferases.
Os glicosaminoglicanos estão presentes nos espaços
extracelulares como uma matriz gelatinosa que embebem o colágeno e
outras proteínas, particularmente nos tecidos conjuntivos (cartilagens,
tendões, pele, parede de vasos sangüíneos). O glicosaminoglicano
H
O
H
H
CH OH
H
NH
2
1
3
O
6
4
5
2
OH
C O
CH3
H
CH OH
H
H
H
4 1
HOH
NH
C O
CH3
3 2
5
H
O
O
6
2
O
H
O
H
H
CH OH
H
NH
2
1
3
6
4
5
2
OH
C O
CH3
H
O
H
β
β
β

heparina não está presente no tecido conjuntivo, mas ocorre como
grânulos nas células das paredes arteriais e tem função anticoagulante
– inibe a coagulação evitando a formação de coágulos.
Tabela 5.2 – Estrutura dos principais dissacarídeos repetidos de alguns glicosaminoglicanos da
matriz extracelular
Principais dissacarídeos repetidos
Glicosaminoglicano
s
Componente 1
Ligação
glicosídic
a
Componente 2
Ligação
glicosídica
Hialuronato D−Glicuronato β(1→3) N−Acetilglicosamina β(1→4)
Condroitina sulfato D−Glicuronato β(1→3) N−Acetilgalactosamina β(1→4)
Dermatana sulfato L−Iduronato α(1→3) N−Acetilgalactosamina β(1→4)
Queratona sulfato D−Galactose β(1→4) N−Acetilglicosamina β(1→3)
Várias enfermidades genéticas denominadas mucopolissacaridoses
são causadas por defeitos no metabolismo dos glicosaminoglicanos.
As desordens são caracterizadas pelo acúmulo nos tecidos e a
excreção na urina de produtos oligossacarídicos derivados do seu
desdobramento incompleto, devido a deficiência de uma ou mais
hidrolases lisossomais (Tabela 5.3).
Tabela 5.3 – Enfermidades genéticas envolvendo o metabolismo dos
glicosaminoglicanos (mucopolissacaridoses).
Síndrome e sinais clínicos Enzima deficiente Produtos
acumulados
Hurler: defeitos ósseos,
retardamento mental,
embaçamento da córnea, morte
prematura
α−L−Iduronidase Dermatana sulfato
Heparana sulfato
Scheie: embaçamento da córnea,
articulações rígidas
α−L−Iduronidase Dermatana sulfato
Heparana sulfato
Hunter: semelhante aos de Hurler
sem efeitos sobre a córnea
Iduronatosulfatase Heparana sulfato
Dermatana sulfato
Sanfilippo A: grave retardamento
mental
Heparan sulfatase Heparana sulfato
Sanfilippo B: defeitos ósseos,
retardamento psicomotor
N−Acetilglicosaminidase Heparana sulfato
Maroteaux-Lamy: graves defeitos
esqueléticos
N−Acetilgalactosamina
sulfatase
Dermatana sulfato
Morquio: defeitos graves dos
ossos, da córnea
Galactosamina−sulfatase Queratana sulfato
Condroitina sulfato
Sly: retardamento mental β−D−Glicuronidase Dermatana sulfato
Heparana sulfato
DiFerrante: retardamento mental Glicosamina−6−sulfato
sulfatase
Queratan sulfato
Heparana sulfato
2. Peptideoglicanos (mureínas). As paredes celulares de muitas
bactérias são formadas por peptídeosglicanos, que são cadeias de

heteroglicanos ligados a peptídeos. São macromoléculas que
consistem de cadeias polissacarídicas e polipeptídicas unidas por
ligações cruzadas covalentes e são componentes da parede celular de
bactérias. A virulência e os antígenos característicos das bactérias são
propriedades do revestimento das suas paredes celulares. As bactérias
são classificadas de acordo com a coloração ou não pelo corante de
Gram:
• Bactérias gram−positivas, ex.: Staphylococcus aureus, possuem
parede celular espessa (~25 nm) formada por várias camadas de
peptídeoglicanos que envolvem a sua membrana plasmática.
• Bactérias gram−negativas, ex.: Escherichia coli, possuem uma
parede celular fina (~2−3 nm) consistindo de uma única camada
de peptídeoglicano inserida entre membranas lipídicas interna e
externa. Essa estrutura é responsável pela maior resistência das
bactérias gram-negativas aos antibióticos.
A estrutura polimérica dos peptídeosglicanos é composta de
cadeias lineares N−acetil−D−glicosamina (GlcNAc) e de ácido
N−acetilmurâmico (MurNAc) alternadas, unidos por ligações
β(1→4). Cadeias dessas estruturas são covalentemente cruzadas pelas
cadeias laterais de seus tetrapeptídeos constituídas alternativamente
por resíduos de D− e L−aminoácidos.

5.4 Glicoconjugados
Os compostos que resultam da ligação covalente de moléculas de
carboidratos às proteínas e aos lipídeos são coletivamente
denominados glicoconjugados. Exercem efeitos profundos nas
funções celulares e também como mediadores para interações
específicas célula-célula de organismos multicelulares. Há duas
classes de conjugados carboidratos-proteínas: as glicoproteínas e os
proteoglicanos.
A. Glicoproteínas
As glicoproteínas são proteínas conjugadas que possuem como
grupos prostéticos um ou vários oligosacarídeos formando uma série
de unidades repetidas e ligadas covalentemente a uma proteína. Essa
definição exclui os proteoglicanos que serão descritos
posteriormente.
OH
H
O
H
H
CH OH
H
H
2
O
H
O
H
H
CH OH
H
NHCOCH
2
O
3
H
H C CH C O3
NH
CH CH3
C O
NH
CH COO
CH
CH
C O
NH
2
2
CH (CH ) NH
C O
NH
CH CH
COO
3
2 4 3
+
L-Ala
Isoglutamato
L-Lys
D-Ala
O
NHCOCH3
Peptideoglicano
N-Acetilglicosamina Ácido- -AcetilmurâmicoN

A ligação covalente entre os açúcares e a cadeia peptídica é a
parte central da estrutura das glicoproteínas. As principais são: (1)
ligações N−glicosídicas entre a N−acetilglicosamina (GlcNAc) e o
aminoácido asparagina (Asn), (2) ligações O−glicosídicas entre a
N−acetilgalactosamina (GalNAc) e o grupo OH da serina (Ser) ou
treonina (Thr).
As glicoproteínas são moléculas constituintes da maioria dos
organismos vivos. Ocorrem nas células na forma solúvel ou ligada às
membranas, e nos líquidos extracelulares. Os vertebrados são
particularmente ricos em glicoproteínas. Exemplos dessas substâncias
incluem a proteína transferrina (transportadora de ferro), a
ceruloplasmina (transportadora de cobre), fatores da coagulação
sangüínea e muitos componentes do complemento (proteínas
envolvidas em reações do sistema imune). Vários hormônios são
glicoproteínas, por exemplo, o hormônio folículo estimulante (FSH),
produzido pela hipófise anterior que estimula o desenvolvimento dos
ovários na mulher e a espermatogênese no homem. Além disso,
muitas enzimas são glicoproteínas. A ribonuclease (RNase), a enzima
que degrada o ácido ribonucléico, é um exemplo bem estudado.
Outras glicoproteínas são proteínas integrais de membrana. Entre
elas, a (Na+
−K+
)−ATPase (proteína que bombeia Na+
para fora e K+
para dentro da célula) e o complexo de histocompatibilidade principal
(MHC) (marcador da superfície celular externa que reconhece os
antígenos protéicos dos hospedeiros) são exemplos especialmente
interessantes..
As moléculas de proteínas são protegidas da desnaturação em
presença de glicoproteínas. Por exemplo, a RNase A bovina é mais
susceptível a desnaturação pelo calor que sua contrapartida
glicosilada, a RNase B. Vários estudos têm demonstrado que as
glicoproteínas ricas em açúcares são relativamente resistentes à
proteólise (quebra de polipeptídeos por reações hidrolíticas
catalisadas por enzimas). Como o carboidrato está sobre a superfície
da molécula, pode formar uma cápsula envolvendo a cadeia
polipeptídica das enzimas proteolíticas.
Os carboidratos nas glicoproteínas parecem afetar a função
biológica. Em algumas glicoproteínas, essa função é mais facilmente
discernida que em outras. Por exemplo, o elevado conteúdo de
resíduos de ácido siálico é responsável pela alta viscosidade das
mucinas salivares (as glicoproteínas lubrificantes da saliva). Outro
exemplo é são as glicoproteínas anticongelamento dos peixes da
Antártica. Aparentemente, os resíduos dissacarídicos formam pontes
de hidrogênio com as moléculas de água. O processo retarda a
formação de cristais de gelo.
As glicoproteínas também são importantes como mediadores para
os eventos célula-molécula, célula-vírus e célula-célula. Um dos
exemplos do envolvimento glicoprotéico nas interações célula-
molécula incluem o receptor de insulina, o qual liga a insulina para
facilitar o transporte de glicose para o interior de numerosas células.
Em parte, isso é realizado pelo recrutamento de transportadores de
glicose para a membrana plasmática. Além disso, o transportador de
glicose que atua no deslocamento da glicose para dentro da célula
também é uma glicoproteína. A interação entre gp120, a glicoproteína
ligadora na célula-alvo do vírus da imunodeficiência humana (HIV, o
agente causador da AIDS) e as células hospedeiras é um exemplo da
interação célula−vírus. O acoplamento do gp120 ao receptor CD4

(glicoproteína transmembrana) encontrado na superfície de vários
células hospedeiras é considerada a primeira etapa no processo
infeccioso.
As glicoproteínas estruturais da célula, componentes do
glicocálix, exercem papel fundamental na adesão celular. O processo
é um evento crítico nas interações do crescimento e diferenciação
célula-célula. As substâncias denominadas moléculas de adesão
celular (CAMs) estão envolvidas no desenvolvimento embrionário do
sistema nervoso do rato. Os resíduos de ácido siálico nos
oligossacarídeos N−ligados de várias CAMs são importantes nesse
fenômeno.
Atualmente, o conteúdo de carboidratos nas glicoproteínas está
sendo empregado na investigação de processos normais como o
desenvolvimento de nervos e de certos processos patológicos. Por
exemplo, as variações nos conteúdos de galactose nos anticorpos IgG
estão diretamente relacionadas com a severidade (o grau de
inflamação) da artrite juvenil. Além disso, a distribuição dos
carboidratos de superfície em células cancerosas pode contribuir no
processo diagnóstico de tumores e metástases.
B. Proteoglicanos
Os proteoglicanos são macromoléculas presentes na matriz
extracelular, constituídas pala união covalente e não-covalente de
proteínas e glicosaminoglicanos (GAG). As cadeias GAG estão
ligadas às proteínas por ligações N− e O−glicosídicas. São
substâncias polianiônicas formadas por cadeias de unidades
diolosídicas repetidas como a queratona−sulfato e o
condroitina−sulfato que estão covalentemente ligadas ao esqueleto
polipeptídico chamado proteína central. Essas proteínas estão ligadas
não-covalentemente a um longo filamento de ácido hialurônico. A
cartilagem, que é formada por uma rede de fibrilas de colágeno
preenchida por proteoglicanos, pode amortecer forças compressivas
porque esses polianíons são altamente hidratados e expulsam a água
durante a compressão. Quando a cessa a pressão, a água retorna aos
proteoglicanos que voltam a ter a estrutura inicial.

Figura 5.5
Estrutura do proteoglicano. Existem várias proteínas centrais ligadas de modo não-covalente
ao filamento central de ácido hialurônico.
Resumo
1.Os carboidratos, as moléculas mais abundantes na natureza, são
classificados como monossacarídeos, dissacarídeos, oligossacarídeos e
polissacarídeos de acordo com o número de unidades de açúcar que
contêm. Os carboidratos também ocorrem como componentes de outras
biomoléculas. Glicoconjugados são moléculas de proteínas e lipídeos
covalentemente ligados a grupos carboidratos. Incluem proteoglicanos,
glicoproteínas e glicolipídeos.
2.Os monossacarídeos com grupos funcionais aldeído são aldoses; aqueles
com grupos cetona são cetoses. Açúcares simples pertencem à família D e
L, de acordo com a configuração do carbono assimétrico mais distante
dos grupos funcionais aldeído e cetona semelhantes ao D e L isômero do
gliceraldeído. A família D contém os açúcares biologicamente mais
importantes.
3.Açúcares que contêm cinco ou seis carbonos existem nas formas cíclicas
que resultam da reação entre grupos hidroxila e aldeído (produto
hemiacetal) ou grupos cetonas (produto hemicetal). Tanto nos anéis com
cinco membros (furanoses) como os anéis com seis membros (piranoses),
o grupo hidroxila ligado ao carbono anomérico está abaixo (α) ou acima
(β) do plano do anel. A interconversão espontânea entre as formas α e β
é chamada mutarrotação.
4.Os açúcares simples sofrem vários tipos de rações químicas. Derivados
dessas moléculas, como os ácidos urônicos, aminoaçúcares,
Oligossacarídeos -ligadosN
Queratona sulfato
Condroitina sulfato
Proteína central
Ácido hialurônico

desoxiaçúcares e açúcares fosforilados, exercem importantes papéis no
metabolismo celular.
5.Hemiacetais e hemicetais reagem com álcoois para formar acetais e cetais,
respectivamente. Quando a forma cíclica hemiacetal ou hemicetal de um
monossacarídeo reage com um álcool, a nova ligação é denominada
ligação glicosídica, e o composto é chamado glicosídeo.
6.As ligações glicosídicas são formadas entre o carbono anomérico de um
monossacarídeo e um dos grupos hidroxila livre de outro
monossacarídeo. Dissacarídeos são carboidratos compostos de dois
monossacarídeos. Os oligossacarídeos, carboidratos que contêm até 10
unidades de monossacarídeos, estão muitas vezes ligados a proteínas e
lipídeos. As moléculas de polissacarídeos são compostas de grande
número de unidades de monossacarídeos, tem estrutura linear como a
celulose e amilose ou estrutura ramificada como o glicogênio e
amilopectina. Os polissacarídeos podem ser formados por um único tipo
de açúcar (homopolissacarídeos) ou tipos múltiplos
(heteropolissacarídeos).
7.Os três homopolissacarídeos mais comuns encontrados na natureza
(amido, glicogênio e celulose) fornecem D-glicose quando são
hidrolizados. A celulose é um material estrutural das plantas; amido e
glicogênio são formas de armazenamento de glicose nos vegetais e
células animais, respectivamente. A quitina, o principal composto
estrutural dos exoesqueletos dos insetos, é composta de resíduos de
N−acetil−glicosamina ligados a carbonos não-ramificados. Os
glicosaminoglicanos, os principais componentes dos proteoglicanos, e
mureína, um constituinte fundamental das paredes das células
bacterianas, são exemplos de heteropolissacarídeos, polímeros de
carboidratos que contêm mais de um tipo de monossacarídeo.
8.A enorme heterogeneidade dos proteoglicanos, que são encontrados
predominantemente na matriz extracelular dos tecidos, exercem diversos,
mas ainda não totalmente entendidos, papéis nos organismos vivos. As
glicoproteínas ocorrem nas células, tanto na forma solúvel como na
forma ligada à membrana, e em líquidos extracelulares. Devido a sua
estrutura diversificada, os glicoconjugados, que incluem os
proteoglicanos, glicoproteínas e glicolipídeos, exercem importantes
funções na transferência de informações nos seres vivos.
Referências
NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princípios de bioquímica. 3 ed. São
Paulo: Sarvier, 2002. p. 409-40.
437-556.
Alegre: Artmed, 2000. p. 195-218.

143
6
Metabolismo dos Carboidratos
Objetivos
1. Descrever a digestão e absorção dos carboidratos
2. Descrever a seqüência as reações da glicólise, incluindo seus substratos,
produtos e co-fatores.
3. Calcular o balanço energético da transformação de 1 mol de glicose em 2 mol
de lactato (glicólise anaeróbica).
4. Explicar como a relação [ATP]/[ADP] pode controlar a velocidade da glicólise.
5. Descrever a formação do glicogênio (glicogênese)
6. Descrever a degradação do glicogênio (glicogenólise).
7. Reconhecer a ação da adrenalina e do glucagon no metabolismo do
glicogênio.
8. Descrever o papel fisiológico do efeito controle do AMPc sobre o metabolismo
dos carboidratos.
9. Descrever a gliconeogênese a partir do lactato, alanina e glicerol.
10. Descrever a via pentose-fosfato.
11. Explicar como a galactose, a frutose e a manose são utilizadas para a
produção de energia.
Os carboidratos, as biomoléculas mais abundantes na natureza,
são as fontes universais de nutrientes para as células humanas. A
glicose é o carboidrato mais importante. Nas células, a glicose é
degradada ou armazenada por diferentes vias. A glicólise transforma
a glicose em duas moléculas de piruvato (ou lactato) posteriormente,
degradado para a produção de energia. O glicogênio, a forma de
armazenamento da glicose nos mamíferos, é sintetizado pela
glicogênese. As reações da glicogenólise desdobram o glicogênio em
glicose. É também possível sintetizar glicose a partir de precursores
não−carboidratos pelo mecanismo chamado gliconeogênese. A via
das pentoses−fosfato converte a glicose em ribose−5−fosfato (o
açúcar utilizado para a síntese dos nucleotídeos e ácidos nucléicos) e
outros tipos de monossacarídeos. O NADPH, um importante agente
redutor celular, é também produzido por essa via.
A síntese e o uso da glicose, o principal combustível da maioria
dos organismos, é o foco de discussão do metabolismo dos

carboidratos. Nos vertebrados, a glicose é transportada através do
corpo pelo sangue. Quando as reservas de energia celular estão
baixas, a glicose é degradada pela via glicolítica. As moléculas de
glicose não necessárias para a imediata produção de energia, são
armazenadas como glicogênio no fígado e músculo. Dependendo das
necessidades metabólicas da célula, a glicose pode também ser
empregada para sintetizar outros monossacarídeos, ácidos graxos e
certos aminoácidos.
6.1 Digestão e absorção dos carboidratos
Os principais carboidratos da dieta são: o amido, a sacarose e a
lactose. O glicogênio, a maltose, a glicose livre e a frutose livre
constituem frações relativamente menores de carboidratos ingeridos.
A absorção dos carboidratos pelas células do intestino delgado é
realizada após hidrólise dos dissacarídeos, oligossacarídeos e
polissacarídeos em seus componentes monossacarídeos. As quebras
ocorrem seqüencialmente em diferentes segmentos do trato
gastrointestinal por reações enzimáticas:
1. α-Amilase salivar. A digestão do amido inicia durante a
mastigação pela ação α-amilase salivar (ptialina) que hidrolisa as
ligações glicosídicas α(1→4), com a liberação de maltose e
oligossacarídeos. Contudo, a α-amilase salivar não contribui
significativamente para a hidrólise dos polissacarídeos, devido ao
breve contato entre a enzima e o substrato. Ao atingir o estômago, a
enzima é inativada pelo baixo pH gástrico.
2. α-Amilase pancreática. O amido e o glicogênio são
hidrolisados no duodeno em presença da α-amilase pancreática que
produz maltose como produto principal e oligossacarídeos chamados
dextrinas – contendo em média oito unidades de glicose com uma ou
mais ligações glicosídicas α(1→6). Certa quantidade de isomaltose
(dissacarídeo) também é formada.
Amido (ou glicogênio)  → −α Amilase
maltose + dextrina
3. Enzimas da superfície intestinal. A hidrólise final da maltose
e dextrina é realizada pela maltase e a dextrinase, presentes na
superfície das células epiteliais do intestino delgado. Outras enzimas
também atuam na superfície das células intestinais: a isomaltase, que
hidrolisa as ligações α(1→6) da isomaltose, a sacarase, que hidrolisa
as ligações α,β(1→2) da sacarose em glicose e frutose, a lactase que
fornece glicose e galactose pela hidrolise das ligações β(1→4) da
lactose.
Maltose + H2O  →Maltase
2 D−glicose
Dextrina + H2O  →Dextrinase
n D−glicose
Isomaltose + H2O  →Isomaltase
2 D−glicose
Sacarose + H2O  →Sacarase
D-frutose + D−glicose
Lactose + H2O  →Lactase
D-galactose + D−glicose
Intolerância à lactose
Alguns grupos populacionais
apresentam carência de lactase
na idade adulta. A deficiência
dessa enzima impede a hidrólise
da lactose que se acumula no
lúmem intestinal. A grande
pressão osmótica exercida pela
lactose não-absorvida promove
um influxo de água para o
intestino. A lactose degradada
pela ação bacteriana, forma vários
ácidos com a liberação de dióxido
de carbono. A combinação desses
efeitos provoca distensão
abdominal, cólicas, náusea e
diarréia. Essa condição é
conhecida como intolerância `a
lactose.

6 Metabolismo dos carboidratos • 145
Quadro 6.1 Diabete melito
O diabete melito (DM) é uma síndrome de
etiologia múltipla, decorrente da falta de insulina
e/ou da incapacidade da insulina de exercer
adequadamente seus efeitos. Caracteriza-se por
hiperglicemia crônica com distúrbios do metabolismo
dos carboidratos, lipídeos e proteínas.
Pacientes portadores de episódios
hiperglicêmicos, quando não tratados, desenvolvem
cetoacidose ou coma hiperosmolar. Com o progresso
da doença aumenta o risco de desenvolver
complicações crônicas, tais como: retinopatia,
angiopatia, doença renal, neuropatia, proteinúria,
infecção, hiperlipemia e doença aterosclerótica.
Diabetes melito tipo 1 (imuno-mediado). Resulta
primariamente da destruição das células β
pancreáticas e tem tendência a cetoacidose. Inclui
casos decorrentes de doença auto-imune e aqueles
nos quais a causa da destruição das células β não é
conhecida. O tipo 1 compreende 5-10% de todos os
casos de diabetes melito. Pacientes com
DM tipo 1 acredita-se ter susceptibilidade
genética no desenvolvimento do diabetes. A
exposição a um desencadeador (viral, ambiental,
toxina) estimula a destruição imunologicamente
mediada das células β. A hiperglicemia está presente
quando 80-90% das células β estão destruídas.
Diabetes melito tipo 2. Resulta, em geral, de
graus variáveis de resistência à insulina e deficiência
relativa de secreção de insulina. A maioria dos
pacientes tem excesso de peso e a cetoacidose
ocorre apenas em situações especiais, como durante
infecções graves. Ao redor de 80-90% de todos os
casos de diabetes correspondem a esse tipo. Ocorre,
em geral, em indivíduos obesos com mais de 40
anos, de forma lenta e com história familiar de
diabetes. Os pacientes apresentam sintomas
moderados e não são dependentes de insulina para
prevenir cetonúria. Nesses casos os níveis de
insulina podem ser: normais, diminuídos ou
aumentados.
A captação de monossacarídeos do lúmen para a célula intestinal
é efetuada por dois mecanismos:
• Transporte passivo (difusão facilitada). O movimento da glicose
está “a favor” do gradiente de concentração (de um
compartimento de maior concentração de glicose para um
compartimento de menor concentração). A difusão facilitada é
mediada por um sistema de transporte de monossacarídeos do
tipo Na+
−independente. O mecanismo tem alta especificidade
para D−frutose.
• Transporte ativo. A glicose é captada do lúmen para a célula
epitelial do intestino por um co−transportador
Na+
−monossacarídeo (SGLT). É um processo ativo indireto cujo
mecanismo é envolve a (Na+
−K+
)−ATPase (bomba de (Na+
−K+
),
que remove o Na+
da célula, em troca de K+
, com a hidrólise
concomitante de ATP (ver Capítulo 9: seção 9.4.D). O mecanismo
tem alta especificidade por D−glicose e D−galactose.
Figura 6.1
Captação da glicose por transporte ativo
Lúmem Capilar
Glicose
Glicose Glicose
Na+
Na+
ATP
Na+
K+
ADP
K+

Após a absorção, a glicose no sangue aumenta e as células β das
ilhotas pancreáticas secretam insulina que estimula a captação de
glicose principalmente pelos tecidos adiposo e muscular. O fígado, o
cérebro e os eritrócitos, não necessitam de insulina para captação de
glicose por suas células (tecidos insulino−independentes). Outros
hormônios e enzimas, além de vários mecanismos de controle, são
importantes na regulação da glicemia.
6.2 Glicólise
A glicólise (do grego, glykos, doce e lysis, romper), também
chamada via de Embden−Meyerhof−Parnas, é a via central do
catabolismo da glicose em uma seqüência de dez reações enzimáticas
que ocorrem no citosol de todas as células humanas. Cada molécula
de glicose é convertida em duas moléculas de piruvato, cada uma
com três átomos de carbonos em processo no qual vários átomos de
carbono são oxidados. Parte da energia livre liberada da glicose é
conservada na forma de ATP e de NADH. Compreende dois estágios:
• Primeiro estágio (fase preparatória). Compreendem cinco reações
nas quais a glicose é fosforilada por dois ATP e convertida em
duas moléculas de gliceraldeído−3−fosfato.
• Segundo estágio (fase de pagamento). As duas moléculas de
gliceraldeído−3−fosfato são oxidadas pelo NAD+
e fosforiladas
em reação que emprega o fosfato inorgânico. O resultado líquido
do processo total de glicólise é a formação de 2 ATP, 2 NADH e 2
piruvato, às custas de uma molécula de glicose. A equação geral
da glicólise é:
Glicose + 2 ADP + 2 Pi + 2 NAD+
→
2 piruvato + 2 NADH + 2 H+
+ 2 ATP + 2 H2O
Em condições de baixo suprimento de oxigênio (hipóxia) ou em
células sem mitocôndrias, o produto final da glicólise é o lactato e
não o piruvato, em processo denominado glicólise anaeróbica:
Glicose + 2 ADP + 2 Pi → 2 lactato + 2 ATP + 2 H2O
Quando o suprimento de oxigênio é adequado, o piruvato é
transformado em acetil−CoA nas mitocôndrias. O grupo acetil da
acetil−CoA é totalmente oxidado no ciclo do ácido cítrico com a
formação de duas moléculas de CO2 (ver Capítulo 7).
A. Reações da glicólise
Todas as reações da glicólise com formação de piruvato (ou
lactato) são catalisadas por enzimas presentes no citoplasma (Figura
6.2). Para cada molécula de glicose são consumidas duas moléculas
de ATP no primeiro estágio e no segundo estágio são produzidas
quatro ATP e 2 NADH. Os elétrons oriundos da reoxidação do NADH
em NAD+
em condições aeróbicas, são transferidos para o oxigênio
molecular na cadeia mitocondrial transportadora de elétrons que

libera a energia livre para a síntese de ATP pela fosforilação
oxidativa (ver Capítulo 8).
Figura 6.2
Reações da glicólise.
1. Síntese de glicose−6−fosfato (G6P). Na primeira reação da
glicólise, a glicose é ativada por fosforilação no grupo hidroxila em
Glicose
Glicose-6-fosfato
Hexocinase
Glicocinase
ATP
ADP
P
Glicose-6-fosfatase
Glicose
fosfato-isomerase
ATP
ADP
Frutose-6-fosfato
Fosfofrutocinase
Frutose-1,6-difosfatase
Frutose-1,6-difosfato
Aldolase
Gliceraldeído-3-fosfato Diidroxiacetona-fosfato
Triose-fosfato-isomerase
NADH
NAD+
Gliceraldeído
3-fosfato-desidrogenase
1,3-Bifosfoglicerato (2)
ADP
ATP
Fosfoglicerato-cinase
2
2
3-Fosfoglicerato (2)
Fosfoglicerato-mutase
2-Fosfoglicerato (2)
Enolase
Fosfoenolpiruvato (2)
ADP
ATP
Piruvato-cinase
2
2
2
Piruvato (2)
Lactato-desidrogenase
NADH
NAD+
Lactato (2)
i
Pi
Pi
2
2
2

C6 com a formação de glicose−6−fosfato pela transferência de um
grupo fosfato do ATP em reação irreversível catalisada pela
hexocinase em presença de íons magnésio que interage com as cargas
negativas dos grupos fosfato para formar o complexo MgATP2-
. A
hexocinase é inibida alostericamente pelo produto da reação, a
glicose−6−fosfato.
A glicose é eletricamente neutra, mas quando fosforilada, torna-
se um composto carregado negativamente e hidrofílico, que impede a
sua transferência através da membrana celular, confinado-a na célula.
A hexocinase também catalisa a fosforilação de outras hexoses
(Quadro 6.2)
A glicose livre é obtida a partir da hidrólise da glicose-6-fosfato
pela enzima glicose−6−fosfatase e pode ser transportada pelo sangue
para os órgãos periféricos:
Glicose−6−fosfato + H2O  → −− fosfatase6ecosGli
glicose + Pi
A glicose livre formada nessa hidrólise é de grande importância
para a manutenção dos níveis de glicemia pelo fígado, na última
etapa da gliconeogênese e da glicogenólise. A reação não regenera o
ATP.
OH
H
O
H
H
CH
H
OH
2
HO
OH
H
O P O P O P O Adenosina
O
O
O
O
O
O
Mg
2+
MgATP2
OH
6
Hexocinase
Glicose
OH
H
O
H
H
CH
H
OH
2
HO
OH
H
O P O
O
O
6
Glicose-6-fosfato
O P O P O Adenosina
O
O
O
O
Mg
2+
MgADP

Quadro 6.2 Hexocinase e glicocinase
A enzima hexocinase cataliza a fosforilação de
diferentes monossacarídios de seis carbonos, como a D-
glicose, D manose, D-frutose e D-glicosamina.
Diferentes isoenzimas (proteínas que catalisam a
mesma reação) da hexocinase estão presentes em vários
tecidos de mamíferos. Cada isoenzima exibe propriedades
cinéticas diferentes. As células hepáticas (hepatócitos) de
mamíferos também contém glicocinase (também chamada
hexocinase tipo IV) que difere das isoenzimas do músculo
esquelético. A ação catalítica da glicocinase está restrita a
D-glicose e a D-manose e tem um Km de ~10mM para a
glicose. Essa enzima requer, portanto, níveis bem mais
elevados de glicose para a sua atividade máxima (o Km das
outras isoenzimas é ~0,1 mM). A glicocinase não é inibida
pela glicose-6-fosfato, mas pelo seu isômero, a frutose-6-
fosfato e é mediada por uma proteína reguladora.
Em alguns microorganismos e invertebrados, existe
uma glicocinase diferente formado por um grupo de
isoenzimas específicas para glicose. Nesses organismos, a
glicocinase catalisa a reação inicial da glicólise.
A glicose é eletricamente neutra, mas quando
fosforilada, apresenta uma carga negativa que
impede a sua transferência através da membrana
celular, confinado-a na célula. A hexocinase também
catalisa a fosforilação de outras hexoses (ver Quadro
lateral
As células do fígado contêm glicocinase (ou
hexocinase IV) que também catalisa a fosforilação da
glicose a glicose−6−fosfato. Essa enzima não é
inibida pelos teores elevados da glicose−6−fosfato e
atua quando a concentração de glicose sangüínea
estiver acima dos teores fisiológicos normais, como,
por exemplo, após uma refeição rica em
carboidratos. Desse modo, o fígado atua como um
“tampão” de glicose sangüínea, pois capta o excesso
de glicose circulante independente da concentração
de glicose−6−fosfato, tornando possível o
armazenamento de glicose sob a forma de glicogênio
ou ácidos graxos. A glicocinase é ativada pela
insulina e, assim, sua atividade é deficiente nos
estados de desnutrição e no diabete melito.
Figura 6.3
Diferenças na velocidade de fosforilação das enzimas hexocinase e glicocinase em relação à concentração de
glicose.
Atividadeenzimáticarelativa
Concentração da glicose (mmol/L)
1.0
Hexocinase
Glicocinase

Quadro 6.3 Destino da glicose−6−fosfato
A glicose-6-fosfato é um importante
intermediário central para várias rotas metabólicas.
A via alternativa predominante depende do estado
metabólico do organismo e varia em diferentes
condições.
Figura 6.4
Destinos da glicose-6-fosfato. A glicose-6-fosfato pode ser usada como: (1) combustível pelo metabolismo
anaeróbico ou aeróbico, por exemplo, no músculo; (2) ser convertida em glicose livre no fígado e, subsequentemente,
liberada para o sangue; (3) ser processada pela via das pentoses-fosfato para gerar NADH ou ribose em vários
tecidos; (4) formar compostos de grande importância metabólica.
2. Conversão da glicose-6-fosfato em frutose−6−fosfato (F6P).
A isomerização reversível da glicose−6−fosfato em frutose−6−fosfato
é catalisada pela fosfoglicose−isomerase. A aldose
(glicose−6−fosfato) é convertida em cetose (frutose−6−fosfato). O
oxigênio carbonílico se deslocou do C1 para o C2:
O
OH
OH
OH
CH2OPO3
OH
O
CH2OPO3
OH
OH
OH
CH2OH
2- 2-
3. Fosforilação da frutose−6−fosfato em frutose−1,6−bifosfato
(FBP). A fosfofrutocinase−1 (PFK−1) catalisa irreversivelmente a
transferência do grupo fosfato do ATP para o C1 da frutose−6−fosfato
com a formação de frutose−1,6−bifosfato:
Glicose-6-fosfato
Glicose-1-fosfato
Glicogênio Ácidos urônicos
Glicoproteínas
Glicosamina-6-fosfato
Frutose-6-fosfato Glicólise
Gliconolactona-6-fosfato
Glicose
Fosfatase
hepática
Via das pentoses-fosfato

O
CH2OPO3
OH
OH
OH
CH2OH
+
O
CH2OPO3
OH
OH
OH
CH2OPO3
+ ADP
2-
2+
2-
2-
ATP (Mg )
A fosfofrutocinase−1 é a principal enzima reguladora da glicólise
nos músculos. A atividade da enzima é modulada em presença de
ativadores ou inibidores alostéricos (Quadro 6.1).
Quadro 6.1 – Principais efetores alostéricos da fosfofrutocinase-1.
Efetores positivos (ativadores) Efetores negativos (inibidores)
Frutose−1,6−bifosfato ATP
Frutose−2,6−bifosfato NADH
ADP Citrato
AMP Ácidos graxos de cadeia longa
Fosfato H+
K+
Ca+
A frutose−2,6−bifosfato é um potente ativador alostérico da
atividade da fosfofrutocinase−1 (PFK−1) hepática e é sintetizada a
partir da frutose−6−fosfato pela ação da fosfofrutocinase−2 (PFK−2)
em resposta a sinais hormonais correlacionados com os níveis de
glicose no sangue. Quando os níveis de glicose sangüínea estão
elevados, o estímulo hormonal (insulina) eleva os teores de
frutose−2,6−bifosfato que aumentam a atividade da PFK−1 ativando a
glicólise e reduzindo a atividade da enzima que catalisa a reação
reversa, a frutose−1,6−bifosfatase (inibe a gliconeogênese, ver
adiante).
A PFK−2 é uma enzima bifuncional que atua como fosfatase
quando fosforilada em resposta ao hormônio glucagon e como cinase
quando defosforilada em resposta ao hormônio insulina.
H
OH
O
H
HO
OH
H
2O POCH3
2
2CH OH
H
OH
O
H
HO
O PO
H
2O POCH3
2
2CH OHATP ADP
Fosfofrutocinase-2
3
2
Frutose-6-fosfato Frutose-2,6-bifosfato

Como a fosforilação catalisada pela fosfofrutocinase-1 é
irreversível, a reação inversa, a hidrólise da frutose−1,6−bifosfato em
frutose−6−fosfato e fosfato inorgânico, é catalisada por uma enzima
distinta, a frutose−1,6−bifosfatase:
Frutose−1,6−bifosfato + H2O  → −− ebifosfatas6Frutose
Frutose−6−fosfato + Pi
A frutose−1,6−bifosfatase é importante na via gliconeogênese
(ver adiante) – e é inibida alostericamente pelo AMP e pela
frutose−2,6−bifosfato.
4. Clivagem da Frutose−1,6−bifosfato. A frutose-1,6-bifosfato é
clivada entre os carbonos 3 e 4 para produzir duas trioses: o
gliceraldeído−3−fosfato (GAP) e diidroxiacetona−fosfato (DHAP)
pela ação da enzima aldolase. O substrato é mostrado em cadeia
aberta para a melhor visualização da reação:
CH2OPO3
1
C2
C3
C4
C5
CH2OPO3
6
OH H
H
H
OH
OH
O
CH2OPO3
1
C2
CH2OH3
O +
C4
C5
CH2OPO3
6
O
OH
H
H
2-
2-
2-
2-
A reação é não−favorável (∆G°′ = +23,8 kJ·mol-1
) mas procede
porque os produtos são rapidamente removidos.
5. Interconversão do gliceraldeído−3−fosfato e da
diidroxiacetona fosfato (DHAP). A enzima
triose−fosfato−isomerase catalisa a interconversão por isomerização
do gliceraldeído−3−fosfato e da diidroxiacetona−fosfato. A reação
dirige a diidroxiacetona−fosfato para o gliceraldeído−3−fosfato, pois
esse é o único que pode ser diretamente degradado nas etapas
subseqüentes da glicólise:
Frutose
2,6-bifosfato
Frutose
6-fosfato
Frutose
2,6-bifosfatase
Pi H O
ATP ADP

A diidroxiacetona−fosfato por sua transformação em
glicerol−3−fosfato, torna-se essencial na biossíntese dos
triacilgliceróis e fosfolipídios (ver Capítulo 9: Metabolismo dos
lipídios).
6. Oxidação do gliceraldeído−3−fosfato a 1,3−bifosfoglicerato
(1,3−BPG). Essa etapa é a única reação de oxidação da glicólise. O
gliceraldeído−3−fosfato é oxidado a 1,3−bifosfoglicerato com a
concomitante redução de um mol de NAD+
a NADH, pela enzima
gliceraldeído−3−fosfato−desidrogenase:
A reação oxida o aldeído e incorpora um fosfato inorgânico com a
produção do primeiro composto de “alta energia” da via, o
1,3−bifosfoglicerato (1,3−BPG).
O NADH formado necessita ser reoxidado para a continuação da
via glicolítica, que ocorre por duas vias: (a) a oxidação pela cadeia
mitocondrial transportadora de elétrons ou (b) pela transformação do
piruvato em lactato.
A partir do 1,3−bifosfoglicerato é sintetizado o
2,3−bifosfoglicerato, presente nos eritrócitos e um importante
regulador da ligação do oxigênio à hemoglobina. Os efeitos
regulatórios do 2,3−bifosfoglicerato são semelhantes aos exercidos
pela frutose−2,6−bifosfato sobre a PFK−1.
7. Formação de ATP a partir do 1,3−bifosfoglicerato. A
fosfoglicerato−cinase catalisa a transferência do fosfato do
1,3−bifosfoglicerato para o ADP gerando o primeiro ATP da via junto
com o 3−fosfoglicerato:
C
O H
H C OH
CH OPO2
2
3
H
C O
CH OPO2
H C OH
2
3
Diidroxiacetona-
fosfato
Gliceraldeído-
3-fosfato
C
CH OPO
O OPO
H C OH + NADH + H
Gliceraldeído-3-fosfato
desidrogenase 2
3
Gliceraldeído
3-fosfato
1
2
3
2
3
2
C
CH OPO
O
H C OH + NAD + P
2
3
1
2
3 2
1,3-Bifosfoglicerato
H
+
i
+

A reação é reversível em condições fisiológicas pois as energias
livres de hidrólise do ATP e do 1,3−bifosfoglicerato apresentam
magnitudes semelhantes. A produção de ATP pela transferência direta
de fosfato do substrato (1,3−bifosfoglicerato) para o ADP em
ausência de oxigênio, é denominada fosforilação ao nível do
substrato. Nessa etapa são gerados dois ATP por molécula de glicose.
8. Conversão do 3−fosfoglicerato a 2−fosfoglicerato (2PG). O
3−fosfoglicerato é convertido reversivelmente a 2−fosfoglicerato pela
ação da fosfoglicerato−mutase que requer a presença de
2,3−bifosfoglicerato (ver acima) para a sua ação:
9. Desidratação do 2−fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato (PEP).
A enolase catalisa a remoção reversível de uma molécula de água do
2−fosfoglicerato para formar o segundo intermediário de “alta
energia”, o fosfoenolpiruvato:
A reação é reversível apesar do elevado conteúdo energético do
fosfoenolpiruvato.
10. Formação do piruvato. A transferência do grupo fosfato do
fosfoenolpiruvato para o ADP formando piruvato e ATP é catalisada
pela enzima piruvato−cinase (PK) e presença de Mg2+
ou Mn2+
e K+
:
C
H C OPO
O O
H C OH
2
3
3 - Fosfoglicerato
H
C
H C OPO
O O
H C OH
2
3
H
1
2
3
1
2
3
2 - Fosfoglicerato
C
CH OPO
O OPO
H C OH + ADP
2
3
1,3-Difosfoglicerato
1
2
3
2
3
C
CH OPO
O O
H C OH + ATP
2
3
1
2
32 2
3-Fosfoglicerato
Enolase
3 - Fosfoglicerato
C
H C OPO
O O
H C OH
2
3
H
1
2
3
Fosfoenolpiruvato
C
C OPO + H O
O O
H C
2
3
H
2

Sob condições fisiológicas, a reação é altamente exergônica,
fornecendo energia livre suficiente para a formação de ATP. Essa é a
segunda reação da glicólise que fosforila o ATP ao nível do substrato.
Nesse estágio são gerados dois ATP por molécula de glicose.
A piruvato−cinase é uma enzima alostérica ativada por níveis
elevados de frutose−1,6−bifosfato e inibida pelo ATP e alanina. A
piruvato−cinase também é modulada por uma proteína-cinase
dependente de AMPc. Em teores diminuídos de glicemia, o glucagon
eleva os níveis intracelulares de AMPc promovendo a fosforilação e
inibição da piruvato−cinase. Desse modo, a glicólise é interrompida e
o piruvato é desviado para a síntese da glicose pela gliconeogênese
que, por sua vez, é também estimulada pelo glucagon. A
piruvato−cinase é reativada por defosforilação realizada por uma
fosfoproteína−fosfatase.
B. Redução do piruvato em lactato
O piruvato pode seguir várias vias metabólicas. Nos tecidos que
funcionam sob condições anaeróbicas, como o músculo esquelético
durante atividades físicas vigorosas, o piruvato é reduzido a lactato
para gerar novamente NAD+
(fermentação homoláctica) o que permite
a continuação da glicólise com baixa produção de ATP.
A redução do piruvato a lactato é catalisada pela
lactato−desidrogenase com o emprego de NADH como agente
redutor:
O NADH utilizado na redução é gerado durante a glicólise na
oxidação do gliceraldeído−3−fosfato a gliceraldeído−1,3−bifosfato
(Figura 6.4).
C
CH
O O
C O + + H
Lactato-desidrogenase
Piruvato
C
CH
O O
HO C H +
3 3
Lactato
N
NH2
H
+
R
C
O
N
NH2
O
C
H H
R
+
NADH
NAD+
Piruvato-cinase
Fosfoenolpiruvato
C
C O + ATP
O O
CH3
C
C OPO + ADP
O O
CH
2
3
2
Piruvato

Figura 6.5
Reciclagem do NADH na glicólise anaeróbica. O NADH produzido na
conversão do gliceraldeído−3−fosfato a gliceraldeído−1,3−bifosfato é
oxidado quando o piruvato é convertido a lactato.
Essa reação é a principal opção empregada pelas células sob
condições hipóxicas como em músculos esqueléticos submetidos à
atividade intensa, por exemplo, para a reoxidação do NADH a NAD+
no citosol e, assim, prosseguir produzindo ATP pela glicólise. O
lactato formado no músculo ativo difunde para o sangue e é
transportado até o fígado, onde é convertido em glicose pela
gliconeogênese (ver adiante).
Alguns tecidos como os eritrócitos, mesmo sob condições
aeróbicas, produzem lactato como produto final da glicólise.
C. Rendimento energético da glicólise
Durante a glicólise, a energia livre liberada na transformação de
uma molécula de glicose a dois piruvato é conservada na forma de
dois ATP. A variação de energia livre é ∆G0´
= −135,6 kJ·mol-1
em
todo o processo. Parte da energia liberada é dissipada como calor. A
equação é:
Glicose + 2 NAD+
+ 2 ADP + 2 Pi →
2 piruvato + 2 NADH + 2 H+
+2 ATP + 2 H2O
Reações ATP/mol de glicose
Fosforilação da glicose −1
Fosforilação da frutose−6−fosfato −1
2(1,3−Bifosfoglicerato → 3−fosfoglicerato) +2
2(Fosfoenolpiruvato → piruvato) +2
Total líquido +2
A Tabela 6.1 mostra as variações de energia livre de cada reação
da glicólise em condições fisiológicas (∆G) e no estado-padrão
(∆G°´
). Parte das reações são endergônicas (∆G°′ <0). Entretanto,
quando a variação de energia livre real (∆G) de cada reação é
calculada a partir de suas concentrações fisiológicas intracelulares,
somente três reações (triose-fosfato-isomerase, fosfoglicerato−cinase
LactatoPiruvato
Pi
Gliceraldeído
1,3 - bifosfato
Gliceraldeído
3 - fosfato
NADNADH +H ++

e fosfoglicerato−mutase) necessitam energia, mesmo assim, em
pequenas quantidades.
Tabela 6.1 – Variação de energia livre padrão e da energia livre real de
cada reação de glicólise.
Variação de energia livre (kJ·mol
−1
)
Enzima
∆G°
´
(estado-padrão)
∆G (condições
fisiológicas)
Hexocinase −16,7 −33,4
Glicose−6−fosfato−isomerase +1,7 −2,5
Fosfofrutocinase −14,2 −22,2
Aldolase +23,8 -1,3
Triose−fosfato−isomerase +7,5 +2,5
Gliceraldeído−3−fosfato-
desidrogenase
+6,3 −1,7
Fosfoglicerato−cinase −18,8 +1,3
Fosfoglicerato−mutase +4,6 +0,8
Enolase +1,7 −3,3
Piruvato−cinase −31,4 −16,7
No transcorrer da via glicolítica em condições aeróbicas, dois
NAD+
são reduzidos a dois NADH. Os NADH produzidos são
reoxidados em NAD+
pela transferência de seus elétrons para a
cadeia mitocondrial transportadora de elétrons. A energia livre
liberada no processo é utilizada para a síntese de ATP a partir de ADP
pela fosforilação oxidativa (ver Capítulo 8).
Em condições anaeróbicas, as células do músculo esquelético
degradam a glicose a lactato e tem ∆G°′= −196 kJ·mol−1
:
Glicose + 2 ADP + 2 Pi → 2 lactato + 2 ATP + 2 H+
Em condições aeróbicas, o piruvato não é transformado em
lactato e sim transferido para a mitocôndria onde é convertido em
acetil−CoA com posterior oxidação a CO2 e H2O no ciclo do ácido
cítrico.
D. Regulação da glicólise
A regulação da glicólise é complexa pela sua importância na
geração de energia na forma de ATP e pela produção de vários
intermediários glicolíticos destinados a biossíntese. Na maioria das
células, a velocidade da glicólise é determinada, principalmente, pela
regulação alostérica das enzimas hexocinase, fosfofrutocinase−1
(PFK−1) e piruvato−cinase. As reações catalisadas por essas enzimas
são irreversíveis e podem ser “ligadas” ou “desligadas” por efetores
alostéricos. Por exemplo, a hexocinase é inibida pelo excesso de
glicose-6-fosfato. Vários compostos de “alta energia” atuam como
efetores alostéricos. Por exemplo, elevadas concentrações de AMP
(um indicador de baixa produção de energia) ativa a PFK−1 e a

piruvato−cinase. Por outro lado, teores elevados de ATP (um
indicador que as necessidades energéticas das células foram
atingidas) inibem as duas enzimas. O citrato e a acetil−CoA, que
acumulam quando existe ATP em quantidade suficiente, inibem a
PFK−1 e a piruvato−cinase, respectivamente. A
frutose−2,6−bifosfato, produzida por indução de hormônio da PFK−2,
é um indicador de altos níveis de glicose disponível e alostericamente
ativa a PFK−1. O acúmulo de frutose−1,6−bifosfato ativa a
piruvato−cinase, promove um mecanismo de controle (a
frutose−1,6−bifosfato é um ativador alostérico). Na Figura 6.6 é
mostrada a ação de cada inibidor ou ativador sobre as enzimas
reguladores.

Figura 6.6
Características regulatórias da glicólise.
Após uma refeição rica em carboidratos, a insulina promove o
aumento na síntese das enzimas glicocinase, fosfofrutocinase−1 e
Glicose
G6P
F6P
G3P DHAP
BPG
3PG
2PG
ADP
ATP
Piruvato
ADP
ATP
PEP
AMP
AMPc
F2,6P
Glicogênio
b
a
G1P
Lactato
Acetil-CoA
Ácidos
graxos
FBP
ATP
Cliclo do
ácido
cítrico
Citrato

piravato−cinase. Por outro lado, a síntese dessas mesmas enzimas é
reduzida quando o glucagon plasmático está aumentado e a insulina
reduzida, como no jejum ou diabetes.
E. Destino do piruvato
O piruvato formado na glicólise e de outras fontes é utilizado em
diferentes vias metabólicas dependendo de vários fatores e
necessidades momentâneas de certos metabólitos−chave. Os
principais destinos são: síntese de lactato (glicólise em condições
anaeróbicas), acetil−CoA (ciclo do ácido cítrico), oxaloacetato
(gliconeogênese) e alanina (síntese de aminoácidos) (Figura 6.6).
Figura 6.6
Destinos do piruvato.
6.3 Glicogênese
A glicogênese é a síntese intracelular do glicogênio. O glicogênio
é um polissacarídio composto de unidades repetidas de D−glicose
unidas por ligações glicosídicas α(1→4) com ramificações formadas
por ligações α(1→6) a cada 8 a 14 resíduos. Constitui a principal
forma de reserva de polissacarídeos nos tecidos animais.
O glicogênio é sintetizado em quase todos os tecidos animais,
mas os maiores depósitos estão presentes no fígado e músculos
esqueléticos. O glicogênio é armazenado em grânulos intracelulares
que também contêm as enzimas que catalisam as reações para a sua
síntese e degradação. A glicose armazenada sob a forma de
glicogênio no fígado e músculos destinam-se a diferentes funções:
• Glicogênio hepático. Atua como reservatório de glicose para a
corrente sangüínea com a distribuição para outros tecidos. A
quantidade de glicogênio hepático varia amplamente em resposta
à ingestão de alimentos. Acumula após as refeições e, quando
necessário, é degradado lentamente para manter a concentração
de glicose no sangue mais ou menos constante. As reservas de
glicogênio hepático no homem apresentam importante papel
como fonte de glicose no período entre as refeições e, em maior
extensão, durante o jejum noturno (isto é, 8-16 horas).
• Glicogênio muscular. Serve como combustível para gerar ATP
durante a atividade muscular aumentada. É formado durante o
repouso após as refeições. Os níveis de glicogênio muscular
Lactato Acetil-CoA Alanina Oxaloacetato
Ciclo
de Cori
Ciclo do
ácido cítrico
Síntese de
proteínas
Gliconeogênese
Metabolismo do álcool
O álcool é sintetizado por leveduras
por meio da fermentação alcoólica. É
um processo em duas etapas em que a
piruvato-descarboxilase remove o
grupo carboxilato do piruvato para
produzir acetaldeído.
Piruvato → acetaldeído
A enzima requer Mg
2+
e a pirofosfato
de tiamina (TPP).
A álcool-desidrogenase catalisa a
transformação do acetaldeído em
etanol:
Acetaldeído → etanol
O etanol é considerado um produto de
excreção do metabolismo da glicose;
seu acúmulo é tóxico aos organismos
que o produzem.

apresentam menor variabilidade do que os teores hepáticos em
resposta a ingestão de carboidratos.
A. Reações da glicogênese
A síntese do glicogênio ocorre após as refeições, quando os
teores de glicose sangüínea estão elevados. Até recentemente,
presumia-se que a glicose sangüínea era a única precursora direta
nesse processo. Entretanto, em condições fisiológicas, grande parte
do glicogênio é produzido por um mecanismo envolvendo a
seqüência: glicose da dieta → molécula C3 → glicogênio hepático. O
lactato e a alanina são as principais moléculas-C3 nesse processo (ver
gliconeogênese). O lactato é formado nos eritrócitos por glicólise e é
captado pelo fígado e convertido em glicose−6−fosfato na
gliconeogênese. A discussão a seguir mostra a síntese do glicogênio a
partir da glicose-6-fosfato derivada da glicose livre pela ação da
glicocinase (no fígado) ou da hexocinase (no músculo).
1. Síntese da glicose−1−fosfato. A glicose−6−fosfato é
convertida reversivelmente a glicose−1−fosfato pela
fosfoglicomutase, uma enzima que contém um grupo fosforil ligado a
um resíduo serina reativo:
O
OH
OH
OH
CH2OPO3
OH
2-
O
OH
OH
OH
CH2OH
OPO3
2-
O grupo fosforil da enzima é transferido para a glicose−6−fosfato
com a formação de glicose−1,6−bifosfato (G1,6P) como
intermediário. Na síntese de glicose−1−fosfato, o grupo fosforil
ligado ao C6 retorna ao resíduo serina da enzima.
2. Síntese de uridina−difosfato-glicose (UDP−glicose ou
UDPG). Em presença da UDP−glicose−pirofosforilase, a
glicose−1−fosfato reage com a trifosfato de uridina (UTP), para
produzir UDP−glicose uma forma “ativada” de glicose. A
UDP−glicose é um composto doador de unidade glicosil para
biossíntese de glicogênio. O UDP está ligado ao C1 da glicose
conforme reação descrita por Leloir em 1957:

O pirofosfato inorgânico (PPi) derivado da UTP, sofre hidrólise
exergônica a dois fosfatos (PPi + H2O → 2Pi) pela ação da
pirofosfatase−inorgânica celular. A variação de energia livre padrão
da hidrólise do PPi é ∆G0’
= −33,5 kJ·mol−1
, grande o suficiente para
dirigir a reação de síntese de UDPG.
3. Síntese do glicogênio a partir de UDP-glicose. A unidade
glicosil de UDP−glicose é transferida para uma extremidade
não−redutora do glicogênio já existente. Isso resulta na anexação de
uma nova unidade de glicose, ligada pelo C1 ao C4, α(1→4), da
glicose terminal do polímero de glicogênio pré-formado em reação
catalisada pela glicogênio-sintase:
O P O
H
OH
O
H
H
H
OH
N
O
NH
O
O
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
H
O P O P O P O CH
O
O
2
O
O
O
O
O
PPi
Pirofosfatase
inorgânica
2 Pi
H O2
UTPH
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
H
H
OH
O
H
H
H
OH
N
O
NH
O P O P O CH
O
O
2
O
O
O
UDP-Glicose
pirofosforilase
- -Glicose-1-fosfatoDα
UDP-Glicose

A UDP é reconvertida a UTP à custa de ATP por meio de uma
reação de transferência do grupo fosforil catalisada pela
nucleosídio−difosfato−cinase:
UDP + ATP  → −− cinasedifosfatooNucleosíde
UTP + ADP
Desse modo, o custo total em ATP, para a incorporação de um
resíduo de glicose ao glicogênio é dado pela equação:
(Glicose)n + glicose + 2ATP → (glicose)n + 1 + 2ADP + 2Pi
O glicogênio é uma estrutura amplamente ramificada com pontos
de ramificações a cada 8 a 14 resíduos. A ramificação é resultante da
ação da enzima amilo-(α−1,4→α−1,6) −transglicosilase (enzima de
ramificação). Essa enzima transfere um fragmento de 6 ou 7 resíduos
de glicose, da extremidade não-redutora de uma cadeia para o grupo
OH do C6 de uma unidade de glicose na mesma ou em outra cadeia
de glicogênio, de modo a formar um enlace α(1→6) onde é
estabelecido um ponto de ramificação. Esquematicamente tem-se
(cada esfera representa uma unidade de glicose):
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
UDP-glucose
H
O P O P O Uridina
O P O P O Uridina
O
O
O
O
O
O
O
O
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
H
O
Glicogênio ( resíduos)n
+
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
H
O
+
H
O
H
CH OH
H
OH
2
OH
H
O
H
Glicogênio-sintase
UDP Glicogênio ( +1 resíduos)n

Após a ocorrência de ramificações, unidades de glicose podem
ser acrescentadas a partir de resíduos glicosil provenientes da
UDP−glicose aos terminais não−redutores de cada uma das cadeias
originais ou das ramificações, por meio da glicogênio−sintase.
Quando um número suficiente de unidades são adicionadas desse
modo, ocorrem novas ramificações.
A síntese de glicogênio necessita a existência de uma cadeia de
glicogênio já constituída, à qual são adicionados novos resíduos de
glicose. Na primeira etapa da síntese, uma glicosil−transferase liga o
primeiro resíduo de glicose a um grupo OH de uma proteína chamada
glicogenina que atua como molde inicial. Essa, por autocatálise,
incorpora novos resíduos de glicose, até formar uma pequena cadeia
de até sete resíduos doados pela UDP-glicose, produzindo uma
molécula nascente de glicogênio. Nesse ponto, a glicogênio−sintase
inicia a síntese do glicogênio, enquanto a glicogenina desliga-se do
polímero.
6.4 Glicogenólise
A degradação do glicogênio consiste na clivagem seqüencial de
resíduos de glicose, a partir das extremidades não−redutoras das
ramificações do glicogênio (existe uma extremidade não-redutora
para cada ramificação) e é denominada glicogenólise. O rompimento
das ligações α(1→4) ocorre por fosforólise com formação de
α−D−glicose−1−fosfato sob a ação da enzima glicogênio−fosforilase
e o ataque do fosfato inorgânico.
Ligação (1 6)

A glicogênio−fosforilase age em presença de íons magnésio e
piridoxal−5’−fosfato, uma coenzima cujo grupo fosfato atua como um
catalisador ácido geral, promovendo o ataque da ligação glicosídica
pelo Pi.
A glicogênio-fosforilase remove unidades sucessivas de glicose
ao longo da cadeia até restarem quatro resíduos de um ponto de
ramificação α(1→6). A continuação da degradação ocorre depois da
transferência de uma unidade de três resíduos de glicose da
ramificação sob a ação da enzima de desramificação do glicogênio,
para a extremidade não-redutora de outra ramificação, ou seja,
acontece o rompimento de uma ligação α(1→4) com a formação de
uma nova ligação α(1→4). Em sua nova posição, os resíduos de
glicose são liberados pela ação da glicogênio-fosforilase.
A remoção do resíduo glicosil restante ligado à cadeia principal
por α(1→6) é realizada por hidrólise (e não fosforólise) pela mesma
enzima de desramificação com a formação de glicose e glicogênio
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
H
O P O
O P O H
O
O
O
O
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
H
O
+
H
O
H
H
CH OH
H
OH
2
HO
OH
H
O
H
O
H
CH OH
H
OH
2
OH
H
O
H
14 14
Extremidade
não-redutora
Glicogênio ( resíduos)n
14 14
Glicogênio ( -1 resíduos)nGlicose-1-fosfato
Glicogênio
fosforilase

não-ramificado. Desse modo, é explicado o aparecimento de
pequenas quantidades de glicose livre (8−10%) em vez de
glicose−1−fosfato na degradação do glicogênio.
O produto final das reações de degradação do glicogênio é a
glicose−1−fosfato que é convertida em glicose−6−fosfato pela
fosfoglicomutase:
Glicose−1−fosfato  →← mutaseFosfoglico
glicose−6−fosfato
A fosfoglicomutase requer a glicose−1,6−bifosfato que exerce
papel análogo ao do 2,3−bifosfoglicerato na reação catalisada pela
fosfogliceromutase (ver Glicólise).
A glicose−6−fosfato pode ser utilizada pela glicólise ou pela via
das pentoses-fosfato (ver adiante). No fígado, a glicose-6-fosfato
também sofre a ação da glicose−6−fosfatase para formar glicose:
Glicose−6−fosfato + H2O  → −− fosfatase6ecosGli
glicose + Pi
A glicose resultante é liberada da célula para a circulação e
transportada para outros tecidos.
6.5 Regulação do metabolismo do glicogênio
A síntese e a degradação do glicogênio são cuidadosamente
reguladas para evitar a perda de energia. As enzimas das diferentes
vias, a glicogênio−fosforilase e a glicogênio−sintase nas formas a
(ativa) e b (inativa ou pouco ativa), são reguladas pelo controle
alostérico e pela modificação covalente das enzimas modulada por
hormônios.
A atividade dessas enzimas é, também, amplamente dependente
da disponibilidade de vários intermediários e co-fatores. Portanto, a
glicogênese e a glicogenólise são reguladas de tal modo que as
quantidades de glicose liberadas são ajustadas segundo as
necessidades do organismo.
1. Controle alostérico. A glicogênio-sintase e a glicogênio-
fosforilase estão sob controle alostérico por diferentes efetores. A
forma inativa (ou pouco ativa) da glicogênio-fosforilase encontrada
no músculo em repouso, é denominada glicogênio−fosforilase b, e é
ativada por AMP e inibida por ATP e glicose−6−fosfato. A
glicogênio−sintase, ao contrário, é ativada pela glicose−6−fosfato.
Desse modo, em presença de teores baixos de ATP e de
glicose−6−fosfato, mas elevados de AMP, a glicogênio−fosforilase é
estimulada e a glicogênio−sintase é inibida, o que favorece a
degradação do glicogênio. Por outro lado, quando os teores de ATP e
glicose−6−fosfato estão elevados, a glicogênio-sintase é estimulada e
favorece a síntese do glicogênio.
2. Regulação por modificação covalente. A interconversão das
formas a e b da glicogênio-sintase e da glicogênio−fosforilase é
regulada reciprocamente por meio de fosforilação−defosforilação
(quando uma enzima é estimulada a outra é inibida) e são catalisadas
por enzimas que estão sob controle hormonal (insulina, glucagon e
adrenalina) ou estímulo nervoso (íons Ca2+
).
Glucagon/Adrenalina
Receptor
proteína G
Proteína G
Adenilato
ciclase
AMPc
Proteína
cinase A
Fosforilase
cinase
Glicogênio
sintase
Inibe
Glicogênio
sintase
Glicogênio
fosforilase
Promove
glicogenolise
Figura 6.8
Resumo da regulação da glicogênio-
sintase e da glicogênio-fosforilase

A ativação da glicogênio-fosforilase emprega três enzimas:
fosforilase−cinase, proteína−cinase dependente de AMPc e
fosfoproteína−fosfatase 1.
A fosforilase−cinase é uma proteína constituída por quatro
subunidades diferentes, nominadas α, β, γ e δ. A subunidade
catalítica é a γ, enquanto as outras três subunidades têm funções
reguladoras da atividade da enzima. A fosforilase-cinase é convertida
da forma inativa para a forma ativa por um dos dois mecanismos:
• Fosforilação das subunidades α e β pela ação da proteína−cinase
dependente de AMPc é ativada pelo AMP cíclico formado sob
estímulo da adrenalina. A subunidade γ não é fosforilada.
• Os íons Ca2+
(o sinal para o início da contração muscular) ligam-
se à subunidade δ através da calmodulina (calcium−modulating
protein) – uma proteína que sofre modificações conformacionais
quando ligada ao cálcio.
A degradação do glicogênio ocorre quando a
glicogênio−fosforilase b menos ativa é convertida na forma mais
ativa, a glicogênio−fosforilase a, pela forma ativa da enzima
fosforilase−cinase e ATP. Além das alterações conformacionais, p
processo envolve a adição de fosfato a glicogênio-fosforilase b. Mais
precisamente, a glicogênio−fosforilase b é um dímero (duas
subunidades peptídicas) não fosforilado, enquanto a fosforilase a é
fosforilada em cada uma das subunidades:
Glicogênio-fosforilase b + 2 ATP →
glicogênio−fosforilase a + 2 ADP
A fosforilase a pode ser convertida novamente em fosforilase b
pela enzima hepática fosfoproteína−fosfatase 1:
Glicogênio−fosforilase a + H2O  → − 1fosfataseínaFosfoprote
2 glicogênio−fosforilase b + 2 Pi
A forma ativa da fosforilase-cinase também tem um precursor
inativo ativado pela proteína−cinase dependente de AMPc.
No músculo em repouso, a atividade da proteína−cinase
dependente de AMPc está sob controle hormonal. O hormônio
adrenalina afeta a seqüência orientando a ativação da fosforilase a
pelo estímulo da enzima adenilato−ciclase que catalisa a conversão
do ATP a AMP cíclico (AMPc)(ver Capítulo 4).
O AMPc ativa a proteína−cinase dependente de AMPc, que por
sua vez, catalisa a fosforilação da fosforilase−cinase, dando origem à
forma da fosforilase−cinase ativa, desencadeando uma série de passos
que resultam na geração da glicogênio−fosforilase a. As atividades
das fosforilases−cinases dependem da presença de Ca2+
, pois existe
um estreito acoplamento entre a glicogenólise e a contração muscular.
Como efeito final, os íons cálcio ativam a glicogênio−fosforilase e
inativam a glicogênio−sintase.
A glicogênio-sintase também ocorre sob duas formas, a e b. A
fosfatase-cinase, que ativa a glicogênio-fosforilase, também fosforila
e inativa a glicogênio-sintase. Em presença da enzima, a

glicogênio−sintase a reage com o ATP para produzir a
glicogênio−sintase b (fosforilada). Essa última pode ser reconvertida
a glicogênio−sintase a pela ação da fosfoproteína−fosfatase 1 (Figura
6.8).
Devido a seu efeito sobre a proteína-cinase dependente de AMPc,
através da geração de AMP cíclico, a adrenalina inibe a síntese do
glicogênio. A glicogênio-sintase e a glicogênio-fosforilase são
afetadas pela fosforilação de modo diferente: a glicogênio-fosforilase
a (ativa) está ligada ao fosfato, enquanto a glicogênio-sintase (ativa)
está na forma desforilada. Como a formação de AMPc estimulado
pela adrenalina transforma as duas enzimas (fosforilase e sintase) em
formas fosforiladas, o resultado é a diminuição na síntese do
glicogênio (pela inativação da sintase) e o aumento na degradação
(pela ativação da fosforilase). A adrenalina, ao estimular a atividade
da adenilato-ciclase, fornece glicose para as células através de dois
mecanismos: (1) inibição do armazenamento na forma de glicogênio e
(2) aumento no seu desdobramento.
Figura 6.9
Regulação do metabolismo do glicogênio por modificação covalente das enzimas moduladas
por hormônios.
Via proteina G (G -GTP)
Hormônio (adrenalina ou glucagon)
Adelinato-ciclase
(inativa)
Adelinato-ciclase
(ativa)
ATP AMP cíclico + PPi
Fosfodiesterase
AMP
Proteína-cinase
(inativa)
Proteína-cinase
(ativa)
ATP
ADP
Fosforilase-cinase aFosforilase-cinase b
Fosfatase
Pi
ATP
ADP
Glicogênio-fosforilase a
Fosfatase
Pi
Glicogênio-fosforilase b
Glicose-1-fosfatoGlicogênio

Quadro 6.4 Doenças de armazenamento de glicogênio
Existem vários distúrbios hereditários que
afetam o metabolismo do glicogênio. São causadas
por deficiências de enzimas envolvidas na síntese e
degradação do glicogênio, produzindo glicogênio
anormal em quantidade ou qualidade.
Elas são coletivamente chamadas de doenças
de armazenamento de glicogênio e a condição é
conhecida como glicogenose. Essas condições são
divididas em tipos distintos descritos na Tabela abixo
Tipo Epônimo Enzima deficiente Características
I Doença de von Gierke Glicose−6−fosfatase Pobre mobilização do glicogênio hepático.
Hipoglicemia em jejum.
II Doença de Pompe α−1,4−Glicosidase (lisossomal) Acúmulo de generalizado de glicogênio
lisossomal.
III Doença de Cori
(dextrinose limite)
Amilo−α-1,6−glicosidase (enzima de
desramificação)
Acúmulo de glicogênio com ramos externos
curtos.
IV Doença de Hendersen
(amilopectinose)
Amilo−(1,4→1,6)-transglicosilase
(enzima de ramificação)
Acúmulo de glicogênio hepático com ramos
externos longos. Hipoglicemia em jejum.
V Doença de McArdle Glicogênio−fosforilase muscular Cãimbras musculares durante exercícios.
VI Doença de Her´s Glicogênio−fosforilase hepática Acúmulo de glicogênio hepático.
VII Doença de Tarui Fosfofrutocinase (muscular) Acúmulo de glicogênio muscular.
VIII - Fosforilase−cinase (hepática) Acúmulo de glicogênio hepático.
IX Doença de Fanconi-
Bickel
Fosforilase−cinase de todos os órgãos Todos os órgãos
0 Glicogênio−sintase hepática Deficiência da quantidade de glicogênio
Junto com a regulação descrita acima, a velocidade da síntese e
degradação é profundamente influenciada por vários intermediários e
co-fatores. Por exemplo, a UDP é um inibidor tanto da
UDP−glicose−pirofosforilase como também da glicogênio-sintase
hepática. A UDP formada na síntese do glicogênio a partir da
UDP−glicose, atua como moderador da velocidade da síntese. O
próprio glicogênio é um inibidor da ativação da glicogênio−sintase.
Conseqüentemente, quantidades excessivas de glicogênio tendem a
diminuir a velocidade de sua própria síntese.
6.6 Gliconeogênese
A gliconeogênese, a formação de novas moléculas de glicose a
partir de precursores não-carboidratos, ocorre no fígado. Em certas
situações, como acidose metabólica ou inanição, os rins também
sintetizam glicose. Os precursores não-glicídicos incluem lactato,
piruvato, glicerol e cadeias carbonadas da maioria dos aminoácidos.
Entre as refeições, os teores adequados de glicose sangüínea são
mantidos pela hidrólise do glicogênio hepático. Quando o fígado
esgota seu suprimento de glicogênio (exemplo, jejum prolongado ou
exercício vigoroso), a gliconeogênese fornece a quantidade
apropriada de glicose para o organismo. O cérebro e os eritrócitos,

utilizam a glicose como fonte primária de energia. Sob circunstâncias
especiais, as células do cérebro também usam corpos cetônicos
(derivados dos ácidos graxos) para gerar energia. O músculo
esquelético em exercício, emprega a glicose a partir do glicogênio em
combinação com ácidos graxos e corpos cetônicos para obter energia.
A. Reações da gliconeogênese
Considerando o piruvato como ponto inicial da gliconeogênese,
as reações podem ser comparadas com as da via glicolítica mas, no
sentido inverso. Muitas das enzimas e intermediários são idênticos.
Sete reações são reversíveis. No entanto, três são irreversíveis:
piruvato−cinase (∆G°′= −31,4 kJ·mol−1
), fosfofrutocinase−1 (∆G°′=
−14,2 kJ·mol−1
) e hexocinase (∆G°′= −16,7 kJ·mol−1
) e devem ser
contornadas por meio de outras reações catalisadas por enzimas
diferentes.
Na gliconeogênese, as três reações irreversíveis são contornadas
nas seguintes etapas:
1. Conversão de piruvato em fosfoenolpiruvato através do
oxaloacetato. São necessárias duas reações exergônicas para essa
conversão. Na mitocôndria, o piruvato é carboxilado a oxaloacetato
(um composto de quatro carbonos intermediário do ciclo do ácido
cítrico) as custas de ATP em reação catalisada pela
piruvato−carboxilase. A coenzima biotina, que funciona como
transportador de bicarbonato, está covalentemente ligada à enzima
através do grupo amino da lisina.
A piruvato-carboxilase é ativada alostericamente pela
acetil−CoA. O oxaloacetato é tanto um precursor para a
gliconeogênese quanto um intermediário do ciclo do ácido cítrico.
Níveis elevados de acetil−CoA sinalizam a necessidade de mais
oxaloacetato. Se houver excesso de ATP, o oxaloacetato será utilizado
na gliconeogênese; se houver falta de ATP, o oxaloacetato entrará no
ciclo do ácido cítrico.
Como a membrana mitocondrial interna é impermeável ao
oxaloacetato esse deve ser transportado para o citosol na forma de
malato. O oxaloacetato é reduzido a malato na mitocôndria pela
malato-desidrogenase.
Oxaloacetato + NADH + H+
 →← − asedesidrogenMalato
L-malato + NAD+
Após a transferência do malato para o citosol por meio do
transportador malato−α−cetoglutarato, ocorre reação reversa
catalisada por uma malato-desidrogenase citoplasmática.
COO
C O + HCO
ATP ADP+P
Piruvato-carboxilase
CH3
i
3
Piruvato Bicarbonato Oxaloacetato
COO
C O
CH2
COO

Em seguida, a descarboxilação do oxaloacetato a
fosfoenolpiruvato é catalisada pela fosfoenolpiruvato−carboxicinase
presente no citosol, em reação que emprega o GTP como doador do
grupo fosforil.
A equação global para as reações de contorno é:
Piruvato + ATP + GTP + HCO3
-
→
fosfoenolpiruvato + ADP + GDP + Pi + CO2
Para produzir uma molécula de fosfoenolpiruvato a partir do
piruvato são consumidos dois grupos fosfato de “alta energia” (um do
ATP e outro do GTP).
H
OH
O
H
H
H
OH
O P O P O P O CH
O
2
N
O
O O
N
NH2
N
O
O
O
NH
COO
C O
CH2
C
O O
Oxaloacetato GTP
H
OH
O
H
H
H
OH
O P O P O CH
O
2
N
O
O O
N
NH2
N
O
O
O
NH
COO
C O P O
CH2
GTP
Fosfoenolpiruvato
carboxicinase
Fosfoenolpiruvato
CO2
COO
H C OH
NAD NADH + H
Malato-desidrogenaseCH2
COO
COO
C O
CH2
COO
+ +
Malato Oxaloacetato

Figura 6.11
Formação do fosfoenolpiruvato a partir do piruvato
2. Conversão da frutose−1,6−bifosfato a frutose−6−fosfato. A
reação irreversível catalisada pela fosfofrutocinase na glicólise é
contornada pela frutose−1,6−bifosfatase dependente de Mg2+
:
Frutose−1,6−bifosfato + H2O  → −− ebifosfatas6,1Frutose
Frutose−6−fosfato + Pi
A reação é exergônica (∆G°′ = −16,3 kJ·mol−1
) e também
irreversível em condições celulares. O ATP não é regenerado. A
frutose−1,6−bifosfatase é uma enzima alostérica estimulada pelo
citrato e inibida pelo AMP e frutose−2,6−bifosfato.
A frutose-6-fosfato é, então, transformada em glicose−6−fosfato
pela enzima glicose−fosfato−isomerase.
3. Formação de glicose a partir da glicose−6−fosfato. A
glicose−6−fosfatase, encontrada somente no fígado e rim, catalisa a
hidrólise reversível da glicose−6−fosfato para formar glicose e Pi
(∆G°′ = −13,8 kJ·mol−1
) A glicose é subseqüentemente liberada para
o sangue.
Mitocôndria
Malato
Piruvato
Citosol
NAD+
NADH + H+
Oxaloacetato
GDP
GTP
CO2
Fosfoenolpiruvato
ADP
ATP
ATP
ADP + P
CO2
Piruvato
Oxaloacetato
NADH + H
NAD
+
+
Malato

A seqüência de fases da gliconeogênese, a partir do
fosfoenolpiruvato está resumida na Figura 6.12.
A síntese de glicose a partir de duas moléculas de piruvato
requer, no mínimo, seis ATP (nas reações catalisadas por:
piruvato−carboxilase, fosfoenolpiruvato−carboxicinase e
fosfoglicerato−cinase). Portanto, a gliconeogênese é um processo
bastante caro em termos de consumo de energia. Quando a
gliconeogênese se processa em altas velocidades, consome mais de
60% do ATP gerado no fígado. Esse ATP é proveniente,
principalmente, da oxidação de ácidos graxos. As condições
fisiológicas que necessitam a síntese de glicose, geralmente são as
mesmas que apresentam disponibilidade de ácidos graxos no sangue.
Nessas ocasiões, os ácidos graxos são oxidados na mitocôndria a
corpos cetônicos com a conseqüente produção de ATP.
H O P
Glicose-6-fosfatase
i2
OH
H
O
H
H
CH OPO
H
OH
H
3
HO OH
OH
H
O
H
H
CH OH
H
OH
H
2
HO OH
2
2
Glicose-6-fosfato Glicose

Figura 6.12
Reações da gliconeogênese
B. Precursores para a gliconeogênese
Os precursores não−carboidratos mais importantes para a
gliconeogênese são:
Glicose
Glicose-6-fosfato
P
Glicose-6-fosfatase
Glicose
fosfato-isomerase
Frutose-6-fosfato
Frutose-1,6-difosfatase
Frutose-1,6-difosfato
Aldolase
Gliceraldeído-3-fosfato Diidroxiacetona-fosfato
NADH
Gliceraldeído
1,3-Difosfoglicerato
ADP
ATP
3-Fosfoglicerato
2-Fosfoglicerato
Enolase
Fosfoenolpiruvato
Fosfoenolpiruvato-carboxicinase
Oxaloacetato
Piruvato
i
P
NAD+
CO + GDP2
GTP
P + ADPi
HCO + ATP3
-

1. Lactato. É liberado pelos eritrócitos e outras células sem
mitocôndrias e, também, pelos músculos esqueléticos durante alta
atividade muscular. É conduzido ao fígado onde é reconvertido a
piruvato pela lactato−desidrogenase e, então, em glicose pela
gliconeogênese (Ciclo de Cori). A glicose resultante difunde para a
circulação e é captada pelas células do músculo esquelético para
repor os estoques de glicogênio. Desse modo, o ciclo de Cori
transfere a energia potencial química na forma de glicose do fígado
para os tecidos periféricos.
Figura 6.13
Interrelação da glicólise muscular e gliconeogênese hepática (Ciclo de
Cori)
A gliconeogênese a partir do lactato é um processo que requer
ATP:
2Lactato + 6ATP + 6H2O → glicose + ADP + 6Pi + 4H+
2. Alanina. É o mais importante aminoácido convertido a
intermediários glicolíticos para a gliconeogênese. Durante o jejum
prolongado ou inanição, a alanina e outros aminoácidos são liberados
a partir de proteínas presentes nos músculos esqueléticos. A alanina é
transportada para o fígado, onde sofre transaminação para gerar
piruvato. O piruvato por meio da gliconeogênese forma glicose que
pode retornar aos músculos ou ser degrada pela via glicolítica. O
mecanismo é chamado ciclo da glicose−alanina e também transporta
o NH4
+
ao fígado para a síntese da uréia. Os aminoácidos são as
principais fontes de carbono para a gliconeogênese durante o jejum,
quando os suprimentos de glicogênio estão esgotados.
Músculo Sangue Fígado
(Carboidratos
da dieta)
Glicose Glicose
6-fosfato
Glicogênio
Lactato
Gliconeogênese
GlicoseGlicoseGlicose
6-fosfato
Glicogênio
Lactato
Glicólise
Lactato

Figura 6.14
Ciclo da glicose alanina
3. Glicerol. É um produto da hidrólise enzimática dos
triacilgliceróis no tecido adiposo (ver Metabolismo dos lipídeos), é
transportado até o fígado pelo sangue e então fosforilado a
glicerol−3−fosfato pela glicerol−cinase. O glicerol−3−fosfato
participa da gliconeogênese (ou da glicólise) através do intermediário
comum, o glicerol−3−fosfato. Por meio do complexo
glicerol−3−fosfato−desidrogenase, o glicerol−3−fosfato é
transformado em diidroxiacetona−fosfato (DHAP) reação que ocorre
quando o teor de NAD+
citoplasmático está relativamente alto.
Figura 6.15
Gliconeogênese a partir do glicerol. O Glicerol−3−fosfato é oxidado em
reações catalisadas por duas desidrogenases; as duas reações produzem
Músculo Sangue Fígado
Alanina
Piruvato
Glicose
Alanina Alanina
Glicose Glicose
Glicólise
Transaminação
Gliconeogênese
Piruvato
Transaminação
Glicerol-3-fosfato
desidrogenase
citosólica
QH2Q
Matriz mitocondrial
Diidroxiacetona
fosfato
Complexo da glicerol
+
+
NAD
NADH, H
Glicerol-3-fosfato
Glicerol
Glicerol
cinase
ATP
ADP
Citosol
Membrana
mitocondrial
interna
Glicose
Gliconeogênese

coenzimas reduzidas. Q = ubiquinona (coenzima Q).
Outros substratos participam em menor grau como fonte para a
formação de glicose tais como, os intermediários do ciclo do ácido
cítrico e as cadeias carbonadas de vários aminoácidos.
O lactato, o glicerol, a alanina e outros aminoácidos são as fontes
de glicose sangüínea durante os estágios intermediários do jejum (1 a
4 dias).
C. Regulação da gliconeogênese
A velocidade da gliconeogênese é afetada principalmente pela
disponibilidade de substratos, efetores alostéricos e hormônios.
Dietas ricas em gorduras, a inanição e o jejum prolongado elevam as
concentrações de lactato, glicerol e aminoácidos e estimulam a
gliconeogênese.
As quatro enzimas-chave da gliconeogênese
(piruvato−carboxilase, fosfoenolpiruvato−carboxicinase,
frutose−1,6−bifosfatase e glicose−6−fosfatase) são afetadas em
diferentes graus por moduladores alostéricos. Por exemplo, a
frutose−1,6−bifosfatase é ativada pelo ATP e inibida pelo AMP e pela
frutose−2,6−bifosfato. A acetil−CoA é um modulador alostérico
positivo da piruvato−carboxilase. A concentração da acetil−CoA, um
produto da degradação dos ácidos graxos, está elevada durante a
inanição.
Como em outras vias bioquímicas, os hormônios afetam a
gliconeogênese por alterações na concentração dos efetores
alostéricos e por modificações na velocidade de síntese das
enzimas−chave. O glucagon (elevado quando o nível de glicose
diminui) reduz a síntese da frutose−2,6−bifosfato, ativando a função
fosfatase da PFK−2. A redução do teor da frutose−2,6−bifosfato
reduz a ativação da PFK−1 e desinibe a frutose−1,6−bifosfatase.
Outro efeito do glucagon nas células hepáticas é a inativação da
enzima glicolítica piruvato−cinase. (A proteína−cinase C, uma
enzima ativada pelo AMPc, converte a piruvato−cinase em sua
conformação fosforilada inativa). Os hormônios também influenciam
a gliconeogênese por alterações na síntese de enzimas. Por exemplo,
a síntese de enzimas gliconeogênicas é estimulada pelo cortisol (um
hormônio esteróide produzido no córtex da supra-adrenal). A ação da
insulina promove a síntese de novas moléculas de glicocinase, PFK−1
e PFK-2. O glucagon promove a síntese de novas moléculas de
PEP−carboxicinase, frutose−1,6−bifosfatatase e glicose−6−fosfatase.
O controle hormonal da gliconeogênese é importante no
suprimento de ácidos graxos para o fígado além de regular as
enzimas, tanto glicolíticas como gliconeogênicas. O glucagon
aumenta a concentração dos ácidos graxos no plasma pela lipólise no
tecido adiposo, em ação oposta da insulina. A grande disponibilidade
de ácidos graxos, estimulada pelo glucagon, resulta em maior
oxidação dos ácidos graxos para formar acetil−CoA pelo fígado,
permitindo a síntese da glicose. Por outro lado, a insulina tem efeito
oposto. O glucagon e a insulina também regulam a gliconeogênese no
fígado por influenciar o estado de fosforilação de enzimas hepáticas,
tais como, a piruvato−cinase e fosfofrutocinase.

D. Inibição da gliconeogênese pelo etanol
O consumo de álcool (etanol), especialmente por indivíduos
subalimentados, pode causar hipoglicemia. Essa condição resulta dos
efeitos inibidores do álcool sobre a gliconeogênese hepática causado
pelo NADH produzido durante o metabolismo do álcool. O etanol é
convertido em acetaldeído (CH3CHO) pela reação:
CH3CH2OH + NAD+
→ CH3CHO + NADH + H+
O excesso de NADH no citosol reduz a gliconeogênese, pois
desloca o equilíbrio das reações catalisadas pela
lactato−desidrogenase e malato−desidrogenase, nas direções de
formação do lactato e malato, respectivamente:
Piruvato + NADH + H+
→ lactato + NAD+
Os NADH deveriam ser transportados para a mitocôndria pelo
circuito malato−aspartato, mas o fígado não consegue fazê-lo na
velocidade suficiente para evitar distúrbios metabólitos. O NADH
excedente bloqueia a conversão do lactato a glicose provocando
hipoglicemia e também promove a conversão da alanina em lactato,
resultando em acúmulo desse último no sangue (acidose láctica).
A substância que ocasiona lesões ao nível do hepatócito, não é o
álcool e sim o produto de sua degradação, o acetaldeído.
6.6 Via das pentoses-fosfato
A via das pentoses−fosfato (ou desvio hexose−monofosfato ou via
oxidativa do fosfogliconato) é uma via metabólica alternativa à
glicólise para a oxidação da glicose que não requer e não produz ATP.
Seus principais produtos são:
• NADPH (nicotinamida adenina dinucleotído fosfato reduzido) um
agente redutor empregado para os processos anabólicos.
• Ribose−5−fosfato um componente estrutural de nucleotídeos e de
ácidos nucléicos.
A via das pentoses-fosfato ocorre no citosol em duas etapas:
etapa oxidativa e a etapa não−oxidativa. Na etapa oxidativa a
glicose−6−fosfato é convertida à ribulose−5−fosfato (Ru5P)
acompanhada pela formação de duas moléculas de NADPH.
A etapa não−oxidativa envolve a isomerização e condensação de
várias moléculas diferentes de açúcar. Três intermediários do
processo são utilizados em outras vias: a ribose−5−fosfato, a
frutose−6−fosfato e o gliceraldeído−3−fosfato.
A. Reações oxidativas
A etapa oxidativa da via das pentoses-fosfato consiste de três
reações. Na primeira reação, a glicose−6−fosfato−desidrogenase
(G−6−PD) catalisa a oxidação do C1 da glicose−6−fosfato para
formar 6−fosfoglicono−δ−lactona e NADPH:

Essa reação é a etapa limitante da via e controla a velocidade de
produção de NADPH. A deficiência glicose−6−fosfato−desidrogenase
nos eritrócitos provoca anemia.
A 6-fosfoglicono−δ−lactona é então hidrolisada para produzir a
6−fosfogliconato por meio da 6−fosfoglicono−lactonase:
O 6−fosfogliconato sofre descarboxilação oxidativa em presença
de NADP+
e da 6−fosfogliconato−desidrogenase, em
ribose−5−fosfato. São também produzidos CO2 (proveniente do C1 da
hexose) e uma segunda molécula de NADPH:
Na etapa oxidativa são produzidas duas moléculas de NADPH
para cada molécula de glicose−6−fosfato que entra na via.
NADP+
NADPH
+C
H C OH
O O
H C OH
HO C H
CH OPO2
H C OH
6-Fosfogliconato
desidrogenase
CO2
2
3
6 - Fosfogliconato
H C OH
CH OH
C O
CH OPO2
H C OH
2
3
2
Ribulose-5-fosfato
Glicose-6-fosfato
desidrogenaseOH
H
O
H
H
CH OPO
H
OH
H
3
HO OH
2
2
Glicose-6-fosfato
OH
H
O
H
H
CH OPO
H
OH
3
HO
2
2
O
NADP+
NADPH
+
H+
6-Fosfoglicono
-lactonaδ
OH
H
O
H
H
CH OPO
H
OH
3
HO
2
2
O
6-Fosfoglicono
-lactona
δ
C
O
H C OH
CH OPO2
2
3
H O H2
HO C H
H C OH
H C OH
+
O
6-Fosfoglicono
lactonase
6-Fosfogliconato

Quantidades substanciais de NADPH são necessárias para os
processos redutores (exemplo, biossíntese dos lipídeos) e
mecanismos antioxidantes (exemplo, células com alto riso de lesão
oxidativa, como os eritrócitos). As reações são muito ativas em
células que sintetizam grande quantidade de lipídeos, tais como,
tecido adiposo, córtex adrenal, glândulas mamárias e fígado. A via é
pouco ativa no músculo esquelético.
Figura 6.16
Reações oxidativas da via das pentoses-fosfato. Os produtos finais são a
D−ribose e o NADPH.
B. Reações da etapa não-oxidativa
A fase não−oxidativa da via inicia com a conversão da
ribulose−5−fosfato à ribose−5−fosfato pela
ribulose−5−fosfato−isomerase:
NADPH
NADP
Glicose-6-fosfato
desidrogenase
Glicose-6-fosfato
+
H
H O2
6-Fosfoglicono-lactonase
6-Fosfogliconolactonato
+
6-Fosfogliconato
desidrogenase
6-Fosfogliconato
CO2
NADP+
NADPH
Ribulose-5-fosfato
Reações não-oxidativas
C
H C OH
O H
H C OH
CH OPO2
H C OH
Ribulose-5-fosfato
isomerase
2
3
H C OH
CH OH
C O
CH OPO2
H C OH
2
3
2
Ribulose-5-fosfato Ribose-5-fosfato

A ribulose−5−fosfato pode também ser convertida a
xilulose−5−fosfato pela ribulose−5−fosfato−epimerase:
CH2OH
C
C
C
CH2OPO3H2
H
H
OH
OH
OH
H
CH2OH
C
C
C
CH2OPO3H2
H
OH
O
H
OH
+
CH2OH
C
C
C
C
C
CH2OPO3H2
O
H
H
H
H
OH
OH
OH
OH
+
CHO
C
CH2OPO3H2
H OH
Essas interconversões fornecem uma mistura de três pentoses-
fosfato (ribulose, xilulose e ribose) cujas concentrações dependem
das necessidades da célula.
A xilulose−5−fosfato pode reagir com a ribose−5−fosfato para
formar sedoeptulose−7−fosfato e gliceraldeído−3−fosfato pela
translocase:
CH2OH
C
C
C
C
C
CH2OPO3H2
O
H
H
H
H
OH
OH
OH
OH
+
CHO
C
CH2OPO3H2
H OH
CH2OH
C
C
C
C
CH2OPO3H2
O
OH
H
H
H
OH
OH
C
C
CH2OPO3H2
H OH
CHO
H OH
+
A ação da transcetolase requer o co-fator tiamina pirofosfato
(TPP). Envolve a transferência do grupo glicolaldeído da
D−xilulose−5−fosfato para o C1 da ribose−5−fosfato. A unidade
glicolaldeído está ligada ao complexo enzima−TPP sendo transferido
direto para o aceptor. Note que o doador do grupo
(xilulose−5−fosfato) e o produto (sedoeptulose−7−fosfato) são
cetoses onde o C3 tem configuração “tipo L”.
Na reação seguinte, a sedoeptulose−7−fosfato transfere o grupo
diidroxiacetona (C1, C2 e C3) para o gliceraldeído−fosfato em reação
reversível catalisada pela transaldolase, com a formação de
eritrose−4−fosfato e frutose−6−fosfato:
CH2OH
C
C
C
C
C
CH2OPO3H2
O
H
H
H
H
OH
OH
OH
OH
+
CHO
C
CH2OPO3H2
H OH
CH2OH
C
C
C
C
CH2OPO3H2
O
OH
H
H
H
OH
OH
C
C
CH2OPO3H2
H OH
CHO
H OH
+
A transaldolase difere da aldolase da via glicolítica por não
liberar a diidroxiacetona livre; essa última está ligada a enzima
transaldolase e é transferida diretamente ao aceptor.

A eritrose−4−fosfato atua como aceptor na reação da
transcetolase. Ela pode então reagir com a xilulose−5−fosfato para
fornecer frutose−6−fosfato e gliceraldeído−3−fosfato:
CHO
C
CH2OPO3H2
H OH
CH2OH
C
C
C
C
CH2OPO3H2
O
OH
H
H
H
OH
OH
+
C
C
CH2OPO3H2
H OH
CHO
H OH
+
CH2OH
C
C
C
CH2OPO3H2
H
OH
O
H
OH
As reações acima mostram que o resultado líquido da via das
pentoses-fosfato é a produção de frutose−6−fosfato e
gliceraldeído−3−fosfato. Quando as pentoses não são necessárias para
reações de biossíntese, os metabólitos da etapa não−oxidativa podem
ser consumidos pela glicólise. Com a cooperação de quatro enzimas
glicolíticas, essa via pode resultar na conversão de todos os carbonos
da glicose em CO2. As enzimas necessárias são: (1)
triose−fosfato−isomerase para converter o gliceraldeído−3−fosfato a
diidroxiacetona fosfato; (2) aldolase para produzir frutose-1,6-
bifosfato a partir do gliceraldeído−3−fosfato e
diidroxiacetona−fosfato; (3) frutose−1,6−bifosfatase para hidrolisar a
frutose−1,6−bifosfato a frutose−6−fosfato; (4)
glicose−fosfato−isomerase para formar glicose−6−fosfato a partir da
frutose−6−fosfato. A glicose−6−fosfato pode re−entrar na via e
repetir o processo. A equação geral da via pentoses−fosfato é:
6 Glicose−6−fosfato + 12 NADP+
+ 7 H2O →
5 glicose−6−fosfato + 6 CO2 + 12 NADPH + 12 H+
+ Pi
A reação líquida é
Glicose−6−P + 12NADP+
+ 7H2O → 6CO2 + 12NADPH + 12H+
+ Pi
De acordo com as considerações acima, 6 mol de
glicose−6−fosfato são convertidos em 6 moles de CO2 e 5 moles de
glicose−6−fosfato. Esse último, pela adição de outro mol de
glicose−6−fosfato, pode ser reciclado através das mesmas etapas. A
Figura 5.24 mostra o esquema do processo geral.

Figura 6.17
Reações não-oxidativas da via pentoses−fosfato.
Alternativamente, a via das pentoses−fosfato pode ser concebida
como um “desvio” para a produção de frutose−6−fosfato a partir da
glicose−6−fosfato. Tanto a glicose−6−fosfato como o
gliceraldeído−3−fosfato produzidos pela via das pentoses−fosfato
podem ser metabolizados a piruvato e, finalmente, oxidado no
sistema enzimático mitocondrial.
6.7 Visão geral do metabolismo da glicose em
várias células
O metabolismo da glicose em diversos tecidos ocorre do seguinte
modo:
• Eritrócitos. Glicólise (lactato como produto final) e via das
pentoses−fosfato.
• Cérebro. Glicólise (piruvato como produto final), ciclo do ácido
cítrico e via das pentoses−fosfato.
• Células musculares. Glicólise (piruvato e lactato como produto
final), ciclo do ácido cítrico, via das pentoses−fosfato,
glicogênese e glicogenólise.
• Tecido adiposo. Glicólise, ciclo do ácido cítrico, via das
pentoses−fosfato, glicogênese, glicogenólise e lipogênese,.
Ribulose-5-fosfato
Ribulose-5-fosfato-isomerase
Ribulose-5-fosfatoXilulose-5-fosfato
Ribulose-5-fosfato-epimerase
Translocase
Sedoeptulose-7-fosfato Gliceraldeído-3-fosfato
Transaldolase
Eritrose-4-fosfato
Transcetolase Frutose-6-fosfato
Gliceraldeído-3-fosfato Frutose-6-fosfato

Quadro 6.4 Defeitos no metabolismo da frutose
São conhecidos três defeitos hereditários do
metabolismo da frutose. A frutosúria essencial é uma
desordem metabólica benigna causada pela
deficiência de frutocinase que está normalmente
presente no fígado, ilhotas do pâncreas e no córtex
renal. Os sintomas são: aumento no teor de frutose
no sangue e aparecimento de frutosúria após
ingestão de frutose; mesmo assim, 80 a 90% da
frutose é metabolizada e pode permanecer sem
diagnóstico.
Outro defeito mais sério, é a intolerância
hereditária à frutose, que consiste de deficiência da
frutose-1-fosfato aldolase (também chamada
aldolase do Tipo B), provocando hipoglicemia severa
após a ingestão de frutose. Em crianças o consumo
prolongado de frutose pode levar a uma condição
crônica ou morte.
Nessa desordem, a frutose 1-fosfato acumula
intracelularmente no fígado e rins, resultando em
lesão renal com distúrbios funcionais. utros sintomas
são: dor abdominal e vômitos. O tratamento consiste
na remoção de frutose e sacarose da dieta. A
hipoglicemia presente nesse distúrbios é provocada
pela inibição da glicogenólise por interferência com a
glicogênio-fosforilase pela frutose 1-fosfato.A
deficiência hereditária da frutose-1,6-bifosfatase
resulta em severa redução da gliconeogênese
hepática, provocando episódios de hipoglicemia,
apnéia, hiperventilação, cetose e acidose láctica. Em
neonatos, a deficiência pode ser letal. Em outras
idades os episódios podem ser desencadeados pelo
jejum e infecções febris.
• Fígado. Glicólise, ciclo do ácido cítrico, glicogênese,
glicogenólise, via das pentoses−fosfato, gliconeogênese,
liberação de glicose para o sangue e formação de glicuronídeos
(excreção de fármacos e bilirrubina),
6.8 Metabolismo de outros monossacarídeos
importantes
Os monossacarídeos frutose, galactose e manose encontrados
comumente em oligossacarídeos e polissacarídeos, exercem
importante papel como combustíveis metabólicos. São convertidos
em intermediários glicolíticos.
A. Metabolismo da frutose
As fontes de frutose na dieta incluem frutas, mel e o dissacarídeo
sacarose. A frutose pode entrar na via glicolítica por duas vias: (1) no
músculo e tecido adiposo, a frutose é fosforilada no C6 para produzir
frutose-6-fosfato pela ação da hexocinase em conversão semelhante a
da glicose em glicose−6−fosfato. A frutose−6−fosfato formada entra
na via glicolítica.
Frutose + ATP  →
+2
Mg
frutose−6−fosfato + ADP
(2) a enzima frutocinase.catalisa a fosforilação da frutose em C1:
Frutose + ATP  →
+2
Mg
frutose−1−fosfato + ADP
A frutose−1−fosfato entra na glicólise e é clivada pela
frutose−1−fosfato−aldolase (também chamada aldolase do Tipo B)
em diidroxiacetona−fosfato (DHAP) e gliceraldeído. A DHAP é,
então, convertida a gliceraldeído−3−fosfato pela
triose−fosfato−isomerase.

Quadro 6.4 Galactosemia
A ausência hereditária da enzima galactose-1-fosfato-
uridiltransferase resulta na galactosemia. Os indivíduos
portadores desse defeito são inacapazes de metabolizar
galactose derivada do leite (lactose) nos metabólitos de
glicose, muitas vezes resultando na formação de cataratas,
hepatomegalia e retardamento mental. O tratamento
consiste em dieta isenta de lactose. A dieta deve ser
realizada durante a infância para evitar sérias lesões
irreversíveis..
Outro defeito mais sério, é a intolerância
hereditária à frutose, que consiste de deficiência da
frutose-1-fosfato aldolase (também chamada
aldolase do Tipo B), provocando hipoglicemia severa
após a ingestão de frutose. Em crianças o consumo
prolongado de frutose pode levar a uma condição
crônica ou morte.
Outra forma de galactosemia mais moderada
envolve a ausência da enzima galactocinase, que
leva ao acímulo de galactose nos tecidos e a
excreção urinária desse açúcar. O excesso de
galactose em tecidos é convertido a galactitol
(dulcitol), que leva a formação de catarata. O
tratamento é o mesmo descrito acima.
Frutose
ATP
Frutocinase
Frutose-1-fosfato
Frutose-1-fosfato-aldolase
Diidroxiacetona-fosfatoGliceraldeído
Gliceraldeído-cinase
Gliceraldeído-3-fosfatoGliceraldeído-3-fosfato
ADP
ATP
ADP
Figura 6.18
Metabolismo da frutose
O gliceraldeído é também fosforilado pelo ATP em reação
catalisada pela gliceraldeído−cinase para formar gliceraldeído-3-
fosfato.
Assim, os dois produtos da hidrólise da frutose entram na
glicólise como gliceraldeído−3−fosfato.
B. Metabolismo da galactose
Apesar da galactose e da glicose apresentarem estruturas
similares (são epímeros que diferem na configuração no C4) várias
reações são necessárias para que esse açúcar entre na via glicolítica.
A galactose é inicialmente convertida à galactose-1-fosfato pela
galactocinase. A seguir, a galactose-1-fosfato é transformada em um
derivado uridina−fosfato, a UDP−galactose. Durante o

desenvolvimento fetal e na infância a formação da UDP−galactose é
catalisada pela galactose−1−fosfato−uridiltransferase. Na
adolescência, a UDP−galactose é produzida pela ação da
UDP−galactose−pirofosforilase.
A UDP−galactose é transformada por isomerização em UDP-
glicose pela ação da UDP-glicose−4−epimerase. Dependendo das
necessidades metabólicas da célula, a UDP-glicose é usada
diretamente na síntese do glicogênio ou é convertida à glicose 1-
fosfato pela UDP−glicose−pirofosforilase. A glicose 1−fosfato entra
na via glicolítica após sua conversão a glicose−6−fosfato pela
fosfoglicomutase (Figura 6.18).
Figura 6.19
Metabolismo da galactose.
C. Metabolismo da manose
A manose é um importante componente dos oligossacarídeos
encontrados nas glicoproteínas. A manose é fosforilada pela
hexocinase à manose−6−fosfato que, a seguir, é transformada pela
fosfomanose−isomerase em frutose−6−fosfato que entra na via
glicolítica.
Galactose
ADP
ATP
Galactocinase
Galactose-1-fosfato
Galactose-1-fosfato
uridiltransferase
UDP - Glicose
UDP - Galactose
UDP - Galactose-epimerase
PP
UTP
Glicose-1-fosfato
Fosfoglicomutase
Glicose-6-fosfato
UDP - Glicose
pirofosforilase
i

Manose
Hexocinase
Manose-6-fosfato
Fosfomanose
isomerase
Frutose-6-fosfato
Figura 6.20
Metabolismo da manose.
Resumo
1. O metabolismo dos carboidratos está centrado na glicose porque esse
açúcar é uma molécula combustível importante para a maioria dos
organismos. Se as reservas de energia são baixas, a glicose é degradada
pela via glicolítica. As moléculas de glicose não utilizadas para a
produção imediata de energia são armazenadas como glicogênio (em
animais) ou amido (em vegetais).
2. Durante a glicólise (seqüência de 10 reações), a glicose é fosforilada e
clivada para formar duas moléculas de gliceraldeído−3−fosfato. Cada
gliceraldeído−3−fosfato é então convertido em uma molécula de
piruvato. Uma pequena quantidade de energia é armazenada em
moléculas de ATP e NADH. Em organismos anaeróbicos, o piruvato é
reduzido a lactato. Durante esse processo, o NAD+
é regenerado para a
continuação da glicólise. Na presença de O2, os organismos aeróbicos
convertem o piruvato a acetil−CoA e, então, a CO2 e H2O. A glicólise é
controlada principalmente por regulação alostérica de três enzimas –
hexocinase, fosfofrutocinase 1 (PFK−1) e piruvato−cinase e pelos
hormônios insulina e glucagon.
3. Durante a gliconeogênese, moléculas de glicose são sintetizadas a partir
de precursores não−carboidratos (lactato, piruvato, glicerol e certos
aminoácidos). A seqüência de reações na gliconeogênese corresponde a
reações da via glicolítica, mas no sentido inverso. As três reações
irreversíveis da glicólise (síntese do piruvato, conversão da
frutose−1,6−bifosfato a frutose−6−fosfato e a formação de glicose a
partir da glicose−6−fosfato) são substituídas na gliconeogênese por
reações energeticamente favoráveis.
4. A via das pentoses-fosfato, na qual a glicose-6-fosfato é oxidada, ocorre
em duas etapas. Na etapa oxidativa, duas moléculas de NADPH são
produzidas enquanto a glicose−6−fosfato é convertida em
ribulose−5−fosfato. Na etapa não−oxidativa, a ribose−5−fosfato e outros
açúcares são sintetizados. Se a célula necessita mais NADPH que
ribose−5−fosfato (componente dos nucleotídeos e ácidos nucléicos)
então os metabólitos da etapa não−oxidativa são convertidos em
intermediários glicolíticos.
5. Vários açúcares diferentes da glicose são importantes no metabolismo
dos vertebrados. Entre eles estão: frutose, galactose e a manose.

6. O substrato para a síntese de glicogênio é a UDP−glicose, uma forma
ativada do açúcar. A UDP−glicose−pirofosforilase catalisa a formação de
UDP−glicose a partir da glicose−1−fosfato e UTP. A glicose−6−fosfato é
convertida em glicose−1−fosfato pela fosfoglicomutase. Para formar o
glicogênio são necessários duas enzimas: a glicogênio sintase e a enzima
de ramificação. A degradação do glicogênio requer a glicogênio-
fosforilase e a enzima de desramificação. O equilíbrio entre glicogênese
(síntese do glicogênio) e glicogenólise (clivagem do glicogênio) é
regulada por vários hormônios (insulina, glucagon e adrenalina).
Referências
419-36.

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Ciclo do Ácido
Cítrico
Capítulo
7

191
7
Ciclo do Ácido Cítrico
Objetivos
1. Descrever a obtenção de acetil−CoA pela descarboxilação oxidativa do
piruvato nas mitocôndrias.
2. Reconhecer que o ciclo do ácido cítrico é a via de oxidação do grupo acetila da
acetil−CoA com formação de três NADH e de um FADH2 além da formação de
um ATP (ou GTP) por fosforilação ao nível do substrato.
3. Identificar a reação catalisada pela citrato−sintase como a primeira reação do
ciclo do ácido cítrico e reconhecer as substâncias participantes.
4. Identificar as substâncias participantes das reações do ciclo do ácido cítrico
catalisadas por: isocitrato−desidrogenase, complexo do α−cetoglutarato,
succinil−CoA−sintetase (succinato−tiocinase), succinato desidrogenase e
malato−desidrogenase.
5. Explicar a reação catalisada succinil−CoA−sintetase (succinato tiocinase) na
formação de ATP ao nível do substrato.
6. Calcular o número de compostos de “alta energia” (ATP) sintetizados pela
oxidação de um mol acetil−CoA no ciclo do ácido cítrico.
7. Descrever os mecanismos de regulação do ciclo do ácido cítrico.
8. Descrever a entrada e saída de intermediários do ciclo do ácido cítrico.
O ciclo do ácido cítrico (também chamado de ciclo de Krebs ou
ciclo dos ácidos tricarboxílicos) é o estágio final da oxidação dos
combustíveis metabólicos. Os átomos de carbono entram no ciclo na
forma de grupos acetila derivados dos carboidratos, ácidos graxos e
aminoácidos. O grupo acetila ligado a coenzima A (acetil-CoA) é
oxidado em oito reações mitocondriais para formar duas moléculas de
CO2 com a conservação da energia livre liberada em três moléculas
de NADH, uma de FADH2 e um composto de “alta energia” (GTP ou
ATP). O NADH e o FADH2 são oxidados e os elétrons são conduzidos
pela cadeia mitocondrial transportadora de elétrons com a liberação
de energia conservada na forma de ATP sintetizado a partir de ADP e
Pi por meio de processo denominado fosforilação oxidativa (ver
Capítulo 8). A reação líquida para o ciclo do ácido cítrico é:

Quadro 7.1 Descoberta do ciclo do ácido cítrico
A operação do ciclo do ácido cítrico foi deduzida
por Hans Krebs em 1937 a partir de observações
sobre a velocidade de consumo de oxigênio durante
a oxidação do piruvato por suspensões de músculos
peitorais de pombos. Esses músculos ativos no vôo,
exibem uma velocidade de respiração muito alta e
são apropriados para as investigações metabólicas.
O consumo de oxigênio foi monitorado com o auxílio
de um manômetro, um aparelho que permite a
medida das alterações no volume de um sistema
fechado a pressão e temperatura constantes.
Estudos anteriores, principalmente os realizados
por Albert Szent−Györgyi (1935), mostraram que o
succinato, o fumarato, o malato e o oxaloacetato
estimulavam o consumo de oxigênio por esses
músculos. Krebs mostrou que o piruvato também
aumentava o consumo de oxigênio.
Além disso, ele também observou que a
oxidação do piruvato podia ser grandemente
estimulada pelo oxaloacetato, cis-aconitato, isocitrato
e α-cetoglutarato. Os efeitos dessas substâncias
eram completamente suprimidos pela adição de
malonato, um inibidor competitivo da
succinato−desidrogenase. A adição do malonato
também acumulava citrato, α−cetoglutarato e
succinato. Pelo fato da adição do piruvato e
oxaloacetato à suspensão ter resultado no acúmulo
de citrato, Krebs concluiu que a via operava como um
ciclo. Somente em 1951 foi demonstrado que a
acetil-CoA é o intermediário que condensa com o
oxaloacetato para formar citrato.
Krebs publicou sua descoberta no periódico
Enzimologia já que a revista Nature recusou o artigo
original.
Acetil−CoA + 3 NAD+
+ FAD + GDP + Pi + 2 H2O →
2 CO2 + 3 NADH + FADH2 + CoASH + GTP + 3 H+
Além do papel na geração de energia, o ciclo do ácido cítrico
também é fonte de unidades monoméricas para a biossíntese de
carboidratos, lipídeos e aminoácidos não-essenciais.
Nesse contexto será examinado como o piruvato, derivado da
glicose e outros açúcares através da via glicolítica, é oxidado à
acetil−CoA e CO2 para entrar no ciclo do ácido cítrico (Figura 7.1).
O piruvato atravessa a membrana externa da mitocôndria via
canais aquosos de proteínas transmembranas chamados porinas (ver
Seção 9.4). A piruvato−translocase, uma proteína da membrana
mitocondrial interna, transporta especificamente o piruvato do espaço
intermembrana para a matriz mitocondrial em simporte com o H+
(ver
Seção 9.4.B).
Ciclo do
ácido cítrico
2CO2
GTP
8e
Acetil-CoA
CO2
2e
Piruvato
Figura 7.1
Associação da glicólise e o ciclo do ácido cítrico. O piruvato produzido
na glicólise é convertido em acetil−CoA, o combustível do ciclo do ácido
cítrico. Os elétrons removidos são transportados pelo NADH e FADH2 para a
cadeia mitocondrial transportadora de elétrons no interior das mitocôndrias

7 Ciclo do ácido cítrico • 193
que fornece energia para a síntese de ATP.
7.1 Oxidação do piruvato a acetil−CoA e CO2
Sob condições aeróbicas, o piruvato presente na matriz
mitocondrial é convertido em CO2 e um fragmento de dois carbonos,
a acetil−CoA em reação de descarboxilação oxidativa. A reação é
catalisada pelo complexo da piruvato−desidrogenase constituído por
três enzimas distintas: a piruvato−desidrogenase (E1), a
diidrolipoil−transacetilase (E2) e a diidrolipoi−desidrogenase (E3)
associadas de modo não-covalente e cinco diferentes coenzimas. O
complexo está localizado exclusivamente na mitocôndria das células
eucarióticas. Devido a grande energia livre padrão negativa dessa
reação sob condições fisiológicas, o processo é irreversível o que
impede a reação inversa de formação do piruvato a partir do
acetil−CoA.
A operação do complexo da piruvato desidrogenase requer cinco
coenzimas cujos papéis funcionais são descritos a seguir.
1. Descarboxilação oxidativa do piruvato. A reação requer o co-fator
pirofosfato de tiamina (TPP) ligado à enzima
piruvato−desidrogenase (E1). O TPP ataca o carbono da carbonila
do piruvato e libera o CO2 deixando o grupo hidroxietil ligado ao
TPP para formar o hidroxietil−TPP (HETTP).
2. Transferência do grupo hidroxietil do HETTP para a
diidrolipoil−transacetilase (E2). O aceptor do hidroxietil é o
H O C CH3
CO2
H+
N
O C C CH3
C S
+
CH3
N
C S
+
CH3
C
O O
+
C O
CH3
O OH
N
C S
+
CH3
Piruvato
Hidroxietil-TPP
Citosol Matriz mitocondrial
NAD NADH,H
Complexo piruvato
desidrogenase
COO
C O
CH3
H
Piruvato
translocase
+ + +
HS-CoA CO2
S-CoA
C O
CH3
Piruvato Acetil-CoA
Piruvato

grupo prostético lipoamida. A reação de transferência regenera o
TPP da E1 e oxida o grupo hidroetil a um grupo acetila.
3. Transferência do grupo acetila para a coenzima A, em reação
catalisada pela diidrolipoil−transacetilase.
4. Regeneração do complexo da piruvato−desidrogenase original. O
grupo diidrolipoato da E2 é reduzido pela flavina adenina
dinuclotídeo (FAD) em presença de diidrolipoil−desidrogenase
com a regeneração do lipoato.
CoA SH
C
O CH3
S
HS
Coenzima A
Acetil CoA
CoA S C CH3
O
+
HS
HS
N
H O C CH3
S
S
C S
+
CH3
H+
N
H O C CH3
HS
S
C S
+
CH3
N
HS
S
C S
+
CH3
C
O CH3
S
S CH2
CH2
CH2
CH CH CH CH C NH (CH ) CH2 2 2 2 2 4
O NH
C O
Lipoamina
Ácido lipóico Lis
Lipoamina
H+

5. A FADH2 é reoxidada pela transferência dos elétrons para o
NAD+
para formar NADH. O NADH transfere os elétrons para a
cadeia mitocondrial transportadora de elétrons que está acoplada
à síntese de 2,5 moléculas de ATP por meio da fosforilação
oxidativa. A reação total de conversão de piruvato a acetil−CoA é
altamente exergônica ∆G°′ = −33,5 kJ·mol−1
. Como para cada
molécula de glicose, 2 piruvato são formados pela glicólise, são
sintetizadas 5 moléculas de ATP.
A representação esquemática da operação do complexo da
piruvato−desidrogenase está resumida na Figura 7.2.
A atividade do complexo da piruvato−desidrogenase é regulada
por mecanismos alostéricos e covalentes. O complexo é ativado e
inibido alostericamente pelos efetores mostrados no Quadro 7.1.
Quadro 7.1 – Principais efetores alostéricos do complexo da piruvato−desidrogenase.
Efetores positivos (ativadores) Efetores negativos (inibidores)
Coenzima A ATP
NAD+
NADH
AMP Acetil−CoA
Ca2+
Ácidos graxos de cadeia longa
HS
HS
FAD FADH2
S
S
FADH2 FAD
NAD+
NADH + H+

Figura 7.2
Operação do complexo da piruvato-desidrogenase. TTP = pirofosfato de tiamina. O lipoato tem dois
grupos tiós (−SH) que formam uma ligação dissulfeto (−S−S−) por oxidação.
Os mecanismos de regulação alostérica do complexo são
complementados por modificações covalentes de proteínas. O
complexo é inibido por fosforilação pela ação de proteína-cinase
(altos teores de piruvato, CoASH e NAD+
inibem a cinase) e ativado
por desfosforilação pela ação de fosfatases quando os níveis de [ATP]
mitocondrial declinam.
A seguir a fórmula d coenzima A (CoA):
TPP
Hidroxietil-TPP
Lipoamida
FAD
S
S
CO2
NADH + H+
NAD+
Piruvato
CH C C3
O O
O
1 2
CH C TPP3
OH
HS
SCH C3
O
S
S
HS
HS
Acetil-diidrolipoamida
FAD
SH
SH
3
4
5
CoA
S CoACH C3
O
Acetil-CoA
Piruvato
desidrogenase
Diidrolipoil
transacetilase
Diidrolipoil
desidrogenase

A. Destinos metabólicos do acetil-CoA
Os principais destinos metabólicos do acetil−CoA produzido na
mitocôndria incluem: (1) completa oxidação do grupo acetila no ciclo
do ácido cítrico para a geração de energia; (2) conversão do excesso
de acetil−CoA em corpos cetônicos (acetoacetato, β−hidroxibutirato e
acetona) no fígado; (3) transferência de unidades acetila para o
citosol com a subseqüente biossíntese de moléculas complexas como
os esteróis e ácidos graxos de cadeia longa.
S C CH
CH2
CH
NH
C O
CH
CH
NH
2
2
C O
HO C H
H C C CH
CH O P O P O2
Resíduo de
-mercaptoetilamida
N
N
N
NH2
H
O
O
H
H
H
OH
2CH
N
2
3 O O
O O
Adenosina-3-fosfato
Resíduo de
ácido pantotênico
O P O
O
3
O
3
Grupo acetil
Acetil-coenzima A (acetil-CoA)
´
α

Figura 7.3
Destinos do acetil-CoA
7.2 Reações do ciclo do ácido cítrico
A oxidação de acetil−CoA é realizada pelo ciclo do ácido cítrico
em oito reações sucessivas onde entra o grupo acetila (dois carbonos)
e saem duas moléculas de CO2. (Figura 7.4).
Acetil-CoA
Piruvato Aminoácidos Ácidos graxos
Ciclo do ácido
cítrico
Corpos cetônicos Esteróis-ácidos
graxos

Figura 7.4
Reações do ciclo do ácido cítrico. O ciclo oxida duas unidades de carbono com a produção de duas moléculas de
CO2, uma molécula de GTP, três moléculas de NADH e uma molécula de FADH2.
1. Condensação da acetil-CoA com o oxaloacetato. A etapa
inicial do ciclo do ácido cítrico é a condensação do acetil−CoA com o
HO C COO
CH
COO
CH2
2
COO
Citrato
Acetil-CoA
CoASH
H O2
CH C S CoA
O
3
1. Citrato-
sintase
CH
C O
COO
COO
2
Oxaloacetato
NADH
NAD+
8. Malato-
desidrogenase
HO C COO
CH
COO
HO C H
2
COO
Isocitrato
2. Aconitase
Ciclo do
ácido cítrico
CH
COO
HO C H
2
COO
L-Malato
7. Fumarase
H O2
HC
CH
COO
COO
Fumarato
FAD
FADH2
6. Succinato-
desidrogenase
Succinil-CoA
CoASH
5. Succinil-
CoA-sintetase
Succionato
CH2
COO
CH2
COO
GTP
GDP + Pi
CoASH
CO2
NADH
NAD+
4. -Cetoglutarato-
desidrogenase
CH
C O
2
COO
CH2
COO
CH
C O
2
COO
CH2
S Coa
-Cetoglutarato
NAD+
NADH
CO2
3. Isocitrato-
desidrogenase

oxalacetato para formar citrato e CoA livre, em reação irreversível
catalisada pela citrato−sintase. A condensação aldólica ocorre entre o
grupo metílico da acetil−CoA e o grupo carboxílico do oxaloacetato,
com hidrólise da ligação tioéster e a produção de coenzima A livre. A
reação é altamente exergônica (∆G°′ = −31,5 kJ·mol−1
).
C
CH2
COO
-
COO
-
O
+ CoA S C CH3
O
+ OH2 C
CH2
COO
-
CH2
COO
-
OH COO
-
+ CoA SH
A citrato-sintase é inibida pelo ATP, NADH, succinil−CoA e
ésteres acil−CoA graxos. A velocidade de reação é determinada pela
disponibilidade de acetil−CoA e do oxaloacetato. O citrato também
está envolvido na regulação de outras vias metabólicas (inibe a
fosfofrutocinase na glicólise e ativa a acetil−CoA−carboxilase na
síntese dos ácidos graxos) e como fonte de carbono e equivalentes
redutores para vários processos de síntese.
Além da condensação com o acetil−CoA para formar citrato, o
oxaloacetato pode ser transformado em piruvato, glicose
(gliconeogênese) e aspartato.
2. Isomerização do citrato em isocitrato via cis−aconitato. A
aconitase catalisa a isomerização reversível do citrato e do isocitrato,
por meio do intermediário cis−aconitato. A mistura em equilíbrio
contém 90% de citrato, 4% de cis−aconitato e 6% de isocitrato. No
meio celular, a reação é deslocada para a direita, porque o isocitrato é
rapidamente removido na etapa seguinte do ciclo. A aconitase contém
um centro ferro−enxôfre que atua tanto na ligação do substrato como
na catálise da reação.

3. Descarboxilação oxidativa do isocitrato para formar
α-cetoglutarato, o primeiro NADH e CO2. Na etapa seguinte, o
isocitrato é oxidado a α−cetoglutarato pela enzima alostérica
isocitrato−desidrogenase−NAD+
−dependente. Junto à oxidação ocorre
a perda simultânea de CO2 (remoção do grupo β-carboxílico). A
enzima necessita Mg2+
ou Mn2+
e é ativada pelo ADP e inibida pelo
ATP e NADH.
4. Oxidação e descarboxilação do α−cetoglutarato para formar
succinil−CoA, o segundo NADH e CO2. A conversão do
α−cetoglutarato em um composto de “alta energia”, a succinil−CoA, é
catalisada pelo complexo enzimático α−cetoglutarato−desidrogenase.
A reação é semelhante à reação do complexo da piruvato-
desidrogenase utilizada na transformação do piruvato em acetil−CoA.
Participam da reação a tiamina pirofosfato, lipoato, coenzima A, FAD
e NAD+
. O complexo multienzimático consiste da
α−cetoglutarato−desidrogenase, diidrolipoil−transuccinilase e
diidrolipoil−desidrogenase como três unidades catalíticas. A reação
produz a segunda molécula de CO2 e o segundo NADH do ciclo. O
complexo é inibido pelo ATP, GTP, NADH, succinil−CoA e Ca2+
.
COO
CH
HO C COO
2
COO
2
CH
Citrato
H O2
COO
CH
C COO
COO
2
CH
Aconitase
H O2
COO
CH
H C COO
COO
2
HO C H
Isocitrato
COO
CH
H C C
C
2
HO C H
Isocitrato
CO2
O O
O
O
NAD+
H + NADH+
COO
CH
H C C
C
2
C O
O O
O
O
COO
CH
H C
C
2
C O
O O
H+
COO
CH
H C H
C
2
C O
O O
-Cetoglutaratoα

5. Clivagem da succinil−CoA com formação de GTP. A
succinil−CoA−sintetase (succinato−tiocinase) hidrolisa a ligação
tioéster de “alta energia” da succinil−CoA (∆G°′ = −32,6
kJ·mol−1
)para formar succinato. A energia liberada é conservada como
trifosfato de guanosina (GTP) produzida a partir de GDP + Pi (∆G°′
= −30,5 kJ·mol−1
), em uma fosforilação ao nível do substrato. O teor
energético do GTP é equivalente ao do ATP.
CH2
CH2
C
S
COO
-
O
CoA
+ GTP + Pi
CH2
CH2
COO
-
COO
-
+ GTP + CoA SH
Em presença da nucleosídio−difosfato−cinase e Mg2+
, o GTP é
convertido reversivelmente em ATP:
GTP + ADP GDP + ATP
6. Oxidação do succinato para formar fumarato e FADH2. O
succinato é oxidado a fumarato pela succinato−desidrogenase. Essa
enzima necessita de flavina adenina dinucleotídio (FAD) ligada
covalentemente. Nas células dos mamíferos, a enzima está
firmemente ligada à membrana mitocondrial interna sendo um
componente da succinato−ubiquinona, um complexo multiprotéico
que participa da cadeia mitocondrial transportadora de elétrons. A
succinato−desidrogenase é fortemente inibida competitivamente pelo
malonato e ativada pelo ATP, fósforo inorgânico e succinato.
COO
H C O
COO
C
C
OOC
FumaratoSuccinato
H C H Succinato-desidrogenase
H
COOHEnz-FAD Enz-FADH2
COO
CH CoASH CO
CH2
COO
2
2
C O
COO
CH
CH2
S CoA
2
C ONAD+
NADH
-Cetoglutaratoα Succinil-CoA

Os co-fatores participam da transferência de elétrons do succinato
para a ubiquinona.
7. Hidratação da liga dupla do fumarato para formar malato e
o terceiro NADH. O fumarato é hidratado a L−malato pela enzima
fumarase. A enzima é estereoespecífica e catalisa a hidratação da
dupla ligação trans do fumarato.
8. Oxidação do malato a oxaloacetato. A reação final do ciclo é
catalisada pela malato-desidrogenase com a formação de oxaloacetato
e NADH. A posição de equilíbrio dessa reação está deslocada quase
totalmente para a síntese do L−malato (∆G°′= +29,7 kJ·mol−1
).
Entretanto, a rápida remoção do oxaloacetato pela citrato sintase para
a formação de citrato, possibilita a oxidação do malato.
Além da condensação com a acetil−CoA para formar citrato, o
oxaloacetado pode ser transformado em piruvato, glicose
(neoglicogênese) e aspartato (ver Metabolismo dos aminoácidos).
A. Energia no ciclo do ácido cítrico
O ciclo do ácido cítrico é a via oxidativa terminal para a maioria
dos combustíveis metabólicos (piruvato, aminoácidos e ácidos
graxos). Os dois carbonos do grupo acetila que participam do ciclo
são oxidados completamente a CO2 e H2O. A energia liberada por
essas oxidações é conservada na forma de três NADH, um FADH2 e
uma molécula de GTP (ou ATP). Para cada NADH que transfere seus
elétrons para a cadeia mitocondrial transportadora de elétrons (ver
Capítulo 8: Fosforilação oxidativa), aproximadamente 2,5 ATP são
produzidos a partir de ADP + Pi. Para cada FADH2, cerca de 1,5 ATP
são produzidos. Assim, a completa oxidação do grupo acetila da
acetil−CoA no ciclo do ácido cítrico produz 10 ATP.
COO
H C OH
Fumarase
COO
COO
CH
HC
COO
Fumarato Malato
H C H
H O2
COO
H C OH
NAD NAD + H
Malato-desidrogenaseCH2
COO
COO
C O
CH2
COO
+ +
Malato Oxaloacetato
Enzima-FADH Enzima-FAD2
Q QH2

B. Regulação do ciclo do ácido cítrico
O ciclo do ácido cítrico possui vários níveis de controle para que
as necessidades energéticas e biossintéticas das células sejam
constantemente atingidas. A disponibilidade de substratos (acetil-
CoA, NAD+
, FAD e ADP), a demanda por precursores biossintéticos
provenientes do ciclo do ácido cítrico e a necessidade de ATP
determinam a velocidade de operação do ciclo.
O suprimento de grupos acetil derivados do piruvato
(carboidratos) ou de ácidos graxos (lipídios) é fundamental na para a
velocidade do ciclo. A velocidade é influenciada por controles
exercidos sobre o complexo da piruvato−desidrogenase (inibido por
acetil−CoA, ATP e NADH e ativado por CoA, ADP e NAD+
) e pela
regulação dos processos de transporte e β−oxidação dos ácidos
graxos.
Relação [NADH]/[NAD+
]. Elevadas concentrações de NADH
inibem alostericamente as três enzimas controladoras do ciclo: a
citrato−sintase, a isocitrato−desidrogenase e a
α−cetoglutarato−desidrogenase. A isocitrato−desidrogenase pode
também ser inibida pelo ATP.
Os intermediários do ciclo podem afetar a atividade de algumas
enzimas. A succinil−CoA inibe o complexo
α−cetoglutarato−desidrogenase e a citrato−sintase. O oxaloacetato
inibe a succinato−desidrogenase. Teores de Ca2+
intramitocondrial
também são importantes na regulação do ciclo do ácido cítrico. A
piruvato−desidrogenase é ativada pelo cálcio através da ação do
cátion sobre a fosfatase regulatória. A isocitrato−desidrogenase e a
α−cetoglutarato−desidrogenase são estimuladas mais diretamente
pelos íons Ca2+
.
Alguns intermediários do ciclo do ácido cítrico podem influenciar
o fluxo em outras vias, por exemplo, as enzimas glicolíticas
fosfofrutocinase e piruvato−cinase, são inibidas pelo citrato e
succinil−CoA, respectivamente.
A Figura 7.5 mostra a regulação do fluxo metabólico no ciclo do
ácido cítrico.

Figura 7.5
Regulação do fluxo metabólico do ciclo do ácido cítrico
7.3 Entrada e saída de intermediários do ciclo do
ácido cítrico
O ciclo do ácido cítrico tem papel central no catabolismo de
carboidratos, ácidos graxos e aminoácidos, com liberação e
conservação de energia. Entretanto, o ciclo também está envolvido no
fornecimento de precursores para muitas vias biossintéticas. O ciclo
do ácido cítrico é, portanto, anfibólico (anabólico e catabólico). Os
intermediários do ciclo (exceto o isocitrato e o succinato) são
precursores ou produtos de várias moléculas biológicas. Por exemplo,
a succinil−CoA é precursora da maioria dos átomos de carbono das
porfirinas. Os aminoácidos aspartato e glutamato podem ser
provenientes do oxaloacetato e α−cetoglutarato, respectivamente, via
reações de transaminação. A síntese de ácidos graxos e colesterol no
citosol necessita de acetil−CoA gerada a partir do citrato que
Acetil-CoA
Citrato
sintase
CoA-SH
H O2
Aconitase
Aconitase
-Cetoglutarato
Isocitrato
desidrogenase
Succinil-CoA
Complexo da
-cetoglutarato
desidrogenase
Citrato
Succinato
Succinil-CoA
sintetase
Succinato
desidrogenase
Fumarato
Malato
Fumarase
Oxaloacetato
Malato
desidrogenase
CO2
Cis-aconitato
CO2
NADH, ATP, Citrato
NAD ,ADP, Ca+
NADH, ATP
NADH
Ca2+
2+
Isocitrato

atravessa a membrana mitocondrial (ver Capítulo 10: Metabolismo
dos lipídeos).
Quadro 7.2 Ciclo do glioxilato
Nos vegetais, em certos microrganismos e em
levedura é possível sintetizar carboidratos a partir de
substratos de dois carbonos como o acetato e etanol,
por meio de uma via alternativa chamada ciclo do
glioxilato. A via emprega as enzimas do ciclo do
ácido cítrico, além de duas enzimas ausentes nos
tecidos animais: a isocitrato−iase e a
malato−sintase. Pela ação da isocitrato−liase, o
isocitrato é clivado em succinato e glioxilato. O
glioxilato condensa com uma segunda molécula de
acetil-CoA sob a ação da malato-sintase (em reação
análoga àquela catalisada pela citrato-sintase no
ciclo do ácido cítrico) para formar malato.
O malato passa para o citosol, onde é oxidado a
oxaloacetato, que pode ser transformado em glicose
pelas reações da gliconeogênese ou se condensar
com outra molécula de acetil−CoA e iniciar outra
volta do ciclo.
Nas plantas, o ciclo do glioxalato está localizado
em organelas chamadas glioxissomos.
Os animais vertebrados não apresentam o ciclo
do glioxilato e não podem sintetizar glicose a partir
de acetil−CoA. Nas sementes em germinação, as
enzimas do ciclo do glioxilato degradam os ácidos
graxos que são convertidos em glicose, precursor da
celulose.
Os intermediários do ciclo do ácido cítrico desviados para a
biossíntese de novos compostos devem ser repostos por reações que
permitam restabelecer seus níveis apropriados. Além disso, as
flutuações nas condições celulares podem necessitar de aumento na
atividade do ciclo, o que requer a suplementação de intermediários. O
processo de reposição de intermediários do ciclo é chamado
anaplerose (do grego, preencher completamente). A produção de
oxaloacetato permite a entrada do grupo acetila no ciclo do ácido
cítrico (oxaloacetato + acetil−CoA → citrato) e é a mais importante
reação anaplerótica.
Em deficiências de qualquer dos intermediários do ciclo, o
oxaloacetato é formado pela carboxilação reversível do piruvato por
CO2, em reação catalisada pela piruvato−carboxilase que contém
biotina como coenzima. O excesso de acetil-CoA ativa
alostericamente a enzima.
Piruvato + CO2 + ATP + H2O oxaloacetato + ADP + Pi
As reações do ciclo convertem o oxaloacetato nos intermediários
deficientes para que se restabeleça sua concentração apropriada.
A síntese do oxaloacetato ocorre também a partir do
fosfoenolpiruvato e é catalisada pela
fosfoenolpiruvato−carboxicinase presente tanto no citosol como na
matriz mitocondrial. A enzima é ativada pelo intermediário glicolítico
frutose−1,6−bifosfato, cuja concentração aumenta quando o ciclo do
ácido cítrico atua lentamente.
Fosfoenolpiruvato + CO2 + GDP oxaloacetato + GTP
Pela ação conjunta das duas enzimas malato−desidrogenase
(“enzima málica”), o malato (e o oxaloacetato) pode ser produzido a
partir do piruvato:
Piruvato + CO2 + NAD(P)H malato + NAD(P)+
Outras reações que abastecem o ciclo do ácido cítrico incluem a
succinil-CoA, um produto do catabolismo de ácidos graxos de cadeia
ímpar, e os α−cetoácidos a partir do α−cetoglutarato e oxaloacetato

provenientes dos aminoácidos glutamato e aspartato, respectivamente,
via reações de transaminação.
Por reversão de reações anapleróticas, os intermediários do ciclo
do ácido cítrico servem como precursores de glicose. Essa função é
demonstrada em certas espécies de microrganismos e plantas que
utilizam o ciclo do glioxilato na síntese de carboidratos a partir da
acetil−CoA.
Figura 7.6
Papel biossintético do ciclo do ácido cítrico. Os intermediários do ciclo do
ácido cítrico são precursores biossintéticos de vários compostos.
Resumo
1. Os organismos aeróbicos empregam o oxigênio para gerar energia a
partir de combustíveis metabólicos por vias bioquímicas: ciclo do ácido
cítrico, cadeia mitocondrial transportadora de elétrons e fosforilação
oxidativa.
2. O ciclo do ácido cítrico é uma série de oito reações sucessivas que
oxidam completamente substratos orgânicos, como carboidratos, ácidos
graxos e aminoácidos para formar CO2, H2O e coenzimas reduzidas
NADH e FADH2. O piruvato, o produto da via glicolítica, é convertido a
acetil−CoA, o substrato para o ciclo do ácido cítrico.
3. Os grupos acetila entram no ciclo do ácido cítrico como acetil−CoA
produzidos a partir do piruvato por meio do complexo multienzimático
da piruvato−desidrogenase que contêm três enzimas e cinco coenzimas.
4. Além do papel gerador de energia, o ciclo do ácido cítrico também
exerce importantes papéis, biossíntese de glicose (gliconeogênese), de
aminoácidos, de bases nucleotídicas e de grupos heme.
5. O ciclo do glioxilato, encontrado em alguns vegetais e em alguns fungos,
é uma versão modificada do ácido cítrico no qual as moléculas de dois
carbonos, como o acetato, são convertidos em precursores da glicose.
Piruvato
Citrato
-Cetoglutarato
Succinil-CoA
Oxaloacetato
Acetil-CoA
Ácidos graxos,
esteróis
Glutamato
Glutamina
Argina
Prolina
Purinas
Pirimidinas
Porfirinas,
heme, clorofila
Asparato
Outros
aminoácidos,
purinas,
pirimidinas
Ciclo do
ácido cítrico
α

Referências
CAMPBELL, M. K. Bioquímica. 3 ed. Porto Alegre: ArtMed, 2000. p. 492-519.
Paulo: Sarvier, 2002. p. 441-64.
MOTTA, V. T. Bioquímica clínica para o laboratório: princípios e
interpretações. 4 ed. Porto Alegre: Editora Médica Missau, 2003. p. 75-103.

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Fosforilação
Oxidativa
Capítulo
8

209
8
Fosforilação Oxidativa
Objetivos
1. Ordenar os componentes da cadeia mitocondrial transportadora de elétrons,
de acordo com seus potenciais redox.
2. Calcular a energia livre padrão da oxidação de um composto, dado o potencial
redox padrão.
3. Comparar a energia livre padrão de oxidação de um mol de FADH2 e de 1 mol
de NADH na cadeia respiratória, até a formação de H2O.
4. Explicar como a energia da oxidação de substâncias pode ser utilizada para a
síntese de ATP.
5. Explicar a síntese de ATP pela fosforilação oxidativa através da hipótese
quimiosmótica.
6. Comparar os efeitos de um inibidor da oxidação, de um inibidor da fosforilação
e de um desacoplador, sobre o consumo de oxigênio e sobre a produção de
ATP.
7. Explicar os mecanismos do estresse oxidativo
A degradação de moléculas nutrientes gera um número reduzido
de moléculas de ATP diretamente pela fosforilação ao nível do
substrato. No entanto, as etapas oxidativas da glicólise, ciclo ácido
cítrico, β-oxidação dos ácidos graxos e da degradação de alguns
aminoácidos produzem ATP indiretamente. Isso ocorre pela
reoxidação das coenzimas NADH e FADH2 formadas pela oxidação
de macromoléculas e que transferem seus elétrons para o O2 por meio
da cadeia mitocondrial transportadora de elétrons. A cadeia é
formada por complexos protéicos (centros redox) localizados na
membrana mitocondrial interna e ligados firmemente a grupos
prostéticos capazes de aceitar e doar elétrons (reações de oxidação-
redução). Grande parte da energia liberada no sistema bombeia
prótons para fora da matriz mitocondrial, gerando um gradiente
eletroquímico de H+. O retorno dos prótons para a matriz
mitocondrial libera energia livre que é canalizada para a síntese de
ATP a partir de ADP e Pi, por meio da fosforilação oxidativa. Essa é a
maior fonte de ATP nas células eucarióticas. Existe um estreito
acoplamento entre a cadeia mitocondrial transportadora de elétrons e
a síntese de ATP pela fosforilação oxidativa nas mitocôndrias. O ATP
é um transdutor energético universal dos sistemas vivos que é
utilizado na condução da maioria das reações dependentes de energia.

As necessidades energéticas diárias de um homem de 70 kg em
ocupação sedentária é, aproximadamente, 10.000 kJ. A energia livre
padrão de hidrólise do ATP é −30,5 kJ·mol−1
. Esse indivíduo deve,
portanto, hidrolizar o equivalente a 328 moléculas ou 165 kg de ATP
por dia, no entanto, o corpo contém somente cerca de 50 g de ATP. O
cálculo sugere que cada molécula de ATP é sintetizada e
desfosforilada mais de 3.000 vezes a cada 24 horas para suprir de
energia as atividades do organismo. O atendimento da maior parte
dessas necessidades tem lugar na membrana mitocondrial interna e é
realizada por dois sistemas acoplados: a cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons e a fosforilação oxidativa.
8.1 Estrutura mitocondrial
Os processos de liberação e conservação da maior parte de
energia livre nas células aeróbicas são realizados nas mitocôndrias. O
número de mitocôndrias em diferentes tecidos reflete a função
fisiológica do mesmo e determina a capacidade de realizar funções
metabólicas aeróbicas. O eritrócito, por exemplo, não possui
mitocôndrias e, portanto, não apresenta a capacidade de liberar
energia usando o oxigênio como aceptor terminal de elétrons. Por
outro lado, a célula cardíaca apresenta metade de seu volume
citosólico composto de mitocôndrias e é altamente dependente dos
processos aeróbicos.
A mitocôndria é formada por duas membranas com diferentes
propriedades e funções biológicas. A membrana externa lisa é
composta de lipídeos (fosfolipídeos e colesterol) e proteínas, com
poucas funções enzimáticas e de transporte. Contêm unidades da
proteína porina, que formam canais transmembrana onde ocorre a
livre difusão de vários íons e de moléculas pequenas.
Matriz Cristas Membran
a interna
Membran
a externa

8 Fosforilação oxidativa • 211
Figura 8.1
Mitocôndria. (a) Acima: diagrama de um corte de uma mitocôndria. (b)
Abaixo: microfotografia eletrônica
A membrana mitocondrial interna é composta de 75% de
proteínas e contêm as enzimas envolvidas no transporte de elétrons e
na fosforilação oxidativa. Contêm também, enzimas e sistemas de
transporte que controlam a transferência de metabólitos entre o
citosol e a matriz mitocondrial. Ao contrário da membrana externa, a
interna é virtualmente impermeável para a maioria das moléculas
polares pequenas e íons. A impermeabilidade da membrana
mitocondrial interna promove a compartimentalização das funções
metabólicas entre o citosol e a mitocôndria. Os compostos se movem
através da membrana mitocôndrial mediados por proteínas específicas
denominadas carreadores ou translocases. A membrana mitocondrial
interna apresenta pregas voltadas para o interior (circunvoluções),
chamadas cristas que aumentam a superfície da membrana e cujo
número reflete a atividade respiratória da célula.
O espaço entre a membrana externa e a membrana interna é
conhecido como espaço intermembranas e é equivalente ao citosol
quanto as suas concentrações em metabólitos e íons. A região
delimitada pela membrana interna é denominada matriz mitocondrial.
Os principais características bioquímicas das mitocondriais são:
• Membrana externa. Livremente permeável a moléculas pequenas
e íons.
• Membrana interna. Impermeável à maioria das moléculas
pequenas e íons, incluindo o H+
, Na+
, K+
, ATP, ADP, Ca2+
, P, o
piruvato, etc. A membrana contêm: cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons, ADP-ATP−translocases, ATP−sintase
(FoF1) e outros transportadores de membrana.
• Matriz mitocondrial. Contêm: complexo da piruvato-
desidrogenase, enzimas do ciclo do ácido cítrico, enzimas da
β−oxidação dos ácidos graxos, enzimas da oxidação dos
aminoácidos, várias outras enzimas, ribossomos, DNA, ATP, ADP,
Pi, Mg2+
, Ca2+
, K+
e outros substratos solúveis.
8.2 Reações de oxidação-redução
As reações de oxidação-redução (reações redox) envolvem a
transferência de elétrons que passam de um doador de elétrons
(redutor) para um aceptor de elétrons (oxidante). Portanto, a

oxidação é a perda de elétrons, enquanto, a redução é o ganho de
elétrons. Nenhuma substância pode doar elétrons sem que outra os
receba. Assim, uma reação de oxidação-redução total é composta de
duas meias−reações acopladas (uma reação de oxidação e uma reação
de redução) e constituem um par redox:
Fe2+
Fe3+
+ e−
(oxidação)
Cu2+
+ e−
Cu+
(redução)
Em algumas reações de oxidação-redução são transferidos tanto
elétrons como prótons (átomos de hidrogênio):
Substrato−H2 → Substrato + 2H → 2H+ + 2e−
A tendência com a qual um doador de elétrons (redutor) perde
seus elétrons para um aceptor eletrônico (oxidante) é expressa
quantitativamente pelo potencial de redução do sistema. O
potencial−padrão de redução (E°′) é definido como a força
eletromotiva (fem), em volts (V), gerado por uma meia-célula onde os
dois membros do par redox conjugado são comparados a uma meia-
célula referência padrão de hidrogênio (2H+ + 2e−
H2) a 25°C e 1
atm sob condições padrão. O potencial−padrão da meia reação do
hidrogênio em pH 7,0 é E°′ = −0,42 V (volts). A Tabela 8.1 apresenta
os valores de potenciais-padrão de redução de alguns pares redox.
Tabela 8.1 – Potenciais−padrão de redução (E°′) de algumas reações
parciais bioquímicas.
Par redox E°′ (V)
Succinato + CO2 + 2e
−
α-cetoglutarato −0,67
2H+ + 2e
−
H2 −0,42
α-Cetoglutarato + CO2 + H+ + 2e
−
isocitrato −0,38
Acetoacetato + 2H+ 2e
−
β-hidroxibutirato −0,35
NAD+ + 2H+ + 2e
−
NADH + H+ −0,32
Lipoato + 2H+ + 2e
−
diidrolipoato −0,29
Acetaldeído + 2H+ + 2e
−
etanol −0,20
Piruvato + 2H+ + 2e
−
lactato −0,19
Oxaloacetato + 2H+ + 2e
−
malato −0,17
Coenzima Q (oxid) + 2H+ + 2e
−
coenzima Q (red) 0,10
Citocromo b (Fe3+) + e
−
citocromo b (Fe2+) 0,12
Citocromo c (Fe3+) + e
−
citocromo c (Fe2+) 0,22
Citocromo a (Fe3+) + e
−
citocromo a (Fe2+) 0,29
Citocromo a3 (Fe3+) + e
−
citocromo a3 (Fe2+) 0,39
½ O2 + 2H+ + 2e
−
H2O 0,82
Quanto maior o potencial−padrão de redução, maior a afinidade
da forma oxidada do par redox em aceitar elétrons e, assim, tornar-se
reduzida.
O potencial de redução depende das concentrações das espécies
oxidadas e reduzidas. O potencial de redução (E) está relacionado
com o potencial−padrão de redução (E°’) pela equação de Nernst
(proposta em 1881):

[ ]
[ ]elétronsdedoador
elétronsdereceptor
ln
nF
RT
EE 'o'
+=
onde E´= potencial de redução para as concentrações encontradas na
célula em pH 7,0, E°′ = potencial−padrão de redução, R = constante
dos gases (8,31 J K−1
mol−1
, T = temperatura absoluta em graus K
(Kelvin)(298K a 25°C), n = número de elétrons transferidos, F =
constante de Faraday (96.485 J V−1
mol−1
, é a carga elétrica de 1 mol
de eletrons) e ln = logaritmo natural. A 25°C, esta equação se reduz a:
[ ]
[ ]elétronsdedoador
elétronsdereceptor
log
n
59
EE 'o'
+=
Onde E′ e E°′ são expressos em V (volts).
A energia disponível para a realização de trabalho é proporcional
a ∆E (diferença nos potenciais de redução). Quando o valor de ∆E for
positivo, ∆G será negativa e indica um processo espontâneo e pode
produzir trabalho.
8.3 Cadeia mitocondrial transportadora de
elétrons
Nas células eucarióticas o estágio final da oxidação de nutrientes
ocorre na mitocôndria. A organela promove a rápida oxidação do
NADH e FADH2 produzidos nas reações de glicólise, ciclo do ácido
cítrico, β−oxidação dos ácidos graxos e oxidação de alguns
aminoácidos. A transferência de elétrons do NADH e FADH2 para O2
se realiza em uma sequência de reações de oxidorredução em
processo denominado cadeia mitocondrial transportadora de elétrons
(CMTE) também conhecido como cadeia respiratória. A cadeia
consiste de uma série de transportadores de elétrons que operam
seqüencialmente, formados por proteínas integrais de membranas
associadas a grupos prostéticos capazes de aceitar ou doar elétrons.
Os elétrons passam através dessa cadeia do menor para o maior
potencial-padrão de redução. Na medida que os elétrons são
transferidos ao longo da cadeia, ocorre a liberação de energia livre
suficiente para sintetizar ATP a partir do ADP e Pi por meio da
fosforilação oxidativa.
Os componentes da cadeia mitocondrial transportadora de
elétrons estão localizados na superfície interna da membrana
mitocondrial interna por onde os elétrons provenientes do NADH e
FADH2 fluem para o oxigênio molecular. Os transportadores de
elétrons funcionam em complexos multienzimáticos conhecidos como
NADH−coenzima Q oxidorredutase (complexo I),
succinato−coenzima Q oxidorredutase (complexo II), coenzima Q-
citocromo c oxidorredutase (complexo III) e citocromo c oxidase
(complexo IV). Os grupos prostéticos transportadores de elétrons
associados aos complexos protéicos são: nucleotídeos da
nicotinamida (NAD+
ou NADP+
), nucleotídeos da flavina (FMN ou
FAD), ubiquinona (coenzima Q), citocromos e proteínas
ferro−enxôfre.
NAD+
, NADP+
e FAD
Apesar das estruturas do
NADH e NADPH serem
semelhantes, suas funções
diferem consideravelmente. O
NADH é reconvertido a NAD+
na cadeia respiratória
mitocondrial transportadora de
elétrons, fundamentalmente
para a geração de ATP. O
NADPH fornece íons hidretos
para a maioria dos processos
sintéticos. Neste contexto é
examinado somente a
reoxidação do NADH na cadeia
respiratória mitocondrial.

Tabela 8.2 – Características dos componentes protéicos da cadeia
mitocondrial transportadora de elétrons
Complexo enzimático Grupo prostético
I (NADH−coenzima Q oxidorredutase) FMN, FeS*
II (Succinato−coenzima Q oxidorredutase) FAD, FeS
III (Coenzima Q−citocromo c oxidorredutase) Citocromo b
Citocromo c1
1 FeSR**
IV (Citocromo c oxidase) Citocromo a
Citocromo a3
CuA, CuB
*FeS = grupo ferro−enxofre.
**FeSR = centro de Rieske
A. Complexo I transfere elétrons do NADH para a
ubiquinona
A transferência de elétrons através da cadeia respiratória inicia
com o complexo I (também chamado NADH−coenzima Q
oxidorredutase ou NADH desidrogenase) catalisa a transferência de
dois elétrons do NADH (nicotinamida adenina dinucleotídio) para a
coenzima Q (ubiquinona). As principais fontes de NADH incluem
reações do ciclo do ácido cítrico e da oxidação dos ácidos graxos.
Composto por 43 cadeias polipeptídicas diferentes, o complexo I é a
maior proteína transportadora de elétrons. Além de uma molécula de
FMN (flavina mononucleotídeo), o complexo contêm sete centros
ferro−enxôfre (FeS). Os centros ferro−enxôfre podem consistir de
dois ou quatro átomos de ferro complexado com igual número de íons
sulfeto, mediam a transferência de um elétron. As proteínas que
contêm centros ferro−enxofre são também conhecidas como
ferro−proteínas sem heme.

As reações catalisadas pelas desidrogenases são exemplificadas
esquematicamente pelas equações:
Substrato reduzido Substrato oxidado + 2H+
+ 2e−
NAD+ + 2H+
+ 2e−
NADH + H+
Esta reação envolve a transferência reversível de dois prótons +
dois elétrons do substrato para o NAD+
. Um próton (H+) é liberado
para o meio e o íon hidreto, :H−
(um próton + dois elétrons), é
incorporado na posição 4 do anel de nicotimanida do NAD+:
O NADH é oxidado a NAD+ pela ação do Complexo I com a
transferência de + 2H+
+ 2e−
para a coenzima Q (CoQ ou ubiquinona)
na cadeia mitocondrial transportadora de elétrons:
H
OH
O
H
H
H
OH
2
Adenosina
H
CH
N
N
N
NH2
+
N
C
O
NH2
O
O P O
O
O P O
O
H
OH
O
H
H
H
OX
2CH
N
Ribose
Nicotinamida
X = H Nicotinamida-adenina-dinucleotídeo (NAD )
X = PO Nicotinamida-adenina-dinucleotídeo-fosfato (NADP )
+
+
3
2
N
NH2
H
+
R
C
O
N
NH2
O
C
H H
R
+ H:
NAD(P)H
(reduzido)
NAD(P)
(oxidado)
+

NADH + H+
+ CoQ (oxidada) NAD+
+ CoQH2 (reduzida)
A transferência envolve várias etapas intermediárias que ainda
não foram completamente esclarecidas. Os elétrons são transferidos
inicialmente do NADH para a FMN, um dos grupos prostéticos da
enzima, para produzir a forma reduzida FMNH2.
NADH + H+ + FMN FMNH2 + NAD+
+2H
-2H
N
N
CH3
CH3
NH
N O
O
R
N
N
CH3
CH3
NH
N O
O
R H
H
A seguir os elétrons são transferidos da FMNH2 para uma série de
proteínas ferro−enxôfre (FeS) cujos grupos mais comuns são 2Fe−2S
e 4Fe−4S. O estado oxidado férrico (Fe3+) dos grupos capta os
elétrons da FMNH2 com a liberação de prótons conforme a equação:
FMNH2 + 2 Proteína-Fe3+S FMN + 2H+ + 2 Proteína-Fe2+S
As proteínas ferro-enxôfre reduzidas são reoxidadas pela
coenzima Q (CoQ), um pequeno composto lipossolúvel presente em
virtualmente todos os sistemas vivos. A CoQ aceita elétrons das
flavoproteínas e é reduzida a CoQH2 em reação reversível de
transferência de elétrons:
O
O
CH3O
OCH3
CH3
CH3
+2H
-2H
HHH2C C C
CH3
CH2
H
n
+
+
OH
OH
CH3O
OCH3
CH3
CH3
HHH2C C C
CH3
CH2
H
n
H
OH
O
H
H
H
OH
CH O P O P OCH
O
2
2
N
N
O
O OH C OH
H C OH
H C OH
2
CH
H C3
H C3 NN O
NH
N
Adenosina
NH2
O
Riboflavina
Ribitol
N
N
Flavina-adenina-dinucleotídeo (FAD)

A reação seguinte mostra a reoxidação das proteínas
ferro−enxôfre na cadeia respiratória mitocondrial pela coenzima Q:
O
O
R1
R2
R3
R4
+ 2H
+
+
OH
OH
R1
R2
R3
R4
+2 Proteína Fe S
2+
2 Proteína Fe S
3+
Durante a transferência de dois elétrons através dos centros
redox do Complexo I, quatro prótons são translocados da matriz
mitocondrial para o espaço intermembrana.
Complexo I
FMN
2
NADNADH
H+
+
Fe-S
Espaço
intermembrana
2e-
Matriz
FMNH
2e-
4H+
QH2
Q
Figura 8.2
Fluxo de elétrons e prótons por meio do Complexo I. Os elétrons passam do
NADH para a coenzima Q por vários centros ferro-enxôfre. A redução do Q a
QH2 também necessita de dois prótons. Quatro prótons são transferidos da
matriz para o espaço intermembrana. O fluxo de prótons gera um potencial
eletroquímico através da membrana mitocondrial interna que conserva parte
da energia liberada pelas reações de transferência de prótons para a síntese
de ATP.
B. Succinato-coenzima Q oxidorredutase (Complexo II)
Uma via independente do Complexo I, permite a entrada de
elétrons de potencial relativamente alto na cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons, utilizando o complexo
succinato−coenzima Q oxidorredutase (complexo II) que também
catalisa a redução da CoQ a CoQH2. Os grupos redox incluem o FAD
(flavina adenina dinucleotídeo), proteínas Fe-S e o citocromo b560. O
FADH2 é formado no ciclo do ácido cítrico pela oxidação do
succinato a fumarato em presença da enzima
succinato−desidrogenase, pertencente ao complexo II. Desse modo, o
FADH2 produzido não deixa o complexo, mas seus elétrons são
transferidos para as proteínas ferro-enxôfre e a seguir para a CoQ
para entrar na cadeia. Do mesmo modo, o FADH2 da
glicerol−fosfato−desidrogenase e acil−CoA−desidrogenase
transferem seus elétrons de alto potencial para a CoQ formando
CoQH2. O complexo II não bombeia prótons através da membrana
mitocondrial, pois a variação de energia livre é insuficiente. Em
conseqüência, forma-se menos ATP pela oxidação do FADH2 que pela
do NADH (ver adiante).
Apesar dos nomes, os complexos I e II não operam em série, mas
ambos atingem o mesmo resultado.

Figura 8.3
Fluxo de elétrons por meio do Complexo II. Os elétrons do succinato passam
por uma flavoproteína e várias centros FeS para atingir o Q. O complexo II
não contribui diretamente para gradiente de concentração mas serve para
suprir de elétrons a cadeia mitocondrial de trnasporte.
C. Complexo III transfere elétrons da CoQH2 para o
citocromo c
O complexo III (coenzima Q-citocromo c oxidorredutase ou
citocromo bc1) catalisa a transferência de elétrons da CoQH2 para o
citocromo c com o transporte de prótons da matriz para o espaço
intermembranas.
CoQH2 + citocromo c (Fe3+) CoQ + citocromo c (Fe2+) + H+
O complexo enzimático é formado no mínimo por oito proteínas
diferentes, incluindo dois citocromos b (tipos b562 e b566) que
apresentam potenciais de oxidorredução diferentes, um citocromo c1
e uma proteína ferro-enxôfre. Devido a essa composição, o complexo
III as vezes é denominado complexo citocromo bc1.
Nos organismos aeróbicos as funções geradoras de energia
possuem vários citocromos, localizados na membrana mitocondrial
interna. Os citocromos são proteínas transportadoras de elétrons
caracterizadas pela presença de um grupo heme (ferro-protoporfirina)
como grupo prostético. As porfirinas são compostos tetrapirrólicos
que permitem numerosas variações em sua estrutura, dependendo dos
substituintes no núcleo pirrólico e de suas disposições específicas.
No decorrer dos ciclos catalíticos, os átomos de ferro dos citocromos
oscilam entre o estado oxidado férrico (Fe3+), e o estado reduzido
ferroso (Fe2+. Os citocromos são classificados pela natureza das
cadeias laterais do grupo heme em três classes principais,
denominadas a, b e c.
A CoQ reduzida é reoxidada pelo citocromo b. O centro reagente
deste intermediário redox é o átomo de ferro do complexo
porfirínico:
Complexo II
Succinato
Espaço
intermembrana
2e-
Matriz
2e- QH2
Q
Fe-S
FAD
2e-
Fumarato + 2H+
2H+

N NH
N NH
CH CH
CH3CH3
CH2
CH2
COOH
CH2
CH2
COOH
CH3CHCH2
CH3 C CH2
H
Fe
3+
+ e
-
N NH
N NH
CH CH
CH3CH3
CH2
CH2
COOH
CH2
CH2
COOH
CH3CHCH2
CH3 C CH2
H
Fe
2+
Quando o citocromo b atua como agente oxidante, o átomo de
ferro é convertido de Fe3+ (férrico) para Fe2+ (ferroso). Ou seja, cada
molécula de citocromo b aceita um elétron. Como a oxidação da
CoQH2 envolve a remoção de dois elétrons (e dois prótons), a
completa oxidação de uma molécula deste intermediário necessita
duas moléculas de citocromo b. Os prótons são liberados para o meio:
CoQH2 + 2 citocromo b (Fe3+)
CoQ + 2 citocromo b (Fe2+) + 2H+
O citocromo b é, subsequentemente, oxidado pelo citocromo c1.
O carreador, como todos os citocromos, é um complexo ferro-
porfirina−proteína. Os citocromos diferem entre si com respeito tanto
a porção protéica como à porfirínica. Entretanto, as reações redox de
todos os citocromos envolvem a oxidação e redução do ferro:
2 Citocromo b (Fe2+) + 2 Citocromo c1 (Fe3+)
2 Citocromo b (Fe3+) + 2 Citocromo c1 (Fe2+)
O citocromo c1 reduzido transfere os elétrons para o citocromo c,
uma proteína heme (protoporfirina IX) frouxamente ligada à cisteína
da proteína na superfície interna da membrana.
Quando o citocromo c reage com o citocromo c1 ocorre a
transferência de elétrons entre os átomos de ferro:
2 Citocromo c1 (Fe2+) + 2 Citocromo c (Fe3+)
2 Citocromo c1 (Fe3+) + 2 Citocromo c (Fe2+)
A oxidação de uma molécula de QH2 é acompanhada pela
translocação de quatro prótons através da membrana mitocondrial
interna para o espaço intermembrana (dois prótons da matriz e outros
dois da QH2).
Complexo III
Espaço
intermembrana
2e-
Matriz
QH2
Q
c
2H+
2H+
Figura 8.4
Fluxo de transporte de elétrons e prótons por meio do Complexo III. Os

elétrons passam do QH2 para o citocromo c. Quatro prótons são translocados
através da membrana: dois da matriz e dois do QH2.
D. Complexo IV oxida o citocromo c e reduz o O2
O complexo IV (citocromo c oxidase) é um complexo protéico
que catalisa a transferência de quatro elétrons do citocromo c até o
oxigênio molecular para formar água:
4 Citocromo c2+ + O2 + 4 H+ → 4 Citocromo c3+ + 2 H2O
Os centros redox do complexo IV nos mamíferos incluem grupos
heme e íons cobre situados entre as 13 subunidades em cada metade
do complexo dimérico.
Cada elétron é transferido do citocromo c para o centro redox
CuA, que contêm dois íons cobre, e então para o grupo heme a. A
seguir, o elétron viaja para para um centro binuclear que consiste do
átomo de ferro do heme a3 e um íon cobre (CuB). A redução do O2
pelos quatro elétrons ocorre no centro binuclear FeCu. A redução do
O2 a H2O consome quatro prótons da matriz mitocondrial.
A citocromo c oxidase também transloca dois prótons da matriz
para o espaço intermembrana.
O mecanismo preciso desta fase não está totalmente esclarecido.
A presença de íons de cobre é crítica para a transferência final dos
elétrons para o oxigênio.
Complexo IV
Espaço
intermembrana
2e-
Matriz
c
2H+
2e-
CuA aa a -Cu3 B
H O
2H+
2
12/ O2
Figura 8.5
Fluxo de elétrons e prótons por meio do Complexo IV. Os átomos de ferro
dos grupos heme no citocromo e os átomos de cobre são oxidados e
reduzidos no fluxo de elétrons. O Complexo IV contribui para a concentração
de prótons de dois modos: a translocação de prótons da matriz para o
espaço intermembrana ocorre em associação com a transferência de
elétrons e a formação de água remove prótons da matriz.
E. Energia livre da transferência dos elétrons do NADH para
o O2
A medida de variação de energia livre das reações de oxido-
redução é dependente da diferença de voltagem entre potenciais-
padrão de redução, ∆E°′, do par redox:
∆E°′ = E°′ (aceptor de elétrons) – E°′ (doador de elétrons)
A variação de energia livre padrão para a reação é dada pela
equação:
∆G°′ =−nF∆E°′
onde ∆G°′ é a variação de energia livre padrão, n é o número de
elétrons transferidos por mol de reagente convertido, F é a constante

de proporcionalidade faraday (1 F = 96.485 J V−1
mol−1
), (um fator
que converte volt/equivalente a joule/equivalente) e ∆E°′ é a
diferença entre os potenciais-padrão de redução do par redox.
Na cadeia mitocondrial transportadora de elétrons dois elétrons
são transferidos do NADH (doador de elétrons) através de uma série
de aceptores de elétrons com potenciais de redução crescentes até o
O2 (aceptor de elétrons). As reações parciais para a oxidação do
NADH pelo O2 são expressas:
NAD+ + 2H+ + 2e−
NADH + H+ E°′ = −0,32 V
½O2 + 2H+ + 2e−
H2O E°′ = +0,82 V
∆E°′ = +0,820 – (–0,320) mV = +1,14 mV
A variação de energia livre padrão é então dada por
∆G°′ = −2 x 96.485 x 1,14 V
∆G°′ = −218 kJ⋅mol−1
A energia livre global liberada (−218 kJ⋅mol−1
) é suficiente para
sintetizar ATP a partir de ADP e Pi por meio da fosforilação
oxidativa.
Figura 8.6
Relações energéticas na cadeia mitocondrial transportadora de elétrons. A
redução na energia livre ocorre em três etapas. Em cada etapa (sítios I, II e
III) a energia liberada é suficiente para a síntese de ATP.
8.4 Fosforilação oxidativa
A fosforilação oxidativa é o processo no qual a energia gerada
pela cadeia mitocondrial transportadora de elétrons (CMTE) é
conservada na forma de ATP. O processo é responsável pela maioria
do ATP sintetizado em organismos aeróbicos. O fluxo de elétrons pela
CMTE, desde o par NADH/NAD+ até o par O2/H2O, libera energia
livre que é acoplada ao transporte de prótons por meio de uma
NADH
UQH2
Sítio I
E0
= + 0,42 V
G0
Complexo Cit bc1
Sítio I
Sítio I
Sítio I
E
E
0
0
= + 0,18 V
= + 0,52 V
G
G
0
0
Sítio II
Sítio III
Cit c
Cit a
Cit a3
O2
Fluxo de elétrons
0
+0,2
+0,4
+0,6
+0,8
E0(V)
. -1
-1
-1
.
.

membrana impermeável ao próton, e é conservada como um potencial
eletroquímico de membrana. O fluxo transembrana de prótons fornece
energia livre para a síntese de ATP por meio da ATP-sintase a partir
de ADP e Pi.
ADP + Pi + H+ ATP + H2O
Apesar dos esforços realizados, ainda não foram identificados
alguns intermediários da cadeia como também certas moléculas
chamadas desacoladoras, que impedem a síntese de ATP durante o
CMTE. Além disso, a hipótese não explica porque toda a membrana
mitocondrial deve estar intacta durante a síntese de ATP.
Além da síntese de ATP, os gradientes de prótons gerados na
CMTE são dissipados na produção de calor empregando outra via
para os prótons retornarem para a matriz mitocondrial por meio de
uma proteína existente nas membranas internas e chamada proteína
desacopladora (termogenina), principalmente, no tecido adiposo
marrom.
A. Teoria quimiosmótica
Nas últimas décadas foram realizados significativos esforços para
delinear o mecanismo da fosforilação oxidativa. Muitas hipóteses
foram propostas, mas somente uma foi amplamente aceita e tem sido
confirmada experimentalmente, a teoria quimiosmótica ou propulsora
de prótons (proposta por Peter Mitchell em 1961) incorporada de
elementos de outra proposta, a do acoplamento conformacional
(1974).
A teoria postula que o transporte de elétrons e a síntese de ATP
estão acoplados pelo gradiente eletroquímico através da membrana
mitocondrial interna. Neste modelo, a energia livre do transporte de
elétrons pela cadeia mitocondrial leva ao bombeamento de H+
(prótons) da matriz para o espaço intermembrana, estabelecendo um
gradiente eletroquímico de H+ (força próton-motiva, pmf) através da
membrana mitocondrial interna. Os H+
retornam para a matriz
mitocondrial por meio de canais protéicos específicos formados pela
enzima ATP-sintase (ver adiante) que é composta de duas unidades
funcionais, Fo e F1. A energia livre liberada pelo potencial
eletroquímico desse gradiente é utilizada para a síntese de ATP a
partir de ADP e Pi. Para cada NADH oxidado na matriz mitocondrial
~2,5 ATP são sintetizados, enquanto ~1,5 ATP são formados por
FADH2 oxidado, já que seus elétrons entram na cadeia em CoQH2,
depois do primeiro sítio de bombeamento de prótons.

Figura 8.7
Acoplamento do transporte mitocondrial de elétrons e a síntese de ATP
(teoria quimiosmótica). O transporte de elétrons movimenta os prótons da
matriz mitocondrial para o espaço intermembranas estabelecendo um
gradiente eletroquímico de prótons através da membrana mitocondrial
interna. O retorno dos prótons para a matriz via Fo−F1 (ATP-sintase) e a
geração de ATP é mostrada à esquerda da figura. A energia também é
utilizada na translocação do Ca2+.
B. Síntese de ATP
O acoplamento entre o transporte de elétrons e a síntese de ATP é
obtido pelo gradiente eletroquímico. A síntese do ATP na mitocôndria
é catalisada pelo complexo ATP−sintase (ATP−sintase bombeadora
de prótons, FoF1 ATP−sintase, complexo V) encontrada na membrana
mitocondrial interna. É uma enzima multiprotéica composta por duas
subunidades distintas: o F1 e o Fo. O componente F1 (fator de
acoplamento I) é uma proteína periférica de membrana solúvel em
água e formada por cinco diferentes subunidades polipeptídicas na
proporção (α3, β3, γ, δ e ε). O componente Fo é um complexo proteíco
integral de membrana com oito diferentes tipos de subunidades e é
insolúvel em água. O Fo é o canal transmembrana que transfere
prótons para o sítio ativo da ATP−sintase. A unidade F1 catalisa a
síntese de ATP em três sítios ativos. A porção Fo da ATP sintase é uma
proteína integral de membrana formada por três ou quatro
subunidades.
Quando o componente F1 está conectado ao componente Fo, a
ATP−sintase (FoF1−ATPase) catalisa a síntese de ATP. No entanto,
quando o componente F1 é liberado para a matriz mitocondrial ocorre
uma ação contrária à sua função normal; ele catalisa a hidrólise do
ATP (o reverso da síntese).
Espaço
intermembrana
Matriz
2e-
H +
H +
Membrana
interna
ATP
sintase
ATP
+
H O2
ADP
+
Pi
12/ O
+
2H
2
H O2
+
+
I III IV
H +
H +

Espaço
intermembrana
Matriz
ATPADP + Pi
H+
F1
F0
Figura 8.8
Função da ATP−sintase. Os prótons fluem através do canal transmembrana
Fo do espaço intermembrana para a matriz; o componente F1 catalisa a
síntese do ATP a partir do ADP + Pi.
O mecanismo da síntese de ATP a partir de ADP e Pi catalisada
pela ATP-sintase foi proposto por Paul Boyer (1979) e consiste de
mecanismo de mudança da ligação no qual os três sítios de F1 giram
para catalisar a síntese. O mecanismo sugere que a energia não é
empregada para formar a ligação fosfoanidro, mas para liberar o ATP
do sítio ativo. No sítio ativo, o Keq para a reação ADP + Pi ATP +
H2O é perto de 1,0. Assim, a formação de ATP no sítio ativo é
rapidamente completada. Contudo, ........ Uma mudança
conformacional dirigida pelo influxo de prótons enfraquece a ligação
do ATP com a enzima e, assim, o ATP recém-sintetizado deixa a
superfície da enzima.
A formação e a liberação de ATP ocorre em três etapas:
1.Uma molécula de ADP e uma molécula de Pi ligam-se ao sítio O
(aberto).
2.A passagem de prótons para o interior através da membrana
mitocondrial interna causa mudanças na conformação dos sítios
catalíticos. A conformação aberta (O) – contendo ADP e Pi
recentemente ligado – torna-se um sítio frouxo (L). O sítio
frouxo, já preenchido com ADP e Pi, torna-se um sítio firme (T).
O sítio T contendo ATP converte-se em sítio O (aberto).
3.O ATP é liberado do sítio aberto; o ADP e Pi, condensan-se para
formar ATP no sítio firme (T).

Figura 8.3
Mecanismo de mudança de ligação
para ATP-sintase. As diferentes
conformações dos três sítios são
indicados por diferentes formatos. O
ADP e o Pi ligam-se ao sítio O. Uma
alteração conformacional
dependente de energia liberada na
translocação de prótons
interconverte os três sítios. O sítio O
para L, T para O e O para L. O ATP é
sintetizado no sítio T e liberado no
sítio O.
C. Transporte ativo do ATP, ADP e Pi através da membrana
mitocondrial
É necessário que o ATP recém-sintetizado saia da mitocôndria
para a sua utilização no citosol, bem como o retorno do ADP para a
produção de ATP na matriz mitocondrial. No entanto, a membrana
mitocondrial interna é impermeável a entrada de ADP e a saída de
ATP. Para que essas moléculas atravessem a membrana é necessária a
ATP
ADPP+
i
ADP + Pi
O
T L
ATP
ADP P+ i
L
O T
ATP
ADPP+i
T
L O
ATP
ADPP+
i
O
T L
ATP
ATP
ATP

presença da ATP-ADP−translocase (translocador de ADP−ATP) –
uma proteína mitocondrial transportadora de íons e metabólitos
carregados – que é impelida pelo potencial de membrana. A difusão
dessas moléculas carregadas é realizada por um mecanismo de
transporte acoplado, ou seja, a entrada de ADP na matriz está
vinculada a saída de ATP, e vice-versa (sistema de antiporte). O
segundo sistema de transporte de membrana é a fosfato−translocase,
que promove a entrada de um Pi e um H+
(próton) para o interior da
matriz (sistema de simporte Pi−H+
), que atua em conjunto com a
ATP−ADP-translocase. A ação combinada desses dois transportadores
promove a troca do ADP e Pi citosólicos pelo ATP da matriz
mitocondrial com o ganho líquido de um H+
no espaço
intermembrana.
Figura 8.11
Transporte de ATP, ADP e Pi através da membrana mitocondrial interna.
A ATP−ADP−translocase (translocador de ADP−ATP) transporta o ATP
recém-sintetizado para o cotosol e ADP e Pi para dentro da matriz
(antiporte). Notar que a troca de Pi e H
+
é simporte. (1) Fosfato-translocase e
(2) ATP-ADP-translocase.
A troca ATP-ADP gasta 25% do rendimento energético da
transferência de elétrons na cadeia mitocondrial para regenerar o
potencial de membrana.
D. Número de ATP gerados via cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons
A relação precisa entre o número de prótons que retornam para a
matriz mitocondrial através da F1−Fo−ATP sintase e o número de ATP
gerados permance incerto. Existe o consenso de que três prótons
Membrana
mitocondrial
interna
3H+
Exterior Interior
F1
ATP-Sintase
1
Pi
H+
ADP
2
ATP4+

voltam para a matriz para cada ATP gerado. Também acredita-se que
o par de elétrons que entra na cadeia transportadora a partir do:
• NADH através dos Complexos I, III e IV resulta na translocação
de 10 prótons (as estimativas variam entre 9 e 12 prótons) para o
espaço intermembrana. O retorno desses 10 prótons por meio da
ATP-sintase promove a síntese de ~2,5 ATP.
• FADH2 que se oxida no complexo II sem passar pelo Complexo I,
transloca seis elétrons para o espaço intermembrana. O retorno
desses 6 prótons por meio da ATP-sintase sintetiza ~1,5 ATP.
A razão P/O é uma medida do número de ATP sintetizados por
átomo de oxigênio utilizado, ou por mol de água produzida. Estudos
recentes confirmaram os valores (2,5 e 1,5) para a razão P/O e,
portanto, não correspondem aos valores anteriormente usados (3 e 2,
respectivamente). O transporte do fosfato para a matriz resulta em um
ganho líquido de um próton. Desse modo, assumindo que 10 prótons
são bombeados para fora da matriz mitocondrial e quatro prótons
retornam para cada ATP sintetizado, 10/4 moléculas de ATP são
produzidas para cada dois elétrons liberados do NADH para O2 na
cadeia mitocondrial transportadora de elétrons. Cálculo similar
mostra que 6/4 moléculas de ATP são produzidas por elétrons
emanados do FADH2.
E. Regulação da fosforilação oxidativa
A velocidade do transporte de elétrons e da fosforilação oxidativa
são controlados estritamente pelas necessidades energéticas da célula.
O controle pelo ADP é ilustrado pelo fato que a mitocôndria só oxida
o NADH e o FADH2 quando houver disponibilidade de ADP e Pi
como substratos para a fosforilação Os elétrons não fluem pela
CMTE até o oxigênio, a menos que o ADP seja simultaneamente
fosforilado a ATP. A velocidade da fosforilação oxidativa é limitada
pelo quociente de ação das massas [ATP]/[ADP][Pi]. Ou seja, a ATP-
sintase é inibida em altas concentrações de ATP e ativada quando as
concentrações de ADP e Pi estão elevadas. A ATP−sintase é inibida
por altas concentrações de ATP e ativada por teores de ADP e Pi
elevados. As quantidades relativas de ATP e ADP intramitocondrial
são controladas por duas proteínas transportadoras presentes na
membrana interna: o translocador de ADP−ATP e o carreador de
fosfato (ver acima).
O translocador de ADP−ATP é uma proteína dimérica
responsável pela troca 1:1 do ATP intramitocondrial pelo ADP
citoplasmático. Como o ATP possui uma carga negativa a mais que o
ADP, o transporte do ATP para o exterior e do ADP para o interior da
mitocôndria são favorecidas. O transporte de H2PO4
−
junto com um
próton é mediada pela fosfato-translocase, também conhecida como
H2PO4
−
/H+
simporte (movem solutos através da membrana na mesma
direção). O transporte de 4 prótons para o interior é necessário para a
síntese de cada moléula de ATP; 3 para dirigir o rotor ATP-sintase e 1
para dirigir o transporte do fosfato para o interior.
F. Desacopladores da fosforilação oxidativa
Os desacopladores da fosforilação oxidativa são substâncias
presentes na membrana mitocondrial interna que dissipam o gradiente

de prótons ao trazerem novamente os prótons do espaço
intermembrana para a matriz mitocondrial, contornando a
ATP−sintase. Aumentam a permeabilidade dos H+
e são capazes de
dissociar a fosforilação oxidativa do transporte de elétrons.
Quadro 8.1 – Alguns inibidores que interferem com a fosforilação oxidativa.
Sítio de inibição Agente
Transporte de elétrons Rotenona
Amital
Antimicina A
Monóxido de carbono (CO)
Cianeto
Azida sódica
Piercidina A
Membrana interna 2,4-dinitrofenol (DNP)
Valinomicina
ATP-sintase Oligomicina
Venturicidina
Proteína desacopladora (termogenina)
G. Desacoplamento do transporte de elétrons e
termogênese
Recém-nascidos, animais que hibernam e animais adaptados ao
frio necessitam maior produção de energia que a normalmente
produzida pelo metabolismo. Os animais de sangue quente usam o
calor para manter a temperatura do corpo. Sob condições normais, o
transporte de elétrons e a síntese de ATP estão intimamente acoplados
de tal forma que o calor produzido é mantido ao mínimo. No tecido
adiposo marrom, a maior parte da energia produzida pela CMTE não
é empregada para formar ATP. Em lugar disso, ela é dissipada como
calor. (Esse tecido tem cor marrom devido ao grande número de
mitocôndrias que contêm). Ao redor de 10% da proteína na membrana
mitocondrial interna é constituída de termogenina ou proteína
desacopladora que permite que os prótons retornem à matriz sem
passar pelo complexo FoF1. Desse modo, quando a termogenina está
ativa, a energia de oxidação não é conservada na forma de ATP mas é
dissipada como calor. A proteína desacopladora é ativada quando ela
se liga a ácidos graxos.
O processo de geração de calor na gordura marrom, chamado
termogênese sem tremor, é regulado pela noradrenalina (na
termogênese com tremor, o calor é produzido pela contração muscular
involuntária). A noradrenalina, um neurotransmissor liberado por
neurônios especializados que terminam no tecido adiposo marrom,
inicia um mecanismo de cascata que hidroliza moléculas de gordura.
Os ácidos graxos produzidos por hidrólise das gorduras ativam a
proteína desacopladora. A oxidação de ácidos graxos continua até
cessar o sinal de noradrenalina ou até que as reservas de gorduram
acabem.

H. Transporte de elétrons do citosol para a mitocôndria
O NADH produzido na glicólise (na oxidação do
gliceraldeído−3−fosfato), não pode ser utilizado diretamente pela
cadeia mitocondrial transportadora de elétrons para a formação de
ATP. Como a geração de NADH (equivalente reduzido) ocorre no
citosol e a membrana mitocondrial interna é impermeável a essa
substância, é possível transportar somente os elétrons do NADH para
a mitocôndria por um dos sistemas de circuitos, tais como, circuito do
glicerol−fosfato e o circuito do malato−aspartato.
1. Lançadeira do glicerol-fosfato. Está presente nos músculos e
cérebro dos mamíferos, e emprega a enzima
3−fosfoglicerol−desidrogenase que catalisa a redução da
diidroxiacetona fosfato pelo NADH para originar 3−fosfoglicerol. O
3−fosfoglicerol difunde-se até a face externa da membrana
mitocondrial interna onde localiza-se uma outra
3−fosfoglicerol−desidrogenase que contém FAD. A diidroxiacetona
fosfato é regenerada a partir da 3−fosfoglicerol formando FADH2. O
FADH2 entrega seus elétrons à coenzima Q para seguir a seqüência da
cadeia mitocondrial transportadora de elétrons. Para cada NADH
citosólico oxidado resulta apenas 1,5 ATP. A diidroxiacetona−fosfato
é, então, transferida de volta para o citosol.
Espaço
intermembrana Matriz
FADH2
FAD
Q
Diidroxiacetona
fosfato
Glicerol
3-fosfato
2e
Glicerol-3-fosfato
desidrogenase
citosólica
NADH + H+
Complexo
glicerol-3-fosfato
desidrogenase
NAD+
Figura 8.12
Circuito (lançadeira) glicerol-fosfato. O NADH citosólico reduz a
diidroxiacetona-fosfato a glicerol−3−fosfato em reação catalisada pela
glicerol−3−fosfato-desidrogenase citosólica. A reação reversa emprega uma
flavoproteína ligada à superfície externa da membrana interna que transfere
os elétrons para a coenzima Q (ubiquinona).
2. Lançadeira do malato-aspartato. Está disponível nas células
hepáticas, cardíacas e renais e de outros tecidos. Nesse sistema, o
NADH citosólico reduz o oxaloacetato a malato pela
malato−desidrogenase extramitocondrial. O malato transpõe a
membrana mitocondrial interna onde é reoxidado a oxaloacetato pela
malato desidrogenase mitocondrial que utiliza o NAD+
como
coenzima. Pela reoxidação do malato na matriz, ocorre a transferência
dos equivalentes reduzidos provenientes do citosol. O oxalacetato
formado é transformado em aspartato que pode atravessar a
membrana. Este sai da mitocôndria e, no citosol, regenera o

oxaloacetato. O NADH regenerado na mitocôndria transfere os
elétrons para a cadeia mitocondrial transportadora de elétrons, onde
forma ATP.
Figura 8.13
Circuito do malato-aspartato. O NADH citosólico reduz o oxaloacetato a
malato., que é transportado através da membrana interna para a matriz
mitocondrial. A reoxidação do malato gera NADH que transfere os elétrons
para a cadeia mitocondrial transportadora de elétrons.
A operação contínua do circuito necessita o retorno do
oxaloacetato para o citosol. O oxaloacetato citosólico é regenerado
por meio de reações de transaminação tanto mitocondriais como
citosólicas.
Todos os tecidos que possuem mitocôndria, parecem ter a
carreadores que atravessam a membrana. A proporção de cada
lançadeira varia para cada tecido. O fígado utiliza, principalmente, a
malato-aspartato, enquanto certas células musculares são mais
dependentes do circuito do glicerol-fosfato.
8.5 Rendimento da oxidação completa da glicose
Cada molécula de glicose completamente oxidada a CO2 e H2O
pelas vias da glicólise, ciclo do ácido cítrico e cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons, utilizando o circuíto malato/aspartato (ver
Capítulo 6: Metabolismo dos carboidratos) gera 32 moléculas de ATP
(Tabela 8.3) aceitando os novos valores para a relação P/O (ver
Dicarboxilase
translocase
Malato
Malato
Aspartato
AspartatoOxaloacetato
Aspartato
transaminase
mitocondrial
Oxaloacetato
Glutamato
asparato
translocase
Malato
desidrogenase
citosólica
Malato
desidrogenase
mitocondrial
Aspartato
transaminase
citosólica
NAD+
+
NADH,H
NAD+
NADH,H+
-Cetoglutarato
-Cetoglutarato
Glutamato
Glutamato
Cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons
(na membrana interna)2e

acima). Os valores anteriormente usados para o rendimento de ATP
pela oxidação completa da glicose é 38 ATP.
Tabela 8.3 – Balanço de ATP formados pela completa oxidação da glicose
a CO2 na glicólise e no ciclo do ácido cítrico
Reações ATP/mol
Fosforilação da glicose −1
Fosforilação da glicose 6−fosfato −1
2 (desfosforilação do 1,3−bifosfoglicerato) +2
2 (desfosforilação do fosfoenolpiruvato) +2
2 x 1 NADH (oxidação do gliceraldeido 3−fosfato) +5
2 x 1 NADH (descarboxilação oxidativa do piruvato) +5
2 x 3 NADH (ciclo do ácido cítrico) +15
2 x 1 FADH2 (ciclo do ácido cítrico) +3
2 x 1 GTP (ciclo do ácido cítrico) +2
Total +31
A utilização do circuíto glicerol-fosfato encontrada no músculo
esquelético e no cérebro, apenas 30ATP são formados.
A oxidação da glicose a CO2 e H2O, libera −2870 kJ⋅mol−1
. A
energia livre padrão necessária para sintetizar 1 mol de ATP a partir
de ADP e Pi é 30,5 kJ⋅mol−1
A energia livre para a síntese de 32 ATP
corresponde a 32 x 30,5 = −976 kJ⋅mol−1
. A eficiência termodinâmica
de formação de ATP a partir da glicose é 976 x 100/2870 = 34%.
Assim, aproximadamente 34% da energia liberada na completa
oxidação da glicose é conservada como ATP.
8.6 Estresse oxidativo
Algumas vezes, o oxigênio pode aceitar elétrons para formar
derivados instáveis, conhecidos como espécies reativas de oxigênio
(ROS) que incluem o radical superóxido, peróxido de hidrogênio,
radical hidroxila e singlet oxigen. Como os ROS reagem facilmente
com vários componentes celulares, a sua ação pode lesar células de
modo significante. Nos organismos vivos, a formação de ROS é
geralmente mantida em quantidades mínimas por mecanismos
antioxidantes. (Antioxidantes são substâncias que inibem a reação de
moléculas com radicais oxigênio).
Em certas ocasiões, denominadas coletivamente como estresse
oxidativo, os mecanismos antioxidantes são contornados com a
ocorrência de lesão oxidativa. A lesão ocorre principalmente por
inativação enzimática, despolimerização polissacarídica, lesões
oxidativas no DNA e rompimento das membranas biológicas.
Exemplos de circunstâncias que podem causar sérias lesões
oxidativas incluem certas anormalidades metabólicas, o consumo
exagerado de certos fármacos, a exposição a radiação intensa e
contato repetitivo com certos contaminates ambientais (exemplo,
fumaça de cigarro).
Além da contribuição aos processos de envelhecimento, a lesão
oxidativa foi relacionada a um grande número de doenças, entre as

quais estão câncer, desordens cardiovasculares (aterosclerose, infarto
do miocárdio, hipertensão), desordens neurológicas como a esclerose
amiotrófica lateral (ALS; doença de Lou Gehring), doença de
Parkinson, doença de Alzheimer. Vários tipos de células
deliberadamente produzem grandes quantidades de ROS. Por
exemplo, os macrófagos e neutrófilos continuamente atuam buscando
microrganismos e células lesionadas.
A. Espécies reativas de oxigênio
As propriedades do oxigênio estão diretamente relacionadas com
sua estrutura molecular. A molécula de oxigênio diatômica é um
diradical. Um radical é um átomo ou grupo de átomos que contêm um
ou mais elétrons não-emparelhados. Dioxigênio é um diradical porque
possui dois elétrons não-emparelhados. Por essa e outras razões,
quando reage, o dioxigênio pode aceitar somente um elétron por vez.
Relembrando que na sequência da cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons, a H2O é formada como resultado da
transferência seqüencial de 4 elétrons para o O2. Durante o processo,
vários ROS são formados. A citocromo−oxidase captura os
intermediários reativos em seu sítio ativo até que todos os 4 elétrons
tenham sido transferidos para o oxigênio. Entretanto, os elétrons
podem escapar da via de transporte de elétrons e reagir com o O2 para
formar ROS.
Sob circunstâncias normais, os mecanismos antioxidantes de
defesa celular miniminizam as lesões. ROS também são formados
durante processos não−enzimáticos. Por exemplo, a exposição à luz
ultravioleta e a radiação ionizante causam a formação de ROS.
O primeiro ROS formado durante a oxidação do oxigênio é o
radical superóxido ( ⋅→+ −−
22 OeO ). A maioria dos radicais
superóxidos são produzidos na cadeia mitocondrial transportadora de
elétrons pelos elétrons derivados do ciclo Q no complexo III e pela
flavina NADH−desidrogenase (complexo I). O radical superóxido
atua como nucleófilo e (sob condições específicas) tanto como agente
oxidante como agente redutor. Devido as suas propriedades de
solubilidade, o ⋅−
2O causa considerável lesões oxidativas aos
componentes fosfolipídicos da membrana. Quando gerado em meio
aquoso, o ⋅−
2O reage consigo mesmo para formar O2 e peróxido de
hidrogênio (H2O2):
2 H+
+ 2 ⋅−
2O → O2 + H2O2
O H2O2 não é um radical pois não possui nenhum elétron
desemparelhado. A limitada reatividade do H2O2 permite a sua
passagem através de membranas e torna-se grandemente disperso. A
reação subseqüente do H2O2 com o o Fe2+
(ou outro metal de
transição) resulta na produção do radical hidroxila, uma espécie
altamente reativa.
Fe2+
+ H2O2 → Fe3+
+ •OH + OH−
Radicais como o radical hidroxila são especialmente perigosos
porque podem iniciar reações autocatalíticas.

B. Mecanismos enzimáticos antioxidantes
As principais defesas enzimáticas contra o estresse oxidativo são:
a superóxido−dismutase, o glutationa−peroxidase e a catalase. A
ampla distribição celular dessas enzimas previne a ação de espécies
de oxigênio reativas.
1. Superóxido-dismutase (SOD). É uma classe de enzimas que
cataliza a formação de H2O2 e O2 a partir do radical superóxido:
2222 OOHH2O2 +→+⋅ +−
Existem duas formas principais de SOD. Em humanos ocorre no
citoplasma a isoenzima Cu−Zn. Uma isoenzima contendo Mn é
encontrada na matriz mitocondrial. A doença de Lou Gehring
(esclerose amiotrófica lateral), uma condição degenerativa fatal na
qual ocorre a degeneração neuromotora, é causada por mutação no
gene que codifica a isoenzima Cu−Zn citosólica da SOD.
2. Glutationa−peroxidase. É uma enzima chave no sistema
responsável pelo controle dos níveis de peroxidase celular. A enzima
contém selênio e A enzima catalisa a redução de várias substâncias
pelo agente redutor glutationa (GSH). Além da redução do H2O2 pera
formar água, a glutationa-peroxidase transforma peróxidos orgânicos
em álcoois:
2 GSH + R-O−O−H → G−S−S−G + R-OH + H2O
Várias enzimas auxiliares mantêm a função da glutationa-
peroxidase. A GSH é regenerada a partir do GSSG (glutationa-
dissulfeto) pela glutationa-redutase:
G−S−S−G + NADPH + H+
→ 2 GSH + NADP+
O NADPH necessário para a reação é fornecido principalmente
pela via das pentoses-fosfato (ver Capítulo 6: Metabolismo dos
carboidratos). O NADPH também é produzido por reações catalisadas
pela isocitrato-desidrogenase e pela enzima málica.
3. Catalase. É uma enzima contendo heme que emprega o H2O2
para oxidar outros substratos:
RH2 + H2O2 → R + 2 H2O
Quantidades abundantes de catalase são encontradas nos
peroxissomos, ricos em H2O2 gerados em várias reações:
RH2 + O2 → R• + H2O2
O excesso de H2O2 é convertido em água pela catalase:
2 H2O2 → 2 H2O + O2
C. Moléculas antioxidantes
Os organismos vivos usam moléculas antioxidantes para se
autoproteger dos radicais. Alguns dos mais proeminentes incluem a
glutationa (GSH), o α−tocoferol (vitamina E), ácido ascórbico
(vitamina C) e o β−caroteno.

Resumo
1. A maioria das reações que captam ou liberam energia são reações de
oxidação-redução. Nessas reações, os elétrons são transferidos entre o
doador de elétrons (agente redutor) e o aceptor de elétrons (agente
oxidante). Em algumas reações, somente os elétrons são transferidos; em
outras, tanto os elétrons como os prótons são transferidos. A tendência
de um par redox conjungado em perder um elétron é chamado potencial
redox. Os elétrons fluem espontaneamente do par redox eletronegativo
para o mais positivo. Nas reações redox favoráveis o ∆E°′ é positivo e
∆G°′ é negativo.
2. O oxigênio é empregado pelos organismos aeróbicos como aceptor
terminal de elétrons na geração de energia. Várias propriedades físicas e
químicas o tornam capaz desse papel. Além de sua disponibilidade, o
oxigênio difunde facilmente através das membranas celulares e
facilmente aceita elétrons.
3. As moléculas de NADH e FADH2 produzidas na glicólise, β-oxidação
dos ácidos graxos, oxidação de alguns aminoácidos e ciclo do ácido
cítrico geram energia na cadeia mitocondrial transportadora de elétrons.
A via consiste de uma série de carreadores redox que recebem elétrons
do NADH e FADH2. No final do caminho os elétrons, juntamente com os
prótons são doados para o oxigênio para formar H2O.
4. Durante a oxidação de NADH, existem três etapas na quais a energia
liberada é suficiente para sintetizar ATP. São elas: as etapas I, III e IV.
5. A fosforilação oxidativa é o mecanismo no qual o transporte de elétrons
está acoplado para a síntese de ATP. De acordo com a teoria
quimiosmótica, a criação de um gradiente de prótons que acompanha o
transporte de elétrons está acoplado a síntese de ATP.
6. A completa oxidação de uma molécula de glicose resulta na síntese de
29,5 a 31 ATP, dependendo do circuito (lançadeira) de elétrons utilizado,
o circuito glicerol-fosfato ou o circuito malato-aspartato, para transferir
os elétrons do NADH citoplasmático para a cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons.
7. O uso de oxigênio pelos organismos aeróbicos relaciona-se com a
produção de ROS (espécies reativas de oxigênio). O ROS é formado
porque as moléculas de diradical de oxigênio aceita um elétron por vez.
Exemplos de ROS incluem o radical superóxido, peróxido de hidrogênio,
radical hidroxila e singlet oxigen. O risco da presença de elevado
conteúdo de ROS é mantido ao mínimo por mecanismos celulares de
defesa antioxidante.
Referências
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of life. 3 ed.
Boston: McGraw-Hill, 2003. p. 298-330.
Paulo : Sarvier, 2002. p. 515-62.
STRYER, L. Bioquímica. 4 ed. Rio de Janeiro : Guanabara-Koogan, 1996. p.
502-28.
Alegre : Artmed, 2000. p. 492-528.

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Lipídeos e
Membranas
Capítulo
9

235
9
Lipídeos e Membranas
Objetivos
1 Compreender as estruturas dos principais lipídeos.
2 Descrever os fatores que influenciam os pontos de fusão dos ácidos graxos.
3 Descrever os diferentes lipídeos presentes nas membranas.
4 Descrever as diferentes proteínas de membrana.
5 Compreender o modelo do mosaico fluído e seus refinamentos.
6 Compreender que a distribuição de íons em cada lado da membrana gera um potencial de
membrana.
7 Compreender os mecanismos de transporte através das membranas.
8 Compreender as modificações na bicamada que ocorrem durante a endocitose e da
exocitose.
Os lipídeos são biomoléculas que exibem uma grande variedade
estrutural. Moléculas como as gorduras e óleos, fosfolipídeos,
esteróides e carotenóides, que diferem grandemente tanto em suas
estruturas como em suas funções são considerados lipídeos. São
compostos orgânicos heterogêneos pouco solúveis em água, mas
solúveis em solventes não-polares. Alguns lipídeos estão combinados
com outras classes de compostos, tais como proteínas (lipoproteínas)
e carboidratos (glicolipídeos).
Os lipídeos participam como componentes não-protéicos das
membranas biológicas, precursores de compostos essenciais, agentes
emulsificantes, isolantes, vitaminas (A, D, E, K), fonte e transporte
de combustível metabólico, além de componentes de biossinalização
intra e intercelulares.
9.1 Classificação dos lipídeos
Os lipídeos são freqüentemente classificados nos seguintes
grupos:
• Ácidos graxos e seus derivados
• Triacilgliceróis.
• Ceras

• Fosfolipídeos (glicerofosfolipídeos e esfingosinas)
• Esfingolipídeos (contêm moléculas do aminoálcool esfingosina)
• Isoprenóides (moléculas formadas por unidades repetidas de
isopreno, um hidrocarboneto ramificado de cinco carbonos)
constituem os esteróides, vitaminas lipídicas e terpenos.
A. Ácidos graxos e seus derivados
Os ácidos graxos são ácidos monocarboxílicos de longas cadeias
de hidrocarbonetos acíclicas, não-polares, sem ramificações e, em
geral, número par de átomos de carbono. Podem ser saturados,
monoinsaturados (contém uma ligação dupla) ou poliinsaturados
(contêm duas ou mais ligações duplas). Os mais abundantes contêm
C16 e C18 átomos. Em geral, as duplas ligações nos ácidos graxos
poliinsaturados estão separadas por um grupo metileno,
−CH=CH−CH2−CH=CH−, para evitar a oxidação quando expostos em
meio contendo oxigênio. Como as ligações duplas são estruturas
rígidas, as moléculas que as contêm podem ocorrer sob duas formas
isoméricas: cis e trans. Os isômeros cis ocorrem na maioria dos
ácidos graxos naturais. Os ácidos graxos são componentes
importantes de vários tipos de moléculas lipídicas. As estruturas e
nomes de alguns ácidos graxos estão ilustrados na Tabela 9.1. Em
geral, são representados por um símbolo numérico que designa o
comprimento da cadeia. Os átomos são numerados a partir do carbono
da carboxila. A numeração 16:0 designa um ácido graxo com C16 sem
ligações duplas, enquanto 16:1∆9
representa um ácido graxo com C16 e
ligação dupla em C9. Os átomos C2 e C3 dos ácidos graxos são
designados α e β, respectivamente.
Figura 9.1
Estrutura e nomenclatura dos ácidos graxos. Os ácidos graxos consistem
de uma longa cauda hidrocarbonada e um terminal com um grupo
carboxílico. Na nomenclatura IUPAC, os carbonos são numerados a partir do
carbono carboxílico. Na nomenclatura comum, o átomo de carbono
adjacente ao carbono carboxílico é designado α, e os carbonos seguintes
são nomeados β, γ, δ, etc. O átomo de carbono mais distante do carbono
carboxílico é chamado carbono ω, independente do tamanho da cadeia. O
ácido graxo mostrado, laureato (ou dodecanoato), tem 12 carbonos e não
O C
CH2
O
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH3
1
3
5
7
9
11
2
4
6
8
12
10
α
β
γ
δ
ε
ω
Ácido
graxo
Grupo
acil
graxo
Cadeia
hidrocarbonada

9 Lipídeos e membranas • 237
contêm duplas ligações.
Outro sistema de numeração também é utilizado na nomenclatura
dos ácidos graxos onde o C1 é o mais distante do grupo carboxila
(sistema de numeração ω ômega):
Tabela 9.1 – Alguns ácidos graxos de ocorrência natural
Símbolo
numérico
Estrutura Nome comum
Ácidos graxos saturados
12:0 CH3(CH2)10COOH Ácido láurico
14:0 CH3(CH2)12COOH Ácido mirístico
16:0 CH3(CH2)14COOH Ácido palmítico
18:0 CH3(CH2)16COOH Ácido esteárico
20:0 CH3(CH2)18COOH Ácido araquídico
22:0 CH3(CH2)20COOH Ácido beênico
24:0 CH3(CH2)22COOH Ácido lignocérico
Ácidos graxos insaturados
16:1∆9
CH3(CH2)5CH=CH(CH2)7COOH Ácido palmitoléico
18:1∆9
CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH Ácido oléico
18:2∆9, 12
CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH Ácido linoléico
18:3∆9, 12, 15
CH3-(CH2-CH=CH)3(CH2)7COOH Ácido α-linolêico
20:4∆5, 8, 11, 14
CH3-(CH2)3-(CH2-CH=CH)4-(CH2)3COOH Ácido araquidônico
Além das gorduras provenientes da dieta, o homem pode
sintetizar a maioria dos ácidos graxos, mas é incapaz de produzir o
ácido linoléico e o ácido linolênico. Esses dois últimos são
denominados ácidos graxos essenciais e são obtidos da dieta. Os
ácidos graxos essenciais são precursores para a biossíntese de vários
metabólitos importantes. A dermatite é um sintoma precoce em
indivíduos com dietas pobres em ácidos graxos essenciais. Outros
sinais da deficiência incluem demora na cura de ferimentos, reduzida
resistência a infecções, alopecia (perda de cabelo) e trombocitopenia
(redução do número de plaquetas, um componente essencial nos
processos de coagulação sangüínea).
Os pontos de fusão dos ácidos graxos elevam com o aumento do
comprimento da cadeia hidrocarbonada. Os ácidos graxos saturados
com dez ou mais átomos de carbono são sólidos em temperatura
ambiente. Todos os insaturados são líquidos nesta temperatura.
Uma das mais importantes reações dos ácidos graxos é a
formação de ésteres:
R−COOH + R’−OH R−COO−R’ + H2O
Essa reação é reversível; ou seja, sob condições favoráveis um
éster de ácido graxo pode reagir com a água para formar um ácido
graxo e um álcool.

B. Triacilgliceróis
Os triacilgliceróis (triglicerídeos) são ésteres de ácidos graxos
com o glicerol. A porção ácido graxo presente nos ésteres lipídicos é
designada grupo acila. Dependendo do número de grupos hidroxila
do glicerol esterificados com ácidos graxos, os acilgliceróis são
denominados monoacilgliceróis, diacilgliceróis e triacilgliceróis.
Estes compostos são também conhecidos como mono−, di− e
triglicerídeos. São os lipídeos mais abundantes no transporte e
armazenamento de ácidos graxos. Os ácidos graxos presentes nos
triacilgliceróis naturais podem ser iguais (triacilgliceróis simples) ou
diferentes (triacilgliceróis mistos).
Triacilglicerol
A maioria dos ácidos graxos presentes nos triacilgliceróis são
mono ou poliinsaturados em configuração cis. O ponto de fusão
desses compostos é determinado, fundamentalmente, pela natureza
dos ácidos graxos presentes na molécula.
Em animais, os triacilgliceróis (geralmente chamados de
gorduras) têm vários papéis. Primeiro, são as principais formas de
armazenamento e transporte de ácidos graxos. As moléculas de
triacilgliceróis armazenam energia mais eficientemente que o
glicogênio por várias razões:
• Os triacilgliceróis hidrofóbicos são armazenados na forma de
gotículas de gordura não hidratadas em células do tecido adiposo.
O glicogênio (outra molécula de armazenamento de energia) liga-
se com substancial quantidade de água de hidratação (2 gramas
de água por grama de glicogênio). Assim, os triacilgliceróis
armazenam uma quantidade muito maior de energia que o
glicogênio hidratado.
• As moléculas de triacilgliceróis são mais reduzidas que as dos
carboidratos e, desse modo, sua oxidação libera o dobro em
energia que a oxidação dos açúcares, ou seja, 38,9 kJ·g−1
(gordura) e 17,2 kJ·g−1
(açúcares).
Segunda importante função da gordura é o isolamento térmico
contra baixas temperaturas, pois é uma pobre condutora de calor.
Como o tecido adiposo, com seu elevado conteúdo de triacilgliceróis,
é encontrado na camada subcutânea previne a perda de calor.
Nas plantas, os triacilgliceróis constituem uma importante
reserva de energia em frutas e sementes. Como essas moléculas
contêm consideráveis quantidades de ácidos graxos insaturados
(exemplos, oléico e linoléico) são chamados óleos vegetais. Sementes
ricas em óleos incluem amendoim, milho, açafrão e feijão de soja.
Abacate e azeitonas são frutas com alto conteúdo em gorduras.
2CH CH CH
O
2
O O
C O C O C O
2CH CH CH22
3CH CH CH33
Glicerol
3 Ácidos graxos

C. Ceras
As ceras são misturas complexas de lipídeos não-polares.
Funcionam como um revestimento de proteção em folhas, caules,
frutos e na pele de animais. Os ésteres são compostos de ácidos
graxos de cadeia longa e álcoois de cadeia longa como constituintes
proeminentes da maioria das ceras. Exemplos bem conhecidos de
ceras incluem a cera de carnaúba e a cera de abelha. O constituinte
principal da cera de carnaúba é o éster de melissil ceronato. O
triacontanoil palmitato é o principal componente da cera de abelha.
As ceras também contêm hidrocarbonetos, álcoois, ácidos graxos,
aldeídos e esteróis (álcoois esteróides).
D. Fosfolipídeos
Os fosfolipídeos são os principais componentes lipídicos
estruturais das membranas. Além disso, vários fosfolipídeos são
agentes emulsificantes (composto que promove a dispersão coloidal
de um líquido em outro) e agentes surfactantes (composto que reduz a
tensão superficial de uma solução, como detergentes). Os
fosfolipídeos exercem essas funções por serem moléculas anfifílicas.
Apesar das diferenças estruturais, todos os fosfolipídeos são
constituídos de “caudas” apolares alifáticas de ácidos graxos e
“cabeças” polares que contêm fosfato e outros grupos carregados ou
polares.
Quando em concentrações apropriadas, os fosfolopídeos
suspensos em água se organizam em estruturas ordenadas na forma de
micelas ou bicamadas lipídicas (ver seção 9.3.A).
Existem dois tipos de fosfolipídeos: os glicerofosfolipídeos e as
esfingomielinas.
1. Glicerofosfolipídeos ou fosfoglicerídeos. São moléculas que
contêm um glicerol, dois ácidos graxos de cadeia longa, um fosfato e
um álcool (exemplo, colina). São os principais componentes lipídicos
das membranas celulares. O ácido fosfatídico
(1,2−diacilglicerol−3−fosfato) é o composto, o precursor de outras
moléculas de glicerofosfolipídeos, consiste de glicerol−3−fosfato,
cujas posições C1 e C2 são esterificadas com ácidos graxos.

Figura 9.2
Glicerofosfolipídeos. (a) Glicerol−3−fosfato e (b) fosfatidato. O fosfatidato
consiste de glicerol−3−fosfato com dois grupos acil graxo (R1 e R2) esterificado
nos grupos hidroxila em C1 e C2.
Os glicerofosfolipídeos são classificados de acordo com o álcool
esterificado ao grupo fosfato. Alguns dos mais importantes são:
fosfatidilcolina (lecitina), fosfatidiletanolamina (cefalina),
fosfatidilglicerol e fosfatidilserina.
Os ácidos graxos frequentemente encontrados nos
glicerofosfolipídeos tem entre 16 e 20 átomos de carbono. Os ácidos
graxos saturados ocorrem geralmente no C1 do glicerol. A posição C2
do glicerol é freqüentemente ocupada por ácidos graxos insaturados.
Um derivado do fosfoinositol denominado fosfatidil−4,5−bifosfato
(PIP2), é encontrado em pequenas quantidades nas membranas e é um
importante componente na transdução de sinal. O sistema do
fosfoinositídeo iniciado quando certos hormônios ligam-se aos
receptores específicos na superfície externa das membranas
plasmáticas, é descrito no Capítulo 12: Regulação do metabolismo
energético.
O C C O
O O
H C CH CH2 2
2 31
O
O P O
O
(R )1 (R )2
Fosfatidato
HO OH
H C CH CH2 2
2 31
O
O P O
O
Cabeça polar
(hidrófila)
Caudas apolares
(hidrofóbicas)
Glicerol-3-fosfato
(a) (b)

Figura 9.3
Glicerofosfolipídeos comuns. Estruturas de quatro glicerofosfolipídeos mais comuns:
Fosfatidilcolina (lecitina), fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol e fosfatidilserina.
2. Esfingomielinas. As esfingomielinas diferem dos
fosfoglicerídeos por conterem esfingosina (aminoálcool) em lugar de
glicerol. Como as esfingomielinas também são classifcadas como
esfingolipídeos, suas estruturas e propriedades são descritas mais
adiante.
Figura 9.4
Estrutura da esfingosina e da esfigomielina. (a) A estrutura da esfingosina é derivada da serina e
palmitato. (b) A ligação de um segundo grupo acila e uma fosfatidilcolina (ou fosfoetanolamina) produz
uma esfingomielina.
C O C O
O O
CH CH CH2
2
O
O P O CH CH N CH
O
R R
Fosfatidilcolina
2
CH3
CH3
3
+
2
C O C O
O O
CH CH CH2
2
O
O P O CH CH NH
O
R R
Fosfatidiletanolamina
2 3
+
2
C O C O
O O
CH CH CH2
2
O
O P O CH CH CH OH
O
R R
Fosfatidilglicerol
2
2
OH
C O C O
O O
CH CH CH2
2
O
O P O CH CH COO
O
R R
Fosfatidilserina
2
NH3
+
CH
HO CH CH CH
Esfingosina
2
OH
NH3
+
CH
(CH )2 12
CH3
Resíduo
de serina
Resíduo de
palmitato
Fosfocolina
2
O
O P O CH CH N CH
O
2
CH3
CH3
3
+
CH
HO CH CH CH2
CH
(H C)2 12
CH3
C O
NH
R
Grupo acila
Esfingomielina
(a) (b)

E. Esfingolipídeos
Os esfingolipídeos são o segundo maior componente lipídico das
membranas animais e vegetais. As moléculas de esfingolipídeos
contêm um aminoálcool de cadeia longa. Em animais, o aminoálcool
é a esfingosina e nas plantas é a fitoesfingosina. As moléculas mais
simples desse grupo são as ceramidas, derivadas de ácidos graxos
ligados ao grupo amino (−NH2) no C2 da esfingosina. As ceramidas
são precursoras das esfingomielinas e glicoesfingolipídeos.
1. Esfingomielina. O grupo álcool primário da ceramida é
esterificado ao grupo fosfórico da fosfocolina ou da
fosfoetanolamina. A esfingomielina é encontrada na maioria das
membranas plasmáticas das células animais. Como o nome sugere, a
esfingomielina está presente em grande quantidade na bainha de
mielina que reveste e isola os axônios em neurônios. As suas
propriedades isolantes facilitam a rápida transmissão dos impulsos
nervosos.
2. Glicoesfingolipídeos. As ceramidas são também precursoras
dos glicoesfingolipídeos (ou glicolipídeos). Nesses compostos, os
monossacarídeos, dissacarídeos ou oligossacarídeos estão ligados por
ligação O−glicosídica. Os glicoesfingolipídeos não contêm grupos
fosfato e são eletricamente neutros. As classes mais importantes dos
gliceroesfingolipídeos são os cerebrosídeos, os sulfatídeos e os
gangliosídeos.
• Cerebrosídeos. São esfingolipídeos cujas cabeças polares
consistem de um resíduo de monossacarídeo. Os
galactocerebrosídeos, o exemplo mais comum dessa classe, são
encontrados predominantemente nas células das membranas do
cérebro.
• Sulfatídeos. São galactocerebrosídeos que contêm um grupo
sulfato esterificado na posição 3 do açúcar. Os sulfatídeos estão
negativamente carregados em pH fisiológico.
• Gangliosídeos. São os glicoesfingolipídeos que possuem
oligossacarídeos com um ou mais resíduos de ácido siálico (ácido
OH
H
O
HO
H
H
HOCH
H
H
OH
O CH
2
CH
OH CH CH
CH
(H C)2 12
CH3
C O
NH
R
2
Um cerebrosídeo

N−acetilneuramínico). Os nomes dos gangliosídeos incluem letras
e números subscritos. As letras M, D e T indicam que a molécula
contém um, dois ou três resíduos de ácido siálico,
respectivamente. Os números designam a seqüência de açúcares
ligados a ceramida. Os gangliosídeos GM1, GM2 e GM3 são os mais
conhecidos. Os gangliosídeos são componentes das membranas da
superfície celular.
Os glicoesfingolipídeos podem atuar como receptores de certas
toxinas protéicas bacterianas, como as que causam cólera, tétano e
botulismo. Algumas bactérias também ligam-se aos receptores
glicolipídicos, exemplo E. coli, Streptococcus pneumoniae e
Neisseria gonorrhoeae, agentes causadores de infecções urinárias,
pneumonia e gonorréia, respectivamente.
H
HO
O
H C C NH
H
CHOH
H
H
H
2
3
O
CHOH
CH OH
COO
O
H
O
HO
H
H
H
HO
2CH OH
H
OH
H
O
H
O
H
H
HO
2HOCH
H
O CH
CH
OH CH CH
CH
(H C)2 12
CH3
C O
NH
R
2
Um gangliosídeo

Figura 9.5
Representação das principais classes de lipídeos. Açúcar = mono ou oligossacarídeo, P =
grupo fosfato.
F. Doenças do armazenamento de esfingolipídeos
(esfingolipidoses)
São causadas por defeitos hereditários de enzimas necessárias
para a degradação dos esfingolipídeos nos lisossomas e provocam o
acúmulo desses compostos nas células. A mais comum é a doença de
Tay−Sachs, causada pela deficiência da β−hexoaminidase A, a enzima
que degrada o gangliosídeo GM2. Como a célula acumula essa
molécula, ocorre uma deterioração neurológica. Os sintomas da
doença (cegueira, fraqueza muscular e retardo mental) geralmente
aparecem alguns meses após o nascimento. Não existe terapia para as
doenças de armazenamento dos esfingolipídeos e, portanto, são
fatais.
Quadro 9.1. Doenças do armazenamento de esfingolipídeos
Doença Sintoma
Esfingolipídeo
acumulado
Enzima deficiente
Doença de Tay−Sachs Cegueira, fraqueza
muscular, retardo mental
Gangliosídeo GM2 β−Hexoaminidase A
Doença de Gaucher Retardo mental,
esplenomegalia,
hepatomegalia, erosão de
ossos longos
Glicocerebrosídeo β−Glicosídeo
Doença de Krabbe Desmielinização, retardo
metal
Galactocerebrosídeo β−Galactosidase
Doença de Niemann−Pick Retardo mental Esfingomielina Esfingomielinase
G. Isoprenóides
Os isoprenóides são um vasto grupo de biomoléculas que contém
unidades estruturais repetidas de cinco carbonos conhecidas como
unidades de isoprenos. Os isoprenóides são sintetizados a partir do
isopentenil pirofosfato formado do acetil−CoA.
Os isoprenóides consistem de terpenos e esteróides. Os terpenos
são um enorme grupo de substâncias encontradas em óleos essenciais
Glicerol
Ácido Graxo
Ácido Graxo
Ácido Graxo
Glicerol
Ácido Graxo
Ácido Graxo
P Álcool
Ácido Graxo
P Álcool
Açúcar
Ácido Graxo
Triglicerídeos Glicerofosfolipídeos
Esfingomielinas Glicoesfingolipídeos
Esfingolipídeos
Fosfolipídeos
Esfingosina
Esfingosina

das plantas. Os esteróides são derivados do anel hidrocarbonado do
colesterol.
1. Terpenos. Os terpenos são classificados de acordo com o
número de resíduos de isopreno que contém. Os monoterpenos são
compostos de duas unidades de isopreno (10 átomos de carbono). O
geraniol é um monoterpeno encontrado no óleo de gerânio. Terpenos
que contêm três isoprenóides (15 carbonos) são denominados
sesquiterpenos. Farnesene, um importante constituinte do óleo de
citronela (uma substância usada em sabões e perfumes), é um
sesquiterpeno. Fitol, um álcool vegetal, é um exemplo de diterpenos,
moléculas compostas de quatro unidades de isoprenos. O esqualeno,
encontrado em grande quantidade no óleo de fígado de tubarões,
azeite de oliva e levedura, é um exemplo de triterpenos. (Esqualeno é
um intermediário da síntese do esteróides). Os carotenóides, o
pigmento laranja encontrado em muitas plantas, são tetraterpenos
(moléculas compostas de oito unidades de isopreno). Os carotenos
são membros hidrocarbonados desse grupo. Os politerpenos são
moléculas de elevado peso molecular composto de centenas ou
milhares de unidades de isopreno. A borracha natural é um
politerpeno composto de 3.000-6.000 unidades de isopreno.
CH3 C C CH3
CH3
H
CH2 C C CH2
H
CH3
Unidade isopreno Isopreno
CH2 C CH2
CH3
CH2 O P O
O
O
-
P
O
O
-
O
-
Isopentenil pirofosfato
Várias biomoléculas importantes são formadas por componentes
não-terpenos ligados a grupos isoprenóides. Exemplos incluem
vitamina E (α-tocoferol), ubiquinona, vitamina K e algumas
citocinas.
2. Esteróides. São complexos derivados dos triterpenos
encontrados em células eucarióticas e em algumas bactérias. Cada
esteróide é composto de quatro anéis não-planares fusionados, três
com seis carbonos e um com cinco. Distinguem-se os esteróides pela
localização de ligações duplas carbono-carbono e vários substituintes
(exemplo, grupos hidroxil, carbonil e alquila).
O colesterol, uma importante molécula dos tecidos animais, é um
exemplo de um esteróide. Além de ser um componente essencial das
membranas biológicas, o colesterol é um precursor na biossíntese de
todos os hormônios esteróides, vitamina D e sais biliares. O
Ubiquinona
H CO3 CH3
H CO3 (CH CH C CH ) H2 2 10
Unidades isoprenóides
CH3
O
O

colesterol é geralmente armazenado nas células como éster de ácido
graxo. A reação de esterificação é catalisada pela enzima acil-
CoA:colesterol aciltransferase (ACAT), localizada na face
citoplasmática do retículo endoplasmático.
Os glicosídeos cardíacos, moléculas que aumentam a intensidade
da contração do músculo cardíaco, estão entre os mais interessantes
derivados dos esteróides. Os glicosídeos são acetais contendo
carboidrato. Apesar de vários glicosídeos cardíacos serem
extremamente tóxicos (exemplo, ouabaína, obtida de sementes da
planta Strophantus gratus), outros apresentam propriedades
medicinais. Por exemplo, digitalis, um extrato de folhas secas da
Digitalis purpúrea (planta ornamental dedaleira), é um estimulador
da contração do músculo cardíaco. A digitoxina, o principal
glicosídeo “cardiotônico” no digitalis, é usado no tratamento da
insuficiência cardíaca por obstrução dos vasos. Em concentrações
acima das terapêuticas, a digitoxina é extremamente tóxica. Tanto a
ouabaína como a digitoxina inibem a (Na+
−K+
)−ATPase.
9.2 Lipoproteínas
Os triacilgliceróis, o colesterol e os ésteres de colesteril são
insolúveis em água e não podem ser transportados na circulação
como moléculas livres. Em lugar disso, essas moléculas se agregam
com os fosfolipídeos e proteínas anfipáticas para formar partículas
esféricas macromoleculares conhecidas como lipoproteínas. As
lipoproteínas têm núcleo hidrofóbico contendo triacilgliceróis e
ésteres de colesteril, e camada superficial externa hidrofílica que
consiste de uma camada de moléculas anfipáticas: colesterol,
fosfolipídeos e proteínas (apoproteínas ou apolipoproteínas). As
lipoproteínas também contêm várias moléculas antioxidantes solúveis
em lipídeos (exemplo, α-tocoferol e vários carotenóides). (Os
antioxidantes destroem os radicais livres, como o radical superóxido
e radical hidroxila). As lipoproteínas são classificadas de acordo com
sua densidade:
1. Quilomícrons. Transportam os lipídeos da dieta por meio da
linfa e sangue do intestino para o tecido muscular (para obtenção de
energia por oxidação) e adiposo (para armazenamento). Os
quilomícrons estão presentes no sangue somente após a refeição. Os
quilomícrons remanescentes ricos em colesterol – que já perderam a
maioria de seu triacilgliceróis pela ação da lipoproteína−lipase
capilar – são captados pelo fígado por endocitose.
HO
Colesterol
H C3
H C3
CH CH CH CH CH2 2 2
CH3
CH3
CH3

2. Lipoproteínas de densidade muito baixa (VLDL). São
sintetizadas no fígado. Transportam triacilgliceróis e colesterol
endógenos para os tecidos extrahepáticos. No transporte das VLDL
através do organismo, os triacilgliceróis são hidrolizados
progressivamente pela lipoproteína−lipase até ácidos graxos livres e
glicerol. Alguns ácidos graxos livres retornam a circulação, ligados à
albumina, porém a maior parte é transportada para o interior das
células. Eventualmente, as VLDL remanescentes
triacilglicerol−depletados são captadas pelo fígado ou convertidas em
lipoproteínas de densidade baixa (LDL). A VLDL é precursora da
IDL (lipoproteína de densidade intermediária), que por sua vez é
precursora da LDL.
3. Lipoproteínas de densidade baixa (LDL). As partículas de
LDL são formadas a partir das VLDL. As LDL enriquecidas de
colesterol e ésteres de colesteril transportam esses lipídeos para os
tecidos periféricos. A remoção de LDL da circulação é mediada por
receptores de LDL (sítios específicos de ligação) encontrados tanto
no fígado como em tecidos extrahepáticos. Um complexo formado
entre a LDL e o receptor celular entra na célula por endocitose
(engolfamento). As lípases dos lisossomos e proteases degradam as
LDL. O colesterol liberado é incorporado nas membranas celulares
ou armazenado como ésteres de colesteril. A deficiência de receptores
celulares para as LDL desenvolve hipercolesterolemia familiar, na
qual o colesterol acumula no sangue e é depositado na pele e artérias.
4. Lipoproteínas de densidade alta (HDL). As HDL removem o
colesterol do plasma e dos tecidos extrahepáticos, transportando-o
para o fígado. Na superfície hepática, a HDL se liga ao receptor SR-
B1 e transfere o colesterol e os ésteres de colesteril para o interior do
hepatócito. A partícula de HDL com menor conteúdo de lipídeos
retorna ao plasma. No fígado o colesterol pode ser convertido em sais
biliares, que são excretados na vesícula. O risco de aterosclerose
(depósito de colesterol nas artérias) diminui com a elevação dos
níveis de HDL e aumenta com a elevação da concentração das LDL.
Célula
Colesterol
LDL
Receptor
LDL

Tabela 9.2 – Classificação, propriedades e composição das lipoproteínas humanas.
Parâmetro Quilomícrons VLDL LDL HDL
Densidade (g/mL) <0,95 0,95−1,006 1,019–1,063 1,063–1,21
Diâmetro (nm) >70 30–80 18–28 5–12
Mobilidade eletroforética Origem Pré–β β α
Composição (% do peso)
Colesterol livre 2 5–8 13 6
Colesterol esterificado 5 11–14 39 13
Fosfolipídeos 7 20–23 17 28
Triglicerídeos 84 44–60 11 3
Proteínas 2 4–11 20 50
Local de síntese Intestino Intestino, fígado Intravascular Intestino, fígado
Célula
HDL
Transportador/
flipase

Figura 9.6
Visão geral do metabolismo das lipoproteínas. Os quilomícrons formados nas células
intestinais transportam os triacilgliceróis para os tecidos periféricos, incluindo o músculo
e o tecido adiposo. Os quilomícrons remanescentes entregam os ésteres de colesteril
para o fígado. As VLDL são formadas no fígado e transportam os lipídeos endógenos
para os tecidos periféricos. Quando as VLDL são degradas (via IDL) o colesterol é
esterificado com ácidos graxos provenientes do HDL para tornar-se LDL, que transporta
o colesterol para os tecidos extra-hepáticos. A HDL envia o colesterol dos tecidos
periféricos para o fígado.
A. Lipoproteínas e aterosclerose
Aterosclerose é caracterizada por depósitos lipídicos
irregularmente distribuídos na camada íntima de artérias de grosso e
médio calibres, provocando o estreitamento das luzes arteriais e
evoluindo, por fim, para fibrose e calcificação. A limitação do fluxo
sangüíneo é responsável pela maioria dos sintomas clínicos.
Os fatores de risco para a doença arterial coronária são capazes
de lesar o endotélio vascular causando disfunção endotelial. A partir
do dano vascular, ocorre a expressão de moléculas de adesão das
células vasculares (VCAM−1) e proteína quimiotática de monócitos
(MCP−1) que atraem a entrada de monócitos em direção ao espaço
intimal. Os monócitos – que se transformam em macrófagos sob a
influência do fator estimulador de colônias de macrófagos/monócitos
(M−CSF) no espaço intimal – englobarão lipoproteínas modificadas
(predominantemente LDL oxidadas), originando as células
espumosas.
Quilomícrons
Intestino
VLDL
Fígado
Triacilglicerol
Colesterol
Éster de colesteril
Lipídios da dieta
Triacilglicerol
Colesterol
Éster de
colesteril
Tecidos periféricos
Quilomícrons
remanescentes
IDL LDL HDL

Quadro 9.1 Fatores de risco para a doença arterial coronária
São parâmetros que parecem guardar relação de
causa e efeito, com a doença arterial coronária.
Fatores de risco são atributos associados a um
aumento substancial da suscetibilidade individual
para a doença coronária, e em especial, para o seu
aparecimento precoce. Os principais são:
Tabagismo
Hipertensão arterial sistêmica (≥140/90 mmHg)
Hipercolesterolemia >200 mg/dL (LDL-C >160 mg/dL)
HDL-C baixo (<40 mg/dL)
Diabetes melito
Hipertrigliceridemia (>200 mg/dL)
Obesidade (IMC >25 kg/m
2
)
Sedentarismo
Idade (≥45 anos homens e ≥55 anos mulheres)
História familiar precoce de ateroscleorose (parentes
de primeiro grau <55 anos homens e <65 anos
mulheres)
Fatores de risco emergentes: lipoproteína (a),
homocisteína, fatores hemostáticos (antígeno do
PA−1 e t−PA), fatores proinflamatórios (proteína C
reativa), glicemia de jejum alterada e aterosclerose
subclínica.
Danos posteriores ocorrem quando as células endoteliais e da
musculatura lisa iniciam a secreção de alguns peptídios pequenos,
como o fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF),
interleucina−1 (IL−1) e fator de necrose tumoral (TNF), que
estimulam, perpetuam e ampliam o processo, levando à formação da
placa aterosclerótica. Esta é constituída por elementos celulares,
componentes da matriz extracelular e núcleo lipídico. As placas
podem ser divididas em estáveis ou instáveis.
9.3 Membranas biológicas
Muitas das propriedades dos organismos vivos (exemplo,
movimento, crescimento, reprodução e metabolismo) dependem,
direta ou indiretamente, das membranas celulares. As membranas
biológicas envolvem todas as células como também separam as
organelas no seu interior. No entanto, as membranas biológicas não
são meramente barreiras passivas; elas executam uma grande
variedade de funções complexas. Algumas proteínas presentes nas
membranas atuam como bombas seletivas que controlam o transporte
de íons e pequenas moléculas para dentro e para fora da célula e
também geram gradientes de prótons essenciais para a produção de
ATP pela fosforilação oxidativa. Por meio do controle dos sistemas
de transporte seletivo, as concentrações de substãncias em
compartimentos celulares são moduladas, excercendo, assim,
influência sobre as vias metabólicas. Receptores protéicos específicos
nas membranas reconhecem sinais extracelulares (hormônios,
reguladores de crescimento e de metabolismo) e comunica-os para o
interior das células.
As membranas biológicas típicas possuem cerca de 25-50% de
lipídeos e 50-75% de proteínas. No conceito atualmente aceito,
denominado modelo do mosaico fluido proposto por Singer e
Nicolson em 1972, a membrana é uma bicamada lipídica constituída
por uma mistura complexa de fosfolipídeos (glicerofosfolipídeos),
esteróis e esfingolipídeos cujas regiões não-polares são orientadas
para o centro da bicamada, e os grupos polares para o exterior. As
proteínas estão embebidas na bicamada lipídica e determinam as
funções biológicas da membrana.

Como cada espécie de célula e organela possui suas próprias
funções, os componentes lipídicos e protéicos das membranas
também são únicos para cada uma delas. Assim, as membranas são
constituídas por diferentes tipos de lipídeos e de proteínas em
combinações que variam consideravelmente. Por exemplo, a bainha
de mielina que envolve certos nervos, contém relativamente pouca
proteína. Em contraste, a membrana mitocondrial interna é rica em
proteínas, refletindo seu elevado grau de atividade metabólica. A
membrana plasmática dos eritrócitos é também excepcionalmente rica
em proteínas.
Apesar da diversidade da composição e de funções das
membranas, elas compartilham certos atributos fundamentais:
1. As membranas são estruturas em forma de lâmina com duas
moléculas de espessura que circundam diferentes compartimentos. A
espessura da maioria das membranas é 6nm a 10nm.
2. As membranas consistem principalmente de lipídeos e
proteínas, mas também contêm carboidratos tais como, glicoproteínas
e glicolipídeos.
3. Os lipídeos das membranas são moléculas relativamente
pequenas com porções hidrofílicas e hidrofóbicas. Quando
misturados em água esses lipídeos espontaneamente formam três
tipos de agregados: micelas, bicamadas e lipossomos.
4. Proteínas específicas mediam distintas funções das
membranas. Atuam como bombas, canais, receptores, enzimas e
transdutores de energia. As proteínas das membranas estão embebidas
nas bicamadas lipídicas, que criam um meio apropriado para a sua
ação.
5. As membranas são associações não−covalentes. As moléculas
de proteínas e as de lipídeos estão unidas por interações não-
covalentes.
6. A maioria das membranas são eletricamente polarizadas, cujo
interior é negativa [tipicamente −60 milivolts (mV)]. O potencial de
membrana exerce papel fundamental no transporte, na conversão de
energia e na excitabilidade.
A. Lipídeos da membrana
Os principais lipídeos de membranas são: gliceroesfingolipídeos,
esfingolipídeos, glicoesfingolipídeos e colesterol. As várias
membranas celulares de diferentes tcidos têm distintas composições
lipídicas. Os gliceroesfingolipídeos e esfingolipídeos são moléculas
anfipáticas (caudas hidrofóbicas e cabeças hidrofílicas) que
constituem os lipídeos mais comuns das membranas celulares. Os
ácidos graxos presentes nos gliceroesfingolipídeos e esfingolipídeos
das biomembranas são alifáticos de cadeia longa e, em geral, com
C16 e C18. Cerca de 50% dos ácidos graxos presentes nas membranas
são insaturados, com uma ou mais duplas ligações carbono-carbono
na configuração cis.
Os glicoesfingolipídeos têm um açúcar ligado e não contêm
fosfato e são não-iônicos. As classes mais importantes são: os
cerebrosídeos, os sulfatídeos e os gangliosídeos.

O colesterol não forma bicamadas por si mesmo mas compõe
cerca de 30% do conteúdo lipídico das membranas biológicas. O
colesterol modifica a fluidez da membrana e participa do controle da
microestrutura das membranas plasmáticas.
Figura 9.7
Representação esquemática de fosfolipídeos ou outros lipídeos de
membrana. O grupamento cabeça polar é hidrofílico, e as caudas
hidrocarbonadas são hidrofóbicas. Os ácidos graxos nas caudas são
saturados (S) ou insaturados (I).
Quando em concentrações adequadas, as moléculas anfipáticas
são suspensas em água e espontaneamente são agregadas em
estruturas esféricas chamadas micelas. As caudas hidrofóbicas
hidrocarbonadas ficam voltadas para o interior excluindo a água,
enquanto os grupos das cabeças polares (grupos hidrofílicos) ficam
no lado de fora da esfera para interagir com a água permitindo a
solvatação.
Figura 9.8
Micela constituída por agregado de lipídeos de cauda dupla. Os
grupamentos cabeça polares estão em contato com a água, enquanto as
caudas hidrofóbicas hidrocarbonadas estão protegidas da água.
Quando em concentrações apropriadas, os lipídeos anfipáticos
organizam-se espontaneamente na água para formar bicamadas
lipídicas, nas quais duas camadas de lipídeos formam uma lâmina
S SS I
Caudas apolares
hidrocarbonadas
Grupamento cabeça polar

bimolecular. As porções hidrofóbicas em cada lâmina, excluídas de
água, interagem entre si. Essa propriedade dos fosfolipídeos (e de
outras moléculas lipídicas anfipáticas) estabelece a estrutura básica
de todas as membranas biológicas.
Figura 9.9
Representação esquemática de bicamadas lipídicas. As estruturas
anfifílicas contêm cabeças polares ligadas a caudas sinuosas hidrofóbicas. As
caudas de ácidos graxos insaturados estão dobradas, resultando em maior
espaçamento entre os grupamentos cabeça polares e, portanto, maior espaço
para movimento.
Os lipídeos das membranas são responsáveis por várias outras
características importantes das membranas biológicas:
1. Fluidez da membrana. Por não estarem ligadas
covalentemente, existe liberdade para as moléculas individuais dos
lipídeos e das proteínas se movimentarem lateralmente no plano da
membrana. A rápida difusão lateral de moléculas de lipídeos nas
bicamadas é, aparentemente, responsável pelo funcionamento
apropriado de muitas moléculas protéicas. (O movimento de
transverso não catalisado de um lado para outro – flip−flop − dos
glicerofosfolipídeos e esfingolipídeos nas bicamadas é extremamente
raro). A fluidez da membrana é principalmente determinada pela
percentagem de ácidos graxos insaturados presentes nas moléculas de
fosfolipídeos. Altas concentrações de cadeias insaturadas resultam
em membranas mais fluidas. O colesterol modula a estabilidade da
membrana sem comprometer grandemente a fluidez por conter
elementos estruturais rígidos (sistema de anéis esteróides) e flexíveis
(caudas de hidrocarbonetos) que interferem na movimentação das
cadeias laterais de ácidos graxos.
2. Permeabilidade seletiva. Devido a sua natureza hidrofóbica,
as cadeias hidrocarbonadas nas bicamadas lipídicas organizam uma
barreira virtualmente impenetrável para o transporte de substâncias
iônicas e polares. Proteínas membranas específicas regulam o
movimento dessas substâncias para dentro e para fora das células.
Cada membrana exibe sua própria capacidade de transporte ou
seletividade baseado em seus componentes protéicos.
3. Capacidade de auto-selar. Quando as bicamadas lipídicas são
rompidas, elas imediata e espontaneamente são reconstituídas porque
uma quebra na camada lipídica expõem as cadeias de hidrocarbonetos
hidrofóbicas à água. Como a brecha nas membranas celulares podem
ser letais, a propriedade de reconstituição é crítica.
Hidrofóbico
Hidrofílico
Hidrofílico
Aquoso
Aquoso

4. Assimetria. As membranas biológicas são assimétricas; ou
seja, os componentes lipídicos das duas lâminas da bicamada são
diferentes. Por exemplo, a membrana dos eritrócitos humanos
possuem substancialmente mais fosfatidilcolina e esfingomielina na
superfície externa. A maior parte da fosfatidilserina e
fosfatidiletanolamina da membrana está na superfície interna. A
assimetria da membrana é fundamental pois cada lado da membrana
está exposta a diferentes compartimentos (intracelular e extracelular,
respectivamente). A assimetria tem lugar durante a síntese de
membrana, já que a biossíntese dos fosfolipídeos ocorre somente em
um lado da membrana. Os componentes protéicos das membranas
também exibem considerável assimetria com distintos domínios
funcionais diferentes dentro da membrana e as faces citoplasmáticas
e extracelulares da membrana.
B. Proteínas de membrana
A maioria das funções associadas com as membranas biológicas
necessita de moléculas de proteínas. As proteínas de membrana são
classificadas de acordo com seus modos de associação com a
bicamada lipídica em proteínas integrais, proteínas periféricas e
proteínas ligadas a lipídeos. Grande parte dessas moléculas são
componentes estruturais, enzimas, receptores de hormônios ou
proteínas transportadoras.
Proteína
integral
Proteína
periférica
Proteína
ligada a lipídeos
Figura 9.10
Proteínas de membrana. Representação esquemática de proteína integral
firmemente associada à membrana por interações hidrofóbicas, proteína
periférica ligada por interações hidrofóbicas e pontes de hidrogênio e
proteína ligada a lipídeos por meio de cauda hidrofóbina incorporada à
bicamada.
1. Proteínas integrais (intrínsicas). São proteínas firmemente
associadas às membranas por meio de ligações hidrofóbicas. Essas
moléculas só podem ser separadas pelo rompimento da membrana por
agentes que interferem nas interações hidrofóbicas, como solventes
orgânicos, desnaturantes ou detergentes.
As duas mais importantes proteínas integrais de membranas dos
eritrócitos são a glicoforina e a proteína de canais de ânions. A
glicoforina é uma glicoproteína com 131 aminoácidos. Cerca de 60%
de seu peso são carboidratos. Certos grupos oligossacarídeos da
glicoforina constituem os antígenos dos grupos sangüíneos ABO e
MN. Entretanto, apesar de todas as pesquisas, as funções da
glicoforina ainda são desconhecidas. A proteína de canais de ânions é

composta de duas subunidades idênticas, cada uma consistindo de
929 aminoácidos. Essa proteína exerce um importante papel no
transporte de CO2 no sangue. O íon HCO3
−
formado a partir do CO2
pela ação da anidrase carbônica, difunde através da membrana do
eritrócito por meio dos canais de ânions em troca do íon Cl−
. A troca
de Cl−
por HCO3
−
, chamada desvio do cloreto, preserva o potencial
elétrico da membrana dos eritrócitos.
2. Proteínas periféricas (extrínsicas). São proteínas ligadas às
membranas por meio de interações eletrostáticas e pontes de
hidrogênio. Algumas proteínas periféricas interagem diretamente com
a camada bilipídica. Normalmente, as proteínas periféricas podem ser
liberadas das membranas por procedimentos relativamente simples,
tais como, uso de soluções salinas concentradas ou mudanças de pH
que alteram as interações não-covalentes entre as cadeias laterais de
aminoácidos.
As proteínas periféricas de membranas dos eritrócitos, composta
principalmente de espectrina, anquirina e banda 4.1, estão envolvidas
na preservação da forma de disco bicôncavo do eritrócito normal.
Essa forma permite a rápida difusão de O2 para as moléculas de
hemoglobina, posicionando-as a uma distância menor do que 1 µm da
superfície celular. A espectrina, uma proteína filamentosa longa, é
um tetrâmero, composto de dois dímeros αβ, que ligam a anquirina e
a banda 4.1. A anquirina é um peptídeo globular de grande tamanho
que liga a espectrina à proteína de canal iônico. Essa é uma conexão
entre o citoesqueleto dos eritrócitos e sua membrana plasmática. A
banda 4.1 liga-se tanto a espectrina como a filamentos actina (um
componente citoesquelético encontrado em muitos tipos de células).
Como a banda 4.1 também se liga a glicoforina, essa também está
associada ao citoesqueleto e a membrana.
3. Proteínas ligadas a lipídeos. São proteínas de membranas que
contêm lipídeos ligados covalentemente. Os lipídeos ligados são
responsáveis por uma âncora hidrofóbica, a qual se insere no interior
da bicamada lipídica e conserva a proteína na superfície da
membrana. A ligação das proteínas à lipídeos ocorrem de três modos:
(a) miristoilação: o ácido mirístico está unido a proteína de
membrana por ligação amida com o grupo α-amino da glicina
amino−terminal; (b) palmitolilação: o ácido palmítico está unido por
ligação tioéster a um resíduo de cisteína e (c) prenilação: os lipídeos
estão ligados às proteínas por unidades de isopreno.

Figura 9.11
Ancoramento de proteínas à membrana. (a) Miristoilação. (b) Palmitoilação. (c)
Prenilação. O lipídeo âncora é um grupo farnesil com 15 carbonos.
Muitos eucariotos, particularmente os protozoários parasitas,
contêm proteínas ligadas pelo C-terminal a um grupo
lipídeo−carboidratos, conhecido como glicosilfosfatidilinositol (GPI).
A estrutura do grupo GPI consiste de um fosfatidilinositol, um
tetrassacarídeo e uma fosfoetanolamina.
C O
(a) (b)
HN CH C2
O
C O
NH CH C
O
S
CH2
(c)
NH CH C O CH
O
S
CH2
3
O

Figura 9.12
Proteínas ligadas a glicosilfosfatidilinositol. Os hexágonos representam diferentes monossacarídeos
que variam com a identidade da proteína. Os resíduos de ácidos graxos do grupo fosfatidilinositol
também variam consideravelmente.
C. Glicoproteínas de membrana
Como os lipídeos de membrana, as proteínas de membrana estão
distribuídas assimetricamente entre as bicamadas. Por exemplo,
algumas proteínas ligadas à membrana voltadas para o interior (as
proteínas ligadas ao glicosilfosfatidilinositol são exceções). A face
exterior da membrana nas células de vertebrados é rica em
glicoesfingolipídeos (cerebrosídeos e gangliosídeos) e glicoproteínas.
As cadeias de oligossacarídeos (polímeros de resíduos de
monossacarídeos) presentes nas glicoproteínas e que estão
covalentemente ancoradas aos lipídeos e as proteínas de membrana
envolvem as células como uma cobertura em plumagem.
Várias cadeias de carboidratos estão ancoradas às proteínas como
oligossacarídeos N-ligados ou O-ligados. Em muitas proteínas
NH CH C NH CH CH
O
R
22
O
O P O
O
H
HO
O
HO
H
OH
H
H
H
O
OH
H
O
O P O
CH CH CH2 2
C O
2
O
C O
O

solúveis, particularmente as extracelulares, os oligossacarídeos
ajudam a estabilizar a proteína sob condições extracelulares hostis.
Os resíduos de monossacarídeo podem ligar-se uns aos outros de
diferentes modos e em seqüências potencialmente ilimitadas. Essa
diversidade, presente em glicolipídeos e glicoproteínas, é uma forma
de informação biológica. Por exemplo, o sistema ABO de grupos
sanguíneos é baseado na diferença na composição de carboidratos dos
glicolipídeos e das glicoproteínas nos eritrócitos. Muitas outras
células parecem reconhecer uma a outra baseado nos carboidratos
existentes em suas superfícies.
Figura 9.13
Ligação oligossacarídica em glicoproteínas. (a) Nos oligossacarídeos
N−ligados, o resíduo N−acetilglicosamina está ligado por ligação glicosídica à
proteína via o N da amida de resíduos específicos de Asn. Os oligossacarídeos
tipicamente contêm vários resíduos monossacarídicos adicionais ligados em
seqüência a um dos grupos OH da glicosamina. (b) Nos oligossacarídeos
O−ligados, a N−acetilgalactosamina está covalentemente ligada a átomos de O
de cadeias laterais de resíduos específicos de Ser ou Thr.
9.4 Transporte através de membranas
As membranas estão envolvidas em um grande número de
funções nas células vivas. Entre as mais importantes estão o (a)
transporte de moléculas e íons para o interior e exterior das células e
de organelas e (b) ligação de hormônios e outras biomoléculas.
O fluxo de íons e moléculas é altamente regulado para atingir as
necessidades metabólicas de cada célula. Por exemplo, a membrana
plasmática regula a entrada de moléculas nutrientes e a saída de
produtos de excreção, além das concentrações intracelulares de íons.
Como as bicamadas lipídicas são geralmente impermeáveis a íons e a
moléculas polares, o trânsito é mediado por proteínas integrais que
reconhecem e transportam esses compostos: canais de membranas,
transportadores passivos (movem substratos a favor do seu gradiente
de concentração) e transportadores ativos (movem o substrato contra
seu gradiente de concentração). Vários exemplos dessas estruturas,
(a)
O
OH
H
O
H
HO
H
CH OH
H
H
NH
NH C CH CH Asn
2
2
NH
C O
C O
CH3
(b)
OH
H
O
HO
H
H
CH OH
H
O
NH
CH CH Ser
2
2
NH
C O
C O
CH3

chamadas transportadores, carreadores, transladadores ou permeases,
serão descritas.
Os mecanismos biológicos de transporte são classificados de
acordo com suas propriedades cinéticas e com a necessidade ou não
de energia. Os diferentes sistemas de transporte são realizados por
proteínas integrais de membrana (porinas, canais iônicos,
transportadores passivos e transportadores ativos), também como por
exocitose e endocitose.
A. Sistemas de transporte
O transporte de substratos através das membranas é executada
por proteínas integrais de membrana que se ligam a um substrato de
um lado da membrana, conduzem-no através da bicamada e liberam-
no no outro lado. Os transportadores diferem quanto ao número de
solutos (substratos) transportados e na direção em cada um é
transportado. O transporte pode ser classificado como:
• Uniporte (transporte único) envolve o movimento de uma única
molécula de soluto de cada vez. A família de transportadores de
glicose constituída de cinco membros, denominados GLUT-1 a
GLUT-5 exemplifica o uniporte.
• Simporte (co−transporte) transporta simultaneamente duas
moléculas diferentes de soluto na mesma direção. A glicose,
aminoácidos, muitos íons e outros nutrientes presentes no filtrado
dos túbulos proximais dos rins são quase completamente
reabsorvidos por processos de simporte.
• Antiporte (contratransporte) transporta simultaneamente duas
moléculas diferentes de soluto em direções opostas.
Figura 9.14 – Sistemas de transporte uniporte, simporte e antiporte.
A classificação não descreve se os processos necessitam energia
(transporte ativo) ou independentes de energia (transporte passivo).
Uniporte Simporte Antiporte

Figura 9.15
Transporte de soluto através de membranas.
B. Porinas
As porinas são as mais simples transportadoras de membrana.
Estão localizadas nas membranas externas das bactérias,
mitocôndrias e cloroplastos. São proteínas intrínsicas de membrana
que permitem a livre difusão de moléculas de até 1000 D a favor do
seu gradiente de concentração. Todas as porinas conhecidas são
trímeros protéicos nos quais cada subunidade forma um domínio de
16 ou 18 fitas de barril β.
As membranas externas de algumas bactérias são ricas em
porinas que permitem a passagem de íons ou pequenas moléculas de
um lado da membrana para o outro. As porinas são seletivas a
solutos; atuam como peneira permanentemente aberta.
As aquaporinas são proteínas integrais que formam canais para a
passagem de moléculas de água através das membranas plasmáticas.
Atuam na reabsorção, retenção, secreção e captação de água em
vários tecidos. Existem no mínimo dez aquaporinas nos mamíferos
com seis segmentos helicoidais que estão envolvidas em diferentes
funções.
C. Canais iônicos
As membranas plasmáticas das células animais contêm muitos
canais protéicos altamente específicos para determinados íons.
Alguns desses canais estão sempre abertos enquanto outros, abrem e
fecham em resposta a sinais específicos. As membranas de células
nervosas possuem canais de potássio que permitem a passagem rápida
do íon. Os canais permitem aos íons K+
passar até 10.000 vezes mais
facilmente que os íons Na+
. Os canais de K+
são constituídos de
quatro subunidades idênticas que atravessam a membrana e formam
um cone que circunda o canal iônico. As entradas internas e externas
dos canais possuem aminoácidos carregados negativamente que
atraem cátions e repelem ânions. Os cátions hidratados promovem
uma contração eletricamente neutra do canal chamada seletividade
iônica do filtro. Os íons potássio perdem rapidamente parte de sua
água de hidratação e atravessam o filtro seletivo. Os íons sódio
aparentemente retêm mais água de hidratação e assim transitam pelo
filtro mais lentamente. O restante do canal tem revestimento
hidrofóbico. Baseado na comparação das seqüências de aminoácidos,
ATP ADP + Pi
Difusão
simples
Difusão
facilitada
Transporte
ativo

as propriedades estruturais dos canais de potássio são também
aplicadas a outros tipos de canais.
D. Transporte passivo
O transporte passivo é o movimento de moléculas ou íons
solúveis de um compartimento de maior concentração, através de uma
membrana permeável, para um compartimento de menor
concentração. O processo não necessita de energia. Os mais simples
transportadores de membrana podem ser classificados de acordo com
o número de moléculas transportadas.
O transporte passivo inclui dois sistemas: difusão simples e
difusão facilitada.
1. Difusão simples. Cada soluto, impulsionado por movimento
molecular aleatório, difunde-se através da membrana de acordo com
seus respectivos gradientes de concentração – de um compartimento
de maior concentração para um compartimento de menor
concentração. O caráter hidrofóbico das moléculas é um fator
importante para seu transporte através da membrana, uma vez que a
bicamada lipídica é hidrofóbica. Em geral, quanto maior o gradiente
de concentração, mais rápida a velocidade de difusão do soluto. A
difusão de moléculas pequenas apolares (como O2, N2 e CO2) através
da membrana é proporcional aos seus gradientes de concentração.
Moléculas polares não-carregadas (como uréia, etanol e pequenos
ácidos orgânicos) deslocam-se através das membranas sem o auxílio
de proteínas.
2. Difusão facilitada. Transporte de certas moléculas grandes ou
polares (como aminoácidos e açúcares) ocorre através de canais
especiais ou moléculas transportadoras. Os canais são proteínas
transmembrana semelhantes a um túnel. Cada tipo é designado pelo
transporte de um soluto específico. Muitos canais são controlados
quimicamente ou por voltagem. Os canais quimicamente regulados
abrem ou fecham em resposta a sinais químicos específicos. Por
exemplo, o canal iônico por onde se movimenta o Na+
no receptor
nicotínico da acetilcolina (encontrada nas membranas das células
plasmáticas dos músculos) se abre quando a acetilcolina se liga. O
Na+
é arremetido para o interior da célula com redução do potencial
elétrico transmembrana que causa despolarização. A despolarização
promovida pela acetilcolina abre o canal vizinho de sódio (chamado
de canal de Na+
dependente de voltagem). A repolarização, o
restabelecimento do potencial de membrana, inicia com a difusão de
íons K+
para fora da célula através de canais de K+
dependentes de
voltagem. A difusão de íons K+
para o exterior da célula torna o
interior menos positivo, ou seja, mais negativo.
Outra forma de difusão facilitada envolve proteínas chamadas
transportadoras ou permeases. No transporte mediado por
transportadores, um soluto específico liga-se ao transportador em um
lado da membrana e promove uma alteração conformacional no
transportador. O soluto é então translocado através da membrana e
liberado. Nos eritrócitos o transportador de glicose é um exemplo
bem caracterizado de transportador passivo. Ele permite que a D-
glicose difunda através da membrana da célula para ser utilizada na
glicólise e pela via das pentoses−fosfato. A difusão facilitada
aumenta a velocidade que certos solutos se movem em direção do seu

gradiente de concentração. Esse processo não pode causar o aumento
líquido na concentração do soluto em um lado da membrana.
E. Transporte ativo
É o movimento de substâncias contra gradiente de concentração
ou eletroquímico. O processo de transporte necessita de aporte de
energia. Os sistemas mais importantes de transporte ativo são a
(Na+
−K+
)−ATPase (também chamada ATPase transportadora de íons
ou bomba de Na+
−K+
), e a Ca2+
−ATPase (bomba de Ca+
), criam e
mantêm gradientes eletroquímicos através da membrana plasmática e
através das membranas das organelas. A (Na+
−K+
)−ATPase e a
Ca2+
−ATPase usam a energia da hidrólise do ATP na sua translocação
ativa de substâncias. As duas formas de transporte ativo são:
transporte ativo primário e transporte ativo secundário.
1. Transporte ativo primário. Os transportadores ativos
primários utilizam o ATP diretamente como fonte de energia para
impulsionar o transporte de íons e moléculas. As diferentes
concentrações de Na+
e K+
no interior e exterior das células
eucarióticas são mantidas por mecanismos antiporte pela enzima
(Na+
−K+
)−ATPase, encontrada em todas as membranas celulares. Em
cada ciclo, a (Na+
−K+
)−ATPase hidrolisa 1 ATP e bombeia 3 íons Na+
para o exterior e 2 íons K+
para o interior das células.
Uma proteína transportadora ativa, a P−glicoproteína, parece
exercer papel fundamental na resistência de células tumorais a
quimioterápicos. A resistência multifármaco é a causa dominante do
malogro no tratamento clínico do câncer humano. A P-glicoproteína é
uma glicoproteína integral de membrana abundante em membranas
plasmáticas de células resistentes a fármacos. Usando o ATP como
fonte de energia, a P-glicoproteína bombeia uma grande variedade de
compostos tais como fármacos, para fora das células, contra gradiente
de concentração. Desse modo, a concentração de fármacos no citosol
é mantida em níveis baixos para evitar a morte da célula. A função
fisiológica normal da P-glicoproteína parece ser a remoção de
compostos hidrofóbicos tóxicos da dieta.
2. Transporte ativo secundário. É dirigido por um gradiente
eletroquímico transmembrânico de Na+
ou H+
utilizado para o
deslocamento. O transporte ativo ascendente de um soluto é acoplado
ao transporte descendente de um segundo soluto que foi concentrado
pelo transporte primário ativo. Por exemplo, o gradiente de Na+
criado pela (Na+
−K+
)−ATPase é usado no túbulo renal e células
intestinais para transportar a D-glicose por um simporte Na+
-glicose;
o transporte ativo de glicose, assim, desfaz o gradiente de
concentração do Na+
, que é restabelecido pela (Na+
−K+
)−ATPase.
(Figura 9.7). Portanto, a hidrólise do ATP indiretamente fornece a
energia necessária à captação de glicose, sendo associada pelo
gradiente iônico do Na+
.

Figura 9.16
Transporte ativo secundário. A (Na
+
−K
+
)−ATPase gera um gradiente de íon
sódio (estabelecido por um transporte ativo primário) que direciona o
transporte ativo secundário da glicose nas células epiteliais do intestino. A
glicose é transportada juntamente com o Na
+
através da membrana
plasmática para dentro da célula epitelial.
Existem outras proteínas transprtadoras que necessitam ATP para
bombear substâncias como prótons e íons Ca2+
contra gradientes de
concentração. Por exemplo, a Ca2+
−ATPase é um sistema de
transporte ativo que bombeia íons cálcio para dentro do retículo
endoplasmático especializado (retículo sarcoplasmático) das células
musculares. O cálcio é mantido em baixas concentrações no citosol
pela hidrólise do ATP em ADP e Pi que direciona o íon cálcio para o
retículo sarcoplasmático através da membrana e contra um gradiente
eletroquímico.
Defeitos no mecanismo de transporte da membrana podem
provocar sérias conseqüências. Um exemplo da disfunção do
transporte ocorre na fibrose cística. A fibrose cística, doença
autossômica recessiva, é provocada pela falta ou defeito em uma
glicoproteína de membrana, denominada regulador da condutividade
transmembrânica da fibrose cística (CFTR), que atua como um canal
para íons cloreto nas células epiteliais e é um membro da família de
proteínas chamadas transportadores da caixa ATP−ligante, ABC (ATP
binding cassete). O canal para íons cloreto é vital para a absorção de
sal (NaCl) e água através das membranas plasmáticas das células
epiteliais em tecidos como pulmões, fígado, intestino delgado e
glândulas sudoríparas. O transporte de cloretos ocorre quando
moléculas sinalizadoras abrem os canais CFTRCl−
na superfície das
membranas das células epiteliais. Na fibrose cística, o defeito dos
canais CFTR resulta na retenção de Cl−
no interior das células. Um
muco espesso ou outras formas de secreção causa a excessiva
captação de água devido à pressão osmótica. As características
encontradas na fibrose cística são: doença pulmonar (obstrução do
fluxo de ar e infecções bacterianas crônicas) e insuficiência
pancreática (impedimento da produção de enzimas digestivas que
pode resultar em deficiência nutricional severa). A mutação mais
comum que causa a fibrose cística é a deleção do resíduo Phe508
da
CFTR, o que causa um enovelamento defeituoso e a inserção de uma
proteína mutante na membrana plasmática.
Glicose-permease (Na -K )-ATPase
Na Glicose+
+ +
Na+
K+
Na Glicose+
Na+
K+
Exterior
Interior

Figura 9.17
Regulador da condutividade transmembrânica da fibrose cística (CFTR).
A proteína CFTR está posicionada na membrana celular para formar um
canal para o Cl−
sair da célula.
H. Endocitose e exocitose
Os mecanismos de transporte descritos acima ocorrem em um
fluxo de moléculas ou íons através de membranas intactas. As células
também necessitam importar e exportar moléculas muito grandes para
serem transportadas via poros, canais ou proteínas transportadoras.
Os procariontes possuem sistemas especializados multicomponentes
em suas membranas que permitem secretar certas proteínas (muitas
vezes toxinas ou enzimas) para o meio extracelular. Na maioria das
células eucarióticas, certos componentes de grande tamanho
transitam para dentro e para fora da célula por endocitose e exocitose,
respectivamente. Nos dois casos, o transporte envolve a formação de
um tipo especializado de vesícula lipídica.
1. Endocitose. A endocitose é um mecanismo para o transporte
de componentes do meio circundante para o interior do citoplasma. A
endocitose mediada por receptores, inicia com o seqüestro de
macromoléculas por proteínas receptoras específicas presentes nas
membranas plasmáticas das células. A membrana então se invagina,
formando uma vesícula que contêm as moléculas ligadas. Uma vez
dentro da célula, a vesícula, sem o seu revestimento, funde-se com
endossomos (outro tipo de vesícula) e a seguir com um lisossomo. No
interior do lisossomo, o material endocitado e o receptor são
degradados. Alternativamente, o ligante, o receptor, ou ambos podem
ser reciclados entre a membrana plasmática e o compartimento
endossômico. A fagocitose é um caso especial de endocitose.
Líquido
extracelular
Membrana
celular
Citosol
CFTR
Cl

A
B
Figura 9.18
A. A endocitose inicia com o seqüestro de macromoléculas ela membrana
plasmática da célula. A membrana invagina, formando uma vesícula que
contêm as moléculas ligadas (figura superior). B. Microfotografia eletrônica
da endocitose.
2. Exocitose. A exocitose é o inverso da endocitose. Durante a
exocitose, os materiais destinados à secreção são encapsulados em
vesículas no aparelho de Golgi. As vesículas podem fundir com a
membrana plasmática, liberando o seu conteúdo para o meio
circundante. Os zimogênios das enzimas digestivas são exportados
pelas células pancreáticas desse modo.
Membrana plasmática
Figura 9.19
Mecanismo da exocitose
Citoplasma

9.5 Fusão de membranas
Uma importante característica das membranas biológicas é a sua
capacidade de se fundir com uma outra membrana sem perder a sua
integridade. As proteínas integrais necessárias para as fusões de
membranas são chamadas SNAREs (soluble
N−ethylmaleimide−sensitive-factor attachment protein receptor) que
exercem funções no direcionamento, ancoragem e fusão de vesícula.
A fusão é um processo multi-etapas que inicia com a formação de
bastões em forma de grampo que aproximam as proteínas ligadas às
membrana-alvo (por exemplo, a membrana da vesícula) a outra (por
exemplo, a membrana plasmática). Várias proteínas parecem
participar na junção das duas membranas preparando-as para a fusão.
Resumo
1. Os lipídeos são biomoléculas com grande variedade estrutural. São
solúveis em solventes não-polares. São: ácidos graxos e seus derivados,
triacilgliceróis, ésteres graxos, fosfolipídeos, lipoproteínas,
esfingolipídeos e isoprenóides.
2. Os ácidos graxos são ácidos monocarboxílicos que ocorrem
principalmente como triacilgliceróis, fosfolipídeos e esfingolipídeos. Os
eicosanóides são um grupo de moléculas hormônio−like derivados de
ácidos graxos de cadeias longas. Os eicosanóides incluem as
prostaglandinas, tromboxanos e leocotrienos.
3. Os triacilgliceróis são ésteres de glicerol com três moléculas de ácidos
graxos. Os triacilgliceróis (chamadas gorduras) são sólidos a temperatura
ambiente (possuem principalmente ácidos graxos saturados). Os líquidos
a temperatura ambiente (ricos em ácidos graxos insaturados) são
denominados óleos. Os triacilgliceróis, a principal forma de transporte e
armazenamento de ácidos graxos, são uma importante forma de
armazenamento de energia em animais. Nas plantas são armazenados nas
frutas e sementes.
4. Os fosfolipídeos são componentes estruturais das membranas. Existem
dois tipos de fosfolipídeos: glicerofosfolipídeos e esfingomielinas.
5. Os esfingolipídeos são também componentes importantes das membranas
celulares de animais e vegetais. Contêm um aminoálcool de cadeia
longa. Nos animais esse álcool é a esfingosina. A fitoesfingosina é
encontrada nos esfingolipídeos vegetais. Os glicolipídeos são
esfingolipídeos que possuem grupos carboidratos e nenhum fosfato.
6. Os isoprenóides são moléculas que contêm unidades isoprênicas de cinco
carbonos repetidas. Os isoprenóides consistem de terpenos e esteróides.
7. As lipoproteínas plasmáticas transportam moléculas de lipídeos através
da corrente sangüínea de um órgão para outro. Elas são classificadas de
acordo com a densidade. Os quilomícrons são lipoproteínas volumosas
de densidade extremamente baixa que transportam os triacilgliceróis e
ésteres de colesteril da dieta, do intestino para o tecido adiposo e
músculo esquelético. As VLDL são sintetizadas no fígado e transportam
lipídeos para os tecidos. No transporte pela corrente sangüínea, elas são
convertidas em LDL. As LDL são captadas pelas células por endocitose
após ligação a receptores específicos localizados na membrana
plasmática. As HDL, também produzidas pelo fígado, captam o
colesterol das membranas celulares e outras partículas lipoprotéicas. As
LDL tem importante papel no desenvolvimento da aterosclerose.
8. De acordo com o modelo do mosaico fluído, a estrutura básica das
membranas biológicas é uma bicamada lipídica na qual as proteínas

flutuam. Os lipídeos da membrana (a maioria dos quais são
fosfolipídeos) são os principais responsáveis pela fluidez,
permeabilidade seletiva e a capacidade de auto-selar das membranas. As
proteínas das membranas geralmente definem as funções biológicas
específicas. Dependendo de sua localização, as proteínas de membranas
podem ser classificadas como integrais, periféricas ou ligadas a lipídeos.
Exemplos de funções nas quais as proteínas de membranas estão
envolvidas incluem o transporte de moléculas e íons e a ligação de
hormônios e outros sinais metabólicos extracelulares.
9. Algumas moléculas pequenas ou hidrofóbicas podem difundir através da
bicamada lipídica. Poros, canais iônicos transportadores passivos e
ativos mediam o movimento de íons e moléculas polares através das
membranas. As macromoléculas deslocam-se para dentro e para fora das
células por endocitose ou exocitose, respectivamente.
Referências
HORTON, H. R., MORAN, L. A., OCHS, R. S., RAWN, J. D., SCRIMGEOUR,
K. G. Principles of biochemistry. 3 ed. Upper Saddle River: Prentice Hall,
2002. p. 264-303.
Paulo: Sarvier, 2002. p. 280-339.
Alegre: Artmed, 2000. p. 195-218.

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Metabolismo dos
Lipídeos
Capítulo
10

265
10
Metabolismo dos Lipídeos
Objetivos
1. Descrever a digestão e absorção dos lipídeos.
2. Descrever o transporte intracelular de ácidos graxos através da membrana
mitocondrial.
3. Descrever a β−oxidação dos ácidos graxos usando um esquema metabólico.
4. Calcular o balanço energético da oxidação total de um mol de ácido graxo.
5. Descrever a regulação da oxidação dos ácidos graxos.
6. Descrever a formação e degradação de corpos cetônicos e seu papel na
inanição e diabete melito.
7. Descrever o transporte de grupos acetil da mitocôndria para o citosol.
8. Descrever as reações de biossíntese de ácidos graxos pelo complexo ácido
graxo sintase.
9. Descrever o controle da biossíntese dos ácidos graxos.
10. Reconhecer que a glicose é a principal fonte de acetil−CoA, de oxaloacetato e
de NADPH para a biossíntese dos ácidos graxos.
11. Identificar os processos de formação de ácidos graxos de mais de 16 átomos
de carbono e de obtenção de ácidos graxos insaturados.
12. Descrever a síntese de triglicerídeos.
13. Descrever o metabolismo dos lipídeos de membrana.
14. Descrever o metabolismo do colesterol.
15. Descrever a formação de eicosanóides.
A acetil−CoA, uma molécula de “alta energia” composta de
coenzima A e um grupo acetil, exerce papel fundamental no
metabolismo dos lipídeos. Em muitos processos metabólicos
relacionados aos lipídeos, a acetil−CoA atua como substrato ou
produto. Por exemplo, a acetil−CoA não usada imediatamente para a
geração de energia celular é empregada na síntese dos ácidos graxos.
Quando os ácidos graxos de cadeia longa são oxidados para liberar
energia, forma-se acetil−CoA. Três moléculas de acetil−CoA são
combinadas para formar isopentenil pirofosfato, a molécula
construtora de isoprenóides nas reações sintéticas. Assim, moléculas
tão diversas como terpenos e esteróides encontrados em animais e
plantas são sintetizadas a partir de acetil−CoA. Pelo papel importante
dos lipídeos na geração de energia e na formação de materiais

estruturais para as células vivas, o seu metabolismo e os seus
mecanismos de controle são descritos nesse capítulo.
10.1 Digestão e absorção dos lipídeos
Os lipídeos ingeridos são constituídos principalmente por
triacilgliceróis (90% do total) e, em menor grau, glicerofosfolipídeos,
colesterol, ésteres de colesteril e ácidos graxos livres. No trato
gastrointestinal, os lipídeos são emulsificados, digeridos por enzimas
hidrolíticas e absorvidos pelas células da mucosa intestinal.
Em razão da pouca solubilidade em meio aquoso, os lipídeos se
agregam em grandes complexos dificultando a hidrólise enzimática e
a absorção intestinal. Esses obstáculos são contornados pelo emprego
de agentes emulsificantes que aumentam a interface lipídio-água
permitindo a ação das enzimas intestinais hidrossolúveis, também
como a “solubilização” dos produtos de hidrólise.
Os lipídeos da dieta são emulsificados no duodeno pela ação
detergente dos sais biliares. Os sais biliares são moléculas
anfipáticas sintetizadas pelo fígado a partir do colesterol e
temporariamente armazenados na vesícula biliar e liberados no
intestino delgado após a ingestão de gorduras. Os principais são o
glicocolato de sódio e o taurocolato de sódio derivados dos ácidos
glicocólico e taurocólico, respectivamente (ver Seção 10.7.C). A
emulsificação é possível pela natureza anfipática dos sais biliares. A
porção polar das moléculas de sais biliares, interage com a água,
enquanto o grupo não-polar interage com os lipídeos hidrofóbicos.
Desse modo, os lipídeos são finamente dispersos no meio aquoso.
HO
Ácido glicocólico
OH
OH
CH CH
H C C NH
2
3CH
2
O CH2
COOH
HO
Ácido taurocólico
OH
OH
CH CH
H C C NH
2
3CH
2
O CH2
CH2
SO H3

10 Metabolismo dos lipídeos • 267
Três enzimas hidrolíticas são encontradas no suco pancreático
secretado no duodeno: lipase−pancreática, colesterol−esterase e
fosfolipase A2.
A lipase−pancreática catalisa a hidrólise dos triacilgliceróis com
a formação de 2−monoglicerol e 2 ácidos graxos:
A colipase, um co-fator protéico também produzido pelo
pâncreas, é essencial na estabilização da lipase, não permitindo sua
desnaturação ou inibição pelos sais biliares.
Figura 10.1.
Alterações no estado físico durante a digestão dos triacilgliceróis. (TG =
triacilgliceróis, AG = ácidos graxos, MG = monoacilgliceróis).
Os ésteres de colesteril ingeridos na dieta são emulsificados pelos
sais biliares e, então, hidrolisados pela colesterol−esterase a
colesterol e ácidos graxos livres:
Éster de colesteril + H2O  → −esteraseColesterol
colesterol + ácido graxo
A fosfolipase A2, secretada na forma de pró-enzima e ativada pela
tripsina, catalisa a hidrólise dos resíduos de ácidos graxos presentes
R C O C H2
2O CH OH
2CH OH
Triacilglicerol
H O2
Lipase
pancreática
O C R O C R 2 H+ +
O O
3
+
R C O C H2
2O CH O C R
O
1
2CH O C R
O
3
Triacilglicerol
2-Monoacilglicerol
Triacilgliceróis
Lipase
TG
+AG
+MG

na posição 2 dos fosfoglicerídeos, formando 1-acil
lisofosfoglicerídeos:
O suco pancreático contém outras esterases menos específicas
que atuam sobre monoacigliceróis e outros ésteres lipídicos, como os
de vitamina A com ácidos carboxílicos.
Os produtos da lipólise são incorporados a miscelas mistas com
sais biliares conjugados. As miscelas são os principais veículos no
movimento dos ácidos graxos, monoacigliceróis e glicerol da luz para
a superfície das células da mucosa intestinal onde ocorre a absorção.
Na ausência de sais biliares, a absorção dos lipídeos é drasticamente
reduzida com a presença excessiva de gorduras nas fezes
(esteatorréia). A esteatorréia ocorre também por deficiência de lipase
pancreática ou defeitos de absorção ao nível da mucosa intestinal e
outras condições que comprometem a absorção das gorduras.
Na célula da mucosa intestinal, o destino dos ácidos graxos
absorvidos é determinado pelo comprimento de suas cadeias
carbonadas. Ácidos graxos de cadeia curta (2-10 átomos de carbono)
são hidrossolúveis, sendo diretamente liberados para o sangue portal
sem alterações e transportados ao fígado unidos à albumina. Os
ácidos graxos de cadeia longa são convertidos novamente em
triacilgliceróis e agrupados com o colesterol, fosfolipídeos e
proteínas específicas (apolipoproteínas) que os tornam
hidrossolúveis. Esses agregados lipoprotéicos são denominados
quilomícrons e são liberados para os vasos linfáticos intestinais e a
seguir para o sangue.
A lipoproteína-lipase (sintetizada pelo músculo esquelético e
cardíaco, glândula mamária de lactantes e tecido adiposo) ligada à
superfície endotelial dos capilares sangüíneos, converte os
triacilgliceróis dos quilomícrons em ácidos graxos e glicerol. Esses
compostos são captados por vários tecidos, principalmente, o adiposo
e o muscular. A lipoproteína-lipase é ativada por ligação a uma
proteína componente dos quilomícrons, a apoproteína C−II.
A concentração de ácidos graxos livres no organismo é baixa,
pois suas moléculas são detergentes (formam micelas) e podem
romper as membranas celulares. Após entrar nas células,
provavelmente com o auxilia de proteínas, os ácidos graxos podem
ser (1) oxidados para gerar energia, (2) armazenados como
triacilgliceróis ou (3) usados para a síntese de membranas.
O C C O
C O
O O
O H+
H C CH CH2 2
2 31
O
O P O
O
X
R R
R2
2
2
1
H O2
+
Fosfolipase A
O C
O OH
H C CH CH2 2
2 31
O
O P O
O
X
R1
Glicerofosfolipídeo Lisofosfoglicerídeo

Muitos ácidos graxos são empregados pelo fígado e células
musculares, especialmente no músculo cardíaco, que prefere utilizar
ácidos graxos mesmo quando houver disponibilidade de carboidratos.
10.2 Mobilização dos triacilgliceróis (lipólise)
Os ácidos graxos de fontes alimentares e sintetizados no
organismo, são esterificados a triacilgliceróis, transportados via
corrente circulatória e armazenados como gotículas líquidas no
citoplasma das células do tecido adiposo. Os triacilgliceróis
constituem a fonte mais concentrada de energia química do corpo.
Durante o jejum, exercício vigoroso e em resposta ao estresse, os
triacilgliceróis armazenados nos adipócitos são hidrolisados em
ácidos graxos e glicerol pela ação da lipase hormônio-sensível.
Os hormônios adrenalina (epinefrina) e glucagon secretados em
resposta a baixos teores de glicemia, ativam a adenilil−ciclase na
membrana plasmática dos adipócitos (Figura 10.2). A
adenilil−ciclase transforma ATP em AMPc (AMP cíclico) (ver
Capítulo 12). A proteína−cinase dependente de AMPc, fosforila e,
assim, ativa a lipase. Os triacilgliceróis são hidrolizados em ácidos
graxos e glicerol. Elevados teores de glicose e de insulina sangüínea
exercem atividades opostas, acumulando triacilgliceróis no tecido
adiposo.
Figura 10.2
Mobilização de ácidos graxos dos adipócitos
Adrenalina e Glucagon
ATP AMPc
Proteína-cinase
(ativa)
Proteína-cinase
(inativa)
Adenilato-ciclase
ADPATP
Lipase
hormônio
sensível
(ativa)
Lipase
hormônio
sensível
(inativa)
Triacilglicerol Diacilglicerol Monoacilglicerol Glicerol
Ácido graxo Ácido graxo Ácido graxo

O glicerol é conduzido ao fígado e fosforilado a
glicerol−6−fosfato pela glicerol−cinase (ver seção 10.5.F). A
glicerol−3−fosfato é oxidada pela via glicolítica ou usada na síntese
de triacilgliceróis, fosfolipídeos ou glicose (gliconeogênese).
Os ácidos graxos liberados dos adipócitos são transportados pelo
sangue ligados à albumina sérica para diferentes tecidos nos quais
servirão como combustíveis. Difundem-se para o interior das células
por uma proteína transportadora de ácidos graxos presente na
membrana plasmática em processo associado ao transporte ativo do
sódio. As células variam grandemente em suas capacidades de
transporte e utilização dos ácidos graxos.
10.3 Oxidação dos ácidos graxos
Os ácidos graxos são degradados por oxidação em uma seqüência
repetitiva de reações que produzem moléculas de acetil−CoA e
liberam energia. O mecanismo ocorre principalmente na matriz
mitocondrial das células animais, sendo conhecido como β−oxidação
(existe também a β−oxidação nos peroxissomos) na qual os ácidos
graxos são degradados pela remoção de unidades de dois carbonos
(acetil−CoA).
O grau de utilização dos ácidos graxos varia de acordo de tecido
para tecido e depende do estado metabólico do organismo (condição
absortiva, pós−prandial, alimentado, jejum prolongado, inanição,
exercício, repouso, etc). Durante o jejum prolongado, a maioria dos
tecidos é capaz de utilizar os ácidos graxos como fonte de energia. O
tecido nervoso e os eritrócitos não empregam os ácidos graxos como
combustível.
Nas mitocôndrias, os ácidos graxos são degradados pela oxidação
no β-carbono (C3) em um grupo ceto (C=O) com a remoção sucessiva
de fragmentos de dois carbonos na forma de acetil−CoA,
posteriormente oxidada a CO2 no ciclo do ácido cítrico. Em cada
ciclo da β−oxidação, forma-se um mol de acetil−CoA, um de FADH2
e um de NADH. No fígado, a energia liberada pela β-oxidação é
empregada para dirigir a gliconeogênese.
A. Ativação de ácidos graxos
Antes de serem oxidados, os ácidos graxos são ativados pela
adição de CoA para formar acil−CoA graxo. O grupo carboxila dos
ácidos graxos de cadeia longa reage com o grupo sulfidrílico da CoA
em presença de ATP para produzir acil−CoA, AMP e pirofosfato
inorgânico (PPi) em reação catalisada por uma família de enzimas, as
acil-CoA−sintases (tiocinases) que estão associadas ao retículo
endoplasmático ou com a membrana mitocondrial externa.

O processo envolve a clivagem do ATP em pirofosfato inorgânico
(PPi) e AMP, em lugar de ADP e Pi. A formação de acil−CoA é
favorecida pela hidrólise de duas ligações de “alta energia” do ATP,
pois o pirofosfato inorgânico é hidrolisado subsequentemente pela
pirofosfatase inorgânica:
Pirofosfato (PPi) + H2O  → inorgânicaasePirofosfat
2 Fosfato (2Pi)
Na reação total duas ligações fosfato de “alta energia” são
consumidas (hidrólise do ATP e do pirofosfato), enquanto somente
uma é formada (acil−CoA), tornando o processo espontâneo e
irreversível.
B. Transporte do grupo acil para as mitocôndrias
Os ácidos graxos são ativados no citosol, mas a oxidação ocorre
na mitocondria. Como a membrana mitocondrial interna é
impermeável aos acil−CoA graxos de cadeia longa, os grupos acil
entram na mitocôndria por um sistema de lançadeira que emprega a
carnitina (4−trimetilamino−3−hidroxibutirato) como transportador. A
carnitina é um composto dipolar derivado do aminoácido lisina.
COO
-
CH2
C
CH2
N
+
CH3
CH3CH3
H OH
Carnitina
PPi
Pirofosfatase
inorgânica
2 Pi
R C + O P O P O P O
O
O
H O2
O
O
O
O
O
O
Adenosina
R C O P O
O
O
O
Adenosina
Acil-adenilato
H SCoA
R C SCoA + O P O
O
O
O
Adenosina
Acil-CoA
AMP
Ácido graxo

Duas enzimas participam das reações: a carnitina−acil-transferase
I e a carnitina−acil−transferase II. A carnitina−acil-transferase I
localizada na superfície externa da membrana mitocondrial interna,
catalisa a transferência do grupo acil da CoA para o grupo hidroxila
da carnitina, formando acil-carnitina.
A reação é reversível com pequena variação de energia livre-
padrão, indicando que a energia contida na acil−CoA não é dissipada
pela formação da acil-carnitina. Essa última atravessa a membrana e o
grupo acil é transferido da carnitina para a CoA presente na matriz
mitocondrial em reação catalisada pela carnitina−acil−transferase II
encontrada na superfície interna da membrana mitocondrial interna:
Figura 10.3
Transporte dos ácidos graxos para a matriz mitocondrial. (1) O grupo acila da
acil−CoA citosólica é transferido para a carnitina, liberando CoA. (2) A
acil−carnitina é transportada para a matriz com a subseqüente transferência do
grupo acil para a molécula de CoA intramitocondrial. (3) O grupo acil é transferido
para a molécula de CoA do conjunto mitocondrial. (4) A carnitina retorna ao citosol.
A acil-carnitina é lançada para o interior da mitocôndria por um
transportador protéico específico chamado carnitina:
acilcarnitina−translocase. A carnitina retorna ao espaço
intermembranas também pela translocase.
C. Reações da β-oxidação dos ácidos graxos
Na β-oxidação, a acil−CoA graxo é oxidado em um ciclo repetido
de quatro reações enzimáticas: (1) formação de ligação dupla
trans−α,β. (2) Hidratação da ligação dupla, (3) desidrogenação da
L−β−hidroacil−CoA e (4) formação de acetil−CoA.
1. Formação de dupla ligação trans−α,β. Uma vez na matriz
mitocondrial, o acil−CoA graxo é oxidado no carbono β (remoção de
átomos de hidrogênio dos carbonos α e β) por
acil−CoA−desidrogenases que contém FAD, formando dupla ligação
entre os carbonos 2 e 3 em configuração trans α,β
(trans−∆2
−enoil−CoA). Quando a dupla ligação é formada, os elétrons
do acil-CoA graxo são transferidos para o FAD para produzir o
FADH2 que doa o par de elétrons para a cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons, por meio da flavoproteína de
transferência de elétrons (ETF), para a ubiquinona (Q) pela ação da
ETF:ubiquinona−oxidorredutase com a produção de 1,5 ATP.
Microfotografia eletrônica de um
adipócito
Carnitina:
acilcarnitina
translocase
Carnitina
Carnitina
Carnitina
R C
O
CarnitinaR C
O
Membrana
mitocondrial
interna
Citosol Matriz
4
2
1
H SCoA
SCoAR C
O
3
SCoAR C
O
H SCoA

2. Hidratação da ligação dupla. A adição de uma molécula de
água à dupla ligação da trans−∆2
−enoil−CoA forma o L isômero da
β−hidroacil−CoA em reação catalisada por enoil−CoA−hidratases
(crotonases).
3. Desidrogenação da L−β−hidroacil−CoA. A enzima
L−β−hidroxiacil−CoA−desidrogenase NAD+
dependente é específica
para os L−isômeros de substratos com diferentes comprimentos de
cadeia, promovendo a produção de β−cetoacil−CoA. O NADH
formado transfere o par de elétrons para a cadeia mitocondrial
transportadora de elétrons com a subseqüente geração de 2,5 ATP.
4. Formação de acetil−CoA. A reação final catalisada pela
tiolase (acil−CoA−acetiltransferase), consiste em clivagem de um
fragmento carboxiterminal de dois carbonos na forma de acetil−CoA
da 3-cetoacil-CoA entre os Cα e Cβ. O outro produto é uma acil−CoA
contendo dois carbonos a menos que a acil−CoA original.
A acetil−CoA é convertida em CO2 e H2O via ciclo do ácido
cítrico, enquanto a acil−CoA original encurtada em dois átomos de
carbono sofre novo ciclo de quatro reações da β−oxidação. A
repetição sucessiva das quatro reações do processo promove a
degradação completa de ácido graxo com número par de átomos de
carbono em moléculas de acetil−CoA.

Figura 10.4
Reações da via de β−oxidação de ácidos graxos
Oxidação dos ácidos graxos nos perossissomos
Nos peroxissomos (organelas subcelulares), ocorre pequena
percentagem de β−oxidação dos ácidos graxos. Em animais, a
β−oxidação peroxissomal encurta as cadeias de ácidos graxos com
mais de 20 carbonos. Os ácidos graxos resultantes são degradados nas
mitocôndrias pela β−oxidação. Em muitas células vegetais, a
β−oxidação tem lugar predominantemente nos peroxissomos. (Os
ácidos graxos não são fontes de energia importantes para os tecidos
vegetais).
A β-oxidação peroxissomal difere da via mitocondrial somente na
primeira etapa onde uma acil−CoA−oxidase catalisa a reação:
Acil CoA graxo
Enoil CoA
Hidroxiacil CoA
Cetoacil CoA
Acil-CoA graxo
(2 atomos C menor)
Acetil-CoA
O
3C S CoA + CH C S CoA
O
CoA SH
Tiolase
O
2
O
C CH C S CoA
NAD+
NADH + H++
-Hidroxiacil-CoA
desidrogenase
C S CoA
O
H O
H
2
H
Enoil-CoA
hidratase
C C
FAD
FADH2
Acetil-CoA
desidrogenase
O
OH
2 C S CoACH CH
CH (CH ) CH CH C S CoA
O
2 23 2 n
αβ
β
QH2
Q
CH (CH )3 2 n
CH (CH )3 2 n
CH (CH )3 2 n
CH (CH )3 2 n

CH (CH ) C C C SCoA3 2
2
2
n
H H
H H O
Acil-CoA
FAD
FADH
Acil-CoA
oxidase
CH (CH ) C C C SCoA3 2 n
H
H O
Enoil-CoA
H O2
2O
A enoil−CoA é idêntica ao produto da reação da mitocondrial
catalisada pela acil−CoA−desidrogenase. No entanto, os elétrons
removidos são transferidos diretamente para o oxigênio molecular
para formar peróxido de hidrogênio (H2O2) e não para a ubiquinona.
As reações seguintes são iguais as que ocorrem na mitocôndria.
Em algumas sementes em germinação, a β−oxidação ocorre nos
glioxissomos. Os glioxissomos são peroxissomos especializados que
contêm as enzimas do ciclo do glioxilato. A acetil−CoA derivada da
β−oxidação glioxisomal é convertida em carboidratos pelo ciclo do
glioxilato e gliconeogênese.
D. Produção de energia na oxidação dos ácidos graxos
Cada volta do ciclo de β−oxidação produz um NADH, um FADH2
e uma acetil−CoA. A oxidação do NADH e do FADH2 na cadeia
mitocondrial transportadora de elétrons acoplada à fosforilação
oxidativa, produz 2,5 e 1,5 ATP, respectivamente. Cada molécula de
acetil−CoA proveniente da β−oxidação é metabolizada a CO2 e água
no ciclo do ácido cítrico e fosforilação oxidativa, com a produção de
10 ATP. No entanto, na ativação do ácido graxo são consumidos dois
equivalentes de ATP (um ATP é transformado em AMP + 2Pi).
Portanto, em condições fisiológicas, a oxidação completa de uma
molécula de ácido palmítico (16 átomos de carbono) é dada pela
reação:
Palmitoil−CoA + 7 FAD + 7 NAD+
+ 7 CoA + 7 H2O →
8 Acetil−CoA + 7 FADH2 + 7 NADH + 7 H+
A produção de ATP a partir da β-oxidação do ácido palmítico
pelo ciclo do ácido cítrico e da fosforilação oxidativa é resumida na
Tabela 10.1.

Tabela 10.1 – Produção de ATP na oxidação de uma molécula de ácido
palmítico
ATP/mol
2 equivalentes de ATP (etapa de ativação) −2
7 FADH2 oxidados na CMTE (7 x 1,5) 10,5
7 NADH oxidados na CMTE (7 x 2,5) 17,5
8 acetil−CoA oxidados no ciclo do ácido cítrico (10 x 8) 80
Total: 106
CMTE: cadeia mitocondrial transportadora de elétrons
E. Oxidação dos ácidos graxos insaturados
A via de oxidação dos ácidos graxos insaturados é a mesma dos
ácidos graxos saturados até atingir a dupla ligação. O ácido oléico,
18:1∆9
(oleato) e o ácido linoléico 18:2∆9,12
(linoleato), são ácidos
graxos comuns que contêm duplas ligações cis o que dificulta a ação
das enzimas da β−oxidação.
Para o linoleato, as primeiras três voltas da β−oxidação procedem
de forma usual para liberar três moléculas de acetil−CoA. O
acil−CoA que inicia a quarta volta tem dupla ligação entre C3 e C4
(originalmente a dupla ligação era C9 e C10). Além disso, a molécula
é um cis enoil−CoA que não permite a ação da enoil−CoA−hidratase
(enzima que catalisa a etapa 2 da β−oxidação) que reconhece somente
a configuração trans. Esse obstáculo metabólico é removido pela
enzima enoil−CoA−isomerase, que converte a dupla ligação cis 3,4
em uma dupla ligação trans 2,3 para que a β−oxidação continue.
Um segundo obstáculo ocorre após a primeira reação da quinta
etapa da β−oxidação. A acil-CoA−desidrogenase introduz a dupla
Enoil-CoA-isomerase
C
O
SCoA
C
SCoA
O
4 3
3
2
Oleato
C
O
O
C
O
O
Linoleato
18
18
9 1
12 9 1

ligação entre C2 e C3, no entanto, a dupla ligação original entre C12
e C13 do linoato está agora na posição entre C4 e C5. O dienoil-CoA
resultante não é um substrato apropriado para a enzima seguinte, a
enoil−CoA−hidratase da β-oxidação. A dienoil−CoA sofre uma
redução pela 2,4−dienoil−redutase dependente de NADPH para
converter as suas duas duplas ligações em uma única dupla ligação
trans 3,4 que é reconhecida pela enoil−CoA−hidratase e permite a
reentrada do intermediário na via normal de β−oxidação e sua
degradação em seis moléculas de acetil−CoA. O resultado final é a
transformação do linoleato em nove moléculas de acetil−CoA
A oxidação de ácidos graxos insaturados produz menor número
de ATP que os correspondentes ácidos graxos saturados. Quando a
dupla ligação estiver presente não ocorre a etapa catalisada pela
acil−CoA−desidrogenase ligada ao FAD. Além disso, a redutase
NADPH−dependente consome 2,5 equivalentes de ATP na forma de
NADPH (que é energeticamente equivalente ao NADH).
F. Oxidação de ácidos graxos de cadeia ímpar
Apesar de raros, os ácidos graxos com número ímpar de átomos
de carbono também são oxidados na via da β-oxidação com formação
de moléculas sucessivas de acetil−CoA e um fragmento ω-terminal de
três carbonos, a propionil−CoA. Este composto também é gerado na
degradação oxidativa dos aminoácidos isoleucina, valina, metionina e
treonina. Nas mitocôndrias de diversos tecidos, a propionil−CoA
sofre carboxilização pela propionil−CoA−carboxilase em presença de
biotina para produzir um intermediário de quatro átomos de carbono,
a D−metilmalonil−CoA. Na etapa seguinte, a D−metilmalonil−CoA é
epimerizada a L−metlmalonil−CoA pela enzima
metilmalonil−CoA−epimerase. Pela ação da
metilmalonil−CoA−mutase que requer a vitamina B12 como co−fator,
a L−metilmalonil−CoA sofre um rearranjo intramolecular e forma
succinil−CoA. A succinil−CoA entra diretamente no ciclo do ácido
cítrico.
Redutase
C
O
SCoA
C
SCoA
NADPH + H+
+
NADP
C
O
SCoA
Isomerase
O
4 2
3
5
3
4
3
2

G. Vias secundárias de oxidação dos ácidos graxos
Nos microssomas de alguns tecidos, os ácidos graxos de cadeia
ramificada (ácidos fitâmicos) sofrem α−oxidação, na qual somente
um átomo de carbono é removido por vez a partir do terminal
carboxílico em processo que envolve o NAD+
e o ascorbato. A
doença de Refsum é um distúrbio neurológico raro, caracterizado
pelo acúmulo de ácido fitâmico nos tecidos nervosos como resultado
de um defeito genético na α-oxidação.
Na ω−oxidação, o terminal ω (o átomo de carbono mais distante
do grupo carboxila) é oxidado a hidroxiácido graxo para formar um
ácido graxo com duas carboxilas em reação catalisada por oxidases
de função mista que requerem citocromo P450, o O2 e o NADPH como
doador de elétrons. As reações ocorrem no retículo endoplasmático
do fígado e do rim. O ácido dicarboxílico formado entra na
mitocôndria e é degradado por β−oxidação nas duas extremidades da
molécula. Sob condições normais, relativamente pouco ácido graxo é
oxidado nessa via.
ATP + CO
ADP + P
O C C C SCoA2
O
CH CH C SCoA23
Propionil-CoA
2
i
Propionil-CoA-carboxilase
OH
CH3
(S)-Metilmalonil-CoA
Metilmalonil-CoA-racemase
O C C C SCoA
OH
3CH
CO2
(R)-Metilmalonil-CoA
Metilmalonil-CoA-mutase
O
CH CH C SCoA22O C2
Succinil-CoA

10.4 Corpos cetônicos
Sob condições normais, a acetil-CoA proveniente da β−oxidação
é utilizada quase em sua totalidade pelo ciclo do ácido cítrico e para a
síntese de isoprenóides. O metabolismo dos ácidos graxos é regulado
de tal forma que somente pequenas quantidades de acetil−CoA são
produzidas em excesso. Em certas condições metabólicas, tais como,
jejum prolongado, inanição e diabete melito, ocorre aumento na
velocidade da β−oxidação, tornando necessário reciclar o excesso de
acetil−CoA e liberar a CoA livre para novas β−oxidações. No fígado,
o grupo acetil da acetil−CoA é transformado em corpos cetônicos em
processo chamado cetogênese. Os corpos cetônicos consistem de
acetoacetato, β−hidroxibutirato e acetona e são utilizados como
combustível hidrossolúvel pelos tecidos extra−hepáticos.
A cetogênese ocorre em três reações:
1. Formação de acetoacetil−CoA. A primeira reação na
formação do acetoacetato (fonte primária de todos os corpos
cetônicos) é a condensação de duas moléculas de acetil−CoA para
gerar acetoacetil−CoA, catalisada pela acetil−CoA−acetiltransferase.
A formação da ligação C−C é favorecida energeticamente pela
ruptura do enlace tioéster.
2. Formação de HMG−CoA. A acetoacetil−CoA é convertida a
3−hidroxi−3−metilglutaril−CoA (HMG−CoA) por condensação com
uma terceira molécula de acetil−CoA pela ação da hidroxi-
metilglutaril−CoA−sintase. A HMG−CoA é também um precursor da
biossíntese do colesterol.
3. Formação de acetoacetato e acetil−CoA. A clivagem da
HMG−CoA fornece o acetoacetato livre pela
hidroxi−metilglutaril−CoA−liase.
Parte do acetoacetato é reduzido a β−hidroxibutirato por uma
β−hidroxibutirato−desidrogenase NAD+
−dependente ligada à
membrana mitocondrial interna. Essa enzima é específica para o
D−isômero em contraste com o L−isômero acoplado a CoA
intermediária da β−oxidação.
Certa quantidade de acetoacetato sofre contínua descarboxilação
não-enzimática espontânea à acetona. Em condições normais a
formação de acetona é negligenciável, no entanto, em acúmulos
patológicos de acetoacetato, a quantidade de acetona no sangue pode
ser detectada no ar expirado pelo paciente.
A presença aumentada de corpos cetônicos no sangue e na urina
acompanhado de odor de acetona no ar expirado, é denominada
cetose. Essa condição ocorre quando a velocidade de produção de
corpos cetônicos pelo fígado excede a capacidade de sua utilização
pelos tecidos periféricos, resultando em acúmulo no sangue
(cetonemia). Ao ultrapassar o limiar renal, essas substâncias
aparecem na urina (cetonúria).

Figura 10.5
Síntese de corpos cetônicos nas mitocôndrias hepáticas. Em
circunstâncias normais, somente pequenas quantidades de corpos
cetônicos são produzidas. No jejum prolongado, inanição e diabetes melito
ocorre a formação excessiva de corpos cetônicos.
Em jejum prolongado e diabete melito (estado com insulina baixa
e glucagon elevado), como conseqüência do direcionamento do
oxaloacetato para a formação de glicose (gliconeogênese), ocorre
limitação da operação do ciclo do ácido cítrico. Desse modo, a grande
quantidade de acetil−CoA produzida pela β−oxidação dos ácidos
graxos no fígado é canalizada para a síntese de corpos cetônicos.
Quando a formação de corpos cetônicos atinge níveis acima da
capacidade compensatória dos sistemas tampões fisiológicos,
desenvolve-se cetoacidose.
Vários tecidos, mais notadamente o músculo cardíaco e
esquelético, empregam corpos cetônicos para gerar energia. O
cérebro aumenta consideravelmente a utilização de corpos cetônicos
como fonte de energia durante o período de jejum prolongado e
inanição, economizando a glicose e reduzindo a degradação da
proteína muscular para a gliconeogênese.
Nos tecidos periféricos, o β−hidroxibutirato é oxidado a
acetoacetato, que é então ativado pela ação de uma tioforase que
emprega a succinil−CoA como fonte de CoA, formando
Acetil CoA
Acetoacetil CoA
HMG CoA
Acetoacetato
2 CH C S CoA
O
3
CoA
Acetil-CoA
acetil-transferase
3CH C CH
O
3
Acetona
OOC CH CH CH
OH
2
-
CH C CH
O
3 2 C S CoA
O
CoA
Acetil CoA
HMG-CoA-sintase
OOC CH C CH
OH
2
3
C S CoA
O
CH
-
HMG-CoA-liase Acetil CoA
OOC CH C CH
O
2 3
-
NAD+
+
NADH + H
CO2
-Hidroxibutirato
desidrogenase
-Hidroxibutirato
β
β
2
2

acetoacetil−CoA. Esta última sofre clivagem pela tiolase, produzindo
duas moléculas de acetil−CoA que entram no ciclo do ácido cítrico.
Figura 10.6
Catabolismo dos corpos cetônicos. Os corpos cetônicos são transformados
em acetil−CoA em alguns órgãos, como por exemplo, músculo cardíaco e
esquelético.
10.5 Biossíntese de ácidos graxos
A maioria dos ácidos graxos utilizados pelos mamíferos é suprida
pela dieta. Todavia, também podem sintetizar quase todos os ácidos
graxos saturados e insaturados necessários para os processos
metabólicos vitais. Não produzem, entretanto, alguns ácidos graxos
insaturados, tais como, o linolênico e linoléico, que são supridos pela
dieta, sendo denominados ácidos graxos essenciais. Esses ácidos
graxos são abundantes em peixes e óleos vegetais. A deficiência de
ácidos graxos essenciais resultante de dieta com baixo conteúdo em
gorduras apresenta sintomas como o crescimento lento e demora na
cura de ferimentos.
Os ácidos graxos são formados a partir de acetil−CoA
proveniente, quase totalmente, da glicose da dieta, ingerida além das
necessidades imediatas de energia e da capacidade de armazenar
glicogênio. A síntese ocorre principalmente no tecido adiposo, no
fígado e nas glândulas mamárias de animais em lactação.
Inicialmente é formado o ácido palmítico (cadeia linear saturada
com 16 átomos de carbono), a partir do qual outros ácidos graxos são
derivados.
CH C CH
O
3 2 C S CoA
O
Acetoacetil CoA
Tiolase
2 CH C S CoA
O
3
CoA
Acetil CoA
Acetoacetato
-HidroxibutiratoCH CH CH COO
OH
33
ATP + CoA SH
AMP + PPi
-Cetoacil-CoA
transferase
Succinil-S CoA
Succinato
-Hidroxibutirato
desidrogenase
CH C CH
O
3 2 COO
NAD
NADH + H
+
+
β
β
β

A. Transporte de acetato mitocondrial para o citosol
A biossíntese dos ácidos graxos é um processo que ocorre
exclusivamente no citosol. Contudo, a acetil−CoA gerada nas
mitocôndrias não se difunde espontaneamente para o citosol; em
lugar disso, atravessa a membrana mitocondrial interna sob a forma
de citrato, produzido a partir da condensação do oxaloacetato e
acetil−CoA no ciclo do ácido cítrico. Em concentrações elevadas, o
ATP inibe a enzima isocitrato−desidrogenase no ciclo do ácido
cítrico, provocando o acúmulo de citrato na mitocôndria; o excesso
difunde-se livremente para o citosol pela membrana mitocondrial
interna por meio do carreador do tricarboxilato. No citosol, a
acetil−CoA é regenerada, a partir do citrato pela ação da enzima
ATP−citrato−liase:
Figura 10.7
Mecanismo de transporte da acetil−CoA da mitocôndria para o citosol.
H C COOH2
HO C COOH + HS CoA
ATP ADP + P
ATP-citrato-liase
H C C S CoA + C COOH
H C COOH2
3
O O
H C COOH2
i
CO + NADPH2 NADP+
Enzima málica
NAD
Piruvato
+
NADH + H
Oxaloacetato
Malato-desidrogenas
HS-CoA
CO + NADH
Citrato-liase
Complexo da piruvato
desidrogenase
P + ADPi
ATP
CitratoCitrato
i
Ânion
(malato, piruvato, P)
Citoso
Malato
H+
Matriz mitocondrial
P + ADPi
HCO + ATP3
Oxaloacetato
HS-CoA
Piruvato
Acetil CoA
Citrato-sintase
HS-CoA + NAD+
2
Acetil Co

Este processo também transfere o oxaloacetato da mitocôndria
para o citosol.
B. Síntese dos ácidos graxos saturados, o ácido palmítico
O ácido palmítico é sintetizado a partir de uma molécula de
acetil−CoA e sete moléculas de malonil−CoA. Esta última é
produzida pela carboxilação do acetil−CoA. Inicialmente, o CO2
(como bicarbonato, HCO3
−
) é “ativado” por ligação covalente à
biotina com a conversão do ATP em ADP + Pi em reação catalisada
pela biotina−carboxilase (ver adiante):
Biotina + HCO3
−
+ ATP  → ecarboxilas
Biotina
Biotina−COO−
+ ADP + Pi
A seguir, o grupo prostético carboxibiotina transfere o grupo
carboxilato para o acetil−CoA para formar um composto de três
carbonos, a malonil−CoA e regenerar a enzima.
A reação total, catalisada pela acetil−CoA−carboxilase uma
enzima composta de três enzimas (proteína transportadora de biotina,
biotina−carboxilase e a transcarboxilase) em um único polipeptídeo
multifuncional que requer biotina e Mn2+
, é a etapa limitante de
velocidade na síntese de ácidos graxos nos mamíferos. A
acetil−CoA−carboxilase é uma enzima alostérica ativada pelo citrato
e isocitrato e inibida por acil−CoA de cadeia longa, como o
palmitoil−CoA. A biotina está ligada a um resíduo de lisina da
enzima.
NHNH
S
O
C C C C C N Proteína
H
H
H
H
H
H
H
H
O H
Acetil-CoA-carboxilase
A malonil−CoA é o doador das unidades acetil de dois carbonos
para a construção de ácidos graxos.
C. Reações do complexo ácido graxo sintase
A produção de ácidos graxos de cadeia longa (ácido palmítico) a
partir da malonil−CoA envolve o sistema multienzimático
denominado complexo ácido graxo sintase, constituído por seis
enzimas que catalisam etapas sucessivas da síntese. As proteínas
enzimáticas do complexo estão unidas entre si, operando a seqüência
de forma eficiente e regulada. Portanto, apesar de cada reação ser
examinada separadamente, elas estão intimamente integradas.
Biotin COO + CH C SCoA OOC CH C SCoA + Biotina
Acetil-CoA Malonil-CoA
O O
3 2Biotina

Na biossíntese dos ácidos graxos é necessário que todos os
intermediários acílicos participantes do processo liguem-se como
tioésteres, à proteína transportadora de acila (ACP, acil carrier
protein) cujo grupo prostético, a 4′
−fosfopanteteína, também está
presente na estrutura da coenzima A.
Quadro 10.1 Triclosan
Muitos cosméticos, dentifrícios, desodorantes, sabões
antisépticos, brinquedos para bebes, alguns tapetes e
utensílios domésticos contém o composto 5-cloro-2-(2,4-
diclorofenóxi)fenol, mais conhecido com triclosan:
O
Cl OH
Cl Cl
Esse composto é usado a mais de 30 anos como
agente antibacteriano. O triclosan atua como um antibiótico
com alvo bioquímico específico: uma das enzimas da
síntese dos ácidos graxos (nas bactérias, as enzimas de
síntese são proteínas separadas e não parte de um
complexo multienzimático).
O triclosan inibe a enoil-ACP
texto). A síntese dos ácidos grax
sobrevivência das bactérias. No sí
dos anéis fenil do triclosan, c
intermediário da reação, permane
cofator NADPH. O triclosan também
de van der Waals e pontes de hi
aminoácidos no sítio ativo. Alguma
resistentes ao triclosan apresentam
desses contatos.
A ação específica do triclosa
enzima da síntese de ácidos gra
variedades de bactérias resistentes
está sujeito aos mesmos inco
antibióticos – a resistência por mei
ampla utilização do triclosan aum
resistência gênica e, portanto, o se
antimicrobiano.
As etapas catalisadas pelas seis enzimas do complexo ácido graxo
sintase que convertem a acetil-CoA e a malonil−CoA em ácido
palmítico são descritas a seguir.
1. Condensação da acetil e malonil. Inicialmente, o grupo acetil
da acetil−CoA é transferido para a enzima 3-cetoacil-ACP-sintase em
reação catalisada por uma das seis enzimas do complexo, a
acetil−CoA−transacilase.
A seguir, o grupo malonil da malonil-CoA é transferido para o
grupo –SH da ACP pela ação da malonil−transacilase.
Malonil-CoA + ACP-SH  → − setransacilaMalonil
Malonil-ACP + CoA-SH
HS CH CH N C CH CH N C C C CH O P O2 2 2 2 2
H
O O H CH3 O
H OH CH3 O
Proteína transportadora de acila (ACP)
HS CH CH N C CH CH N C C C CH O P O P2 2 2 2 2
H
O O H CH3 O
H OH CH3 OO
O
Coenzima A

O grupo malonil da malonil−ACP condensa com o grupo acetil
ligado à enzima 3−cetoacil−ACP−sintase (por meio da Cys) para
formar acetoacetil−ACP em reação irreversível.
Enzima
SH
C O
CH3
ACP
S
C O
CH2
C
O O
ACP
S
C O
CH2
C O
CH3
Enzima
S
Acetoacetil-ACPAcetil-EnzimaMalonil-ACP
CO2
+3-Cetoacil-
ACP-sintase

Figura 10.8
Operação do complexo ácido graxo sintase. Biossíntese de butiril-ACP a partir
de acetil−ACP e malonil−ACP.
CH C SCoA OOC CH C SCoA
Acetil-CoA
O
Malonil-CoA
3 2
Transacilase Transacilase
O
Sintase
HSCoA
HSACP
HSCoA
CH C S Cys OOC CH C SACP
O
Malonil-ACP3 2
O
CO2
3-Cetoacil-ACP-sintase
CH C CH C SACP3 2
Acetoacetil-ACP
3-Cetoacil-ACP-redutase
H + NADPH+
NADP+
CH C CH C SACP
O
3 2
OH
H
O
O
Crotonil-ACP
3-Hidroxiacil-ACP-desidratase
CH C C C SACP3
H
H
O
H O2
Hidroxibutiril-ACP
3-Enoil-ACP-redutase
H + NADPH+
NADP+
CH CH CH C SACP3
O
2 2 Butiril-ACP
CH CH (CH ) C SACP3
O
2 132 Palmitoil-ACP
Palmitoil-tioesterase
HSACP
H O2
CH CH (CH ) C O3
O
2 132 Palmitato
(+ 6 ciclos)
Sintase

No processo, o grupo carboxílico livre de malonil é liberado
como CO2. Desta forma, o dióxido de carbono adicionado durante a
síntese da malonil−CoA não é incorporado à cadeia carbonada do
ácido graxo.
2. Redução do grupo carbonila. A fase seguinte envolve a
redução do grupo carbonila em C3 da acetoacetil−ACP pelo NADPH
e em presença da 3−cetoacil−ACP−redutase, com a formação de
D−β−hidroxibutiril−ACP. O intermediário 3−hidroxil envolvido na
biossíntese apresenta configuração D, em lugar da configuração L,
encontrada na β−oxidação.
3. Desidratação. A D−3−hidroxibutiril−ACP é convertida a
crotonil−ACP por desidratação pela ação da
3−hidroxiacil−ACP−desidratase. O produto tem configuração trans
na ligação dupla.
4. Redução da dupla ligação. A enzima 3−enoil−ACP−redutase
catalisa a redução da dupla ligação da crotonil−ACP pelo NADPH
para fornecer butiril−ACP.
Com a produção de butiril−ACP está completo o primeiro dos
sete ciclos para a formação de palmitoil−ACP. Para formar o
palmitato o ciclo é repetido mais seis vezes. O ciclo seguinte é
iniciado pela transferência do grupo butiril do ACP para o grupo −SH
da 3−acetoacil−ACP−sintase (originalmente ocupado pelo grupo
acetil), permitindo à ACP receber o malonil de outra molécula de
malonil−CoA.
São necessários sete ciclos completos para produzir
palmitoil−ACP posteriormente transformado em palmitato e HS−ACP
pela ação da palmitoil−tioesterase.
Palmitoil−ACP + H2O  → − etioesterasPalmitoil
Palmitato + HS-ACP
A estequiometria global para a síntese do palmitato a partir do
acetil−CoA é:
8Acetil−CoA + 7ATP + 14NADPH + 14 H+
→
palmitato + 14NADP+
+ 8CoA−SH + 6H2O + 7ADP + 7Pi
A biossíntese do palmitato requer, portanto, acetil−CoA, ATP e
NADPH. Os NADPH nos adipócitos e hepatócitos são provenientes
principalmente da via das pentoses-fosfato (ver Capítulo 6:
Metabolismo dos carboidratos) e, em menor grau, pela enzima
málica.
A formação de NADPH pela enzima málica ocorre em duas
etapas: inicialmente o oxaloacetato é reduzido a malato pelo NADH
em reação catalisada pela malato−desidrogenase:
CH (CH ) C CH C SACP3 2 2n
OH O
H
CH (CH ) C CH C SCoA3 2 2n
H O
OH
3-Hidroxiacil-ACP intermediário
para a síntese de ácidos graxos
(configuração )D
3-Hidroacil-CoA intermediário
da -oxidação
(configuração )L
β

Oxaloacetato + NADH + H+
→ Malato + NAD+
A enzima málica catalisa a descarboxilação oxidativa do malato
com a produção de NADPH:
Malato + NADP+
→ Piruvato + CO2 + NADPH
O piruvato citosólico entra na mitocôndria e é convertido a
oxaloacetato pela piruvato−carboxilase ou em acetil−CoA pela
piruvato−desidrogenase.
Para a síntese do palmitato, oito NADPH são gerados pela
transferência de oito oxaloacetatos de volta à mitocôndria (pois foram
oito acetil−CoA transferidos no caminho inverso).
D. Alongamento e dessaturação dos ácidos graxos
O alongamento e a dessaturação (formação de duplas ligações)
dos ácidos graxos biossintetizados ou obtidos da dieta é realizado
fundamentalmente por enzimas do sistema reticuloendotelial. (O
processo ocorre somente quando a dieta não contém a quantidade
apropriada de ácidos graxos). A alongamento e dessaturação são
especialmente importantes na regulação da fluidez das membranas e
para a síntese de vários precursores derivados dos ácidos graxos,
como os eicosanóides. Por exemplo, a mielinização (um processo no
qual a bainha da mielina é formada ao redor de certos nervos)
depende especialmente das reações de síntese de ácidos graxos no
sistema retículo endoplasmático. Ácidos graxos saturados e
insaturados de cadeia muito longa são constituintes importantes dos
cerebrosídeos e sulfatídeos encontrados na mielina. Aparentemente as
células regulam a fluidez das membranas ajustando os tipos de ácidos
graxos que são incorporados na membrana biológica. Por exemplo,
em climas frios, mais ácidos graxos insaturados são incorporados (os
ácidos graxos insaturados têm pontos de congelamento mais baixos
que os saturados). Se a dieta não supre a quantidade suficiente dessas
moléculas, as vias de síntese dos ácidos graxos são ativadas.
O palmitato (ácido graxo saturado de C16) formado nas reações
catalisadas pelo complexo ácido graxo sintase, é o precursor de
outros ácidos graxos de cadeia longa saturados e insaturados. Dois
mecanismos diferentes estão disponíveis para o alongamento: um na
mitocôndria e outro no retículo endoplasmático liso. Nos dois
sistemas a palmitoil−ACP é convertida a palmitoil−CoA.
Na mitocôndria, o alongamento ocorre pela adição e pela redução
sucessivas de unidades acetil em um processo inverso à oxidação de
ácidos graxos. O alongamento do acil−CoA no retículo
endoplasmático envolve condensações sucessivas de acetil doados
pela malonil−CoA. A síntese no retículo endoplasmático fornece
ácidos graxos de cadeia longa (C18 a C24) necessários para o
desenvolvimento do sistema nervoso central na mielinização das
células nervosas.
Os mamíferos superiores são capazes de introduzir duplas
ligações na configuração cis nos ácidos graxos saturados em presença
de NADH e O2 catalisadas por acil−CoA graxo−dessaturase (oxidase
de função mista). As reações ocorrem no retículo endoplasmático
hepático e necessitam citocromo b5, NADH−citocromo−b5−redutase
(uma flavoproteína) e uma dessaturase, firmemente ligados à
membrana. Tanto o NADH como o ácido graxo são oxidados e dois

pares de elétrons são transferidos para o O2 com a formação de H2O.
Essas reações são parte da denominada cadeia microssomial de
elétrons.
As dessaturações mais freqüentes utilizam acil-CoA saturadas
como substratos com a introdução de dupla ligação no C9 a partir do
terminal carboxílico. A estearoil−CoA−dessaturase catalisa a
transformação do estearil−CoA em oleil−CoA. Por mecanismo
semelhante, a palmitoleoil−CoA é produzida a partir da
palmitoil−CoA. A atividade desta enzima e sua síntese são
controladas tanto pela dieta como por mecanismos hormonais.
F. Síntese de triacilgliceróis
Os triacilgliceróis são sintetizados pela adição de acil-CoA graxo
(biossintetizados ou supridos pela dieta) ao glicerol−3−fosfato ou à
diidroxiacetona−fosfato. A síntese ocorre principalmente no fígado,
intestino e tecido adiposo. O glicerol−3−fosfato é formado por duas
vias: (1) a partir da diidroxiacetona−fosfato gerada na glicólise (ver
Capítulo 6: Metabolismo dos carboidratos) ou (2) formado a partir do
glicerol pela ação da glicerol−cinase.
A diidroxiacetona−fosfato é transformada em glicerol−3−fosfato
em reação catalisada pela glicerol−3−fosfato−desidrogenase:
No fígado, rim e intestino delgado ocorre a fosforilação do
glicerol livre em presença de glicerol−cinase:
Os adipócitos são desprovidos de glicerol−cinase e obtém o
glicerol−3−fosfato exclusivamente pela reação da
glicerol−3−fosfato−desidrogenase. O glicerol livre obtido na
hidrólise dos triacilgliceróis nos adipócitos não é utilizado no próprio
tecido e sim, é levado ao fígado onde é transformado em
glicerol−3−fosfato pela glicerol−cinase.
Os acil−CoA empregados na síntese dos triacilgliceróis são
provenientes de ácidos graxos livres ativados pela ação das
acil−CoA−sintetases (ver seção 10.4A):
Ácido graxo + CoA + ATP → acil−CoA + AMP + PPi
CH OH2
OC
CH PO2
2
3
NADH + H+
NAD+
CH OH2
CH OH
CH O PO2
2
3
Glicerol-3-fosfato
desidrogenase
CH OH2
H C OH
ATP ADP
Glicerol-cinase
CH OH2
CH OH2
H C OH
CH OPO2
2
3

A primeira etapa na biossíntese dos triacilgliceróis é a acilação
dos dois grupos hidroxila livres do glicerol−3−fosfato por duas
moléculas de acil−CoA graxo para formar diacilglicerol−3−fosfato
(fosfatidato ou ácido fosfatídico) em presença da
glicerol−3−fosfato−aciltransferase.
A enzima fosfatidato−fosfatase converte o
diacilglicerol−3−fosfato (fosfatidato) em 1,2−diacilglicerol.
CH CH CH
Glicerol-3-fosfato
O
2
Glicerol-3-fosfato-aciltransferase
O
2
PO2
3
OH OH
Glicerol-3-fosfato-aciltransferase
R C SCoA1
O
R C SCoA2
HSCoA
HSCoA
CH CH CH
O
2 2
PO2
3
O O
C O C O
R1 R2
Fosfatidato
Pi
CH CH CH
OH
2 2
O O
C O C O
R1 R2
Diacilglicerol
Fosfatidato-fosfatase
Diacilglicerol-aciltransferase
O
R C SCoA3
HSCoA
CH CH CH2 2
O O
C O C O
R1 R2
O
C O
R3
Triacilglicerol

O fosfatidato e o 1,2−diacilglicerol são precursores de
triacilgliceróis e de glicerofosfolipídeos.
Na etapa final da biossíntese de triacilgliceróis ocorre a acilação
da posição sn−3 do 1,2−diacilglicerol por meio da
diacilglicerol−aciltransferase.
Figura 10.9
Visão geral da biossíntese dos triacilgliceróis. O glicerol−3−fosfato é
proveniente do glicerol no fígado e da diidroxiacetona−fosfato no tecido
adiposo.
G. Regulação do metabolismo dos ácidos graxos
Mecanismos de curta e longa duração estão envolvidos na
regulação do metabolismo dos ácidos graxos. Na regulação de curta
duração (medida em minutos) a atividade de muitas enzimas-chave
são modificadas por hormônios. Por exemplo, o glucagon e a
adrenalina (liberados quando as reservas energéticas estão baixas ou
quando há um aumento de consumo) estimulam a fosforilação de
várias enzimas. A fosforilação da lipase hormônio-sensível presente
nos adipócitos, ativa a hidrólise de triacilglicerol. (A liberação de
noradrenalina dos neurônios no sistema nervoso simpático e do
hormônio do crescimento da hipófise também ativa a lipase
hormônio−sensível). Subseqüentemente, os ácidos graxos são
liberados para o sangue. Os hormônios também regulam a utilização
dos ácidos graxos pelos tecidos. Por exemplo, a
acetil−CoA−carboxilase é inibida pelo glucagon. Em baixas
concentrações de malonil−CoA, a síntese de ácidos graxos é reduzida.
Como a malonil−CoA inibe a atividade da carnitina−acil−transferase
Fígado
Glicerol
Glicerol
cinase
ATP
ADP NAD+
Células
adiposas
Glicose
Diidroxiacetona
fosfato
NADH
Glicerol-3-P
2 Acil-CoA
Diacilglicerol-3-fosfato (fosfatidato)
Pi
Diacilglicerol
Triacilglicerol
Células
adiposas
Armazenamento
de gordura
Fígado
VLDL
sangüínea
Acil-CoA

I, os ácidos graxos podem ser transportados para a mitocôndria, onde
são degradados para gerar energia.
O efeito da insulina sobre o metabolismo dos ácidos graxos é
oposta aos dos hormônios glucagon e adrenalina. A secreção de
insulina em resposta a elevados níveis de glicose sangüínea estimula
a lipogênese. A insulina induz a síntese de ácidos graxos pela
fosforilação da acetil−CoA−carboxilase por um processo
independente do mecanismo da proteína-cinase dependente de AMPc.
A lipólise simultânea é evitada pela insulina por inibição da ativação
da proteína-cinase mediada por AMPc. O processo provoca a
desfosforilação (portanto, a inativação) da lipase hormônio-sensível.
10.6 Metabolismo de lipídeos de membrana
Os lipídeos de membranas celulares são compostos
principalmente por fosfolipídeos e esfingolipídeos.
A. Metabolismo dos fosfolipídeos
A biossíntese de fosfolipídeos ocorre primariamente na superfície
do retículo endoplasmático liso, apesar de algumas enzimas também
estarem presentes no complexo de Golgi. Como cada enzima é uma
proteína associada à membrana com seu sítio ativo voltado para o
citosol, a biossíntese dos fosfolipídeos ocorre na interface da
membrana do retículo plasmático e o citosol. A composição de ácidos
graxos dos fosfolipídeos altera discretamente após a sua síntese.
(Tipicamente, os ácidos graxos insaturados substituem os ácidos
graxos saturados originais incorporados durante a síntese). Parte do
remodelamento é executada por certas fosfolipases e
acil−transferases. Provavelmente, o processo permite a célula ajustar
a fluidez de suas membranas.
As sínteses da fosfatidiletanolamina e fosfatidilcolina são
similares. A síntese da fosfatidiletanolamina inicia no citoplasma
quando a etanolamina entra na célula e é então imediatamente
fosforilada. Subseqüentemente, a fosfoetanolamina reage com a CTP
(trifosfato de citidina) para formar o intermediário ativado
CDP−etanolamina. Vários nucleotídeos servem como carreadores de
alta energia para moléculas específicas. Os derivados CDP têm
importante papel na transferência de grupos cabeça polar na síntese
de fosfoglicerídeo. A CDP−etanolamina é convertida a
fosfatidiletanolamina quando reage com o diacilglicerol (DAG). A
reação é catalisada por uma enzima no retículo endoplasmático.
A biossíntese da fosfatidilcolina é similar aquela da
fosfatidiletanolamina. A colina necessária nessa via é obtida da dieta.
Entretanto, a fosfatidilcolina é também sintetizada no fígado a partir
da fosfatidiletanolamina. A fosfatidiletanolamina é metilada em três
etapas pela enzima fosfatidiletanolamina−N−metiltransferase para
formar o produto trimetilado, a fosfatidilcolina. O doador de metila é
a S−Adenosilmetionina (SAM) (ver Seção 11.8.A).

Figura 10.10
Síntese da fosfatidiletanolamina e fosfatidilserina. O X é H na
etanolalamina e CH3 na colina.
A fofatidilserina é gerada em reação na qual a etanolamina da
fosfatidiletanolamina é substituída pela serina. A reação, catalisada
por uma enzima do retículo endoplasmático, é reversível. Na
mitocôndria, a fosfatidilserina pode ser convertida em
fosfatidiletanolamina por descarboxilação.
ATP
ADP
O P O CH CH NX2 2
+
3
O
O
HO CH CH NX2 2
+
3
Etanolamina/Colina
Fosfoetanolamina/Fosfocolina
CTP
PP 2 Pi i
O P O CH CH NX2 2
+
3
O
O
O
O
PCitidina
CTP-Etanolamina/CDP-Colina
CH CH CH
O
2 2
OH
O O
C O C O
R1 R2
Diacilglicerol
CMP
O P O CH CH NX2 2
+
3
O
O
CH CH CH2 2
O O
C O C O
R1 R2
Fosfatidiletanolamina/Fosfatidilcolina

Figura 10.11
Síntese da fosfatidilserina
O fosfatidilinositol é sintetizado pela condensação de
CDP−diacilglicerol com o inositol.
O P O CH CH NH2 2
+
3
O
O
CH CH CH2
HO CH CH COO2
+
3NH
2
O O
C O C O
R1 R2
Fosfatidiletanolamina
HO CH CH COO2 2
+
3NH
Serina
HO CH CH NH2 2
+
3
Etanolamina
O P O
O
O
CH CH CH2 2
O O
C O C O
R1 R2
Fosfatidilserina

Figura 10.12
Síntese do fosfatidilinositol
O turnover dos fosfolipídeos é rápido. Por exemplo, em células
animais, cerca de duas divisões celulares são necessárias para a
O P O
O
O
CH CH CH2 2
O O
C O C O
R1 R2
Fosfatidato
CTP
PP 2 Pi i
O P O P O Citidina
O
O
O
O
CH CH CH2 2
O O
C O C O
R1 R2
CDP-Diacilglicerol
OH
H
OH
Inositol
CMP
O P
O
O
CH CH CH2 2
O O
C O C O
R1 R2
Fosfatidilinositol
HO
H
OH
H
H
HO
OH
H
H
OH
H
OH
H
OH
H
HO
OH
H
HO

substituição de metade do número total de moléculas de
fosfolipídeos. Os fosfoglicerídeos são degradados pelas fosfolipases.
As fosfolipases catalisam o rompimento de ligações específicas em
moléculas de fosfoglicerídeos e são denominadas de acordo com a
ligação clivada. As fosfolipases A1 e A2, que hidrolizam as ligações
éster dos fosfoglicerídeos em C1 e C2, respectivamente, contribuem
para a remodelação fosfolipídica descrita.
B. Metabolismo dos esfingolipídeos
Os esfingolipídeos em animais possuem ceramida, um derivado
do amino−álcool esfingosina. A síntese da ceramina inicia com a
condensação de palmitoil−CoA com a serina para formar 3-
cetoesfinganina. A reação é catalisada pela
3−cetoesfinganina−sintase, uma enzima
piridoxal−5’−fosfato−dependente. A 3−cetoesfinganina é
subseqüentemente reduzida pelo NADPH para formar esfinganina.
Em processo de duas etapas envolvendo a acil−CoA e FADH2, a
esfinganina é convertida a ceramida. A esfingomielina é formada
quando a ceramida reage com a fosfatidilcolina. (Em reação
alternativa, a CDP−colina é usada em lugar da fosfatidilcolina).
Quando a ceramida reage com com a UDP-glicose, a glicosilceramida
(um cerebrosídeo comum, às vezes denominado como
glicosilcerebrosídeo) é produzida. O galactocerebrosídeo, um
precursor de outros glicolipídeos, é sintetizado pela reação da
ceramida com a UDP-galactose. Os sulfatídeos são sintetizados
quando os galactocerebrosídeos reagem com a molécula doadora de
sulfato a 3’−fosfoadenosina−5’−fosfosulfato (PAPS). A transferência
de grupos sulfato é catalisada por uma sulfotransferase microssomal.
Os esfingolipídeos são degradados nos lisossomos. As doenças
chamadas esfingolipidoses, são provocadas pela falta ou defeito das
enzimas necessárias para a degradação dessas moléculas.
10.7 Metabolismo dos isoprenóides
Os isoprenóides ocorrem em todas as células eucarióticas. Apesar
da grande diversidade das moléculas isoprenóides, os mecanismos
pelas quais diferentes espécies são sintetizadas são similares. De fato,
a fase inicial da síntese isoprenóide (síntese do isopentenil
pirofosfato) parece ser idêntica em todas as espécies investigadas.
Pela sua importância na biologia humana, o colesterol recebeu
enorme atenção dos pesquisadores. Por essa razão, o metabolismo do
colesterol é melhor compreendido que qualquer outra molécula de
isoprenóide.
A. Biossíntese do colesterol
O colesterol do organismo é derivado de duas fontes: dieta e
síntese de novo. Quando a dieta fornece colesterol suficiente, a
síntese é inibida. A biossíntese do colesterol é estimulada quando a
dieta tem pouco colesterol.
Apesar de quase todos os tecidos poderem produzir colesterol (p.
ex., glândulas supra−renais, ovários, testículos, pele e intestino), a

maior parte da síntese ocorre no fígado. A síntese do colesterol pode
ser dividida em três etapas:
• Síntese de HMG−CoA (β-hidróxi−β−metilglutaril−CoA) a partir
de acetil−CoA.
• Conversão do HMG−CoA a esqualeno.
• Conversão do esqualeno em colesterol.
1. Síntese de HMG−CoA a partir do acetato. No citosol duas
moléculas de acetil−CoA condensam-se para formar acetoacetil−CoA
(também conhecida como β−cetobutiril−CoA) em reação catalisada
pela tiolase.
Na reação seguinte, o acetoacetil−CoA condensa com uma
terceira molécula de acetil−CoA para formar
β−hidróxi−β−metilglutaril−CoA (HMG−CoA). A reação é catalisada
pela β−hidróxi−β−metilglutaril−CoA−sintase (HMG−CoA−sintase).
Na mitocôndria, o HMG−CoA é um intermediário para a síntese de
corpos cetônicos.
2. Conversão do HMG−CoA a esqualeno. A etapa seguinte da
síntese do colesterol inicia com a redução da HMG−CoA para formar
mevalonato (um composto de 6C) pela ação da HMG−CoA−redutase.
O NADPH é o agente redutor.
A HMG−CoA−redutase é a enzima limitante da velocidade de
síntese de colesterol. Acúmulo de colesterol na célula proveniente
tanto da síntese endógena como da dieta ou degradação, reduz a
atividade da HMG−CoA−redutase de dois modos: (a) inibe a
atividade da enzima e (b) aumenta a degradação da enzima existente.
A atividade e a concentração da HMG−CoA−redutase, localizada na
superfície citoplasmática do retículo endoplasmático, é afetada em
vários graus pela concentração de produtos intermediários da via (p.
ex.,, mevalonato, farnesil, esqualeno e 7−diidrocolesterol). O
mecanismo preciso pelo qual essa importante enzima é regulada,
entretanto, permanece obscuro.

Em uma série de reações citoplasmáticas, o mevalonato é
convertido a farnesil−pirofosfato. A mevalonato−cinase catalisa a
síntese do fosfomevalonato. Uma segunda reação de fosforilação
catalisada pela fosfomevalonato−cinase produz
5−pirofosfomevalonato. A fosforilação aumenta significativamente a
solubilidade das moléculas hidrocarbônicas no citoplasma.
O 5−pirofosfomevalonato é transformado em isopentenil
pirofosfato em processo envolvendo descarboxilação e desidratação:
CH C CH CH O P O P O2
CH3
2 2
O O
O O
Isopentenil pirofosfato
CH C SCoA +
Acetil-CoA
O
3
Tiolase
H SCoA
CH C SCoA
O
3
Acetil-CoA
CH C CH C SCoA
O
3 2
O
Acetoacetil-SCoA
CH C SCoA
O
3
H SCoA
OOC CH C CH C SCoA
O
2 2
OH
CH3
HMG-CoA-sintase
3-Hidroxi-3-metiglutaril-CoA (HMG-CoA)
HMG-CoA-redutase
2 NADPH
2 NADP + HSCoA+
OOC CH C CH CH OH2 2
OH
CH3
2
Mevalonato

O isopentenil−pirofosfato é convertido a seguir em seu isômero
dimetilalil−pirofosfato pela isopentenil−pirofosfato isomerase. (Um
grupo CH2=CH−CH2- sobre uma molécula orgânica é muitas vezes
chamadas de grupo alil).
O geranil−pirofosfato é produzido durante uma reação de
condensação entre isopentenil−pirofosfato e dimetilalil−pirofosfato.
O pirofosfato é também um produto da reação e duas reações
subseqüentemente. A geranil−transferase catalisa a reação de
condensação entre o geranil−pirofosfato e isopentenil−pirofosfato
que forma farnesil−pirofosfato. O esqualeno é sintetizado quando a
farnesil−transferase (uma enzima microssomal) catalisa a
condensação de duas moléculas de farnesil−pirofosfato. A
farnesil−transferase as vezes chamada de esqualeno−sintase. Essa
reação requer NADPH como um doador de elétrons.
3. Conversão do esqualeno a colesterol. A última fase da via
biossintética do colesterol inicia com a ligação do esqualeno a uma
proteína transportadora específica chamada proteína transportadora
de esterol. A conversão do esqualeno a lanosterol ocorre enquanto os
intermediários estão ligados a essa proteína. A
esqualeno−monoxigenase acrescenta um átomo de oxigênio do O2 na
extremidade da cadeia do esqualeno, produzindo um epóxido e,
subseqüentemente, a ciclização
(esqualeno−2,3−epóxido−lanosterol−ciclase) que resulta na formação
de lanosterol localizada nos microssomos. A
esqualeno−monoxigenase requer NADPH e FAD para a sua atividade.
Após sua síntese, o lanosterol (que contém os quatro anéis do núcleo
esteróide) liga-se a uma segunda proteína transportadora, que
permanece ligada durante as reações restantes. As atividades das
enzimas que catalisam as restantes 20 reações necessárias para a
conversão do lanosterol a colesterol estão embebidas nas membranas
microssomiais. Em uma série de transformações envolvendo NADPH
e algum oxigênio, o lanosterol é convertido a 7−diidrocolesterol. Esse
produto é então reduzido pelo NADPH para formar colesterol.

Figura 10.13
Estrutura do esqualeno, um precursor do colesterol. (a) Esqualeno com
suas seis unidades isoprênicas, (b) uma molécula de esqualeno dobrado
antes da ciclização e (c) colesterol, um derivado do esqualeno com C27.
B. Esterificação do colesterol
O colesterol livre pode ser esterificado para o armazenamento no
fígado ou transportado em partículas VLDL (lipoproteína de
densidade muito baixa) para outros tecidos. Em presença de
acil−CoA:colesterol−aciltransferase (ACAT) o ácido graxo esterifica
o grupo 3–OH do colesterol.
(a)
c)
(b)
(
Esqualeno dobrado
Esqualeno
Colesterol

C. Transformação do colesterol em ácidos biliares
De modo diferente de outras biomoléculas, o colesterol e outros
esteróides não são degradados em moléculas menores. Em lugar
disso, o colesterol é convertido em um derivado mais hidrofílico para
facilitar sua excreção. O mais importante mecanismo para a
degradação e eliminação do colesterol é a síntese dos ácidos biliares.
A conversão do colesterol a 7−α−hidrocolesterol, catalisada pela
colesterol−7−hidroxilase (uma enzima microssomal que requer
oxigênio, NADPH e citocromo P450), é a etapa limitante da
velocidade na síntese de sais biliares. Nas últimas reações, a ligação
dupla em C5 é rearranjada e reduzida, e um grupo hidroxila adicional
é introduzido. Os produtos desse processo, o ácido cólico e ácido
desoxicólico, são convertidos a sais biliares por enzimas
microssomiais que catalisam reações de conjugação. Nas reações de
conjugação a solubilidade de uma molécula é aumentada pela
conversão em um derivado que contêm um grupo solúvel em água.
Amidas e ésteres são exemplos comuns desses derivados conjugados.
A quase totalidade dos ácidos biliares estão conjugados com a glicina
ou taurina para formar ácido glicocólico ou ácido taurocólico,
respectivamente.
O
Acil-CoA-colesterol
aciltransferase
R C SCoA HSCoA
HO
Colesterol
Éster do colesteril
O
R C O

Os sais biliares são importantes componentes da bile, um líquido
amarelo-esverdeado produzido pelos hepatócitos que auxiliam na
digestão dos lipídeos. Além dos sais biliares, a bile contêm
colesterol, fosfolipídeos e pigmentos biliares (bilirrubina e
biliverdina) Os pigmentos biliares são produtos de degradação do
heme. Após sua secreção para as vias biliares e armazenados na
vesícula, a bile é usada no intestino delgado para aumentar a absorção
das gorduras da dieta. A bile atua como agente emulsificante que
promove a quebra de grandes gotas de gordura em porções menores.
Os sais biliares também estão envolvidos na formação de micelas
biliares, que ajudam na absorção de gorduras e das vitaminas lipídeo-
solúvel (A, D, E, K). A maior parte dos sais biliares é reabsorvida no
íleo distal (perto do final do intestino delgado). Eles entram no
sangue e retornam ao fígado, onde são re-secretados para os dutos
biliares com outros componentes biliares. O significado biológico das
reações de conjugação dos ácidos biliares parece ser que o processo
de conjugação previne a prematura absorção dos ácidos biliares no
trato biliar (dutos biliares e vesícula) e intestino delgado. A
reabsorção de sais biliares no íleo distal do intestino delgado é
aparentemente desencadeado pelo sinal da glicina ou taurina. Estima-
se que as moléculas de sais biliares são recicladas 18 vezes antes de
serem finalmente eliminadas.
D. Síntese de hormônios esteróides
Todos os hormônios esteróides são derivados do colesterol. A
reação inicial na síntese de hormônios esteróides é a conversão do
colesterol em pregnenolona, pela desmolase, uma enzima
mitocondrial complexa composta de duas hidroxilases, uma das quais
a enzima citocromo P450. Após a síntese, a pregnenolona é
transportada ao retículo endoplasmático, onde é convertida a
progesterona. A pregnenolona e progesterona são precursores de
todos os hormônios esteróides. Além do papel de precursor, a
progesterona também atua como hormônio. O seu papel primário
como hormônio é a regulação de várias modificações fisiológicas no
útero. Durante o ciclo menstrual, a progesterona é produzida por
células especializadas no interior do ovário. Durante a gravidez é
produzida em grandes quantidades pela placenta para previr as
contrações do músculo uterino liso.
As quantidades e os tipos de esteróides sintetizados em um tecido
específico são cuidadosamente regulados. As células respondem a
sinais químicos que influenciam o metabolismo dos esteróides por
HO
O
C OH
H
CH3
HO
CH3
OH
Colato

indução da síntese de enzimas específicas. Os mais importantes sinais
químicos são os hormônios peptídicos secretados pela hipófise e
várias prostaglandinas. Por exemplo, o hormônio adrenocorticotrófico
(ACTH) é um hormônio peptídeo secretado pela hipófise que estimula
a síntese dos esteróides adrenais. Uma das conseqüências da ligação
do ACTH aos receptores da adrenal é o aumento da síntese do
17−α−hidroxilase e 11−β−hidroxilase. Em contraste, a prostaglandina
F2α inibe a indução da síntese de progesterona nos ovários. Esse
último processo é estimulado pelo hormônio luteinizante (LH), uma
proteína também produzida pela hipófise.
O processo enzimático no qual o colesterol é convertido a
esteróides biologicamente ativos, também como o modo pelos quais
os esteróides são inativados e preparados para a excreção,
compreende um elaborado mecanismo conhecido como
biotransformação. Durante a biotransformação as mesmas (em alguns
casos similares) enzimas são também usadas para solubilizar o
xenobiótico hidrofóbico para torná-los mais facilmente excretados. A
biotransformação do colesterol em ácidos biliares é descrito a seguir.
10.8 Eicosanóides
Os eicosanóides são substâncias fisiologicamente ativas que
atuam como potentes biosinalizadores produzidos na maioria dos
tecidos dos mamíferos. Mediam uma grande variedade de processos
fisiológicos, tais como, a contração de músculos lisos, inflamação,
percepção da dor e a regulação do fluxo sangüíneo. Os eicosanóides
também estão relacionados com várias doenças como o infarto do
miocárdio e artrite reumatóide. Como agem nos tecidos próximos das
células que os produzem, os eicosanóides são chamados reguladores
autócrinos e não de hormônios que são transportados pela corrente
sangüínea até os sítios de ação.
A maioria dos eicosanóides são derivados do ácido araquidônico
(20:4∆5,8,11,14
), sintetizado a partir do linoleato pela adição de uma
unidade de três carbonos seguida pela descarboxilação e
dessaturação.

Quase todo ácido araquidônico é armazenado nas membranas
celulares como ésteres no C2 do glicerol nos fosfoglicerídeos. A
produção de eicosanóides inicia após a liberação do ácido
araquidônico a partir de moléculas de fosfolipídeos das membranas
pela ação da enzima fosfolipase A2 ativada por estímulo hormonal e
outros. Os eicosanóides, que incluem as prostaglandinas, os
tromboxanos e os leucotrienos, são ativos por curtos períodos (muitas
vezes medidos em segundos ou minutos) e produzidos em pequenas
quantidades.
A. Prostaglandinas
São derivados do ácido araquidônico que contém um anel de
ciclopentano com grupos hidróxi em C11 e C15. As moléculas que
pertencem a série E das prostaglandinas tem um grupo carbonila em
C9, enquanto as moléculas da série F tem um grupo OH na mesma
posição. O número subescrito no nome das prostaglandinas indica o
número de ligações duplas na molécula. A série 2, derivada do ácido
araquidônico, parece ser o grupo mais importante de prostaglandinas
em humanos.
No retículo endoplasmático liso, as enzimas cicloxigenase (COX)
e peroxidase catalisam a transformação do araquidonato em PGH2, o
precursor de muitas prostaglandinas e tromboxanos. O PGH2 sofre
modificações adicionais, dependendo do tecido.
COO
COO
COO
COO
Linoleato 18:2 ( )
Dessaturação
9,12
-Linoleato 18:3 ( )
Alongamento
6,9,12
Eicostrienoato 20:3 ( )8,11,14
Araquidonato 20:4 ( )5,8,11,14
γ

As prostaglandinas estão envolvidas em uma grande variedade de
funções de controle. Por exemplo, as prostaglandinas promovem a
inflamação e processos que produzem dor e febre. Atuam nos
processos reprodutivos (exemplo, ovulação e contrações uterinas) e
digestão (exemplo, inibição da secreção gástrica). Ações biológicas
adicionais de algumas prostaglandinas são mostradas na Figura 10.15.
O bloqueio da produção de prostaglandinas pela inibição das
enzimas de síntese implica no alívio da dor e da inflamação mediadas
pelas prostaglandinas. Por exemplo, os glicocorticóides exercem
importantes ações antiinflamatórias por suprimir a resposta imune por
meio da inibição da expressão de ciclooxigenase. Existem duas
formas de cicloxigenase: COX1 e COX2. A enzima COX2 pode ser
induzida em células inflamatórias. A supressão da síntese de COX2
por glicocorticóides exerce importantes efeitos antiinflamatórios.
Vários outros inibidores são utilizados como antiinflamatórios tais
como, a aspirina, ibuprofeno (antiinflamatório não esteróide),
paracetamol (Tylenol
), Celebrex
e Vioxx
.
B Tromboxanos.
São também derivados do ácido araquidônico. Diferem de outros
eicosanóides por possuir um anel cíclico éter. O tromboxano A2
(TXA2), o mais proeminente membro do grupo dos eicosanóides, é
principalmente produzido pelas plaquetas (fragmentos celulares que
iniciam o processo de coagulação sangüínea). Uma vez liberado, o
TXA2 promove a agregação plaquetária e a vasoconstrição. A
ingestão regular de pequenas doses de aspirina reduzem a
probabilidade de infartos do miocárdio e acidentes vasculares
cerebrais pela inibição da síntese de tromboxana.
C. Leucotrienos
COO
Araquidonato
Ciclooxigenase2 O2
Peroxidase
COO
COO
O
O
O
O
OH
OOH

São derivados lineares do ácido araquidônico cuja síntese é
iniciada por uma reação de peroxidação. Os vários leucotrienos
diferem na posição do peróxido e na natureza do grupo tioéter
atacado perto do local da peroxidação. O nome leucotrienos lembra
que eles foram descobertos nos leucócitos (glóbulos brancos) e
possuem um trieno (três duplas ligações conjugadas) em suas
estruturas. (O termo conjugado indica que as duplas ligações
carbono-carbono são separadas por uma ligação carbono-carbono
simples). Atuam como mediadores da inflamação e nas reações
alérgicas. Os leucotrienos LTC4, LTD4 e LTE4 foram identificados
como componentes da SRS-A (substância de reação lenta da
anafilaxia). (O subescrito no nome do leucotrieno indica o número
total de ligações duplas). Anafilaxia é o tipo imediato e transitório de
reação imunológica (alérgica), caracterizada pela contração dos
músculos lisos e dilatação dos capilares em decorrência da liberação
de substâncias farmacologicamente ativas (histamina, bradicinina,
serotonina e substância de reação lenta). Durante a inflamação (uma
resposta normal à lesão tecidual) essas moléculas aumentam a perda
de líquidos dos vasos sangüíneos das áreas afetadas. O LTB4, um
potente agente quimiotático, atrai leucócitos (infection−fighting).
(agentes quimiotático são também chamados como quimioatrativos).
Outros efeitos dos leucotrienos incluem a vasoconstrição e a
broncoconstrição (ambos causados pela contração do músculo liso
nos vasos sangüíneos e das passagens de ar nos pulmões) e edema
(aumento da permeabilidade capilar que causa a perda de líquidos dos
vasos sangüíneos).
Figura 10.15
Ações biológicas de algumas moléculas de eicosanóides
Ácido araquidônico
PGH2
PGI2 TXA2
Antiagregação
plaquetária
Vasodilatação Agregação
plaquetária
Vasoconstrição
PGF2PGE2
Contração do
músculo liso
VasodilataçãoContração do
músculo liso
Vasoconstrição
Inflamação Broncoconstrição,
vasoconstrição,
permeabilidade capilar
Leucotrienos
Todos os
tecidos
Tecido
específico

Resumo
1. A acetil−CoA exerce papel central na maioria dos processos metabólicos
relacionados aos lipídeos. Por exemplo, a acetil−CoA é usada na síntese
dos ácidos graxos. Quando os ácidos graxos são degradados para gerar
energia, o produto é a acetil−CoA.
2. Dependendo das necessidades energéticas, as novas moléculas de
gordura são empregadas para a geração de energia ou são armazenadas
nos adipócitos. Quando as reservas de energia do organismos estão
baixas, as gorduras armazenadas são mobilizadas em processo
denominado lipólise. Na lipólise, os triacilgliceróis são hidrolizados em
ácidos graxos e glicerol. O glicerol é transportado para o fígado, onde
pode ser usado na síntese de lipídeos ou glicose. A maior parte dos
ácidos graxos são degradados para formar acetil−CoA na mitocôndria em
processo denominado β−oxidação. A β−oxidação nos peroxissomos
encurtam os ácidos graxos muito longos. Outras reações degradam ácidos
graxos de cadeia ímpar e insaturados. Quando o produto de degradação
dos ácidos graxos (acetil−CoA) está presente em excesso, são produzidos
corpos cetônicos.
3. A síntese dos ácidos graxos inicia com a carboxilação da acetil−CoA
para formar malonil−CoA. As demais reações da síntese dos ácidos
graxos são realizadas pelo complexo ácido graxos sintase. Várias
enzimas estão disponíveis para o alongamento e o processo de
dessaturação dos ácidos graxos da dieta e sintetizados.
4. Após a síntese dos fosfolipídeos na interface do sistema retículo
endotelial e citoplasma, eles são muitas vezes “remodelados”, ou seja, a
composição de seus ácidos graxos é ajustada. O turnover (degradação e
reposição) dos fosfolipídeos, mediado por fosfolipases, é rápido.
5. A síntese do componente ceramida dos esfingolipídeos inicia com a
condensação do palmitoil−CoA com a serina para formar
3−cetoesfingamina. Em processo de duas etapas envolvendo a acil−CoA
e FADH2, esfinganina (formada quando a 3−cetoesfinganina é reduzida
pelo NADPH) é convertida a ceramida. Os esfingolipídeos são
degradados nos lisossomos.
6. As proteínas translocadoras de fosfolipídeos, as proteínas de troca de
proteínas e as vesículas de transição estão envolvidas em um complicado
processo de síntese de membrana e entrega de componentes da membrana
para seus destinos celulares.
7. A síntese de colesterol pode ser dividida em três etapas: formação de
HMG−CoA a partir de acetil−CoA, conversão de HMG−CoA a esqualeno
e transformação do esqualeno a colesterol. O colesterol é o precursor de
todos os hormônios esteróides e de sais biliares. Os sais biliares são
usados para emulsificar a gordura da dieta.
8. A primeira etapa na síntese dos eicosanóides é a liberação do ácido
araquidônico do C2 do glicerol das moléculas de fosfoglicerídeos da
membrana. A ciclooxigenase converte o ácido araquidônico em PGG2,
que é um precursor das prostaglandinas e tromboxanos. A lipoxigenase
converte o ácido araquidônico em precursores dos leucotrienos.
Referências
HORTON, H. R., MORAN, L. A., OCHS, R. S., RAWN, J. D., SCRIMGEOUR,
K. G. Principles of biochemistry. 3 ed. Upper Saddle River: Prentice Hall,
2002. p. 264-303.

Paulo: Sarvier, 2002. p. 599-638.
Alegre: Artmed, 2000. p. 562-610.

319
11
Metabolismo do Nitrogênio
O nitrogênio é um elemento essencial encontrado em proteínas, em
ácidos nucléicos e em outras biomoléculas. Apesar do importante papel que
exerce nos organismos vivos, o nitrogênio utilizado biologicamente é
escasso. Embora o nitrogênio molecular (N2) seja abundante na biosfera,
ele é quase inerte quimicamente. Portanto, a conversão do N2 para a forma
utilizável necessita gasto de energia. Certos microorganismos podem
reduzir o N2 para formar NH3 (amônia). As plantas e os microorganismos
absorvem NH3 e −
3NO (íon nitrato), o produto de oxidação da amônia. As
duas moléculas são usadas para a síntese de biomoléculas contendo
nitrogênio. Os animais não sintetizam moléculas contendo nitrogênio a
partir de amônia e nitrato. Em lugar disso, eles obtêm “nitrogênio
orgânico”, (principalmente aminoácidos) da dieta. Em uma complexa série
de vias, os animais usam o nitrogênio dos aminoácidos para sintetizar
vários compostos orgânicos.
O nitrogênio é encontrado em inúmeras biomoléculas, como por
exemplo, aminoácidos, bases nitrogenadas, porfirinas e alguns lipídeos.
Muitos metabólitos contendo nitrogênio são necessários em pequenas
quantidades (ex.: aminas biogênicas e glutationa).
11.1 Fixação de nitrogênio
Várias circunstâncias limitam a utilização do nitrogênio atmosférico
nos seres vivos. Devido a estabilidade química do nitrogênio molecular
atmosférico, a redução do N2 até íon amônio ( +
4NH ) (denominado fixação
do nitrogênio) necessita de grande quantidade de energia. Por exemplo, no
mínimo 16 ATP são necessários para reduzir um N2 a duas NH3. Além
disso, somente alguns procariotos podem “fixar” nitrogênio. Entre eles
estão as bactérias (Azotobacter vinelendii e Clostridium pasteurianum), as
cianobactérias (Nostoc muscorum e Anabaena azollae) e as bactérias
simbiontes (várias espécies de Rhizobium) localizadas em nódulos de raízes
de plantas leguminosas como soja e alfafa.
As espécies fixadoras de nitrogênio possuem um complexo da
nitrogenase, cuja estrutura consiste de duas proteínas chamadas
dinitrogenase e dinitrogenase−redutase. A dinitrogenase (MoFe−proteína) é
um α2β2-heterotetrâmero que contêm dois átomos de molibdênio (Mo) e 30
átomos de ferro. A dinitrogenase−redutase (Fe−proteína) é um dímero de

subunidades idênticas. O complexo da nitrogenase catalisa a produção de
amônia a partir do nitrogênio molecular:
N2 + 8H+
+ 8e−
+ 16 ATP + 16 H2O → 2NH3 + H2 + 16ADP + 16Pi
São necessários oito elétrons para a reação: seis para a redução do N2 e
dois para produzir H2. Os dois componentes do complexo da nitrogenase
são inativados irreversivelmente pelo oxigênio e, porisso, muitas bactérias
fixadoras de oxigênio ficam confinadas em ambientes anaeróbicos.
Em condições fisiológicas, a amônia existe principalmente na forma
protonada, +
4NH (íon amônio) (pK’ 9,25).
A. Nitrificação e desnitrificação
O nitrogênio biologicamente útil também é obtido a partir do íon
nitrato ( −
3NO ) presente na água e no solo. O nitrato é reduzido a íon amônio
pelas plantas, fungos e muitas bactérias. Primeiro, a nitrato−redutase
catalisa a redução de dois elétrons do íon nitrato a íon nitrito ( −
2NO ):
−
3NO + 2H+
+ 2 e−
→ −
2NO + H2O
A seguir, a nitrito−redutase converte o nitrito a íon amônio:
−
2NO + 8H+
+ 6e−
→ +
4NH + 2H2O
O nitrato é também produzido por certas bactérias que oxidam o +
4NH a
−
2NO e a seguir até −
3NO , em processo chamado nitrificação. Outros
organismos convertem o íon nitrato e o íon nitrito de volta a N2 para a
atmosfera, em mecanismo chamado desnitrificação. Todas essas reações
constituem o ciclo do nitrogênio. (Figura 11.1).
Figura 11.1
N2
NO3
Nitrato
NO2
Nitrito
Nitrato
redutase
Nitrificação
Desnitrificação
Nitrito
redutase
NitrogenaseFixação do
nitrogênio
NH4
+
Aminoácidos
Nucleotídeos
Fosfolipídeos

11 Metabolismo do nitrogênio • 321
Ciclo do nitrogênio. A fixação do nitrogênio converte N2 em íon amônio útil
biologicamente. O nitrato também pode ser convertido a íon amônio. A amônia é
transformada de volta a N2 por nitrificação seguida por desnitrificação.
B. Incorporação de íons amônio em aminoácidos
Existem duas vias principais para a incorporação de íons amônio para
formar aminoácidos e, a seguir, outras biomoléculas: (1) aminação redutiva
de α−cetoácidos e (2) formação de amidas de ácido aspártico e de ácido
glutâmico com a subsequente transferência do nitrogênio amida para
formar outros aminoácidos.
A glutamato−desidrogenase, uma enzima encontrada na mitocôndria e
citoplasma de células eucarióticas e em algumas bactérias, catalisa a
incorporação de íons amônio ao α−cetoglutarato:
Em eucariotos, a desidrogenase também libera íons amônio para a
excreção de nitrogênio a partir do glutamato proveniente, sobretudo, das
reações de transaminação. Como a reação é reversível, o excesso de amônia
promove a síntese de glutamato. A glutamato−desidrogenase é uma enzima
alostérica ativada pelo ADP e o GDP, e inibida pelo ATP e o GTP.
Os íons amônio são também incorporados ao glutamato para formar
glutamina em presença da glutamina−sintetase, enzima encontrada em
todos os organismos. Nos microrganismos, é um ponto crítico de entrada
para a fixação de nitrogênio. Em animais, é a principal via de conversão de
íons amônio – compostos altamente tóxicos – em glutamina para ser
transportada no sangue. Na primeira etapa da reação, o ATP doa um grupo
fosforil para o glutamato. A seguir, os íons amônio reagem com o
intermediário (γ−glutamil−fosfato), deslocando o Pi para produzir
glutamina.
O nome sintetase indica que o ATP é consumido na reação.
O cérebro, uma fonte rica em glutamina−sintetase, é especialmente
sensível aos efeitos tóxicos de íons amônio. As células do cérebro
convertem íons amônio em glutamina, uma molécula neutra e não−tóxica.
NAD(P)H,H
CH + NH
COO
CH
2
COO
2
C O
-Cetoglutaratoα
+
NADP+
Glutamato-desidrogenase
CH + H O
COO
CH
2
2
H N C H3
+
COO
Glutamato
4
+
α
2
α
Glutamato
ATP ADP NH4
Pi
COO
H N C H
2
3
+
CH
2CH
C
O O OPO2
3
COO
H N C H
2
3
+
CH
2CH
C
O
-Glutamil-fosfato
COO
H N C H
2
3
+
CH
2CH
C
O NH2
Glutamina
+

A glutamina é, então, transportada ao fígado, onde ocorre a produção de
compostos nitrogenados para a excreção.
Em muitos organismos, a glutamina e o glutamato estão presentes em
concentrações mais elevadas que outros aminoácidos, o que é consistente
com seu papel de carreador de aminoácidos. Sendo assim, a atividade da
glutamina−sintetase é fortemente regulada para manter o suprimento
adequado de aminoácidos. Por exemplo, a glutamina−sintetase
dodecamérica da E. Coli é regulada alostericamente e por modificação
covalente.
Em bactérias e vegetais, a enzima glutamato−sintase catalisa a
aminação redutiva do α−cetoglutarato empregando a glutamina como
doadora de nitrogênio e o NADH2 como doador de elétrons (exemplo, em
raízes e sementes) e, em algumas plantas, a ferrodoxina reduzida (exemplo,
em folhas):
(as reações catalisadas pelas sintases não requerem ATP). O resultado
das reações da glutamina−sintetase e glutamato−sintase é
α−Cetoglutarato + +
4NH + NADPH + ATP →
glutamato + NADP+
+ ADP + Pi
Em resumo, a ação combinada das duas reações incorpora o nitrogênio
(íon amônio) em um composto orgânico (α−cetoglutarato, um intermediário
do ciclo do ácido cítrico) para produzir aminoácidos (glutamato). Os
mamíferos não possuem a glutamato−sintase, mesmo assim, as
concentrações de glutamato nesses organismos são relativamente altas
porque o aminoácido é produzido por outras reações.
11.2 Transaminação
As transaminases (também chamadas amino−transferases) catalisam a
transferência reversivel de grupos α−amino de um aminoácido para um α
−cetoácido para produzir um α−cetoácido do aminoácido original e um
novo aminoácido. Por exemplo:
NADPH
+
H
COO
CH
CH +2
COO
2
O C
-Cetoglutaratoα
COO
CH
CH2
C
2
H N C H3
+
O NH2
Glutamina
+
NADP+
Glutamato
sintase
COO
CH
CH +2
2
H N C H3
+
COO
COO
CH
CH2
2
H N C H3
+
COO
Glutamato

As transaminases requerem piridoxal−5´−fosfato (PLP) como
coenzima. Este composto é a forma fosforilada da piridoxina (vitamina B6):
A PLP está covalentemente ligada ao sítio ativo da enzima via base de
Schiff (R’−CH=N−R, uma aldimina) ligada ao grupo ε-amino do resíduo de
lisina:
Forças estabilizadoras adicionais incluem interações iônicas entre as
cadeias laterais de aminoácidos e o anel piridinium e o grupo fosfato.
As reações de transaminação exercem papeis centrais tanto na síntese
como degradação dos aminoácidos. Além disso, essas reações envolvem a
interconversão de aminoácidos a piruvato ou ácidos dicarboxílicos, e atuam
como ponte entre o metabolismo dos aminoácidos e os carboidratos.
Enzima-PLP
(base de Schiff)
3
O
CHN
H
+
H
N+
C
H
CH2
CH2
CH2
CH2
Enzima
CH2
O PO3
2
O P O H C
3
OH
C
2
H O
CHN
H
+
3
2
1
6
5
4
3
2
5´
4´
Pirodoxal-5-
fosfato (PLP)
´
HO H C
3
OH
H C
2
OH
CHN
H
+
2
Pirodoxina
(vitamina B )6
Glutamato
(Aminoácido)
CH + O C
COO
H N C H
2
3
+
CH2
COO
COO
CH3
Transaminase
CH +
COO
O C
2
CH2
COO
Piruvato
( -Cetoácido)
-Cetoglutarato
( -Cetoácido)
COO
CH3
H N C H3
+
Alanina
(Aminoácido)

Figura 11.2
Papel do piridoxal -5’-fosfato na transaminação.
O P O
O
O
N
H
C N Enzima
H
OH
CH3
H
+
+
+R C C C O
H H O
H NH3
+
-Aminoácido
H O2H O2
H+ H+
Base de Schiff
R C C C O
H H O
H
O P O
O
O
N
H
CH3+
H
N
HC
O
+
R C C C O
H
H
O P O
O
O
N
H
CH3+
H
N
HC
O
+
O
Cabânion Intermediário quinonóide
R C C C O
H
H
O P O
O
O
N
H
CH3+
H
N
HC
O
+
O
H+ H+
R C C C O
H
H
O P O
O
O
N
H
CH3+
H
N
H C
O
+
O
2
H O2H O2
R C C C O
H
H
OO
-Cetoácido
+ O P O
O
O
N
H
CH3+
CH
O
2
NH2
Piridoxamina-fosfato
Piridoxal-fosfato

11.3 Aminoácidos essencias e não−essencias
Os aminoácidos diferem de outras classes de biomoléculas pois cada
membro é sintetizado por via única. Apesar da diversidade das vias
sintéticas, o esqueleto carbonado de cada aminoácido é derivado dos
mesmos intermediários metabólicos: o piruvato, o oxalacetato, o
α−cetoglutarato e o 3−fosfoglicerato. A tirosina, sintetizada a partir da
fenilalanina, é uma exceção.
Os aminoácidos sintetizados em quantidades suficientes por mamíferos
a partir da amônia e de esqueletos carbonados, são denominados
não−essenciais; ou seja, eles eståo disponíveis para as células mesmo
quando não incluídos na dieta. Por outro lado, os aminoácidos essenciais
são aqueles não sintetizados ou sintetizados em velocidade inadequada às
necessidades metabólicas do organismo e, portanto, devem ser ingeridos na
dieta. Os aminoácidos essenciais e não−essenciais estão listados na Tabela
11.1.
Tabela 11.1 – Aminoácidos essenciais e não−essenciais no homem
Essenciais Não−essenciais
Arginina Alanina
Histidina* Asparagina
Isoleucina Aspartato
Leucina Cisteína
Lisina Glutamato
Metionina Glutamina
Fenilalanina Glicina
Treonina Hidroxiprolina
Triptofano Prolina
Valina Serina
Tirosina
* A histidina é essencial no mínimo até os 12 anos de idade
As fontes exógenas de proteínas diferem consideravelmente em suas
proporções de aminoácidos essenciais. Em geral, os aminoácidos essências
são encontrados em maior quantidade em proteínas de origem animal
(exemplo, carne, leite e ovos). As proteínas vegetais muitas vezes são
carentes de um ou mais desses aminoácidos. Por exemplo, a gliadina
(proteína do trigo) tem quantidade insuficiente de lisina enquanto a zeína
(proteína do milho) tem baixo conteúdo de lisina e triptofano. Como as
proteínas vegetais diferem em sua composição de aminoácidos, é possível
obter aminoácidos essenciais em quantidades apropriadas a partir da
combinação de diversos vegetais. Por exemplo, o feijão (metionina baixa)
associado com cereais (lisina baixa).
As rotas biossintéticas para a produção de aminoácidos não−essenciais
são descritas a seguir. Ao considerar estes processos, deve-se compreender
que se algum destes aminoácidos for excluido da dieta, pode ocorrer uma
elevada demanda de aminoácidos essenciais, pois parte destes últimos são
utilizados na síntese de não−essenciais. Por exemplo, a tirosina é
classificada como não−essencial pois é formada a partir da fenilalanina.
Entretanto, na ausência de tirosina exógena, a quantidade de fenilalanina
necessária aumenta significativamente.

A. Biossíntese de aminoácidos não−essenciais
Em mamíferos, os aminoácidos não−essenciais são sintetizados a partir
de várias fontes, tais como, os aminoácidos essenciais (tirosina por
hidroxilação da fenilalanina) ou de intermediários metabólicos comuns: o
piruvato, o oxalacetato, o α−cetoglutarato e o 3−fosfoglicerato.
Alguns aminoácidos são formados por reações de transaminação. Por
essa via, a alanina é produzida a partir do piruvato, o glutamato a partir do
α−cetoglutarato e o aspartato a partir do oxaloacetato. A
glutamina−sintetase catalisa a amidação do glutamato para produzir
glutamina. A asparagina−sintetase, emprega a glutamina como doador de
grupo amino e converte o aspartato em asparagina:
Somente três intermediários metabólicos (piruvato, oxaloacetato e
α−cetoglutarato) fornecem cinco dos dez aminoácidos não−essenciais por
reações de transaminação e amidação.
Vias mais complexas convertem glutamato em prolina e arginina:
A serina tem como precursor a 3−fosfoglicerato, um intermediário da
glicólise. A síntese ocorre em três reações:
Glutamato
COO
CH
H N C H
2
3
+
CH2
COO Arginina
COO
CH
H N C H
2
3
+
CH2
NH
C
CH2
+
2NHH N2
HN
H C2 CH2
CH2
C H
COO
Prolina
Aspartato
COO
CH
C
H N C H
2
3
OO
Glutamina
+
ATP
Glutamato
+
AMP + PPi
Asparagina-sintetase
Asparagina
COO
CH
C
H N C H
2
3
NHO 2
++

A serina, um aminoácido com três carbonos, produz glicina com dois
carbonos em reação catalisada pela serina−hidroximetil−transferase (a
reação reversa converte glicina em serina). A enzima emprega um
mecanismo dependente de piridoxal−5’−fosfato (PLP) para remover o
grupo hidroximetil (−CH2OH) ligado ao carbono α da serina; o fragmento
de um carbono é então transferido para o co−fator tetrahidrofolato (THF)
(ver Seção 11.11.b).
O esqueleto carbonado da serina é utilizado para a síntese de cisteína.
A reação envolve a condensação da serina com a homocisteína para formar
cistationina que por clivagem produz cisteína, α−cetobutirato e amônia.
Estas reações são catalisadas pela cistationina−β−sintetase e cistationina−β
−liase, respectivamente:
A homocisteína é derivada da metionina pela formação do
intermediário S−adenosilmetionina. A transferência do grupo metila deste
último, libera a S−adenosil−homocisteína, que é clivada à homocisteína.
Enquanto os carbonos da cisteína são derivados da serina, o enxôfre é
obtido unicamente a partir da metionina (em processo denominado
transsulfuração). Restrição de cisteína na dieta deve ser compensada por
um aumento na ingestão de metionina.
B. Biossíntese de aminoácidos essencias
Os aminoácidos essenciais são sintetizados por vias que necessitam
várias etapas. Em algum ponto da evolução, os animais perderam a
capacidade de sintetizar esses aminoácidos, provavelmente porque as vias
consumiam muita energia e os compostos já existiam em alimentos. Em
Tetraidrofolato
Serina
Metileno-tetraidrofolato
H N C H
CH OH2
3
COO
+
Serina-hidroximetil-transferase
Glicina
H N C H
H
3
COO
+
Serina
CH
COO
H N C H +
2
3
+
OH
CH
COO
H N C H
2
3
+
CH2
SH
H O2
CH
COO
H N C H
2
3
+
S
CH
COO
H N C H
2
3
+
CH2
NH4
+
H O2
CH
COO
H N C H +
2
3
+
SH
CH
COO
2
CH3
O C
Homocisteína Cistationina Cisteína -Cetobutirato
NAD NADH
COO
H C OH
CH OPO2
2
3
+
COO
C OH
CH OPO2
2
3
Glutamato
-Cetoglutarato Pi COO
H N C H
CH2
3
OH
+
COO
H N C H
CH OPO2
2
3
3
+
3-Fosfoglicerato 3-Fosfo-
hidroxipiruvato
3-Fosfosserina Serina

resumo, os humanos não sintetizam aminoácidos ramificados ou aromáticos
e, também, não incorporam enxôfre em compostos como a metionina.
Foi descrito acima que a síntese da cisteína em mamíferos necessita um
átomo de enxôfre derivado, em última instância, da metionina. Em
bactérias, a síntese de metionina requer um átomo de enxôfre derivado da
cisteína. O enxôfre proveniente do sulfeto inorgânico substitui o grupo
acetila da O−acetilserina (obtida por acilação da serina) para produzir
cisteína..
A cisteína doa, então, o átomo de enxôfre para a homocisteína, cujo
esqueleto de quatro carbonos é derivado do aspartato. A etapa final da
síntese da metionina é catalisada pela metionina−sintase, que adiciona à
homocisteína um grupo metila transportado pelo tetrahidrofolato;
Em humanos, níveis elevados de homocisteína no sangue estão
associados com a doença cardiovascular. A relação foi inicialmente
descoberta em indivíduos com homocistinúria, uma desordem em que o
excessso de homocisteína é excretada na urina. Esses indivíduos
desenvolvem aterosclerose ainda crianças, provavelmente porque a
homocisteína danifica diretamente as paredes dos vasos sangüíneos mesmo
em ausência de teores elevados de LDL. Aumentos na ingestão de folato, a
vitamina precursora do tetraidrofolato, reduz o nível de homocisteína pela
sua conversão em metionina.
O aspartato, precursor da metionina, é também o precursor dos
aminoácidos essenciais treonina e lisina. Como esses aminoácidos são
derivados de outro aminoácido, eles já possuem o grupo amino. Os
aminoácidos alifáticos (valina, leucina e isoleucina) são sintetizados por
vias que empregam o piruvato como substrato inicial. Esses aminoácidos
necessitam uma etapa catalisada por transaminase (com glutamato como
substrato) para introduzir o grupo amino.
Em plantas e bactérias, a via de síntese de aminoácidos aromáticos
(fenilalanina, tirosina e triptofano) inicia com a condensação do
fosfoenolpiruvato (um intermediário glicolítico com três carbonos) com a
eritrose−4−fosfato (um intermediário de quatro carbonos na via
pentose−fosfato). O produto da reação com sete carbonos cicliza e sofre
Serina
COO
H N C H
CH OH2
3
+
H C C SCoA3
O
CoASH
O-Acetilserina
COO
H N C H
CH O C CH2
3
+
3
O
S + H2
CH COO3
+
COO
H N C H
CH SH2
3
+
Cisteína
Homocisteína
COO
H N C H
CH2
3
+
CH2
SH
Metil-tetraidrofolato
Tetraidrofolato
COO
H N C H
CH2
3
+
CH2
S
CH3
Metionina

modificações adicionais, incluindo a adição de mais três carbonos do
fosfoenolpiruvato, para formar o corismato, o intermediário comum na
síntese dos três aminoácidos aromáticos.
Como os animais não sintetisam o corismato, essa via é alvo de agentes
que podem inibir o metabolismo de plantas sem afetar os animais. Por
exemplo, o herbicida glifosato (Roundup®
) compete com o segundo
fosfoenolpiruvato na via que produz corismato.
As duas reações finais da via biossintética do triptofano (que tem 13
etapas) são catalisadas pela triptofano−sintase, uma enzima bifuncional
com uma estrutura quaternária α2β2. A subunidade α cliva o
indol−3−glicerol−fosfato gerando indol e gliceraldeído−3−fosfato. A
seguir, a subunidade β adiciona serina ao indol para produzir triptofano.
Indol, o produto da reação da subunidade α e o substrato para a reação
da subunidade β, nunca se separa da enzima. Em vez disso, o intermediário
indol se difunde entre os dois sítios ativos, não escapando para o solvente
circundante. Esse fenômeno, no qual o intermediário de duas reações é
C
O
C OPO
CH2
O
2
3
Fosfoenolpiruvato Glifosato
C
O
CH
2
O
2
3HN CH OPO
Fosfoenolpiruvato
Eritrose-4-fosfato
C
O
C OPO
CH2
O
2
3
CH OPO2
H C OH
2
3
C
O H
H C OH
Fosfoenolpiruvato
C
O
C O
CH2
O
CH OPO2
H C OH
2
3
H C OH
HO C H
Pi
Pi
CH2
OH
O C COO
COO
Corismato
+
C C C CH OPO
C
HN
H
2
2
3
OH
H
OH
H N
H
Serina H O2
N
H
CH2
H N C H3
+
COO
Gliceraldeído
3-fosfato
Indol-3-glicerol-fosfato Indol Triptofano

diretamente transferido de um sítio ativo a outro, é chamado canalização e
aumenta a velocidade do processo ao evitar a perda de intermediários.
Somente um dos aminoácidos−padrão não é sintetizado a partir das
principais vias que metabolizam os carboidratos: a histidina, para o qual, o
ATP fornece um nitrogênio e um átomo de carbono. O glutamato e a
glutamina doam os outros dois átomos de nitrogênio e os restantes cinco
carbonos são derivados do 5−fosforribosil−pirofosfato (PRPP).
N
N
N
NH2
N
HC
Ribose-trifosfato
H
HO
O
H
H
OH
O P O CH3
2
2
C
CC
C
H
O P P
ATP
+
Glutamina
Glutamato
COO
H N C H3
+
CH2
C
HN
HC N
CH
Histidina
5-Fosforribosil
pirofosfato (PRPP)
O 5−fosforribosil−pirofosfato é também fonte de ribose para os
nucleotídeos. Isso sugere que a histidina talvez tenha sido um dos
primeiros aminoácidos sintetizados nos primórdios da vida realizando a
transição de um metabolismo todo−RNA para um RNA−e−proteína.
11.4 Biossíntese de nucleotídeos
Os nucleotídeos são sintetizados a partir de precursores metabólicos:
aminoácidos, ribose−5−fosfato, CO2 e NH3 (via “de novo”) . O organismo
humano também recicla nucleotídeos a partir dos produtos de degradação
de ácidos nucléicos e de co-fatores nucleotídeos (via de recuperação).
Apesar do suprimento alimentar de nucleotídeos, as vias biossintéticas e de
recuperação são tão eficientes que não há necessidade de purinas e
pirimidinas da dieta. Nessa seção serão examinados algumas vias
biossintéticas dos nucleotídeos purínicos e pirimidínicos em mamíferos.
Os nucleotídeos de purina (AMP e GMP) são sintetizados a partir da
ribose−5−fosfato (produto da via pentose−fosfato) para formar
5−fosforribosil−pirofosfato (que é também precursor da histidina):

As subsequentes dez etapas da via requerem como substratos a
glutamina, a glicina, o aspartato, o bicarbonato além de grupos formil
(−HC=O) doados pelo tetraidrofolato. O produto é a inosina monofosfato
(IMP), um nucleotídeo cuja base é a purina hipoxantina:
O IMP é o substrato para duas vias curtas que produzem AMP e GMP.
Na síntese de AMP, um grupo amino do aspartato é transferido para a
purina; na síntese de GMP, o glutamato é a fonte do grupo amino. As
cinases então catalisam as reações de transferência de grupos fosforil para
converter os nucleosídeos monofosfatos em difosfatos e, a seguir, em
trifosfatos (ATP e GTP).
A Figura 11. 3 indica que a GTP participa da síntese de AMP, enquanto
o ATP participa na síntese de GMP. Altas concentrações de ATP, portanto,
promovem a produção de GMP, enquanto altas concentrações de GTP
promovem a produção de AMP. Essa relação recíproca é um mecanismo de
controle da produção dos nucleotídeos adenina e guanina. (Como a maioria
dos nucleotídeos destinam-se para a síntese de DNA e RNA, eles são
necessários em quantidades aproximadamente iguais). A via que produz
AMP e GMP é também regulada por retroinibição em vários pontos,
incluindo a primeira etapa, a produção de 5−fosforribosil−pirofosfato a
partir da ribose−5−fosfato, que é inibida tanto pelo ADP como pelo GDP.
Inosina-monofosfato (IMP)
H
OH
O
H
H
OH
O P O CH23
2
H
OH
O
H
H
OH
O P O CH23
2
H
N
N
NHN
CH
C
CHC
C
O
GlutaminaFormil-tetraidrofolato
Aspartato
Glicina
Formil-tetraidrofolato
HCO3
Ribose-5-fosfato
ATP AMP
H
OH
O
H
H
H
OH
O P O CH23
2
OH
H
OH
O
H
H
H
OH
O P O CH23
2
OH O P O P O
O O
O O
H
OH
O
H
H
H
OH
O P O CH23
2
Ribose-fosfato
pirofosfocinase
5-Fosforibosil-pirofosfato

Figura 11.3
Síntese de AMP e GMP a partir do IMP.
Em contraste aos nucleotídeos das purinas, os nucleotídeos das
pirimidinas são sintetizados como uma base subsequentemente ligada ao
5−fosforribosil−pirofosfato para formar o nucleotídeo. A via de seis etapas
que forma a uridina monofosfato (UMP) necessita glutamina, aspartato e
bicarbonato.
NAD + H O2
+
NADH + H+
Aspartato + GTP
GDP + Pi
OOC CH CH COO
N
N
NN
O
H
Ribose-5-fosfato
2
N
N
NN
NH
Ribose-5-fosfato
Adenilosuccinato
Fumarato
N
N
NN
NH2
Ribose-5-fosfato
N
N
NN
O
H
O
Ribose-5-fosfato
H
Xantosina-monofosfato (XMP)
Glutamina + ATP + H O2
Glutamato + AMP + PPi
N
N
NN
O
H
Ribose-5-fosfato
H
H N2
IMP
GMPAMP

A UMP é fosforilada para formar UDP e, a seguir, UTP. A
CTP−sintetase catalisa a aminação de UTP a CTP, usando a glutamina
como doador do grupo amino:
A via de síntese de UMP em mamíferos é regulada principalmente por
retroinibição pelo UMP, UDP e UTP. O ATP ativa a enzima que catalisa a
primeira etapa. Isso ajuda a equlibrar a produção de nucleotídeos purínicos
e pirimidínicos.
Até aqui, foram descritas as sínteses de ATP, GTP, CTP e UTP, que
são substratos para a síntese de RNA. O DNA é sintetizado a partir de
desoxinucleotídeos, que são formados pela redução de ribonucleosídeos
difosfatoatos ADP, GDP, CDP e UDP seguido de pela fosforilação de
desoxinucleosídeo difosfatos a desoxinucleosídeo trifosfatos.
A dUTP não é usada para a síntese de DNA. Em vez disso, ela é
rapidamente convertida em nucleotídeos timina (que previne a
incorporação acidental de uracila ao DNA). Inicialmente, a dUTP é
hidrolizada a dUMP. A seguir, a timidilato−sintase adiciona um grupo
metila ao dUMP para produzir dTMP, usando o metileno−tetraidrofolato
como doador de metila.
H
OH
O
H
H
H
OH
P P P H C2
N
UTP
N
O
H
Glutamina
ATP + H O
Glutamato
ADP + Pi
CTP-sintetase
2
H
OH
O
H
H
H
OH
P P P H C2
N
CTP
NH2
N
O
O
Monofosfato de uridina (UMP)
H
OH
O
H
H
H
OH
2
N
HN
C
O
C
O
CH
CH
O P O CH3
2
Aspartato
Glutamina
HCO3

A reação da serina−hidroximetiltransferase é a principal fonte de
metileno−tetraidrofolato.
Na conversão do grupo metileno (−CH2−) a grupo metila (−CH3), a
timidilato−sintase converte o co-fator tetraidrofolato à diidrofolato. A
enzima diidrofolato−redutase dependente de NADH regenera, então, o
co−fator tetraidrofolato reduzido. Finalmente, dTMP é fosforilado para
produzir dTTP, substrato para a DNA−polimerase. (Ver Capítulo 13).
Como as células cancerígenas sofrem rápida divisão celular, as enzimas
da síntese de nucleotídeos, incluindo a timidilato−sintase e a
diidrofolato−redutase, são altamente ativas. Os compostos que inibem essas
reações são usados na terapia contra o câncer. Por exemplo, o análogo da
dUMP, a 5−fluorodesoxiuridilato, inativa a timidilato−sintase.
“Antifolatos” como o metotrexato são inibidores competitivos da
diidrofolato−redutase pois competem com o diidrofolato pela ligação com a
enzima. Em presença de metotrexato, a célula cancerígena não regenera o
tetraidrofolato necessário para a produção de dTMP e a célula morre.
Muitas células não cancerígenas, cujo crescimento é mais lento, não são tão
sensíveis ao efeito do medicamento.
11.5 Catabolismo dos aminoácidos
Após remoção dos grupos amino, as cadeias carbonadas dos
aminoácidos são degradadas para atender 10-15% das necessidades
energéticas do organismo. Segundo a natureza dos produtos de degradação,
os aminoácidos podem ser classificados como glicogênicos (precursores da
gliconeogênese) e/ou cetogênicos (produtores de corpos cetônicos)(Tabela
11.3).
N
N
O
H
O
H
H
N
N
H N
O
2
H
H
N
CH2
H C2
CH2N
N
R
5
10
H
N N, -Metileno-tetraidrofolato5 10
Timidilato
sintase
N
N
O
H
O
H
Desoxirribose P
N
N
H N
O
2
H
H
N
CH2
CH2N
HN R
CH3
Desoxirribose P
dUMP
dTMP
Diidrofolato
+
+

Tabela 11.3 – Aminoácidos glicogênicos e cetogênicos
Glicogênicos Cetogênicos Glicogênicos e cetogênicos
Alanina Leucina Fenilalanina
Arginina Lisina Isoleucina
Asparagina Tirosina
Aspartato Treonina
Glicina Triptofano
Cisteína
Glutamato
Glutamina
Histidina
Metionina
Prolina
Serina
Valina
Ao examinar a Tabela 11.3 verifica-se que todos os aminoácidos,
exceto leucina e lisina, no mínimo parcialmente, são glicogênicos; todos os
aminoácidos não essenciais são glicogênicos; e os esqueletos dos
aminoácidos aromáticos são tanto glicogênicos como cetogênicos.
Três aminoácidos são convertidos a substratos glicogênicos por
transaminação (o reverso de suas reações biossintéticas): alanina a
piruvato, aspartato a oxaloacetato, e glutamato a α−cetoglutarato. O
glutamato pode também ser desaminado em reação de oxidação (ver Seção
11.1.B). A asparagina forma aspartato por desaminação, que produz, então,
oxaloacetato por transaminação.
Do mesmo modo, a glutamina é desaminada a glutamato e, então,
desaminada a α−cetoglutarato. A serina é convertida em piruvato por
desaminação:
Asparagina
COO
CH
H N C H
2
C
3
O NH2
NH4
+
H O2
Asparaginase
Asparato
Transaminase
Glutamato
-Cetoglutarato
Oxaloacetato
COO
CH
H N C H
2
C
3
O O
COO
CH
O C
2
C
O O
+ +
NHCOO
H N C H
CH OH2
3
+
Serina Piruvato
COO
CH
C O
3
4
+

Notar que nessa reação e na conversão da asparagina e glutamina em
suas contrapartes ácidas, o grupo amino é liberado como +
4NH em lugar de
ser transferido para outro composto.
A prolina e a arginina (sintetizadas a partir do glutamato), e a histidina
são catabolizadas a glutamato, posteriormente convertido a
α−cetoglutarato. A “família” de aminoácidos do glutamato, que inclui
glutamina, prolina, arginina e histidina, constitui ao redor de 25% dos
aminoácidos da dieta, de tal modo, que suas contribuições potenciais para o
metabolismo energético é significante.
A cisteína é convertida a piruvato por um processo que libera amônia
também como enxôfre:
Os produtos das reações anteriores, piruvato, oxaloacetato e
α−cetoglutarato são todos precursores glicogênicos.
Piruvato
Oxaloacetato
CO2
-Cetoglutaratoα
Piruvato
carboxilase
Ciclo do
ácido
cítrico
Gliconeogênese
Glicose
A treonina é glicogênica e cetogênica por formar acetil-CoA e glicina:
A acetil−CoA é precursora de corpos cetônicos e a glicina é
potencialmente glicogênica − se for inicialmente convertida a serina pela
ação da serina-hidroximetiltransferase. A principal rota de desdobramento
da glicina, entretanto, é catalisada por um complexo multiproteína
conhecido como sistema de clivagem da glicina
NAD+
NADH + H+
3H N C H
C O
COO
CH3
+
3H N C H
CH OH
COO
CH3
+ CoASH
3H N C H
H
COO
+
Glicina
+
O
3H C C SCoA
Acetil-CoA
Treonina -Amino -Cetobutirato
Cisteína
COO
H N C H
CH SH2
3
+
Piruvato
COO
CH
C O
3
H S2
NH4
+
H O2

As vias de degradação dos demais aminoácidos são mais complexas.
Por exemplo, os aminoácidos com cadeias laterais ramificadas – valina,
leucina e isoleucina – sofrem transaminação para as suas formas
α−cetoácidos e são, então, ligados à coenzima A, em reação de
descarboxilação oxidativa. Essa etapa é catalisada pelo complexo da
desidrogenase do α−cetoácido de cadeia ramificada, um complexo
multienzimático semelhante ao complexo da piruvato−desidrogenase e que
compartilha as mesmas subunidades. A deficiência genética da
desidrogenase do α−cetoácido de cadeia ramificada causa a doença da
urina do xarope de bordo, na qual altas concentrações de α−cetoácidos de
cadeia ramificada são excretadas na urina que apresenta um odor
característico. A doença é fatal caso não seja tratada com uma dieta de
baixo teor de aminoácidos de cadeia ramificada.
As reações iniciais do catabolismo da valina são mostrados na figura
11. . Etapas subsequentes fornecem o intermediário do ciclo do ácido
cítrico, a succinil−CoA. A isoleucina e degrada por uma via similar que
produz succinil−CoA e acetil−CoA. A degradação da leucina fornece
acetil−CoA e o acetoacetato (corpo cetônico). A degradação da lisina segue
uma via diferente, mas, também forma acetil−CoA e acetoacetato. A
degradação da metionina produz succinil−CoA.
NAD+
NADH
3H N CH + Tetraidrofolato Metileno-tetraidrofolato + NH + CO
COO
+
Sistema de
clivagem da
glicina
2 4 2
+

Figura 11.2
Etapas iniciais da degradação da valina.
Finalmente, a clivagem de aminoácidos aromáticos − fenilalanina,
tirosina e triptofano − fornece o acetoacetato (corpo cetônico) e também
um composto glicogênico (alanina ou fumarato). A primeira reação na via
de degradação da fenilalanina é sua hidroxilação a tirosina (porisso a
tirosina é não−essencial). A reação usa a tetraidrobiopepterina (derivado da
pterina) como co-fator. A tetraidrobiopepterina é oxidada a
diidrobiopeptirina em reação da fenilalanina−hidroxilase. O co−fator é
subsequentemente reduzido à forma tetraidro por uma enzima
NADH−dependente.
3H C CH CH COO
NH3
+
CH3
Valina
3H C CH C COO
CH3
O
Glutamato
-Cetoglutarato
NAD + CoASH+
NADH + CO2
3H C CH C SCoA
CH3
O
2QH
Q
3H C CH C SCoA
CH3
O

O resumo das interrelações entre o ciclo do ácido cítrico e o
metabolismo dos aminoácidos é mostrada na Figura 11.3.
Tetraidrobiopterina
N
N
HN
O
H
N
C C CH3N
H
H
H
H
HO OH
H H
N
N
H N
O
2
H
N
H
C C CH3N
5
H
8
7
6
H
H
H
HO OH
H H
Diidrobiopterina
HH
HH
H CH C COO2
H
NH3
+
Fenilalanina
+
O2
Tirosina
HH
HH
HO CH C COO2
H
NH3
+
+
H O2
Fenilalanina
hidroxilase

Ciclo do
ácido cítrico
Citrato
Isocitrato
-CetoglutaratoSuccinil-CoA
Fumarato
Oxaloacetato
Arginina
Glutamato
Glutamina
Histidina
Prolina
Isoleucina
Metionina
Valina
Asparato
Fenilalanina
Tirosina
Asparagina
Aspartato
Glicose
Piruvato
CO
CO
CO
2
2
2
Acetil-CoA
Isoleucina
Leucina
Lisina
Treonina
Alanina
Cisteína
Glicina
Serina
Treonina
Triptofano
Acetoacetato
Leucina
Lisina
Fenilalanina
Triptofano
Tirosina
Figura 11.3
Resumo das interrelações entre o ciclo do ácido cítrico e o metabolismo dos
aminoácidos. Conversão dos esqueletos carbonados dos aminoácidos em
piruvato, acetoacetato, acetil-CoA, ou intermediários do ciclo do ácido cítrico para
posterior catabolismo.
11.6 Excreção do nitrogênio
Os aminoácidos são degradados no fígado e, em menor grau, no rim. A
contribuição do músculo esquelético é mínima. No fígado, os grupos amino
dos aminoácidos são removidos em processo envolvendo principalmente
dois tipos de reações: transaminação e desaminação oxidativa.
A. Transaminação
A reação de transaminação transfere reversivelmente o grupo α−amino
de um aminoácido para o α−cetoglutarado em presença de transaminases
(amino−transferases)(ver Seção 11.2)
α−Aminoácido + α−cetoglutarato α−cetoácido + glutamato
A treonina, arginina, lisina e prolina não sofrem transaminação com o
α−cetoglutarato.

B. Desaminação oxidativa
A glutamato−desidrogenase catalisa a remoção do grupo amino como
amônia livre a partir do glutamato proveniente, sobretudo, das reações de
transaminação (ver Seção 11.1.B). No fígado, a enzima está localizada na
matriz mitocondrial e emprega o NAD+ ou NADP+ como aceptor de
elétrons:
Glutamato + NAD+
+ H2O ⎯⎯⎯⎯⎯ →← asedesidrogen
Glutamato
α−Cetoglutarato + NADH + H+
+ NH3
C. L-Aminoácido-oxidases
Pequenas quantidades de amônia são formadas pela ação das
L−aminoácido−oxidases encontradas nos peroxissomas do fígado e rins. O
aceptor imediato de elétrons é a FMN (flavina mononucleotídeo). A
FMNH2 produzida reage com o O2 para formar H2O2.
D. Serina e treonina-desidratases
A serina e a treonina não são substratos para as reações de
transaminações. Seus grupos amino são removidos por enzimas hepáticas
que necessitam piridoxal−fosfato: a serina−desidratase e
treonina−desidratase. O esqueleto carbonado produzidos nas reações são o
piruvato e o α−cetoglutarato, respectivamente.
E. Urease bacteriana
Cerca de 25% da amônia hepática é produzida pela ação de ureases
bacterianas intestinais sobre a uréia que difunde do sangue para o lúmen
intestinal. A amônia liberada volta ao fígado pela circulação.
11.7 Destino da amônia
Os íons amônio formados por transaminação/desaminação oxidativa e
por outras reações, são exportados dos tecidos extra−hepáticos para o
fígado para formar uréia, um composto não−tóxico.
Os efeitos tóxicos dos íons amônio são provocados pela adição dos
mesmos ao α−cetoglutarato para formar glutamato (ação reversa da
glutamato−desidrogenase). Como o desvio do α−cetoglutarato interfere no
funcionamento normal do ciclo do ácido cítrico, ocorre a diminuição da
oxidação de acetil−CoA derivado da glicose, o principal combustível para
o cérebro e, assim, elevar a formação de corpos cetônicos. Como o α
−cetoglutarato é também intermediário em outros processos sua depleção
altera o metabolismo normal da célula. Outros fatores pouco entendidos
também atuam para a toxicidade de íons amônio para o cérebro.
São dois os mecanismos para o transporte de íons amônio dos tecidos
extra−hepáticos para o fígado ou para os rins: a síntese de glutamina e o
ciclo glicose−alanina.

A. Incorporação da amônia ao glutamato para formar glutamina
A maioria dos tecidos sintetizam glutamina a partir do glutamato como
forma de armazenamento temporário não−tóxico e transporte de amônia
para o fígado ou para os rins. (Ver Seção 11.1.B).
Glutamato + ATP → [γ-glutamil−fosfato] + +
4NH → glutamina + Pi
A glutamina é hidrolizada no fígado e rim, a glutamato e amônia pela
ação da enzima glutaminase:
Glutamina + H2O
Glutaminase
⎯ →⎯⎯⎯ Glutamato + NH3
No fígado, a amônia liberada pela hidrólise é utilizada na síntese de
uréia. No rim, além da atividade da glutaminase para a produção de
glutamato, ocorre a desaminação oxidativa desse último a α−cetoglutarato
pela ação da glutamato−desidrogenase. Portanto, duas moléculas de
amônia são excretadas na urina para cada glutamina transformada em α-
cetoglutarato.
Glutamina ⎯⎯⎯⎯ →⎯
eGlutaminas
glutamato ⎯⎯⎯⎯⎯ →⎯
asedesidrogen
Glutamato
α−cetoglutarato + 2NH3
Nos túbulos renais, a amônia é protonada a íons amônio (NH4
+
), que
atuam na neutralização de ácidos metabólicos na urina.
A glutamina também exerce importante papel na biossíntese de
hexosaminas, aminoácidos, purinas e pirimidinas.
B. Ciclo glicose−alanina
Os íons amônio produzidos pela degradação de aminoácidos nos
músculos e outros tecidos, são também transportados ao fígado como
alanina utilizando o ciclo da glicose−alanina. No músculo, os íons amônio
reagem com o α−cetoglutarato para formar glutamato pela ação da
glutamato−desidrogenase. O glutamato transfere o seu grupo α−amino ao
piruvato em presença da alanina−transaminase:
Glutamato + piruvato ⎯⎯⎯⎯⎯ →←
setransamina
Alanina
α−cetoglutarato + alanina
A alanina produzida é transportada pelo sangue ao fígado onde
transfere o seu grupo amino para o α−cetoglutarato por meio da
alanina−transaminase, formando glutamato que, por desaminação, produz
α−cetoglutarato e amônia pela glutamato−desidrogenase.
11.8 Síntese da uréia (Ciclo da Uréia)
A uréia – um composto neutro, não−tóxico, altamente solúvel e
excretado pela urina – é o principal produto de excreção do excesso de
nitrogênio proveniente do catabolismo dos aminoácidos no homem. Com
ingestão normal de proteínas, a uréia constitui 80% dos produtos
nitrogenados da urina. São ainda encontrados na urina: ácido úrico,
creatinina, íons amônio e outras formas menores de compostos
nitrogenados. A síntese de uréia é realizada no fígado por cinco reações
(duas mitocondriais e três citosólicas) do ciclo da uréia (ciclo de
Krebs−Henseleit) (Figura 11.4).

α
Ornitina Citrulina
Arginina Argininosuccinato
Aspartato
Oxaloacetato
Malato
Fumarato
Fumarase
Aminoácido
-Cetoácido
Transaminase
Carbamoil
fosfato
HCONH 33-CetoglutaratoαAminoácido
α-Cetoácido Glutamato
Glutamato
desidrogenase
Transaminase Carbamoil-fosfato-sintetase
Uréia
Figura 11.4
Ciclo da uréia. As enzimas que participam do ciclo são: (1) carbamoil-fosfato-sintetase, (2) ornitina-
transcarbamoilase, (3) arginino-succinato-sintetase, (4) arginino-succinase e (5) arginase. As enzimas (1) e
(2) são mitocondriais e as enzimas 3-5 são citosólicas.
1. Carbamoil−fosfato−sintetase I. O substrato inicial para o ciclo da
uréia é uma molécula “ativada” produzida pela condensação do bicarbonato
e íon amônio, catalisada pela carbamoil−fosfato−sintetase I. A reação
consome dois ATP e produz carbamoil−fosfato (composto de alta energia).
Tecnicamente a reação não faz parte do ciclo da uréia.

Figura 11.5
Síntese da carbamoil−fosfato catalisada pela carbamoil−fosfato−sintetase I. O
ATP ativa o fosfato para formar a carbonila−fosfato. O NH3 reage com a
carbamila−fosfato para formar carbamato. A incorporação de um segundo grupo
fosforil forma carbamoil-fosfato e ADP.
A enzima requer N−acetilglutamato como efetor alostérico positivo.
Essa é a etapa limitante de síntese da uréia.
2. Ornitina−transcarbamoilase. A reação seguinte do ciclo é a
transferência do grupo carbamoil (NH2−CO−), oriundo do
carbamoil−fosfato, para a ornitina para produzir citrulina. A reação ocorre
na matriz mitocondrial pela ação da ornitina−transcarbamoilase. A
citrulina é transferida para o citosol por uma proteína transportadora
específica. As reações seguintes do ciclo da uréia tem lugar no citosol.
HO C O + O P O
O O
ADP
O
ADP
HO C OPO + :NH
O
2
3 3
Carbonil
fosfato
Pi
O C NH2
O
Carbamato
ATP
ADP
O P O C NH2
2
3
O
Carbamoil-fosfato

3. Arginino−succinato−sintetase. O segundo grupo amino da uréia é
doado pelo aspartato. A condensação necessita ATP e é catalisada pela
arginino−succinato−sintetase. Os produtos formados são:
arginino−succinato, AMP e pirofosfato (PPi). O pirofosfato (forte inibidor
da reação) é clivado a ortofosfato (2Pi). A clivagem supre energia adicional
para as reações sintéticas, além de remover o efeito inibidor do pirofosfato.
A principal fonte de aspartato é a transaminação do glutamato com o
oxaloacetato:
Oxaloacetato + glutamato aspartato + α−cetoglutarato
4. Arginino−succinase. A arginino−succinase
(argininossuccinato−liase) catalisa a clivagem do arginino-succinato para
fornecer arginina e fumarato. A síntese do fumarato une o ciclo da uréia ao
ciclo da ácido cítrico. O fumarato também pode ser reconvertido a
aspartato.
Aspartato
+
Citrulina
H N C NH
CH2
CH2
CH2
H C NH
COO
+
3
2
O
H N C H3
+
COO
CH2
COO
ATP AMP + PPi
H N C N
CH2
CH2
CH2
H C NH
COO
+
3
C H
COO
CH2
COO
2
+
H
Argininossuccinato
Carbamoil-fosfato
CH2
CH2
CH2
H C NH
COO
+
3
H N3
+
CitrulinaOrnitina
H N C O P O2
O O
O
H N C NH
CH2
CH2
CH2
H C NH
COO
+
3
2
O
+ Pi

5. Arginase. Somente o fígado possui a enzima arginase que catalisa a
hidrólise da arginina produzindo uréia e regenerando a ornitina. A ornitina
retorna para a mitocôndria onde condensa novamente com a
carbamoil−fosfato para reiniciar o ciclo. Através da corrente sangüínea, a
uréia é transportada até os rins, onde é excretada pela urina.
A uréia é proveniente, portanto, de dois grupos amino, um da amônia e
outro do aspartato, e de um carbono fornecido pelo bicarbonato.
A síntese de uma molécula de uréia requer quatro ATP. Dois para a
síntese de carbamoil−fosfato e um para a formação de argininossuccinato;
esse último é clivado em AMP e pirofosfato (PPi) cuja hidrólise fornece
dois ortofosfatos (2Pi). Duas moléculas de ATP são consumidas para gerar
o ATP a partir de AMP. Mesmo assim, o ciclo da uréia rende 2 ATP por
meio de reações auxiliares. A reação da glutamato−desidrogenase produz
NADH (ou NADPH), e a conversão de malato a oxaloacetato pela
malato−desidrogenase também gera NADH (equivalente a 3 ATP). Total
das duas reações: 6 ATP. O rendimento líquido é 2 ATP por molécula de
uréia.
A. Regulação do ciclo da uréia
A carbamoil−fosfato−sintetase I mitocondrial é ativada alostericamente
pelo N−acetilglutamato, produzido a partir do glutamato e de acetil−CoA
em reação catalisada pela N−acetilglutamato−sintase, que é ativada pela
arginina.
Aspartato
+
Citrulina
H N C NH
CH2
CH2
CH2
H C NH
COO
+
3
2
O
H N C H3
+
COO
CH2
COO
ATP AMP + PPi
H N C N
CH2
CH2
CH2
H C NH
COO
+
3
C H
COO
CH2
COO
2
+
H
Argininossuccinato
Arginina
H O2
H N C NH2 2
+
O
NH
CH2
CH2
CH2
H C NH
COO
+
3
H N C NH2 2
+
NH
CH2
CH2
CH2
H C NH
COO
+
3
3
+
UréiaOrnitina

Quando a quebra metabólica de aminoácidos aumenta, a concentração
do glutamato eleva e estimula a síntese do N−acetilglutamato que, por sua
vez, aumenta a síntese de uréia.
As demais enzimas do ciclo da uréia são reguladas pela concentração
de seus substratos. São modificadas por variações no consumo de proteínas
na dieta. Após alguns dias de alterações no conteúdo protéico da dieta,
ocorrem mudanças na produção de uréia. Vários hormônios (exemplo,
glucagon e glicocorticóides) estão envolvidos no controle da velocidade de
síntese das enzimas do ciclo.
11.9 Excreção de nitrogênio como ácido úrico
A uréia é uma substância relativamente não-tóxica e facilmente
transportada pelo sangue até os rins. Entretanto, a molécula de uréia
necessita grandes quantidades de água para a sua excreção eficiente.
Vertebrados voadores como os pássaros e para os réptéis adaptados a
ambientes áridos, isso é um sério problema. Esses organismos produzem
ácido úrico como produto de excreção de nitrogênio que é eliminado como
uma mistura semifluída.
O ácido úrico é também o produto final da degradação de purina
nucleotídeos em primatas e alguns outros animais. As moléculas de
nucleotídeos são desdobradas por nucleotidases (que removem os grupos
fosfato para formar nucleosídeos) e desaminases (que removem os
substituintes amínicos do anel). A reação final do catabolismo de purina
nucleotídeos é catalisada pela xantina−oxidase para formar ácido úrico:
Ácido úrico
O , H O2
Xantina-oxidase
N
H
N
H
HN
O
O
N
2 H O2 2
N
H
N
H
NHN
O
HO
O
Xantina
N
H
N
H
NHN
O
H
O
O
Ácido úrico
Glutamato
CH + H C C SCoA
COO
H N C H
2
3
+
CH2
COO
O
3
HSCoA H C C NH C H
N-Acetilglutamato
3
O COO
2
CH2
COO
CH
Acetil-CoA

O excesso de ácido úrico, que é pouco solúvel em meio aquoso, resulta
em deposição de cristais de urato de sódio na forma de cálculos renais. O
ácido úrico também pode precipitar nas articulações, principalmente, dos
joelhos e dos dedos do pé, em uma condição clínica dolorosa conhecida
como gota. O excesso de ácido úrico pode ser tratado por um análogo de
purina que bloqueia a atividade da xantina−oxidase. Os intermediários
anteriores do catabolismo da purinas, que são mais solúveis que o ácido
úrico, são então excretados.
As pirimidinas nucleotídeos, de modo semelhante as purinas, sofrem
desaminação e remoção dos grupos fosfato e ribose. Os produtos das
reações são muitas vezes utilizados nas vias de recuperação para regenerar
nucleotídeos. Entretanto, de modo diferente das purinas, as bases
pirimidínicas (uracila e timina) podem ser ainda degradas como derivados
de CoA. Consequentemente, o catabolismo das pirimidinas celulares
contribui levemente para o pool de combustíveis metabólicos, enquanto o
excesso de purinas são excretados.
11.10 Moléculas derivadas dos aminoácidos
Os aminoácidos além de servirem como blocos construtores de
polipeptídeos, são precursores de muitas biomoléculas de grande
importância fisiológica. Na discussão seguinte, serão abordadas a síntese
de várias dessas moléculas, por exemplo, neurotransmissores, glutationa,
alcalóides, porfirinas e nucleotídeos. Como esses processos envolvem a
transferência de carbonos, a seção inicia com uma descrição do
metabolismo de monocarbonos.
Grupamentos de uma unidade de carbono (em vários estágios de
oxidação) são transferidos de um composto para outro em fases importantes
do metabolismo como a síntese e destoxificação. Dois são os carreadores
de compostos monocarbônicos: a S-adenosilmetionina e o tetraidrofolato.
A. S−adenosilmetionina (SAM)
A S−adenosilmetionina é doadora de grupos metila (−CH3) de um
intermediário a outro em várias reações de síntese.
É obtido pela transferência do grupo adenosil do ATP para a
metionina:
Metionina + ATP → S−Adenosilmetionina + Pi + PPi
S-Adenosinilmetionina
H
OH
O
H
H
H
OH
2
N
N
N
NH2
N
S CH
CH3
H C2
H C2
H N CH3
COO
+
+

O grupo sulfônio da S−adenosilmetionina reage com aceptores
nucleófilos e doa grupos metila para as reações de síntese. Por exemplo, a
conversão do hormônio noradrenalina em adrenalina:
A S-adenosilmetionina atua como doador de metila em reações de
metilação de fosfolipídeos, proteínas, DNA e RNA (Tabela 11.4).
Tabela 11.4 − Transferência de grupos metila a partir da
S-adenosilmetionina.
Aceptor metílico Produto metilado
Ácido guanidinoacético Creatina
Fosfatidiletanolamina (3 metilas) Fosfatidilcolina
Nicotinamida N−Metilnicotinamida
Noradrenalina Adrenalina
Carnosina Anserina
Ácido γ−aminobutírico (GABA) Carnitina
RNA de transferência e ribossômico RNA metilado
DNA DNA metilado
B. Tetraidrofolato (THF)
O tetraidrofolato (THF) co−fator derivado do folato, atua como um
carregador de unidades de um carbono (C1) em várias reações do
metabolismo dos aminoácidos e dos nucleotídeos. Os mamíferos não
sintetizam folato (a forma oxidada do tetraidrofolato) e devem obtê-lo a
partir de alimentos. As exigências por folato aumenta durante as primeiras
semanas de gravidez, quando o sistema nervoso fetal começa a se
desenvolver. Suprimentos de folato parecem prevenir certos defeitos do
tubo neural como a spina bífida, na qual o cordão espinhal permanece
exposto.
Noradrenalina
2 3HO
HO
CH CH NH
+
OH
Adrenalina
2 2HO
HO
CH CH NH CH
+
OH
3

Figura 11.2
Tetraidrofolato (THF). (a) O co−fator consiste de um derivado da pterina, um
resíduo de p−aminobenzoato e mais de seis resóduos de glutamato. É a forma
reduzida da vitamina folato. Os quatro átomos de H da forma tetraidro estão
sombreados. (b) Na conversão da serina em glicina, um grupo metileno
(sombreado) liga-se ao N5 e N10 do tetraidrofolato. O tetraidrofolato pode carregar
unidades de um carbono de diferentes estados de oxidação. Por exemplo, um
grupo metila ligado ao N5 e um grupo formil (−HCO) ligado ao N5 ou N10.
O tetraidrofolato aceita unidades de um carbono de vários aminoácidos
ou de seus metabólitos. Um exemplo proeminente é a remoção do grupo
hidroximetil da serina com a consequente formação de glicina. Além da
serina, outros intermediários doam unidades de um carbono ao
tetraidrofolato (Tabela 11.5).
N
HN
H N
O
2
N
H
CH NN
H
H
H
H
2 C N CH CH CH C OH2 2
O H COO O
n
H
2-Amino-4-oxo
6-metilpterina
(a)
p-Aminobenzoato Glutamatos
(n=1-6)
N
HN
H N
O
2
N
CHN
5
H
H
H
H
2
(b)
H C N R2
10
N N, -Metilenotetraidrofolato5 10

Tabela 11.5 − Doadores de unidades de um carbono (C1) ao tetraidrofolato (THF)
Doador Mecanismo
Serina Conversão em glicina com transferência de metileno
Formaldeído Combinação direta
Metionina Oxidação da metila; transferida como −HC=O
Colina Conversão em betaína; os grupos metila são oxidados e
transferidos
Sarcosina Oxidação da metila; transferida como H2C=O
Glicina Oxidação a formato, que é transferido
Ácido δ−aminolevulínico Oxidação a formato, que é transferido
Triptofano Oxidação à N-formilquinurinina, doador de formato
Formato Combinação direta
Histidina Formação do ácido formiminoglutâmico e transferência
de formimidoil (-HC=NH)
C. Neurotransmissores
Na terminação do nervo, a chegada do impulso nervoso influencia uma
segunda célula, como, por exemplo, outro nervo, músculo esquelético,
músculo involuntário ou glândula secretória. A junção entre o terminal do
nervo e a célula seguinte é a sinapse. A chegada do potencial de ação na
sinapse resulta na liberação de uma substância transmissora pela membrana
pré-sinaptica que atravessa a lacuna (espaço entre as células) e libera o
sinal ao se ligar a um receptor específico presente na membrana
pós−sináptica. Os neurotransmissores são moléculas pequenas que
comunicam os impulsos nervosos através da maioria das sinapses. Podem
ser excitatórios ou inibitórios.
Muitos neurotransmissores são aminoácidos ou aminas primárias ou
secundárias derivadas de aminoácidos (aminas biogênicas) (Tabela 11.6).
Nessa seção, será realizada uma breve discussão de aminoácidos, aminas
biogências e do óxido nítrico como neurotransmissores.
Tabela 11.6 − Neurotransmissores aminoácidos e aminas.
Aminoácidos Aminas
Glicina Noradrenalina (norepinefrina)
Glutamato Adrenalina (epinefrina)
Ácido γ-aminobutírico (GABA) Dopamina
Serotonina
Histamina
1. Glicina. É um neurotransmissor inibitório para a medula espinhal e
grande parte do tronco cerebral onde bloqueia o impulso que migra através
do cordão medular para os neurônios motores, para estimular o músculo
esquelético. As terminações nervosas pré-sinápticas apresentam uma
sistema de transporte para remover a glicina da sinapse. A inibição surge
pelo aumento da condutância de Cl. A estricnina provoca rigidez e
convulsões ao se ligar aos receptores de glicina. A apamina, a amida
polipeptídica de 18 resíduos de aminoácidos do veneno de abelha, funciona
de forma semelhante.

2. Glutamato. É o neurotransmissor excitatório amplamente distribuído
pelo sistema nervoso central. O glutamato é reciclado nos neurônios e nas
células gliais. A célula glial transforma o glutamato em glutamina, que
então difunde novamente para o neurônio. A glutaminase mitocondrial no
neurônio produz novamente o glutamato, para reutilização. A ativação de
seu receptor (N−metil−D−aspartato, NMDA) aumenta a sensibilidade aos
estímulos de outros neurotransmissores. O álcool inibe a influencia do
glutamato, e deste modo diminui a sensibilidade aos estímulos. O
glutamato monossódico é suspeito de contribuir para alguns distúrbios
psicológicos, apesar desse fato não ter sido ainda comprovado.
3. Ácido γ−aminobutírico (GABA). Atua como neurotransmissor
inibitório no sistema nervoso central. A ligação do GABA ao seu receptor
aumeta a permeabilidade da membrana da célula nervosa para os íons
cloretos (Os benzodiazepínicos, uma classe de tranqüilizantes que reduzem
a ansiedade e causam relaxamento muscular, provocam uma
potencialização da resposta ao GABA aumentando a condutância da
membrana para cloretos).
Existem dois tipos de receptores deste neurotransmissor: os GABA−α e
os GABA−β, dos quais apenas o primeiro é estimulado pelo álcool,
benzodiazepinas e barbituricos do que resulta uma diminuição de
sensibilidade para outros estímulos. O efeito ansiolítico do álcool é
mediado pelos receptores de GABA
4. Catecolaminas. Compreendem a dopamina, noradrenalina
(norepinefrina) e adrenalina (epinefrina), e são derivadas do aminoácido
tirosina. A dopamina e noradrenalina são usadas no cérebro como
neurotransmissores excitatórios. Fora do sistema nervoso, a noradrenalina e
a adrenalina são liberadas principalmente pela medula adrenal e pelo
sistema nervoso periférico. Como ambas regulam vários aspectos do
metabolismo, elas são consideradas hormônios.
A secreção da adrenalina em resposta ao estresse, trauma, exercício
vioroso ou hipoglicemia causa a rápida mobilização de energia
armazenada, ou seja, glicose do fígado e ácidos graxos do tecido adiposo.
A reação na qual a noradrenalina é metilada para formar adrenalina é
CH2
H N CH23
CH2
COO
-Aminobutirato
+
CH2
H N CH3
+
HO
OH
CH2
H N C H3
+
COO
OH
CH OH
HO
OH
+
HO
OH
CH3
HO
OH
Tirosina Dopamina Noradrenalina Adrenalina Catecol
2 H N CH3
+
2 H N CH3 2
CH OH

mediada pela enzima feniletanolamina−N−metiltransferase (PNMT). Apesar
da enzima ocorrer predominatemente nas células cromafínicas da medula
adrenal ela também é encontrada em certas porções do cérebro onde a
adrenalina funciona como um neurotransmissor. Evidências recentes
indicam que a adrenalina e a noradrenalina estão presentes em vários
outros órgãos (exemplo, fígado, coração e pulmão)
5. Serotonina (5-hidroxitriptamina). A serotonina é um poderoso
vasoconstritor e estimulador da contração do músculo liso e inibidor da
secreção gástrica. É encontrada no cérebro, intestino, mastócitos e
plaquetas, bem como em tumores carcinóides. No cérebro atua,
aparentemente, como um agente neuro-hormonal que aumenta a atividade
do nervo. A serotonina é sintetizada a partir do triptofano.
Baixos níveis de serotonina no cérebro estão relacionados depressão,
agressão e hiperatividade. O efeito antidepressivo de medicamentos como o
Prozac®
resulta de sua capacidade de aumentar os teores de serotonina pelo
bloqueio da reabsorção do neurotransmissor liberado.
A serotonina é tambem convertida em melatonina
(N-acetil-5-metoxitriptamina) formada na glândula pineal e retina. Sua
concentração é baixa durante o dia e alta no escuro. Como a melatonina
parece influenciar a síntese de alguns neurotransmissores que controlam o
ritmo circadiano, ela tem sido usada para o tratamento de distúrbios do
sono e do jet lag.
6. Histamina. É uma amina produzida por muitos tecidos do organismo,
e tem efeitos fisiológicos complexos. É um mediador de reações alérgicas e
inflamatórias, um estimulador da produção gástrica de ácido e um
neurotransmissor em diversas áreas do cérebro. A histamina é formada pela
descarboxilação da L−histidina em uma reação catalisada pela
histidina−descarboxilase, uma enzima que necessita de
piridoxal−5’−fosfato.
2
N
CH
H
2CHHN
3
CH O
O C
CH
3
Melatonina
2
N
CH
H
2CHH N3
HO
Serotonina
+
Triptofano
2
N
CH
H
C HH N3
+
COO

7. Óxido nítrico. É um gás altamente reativo. Além de muitas funções
do óxido nítrico (regulação da pressão sangüínea, inibição da coagulação
sangüínea e a destruição de células estranhas, lesadas ou cancerosas pelos
macrófagos) ele também atua como um neurotransmissor. O óxido nítrico
(NO) é sintetizado a partir da arginina pela óxido−nítrico−sintase (NOS)
sendo produzido em muitas áreas do cérebro onde sua função está
relacionada com a função neurotransmissora do glutamato. Quando o
glutamato é liberado de um neurônio e se liga a certas classes de receptores
do glutamato, um fluxo de Ca2+
através de uma membrana pós-sinaptica é
disparado, o que estimula a síntese da NOS. Uma vez sintetizado, o óxido
nítrico difunde de sua célula de origem para a célula pré-sináptica, onde os
sinais promovem a liberação do glutamato. Em outras palavras, o NO atua
como um neurotransmissor retrógado; ou seja, ele promove um ciclo no
qual o glutamato é liberado do neurônio pré-sinaptico e então liga-se e
promove potenciais de ação no neurônio pós−sináptico. Esse mecanismo
potenciador exerce importante papel no aprendizado e na formação da
memória, também como em outras funções no cérebro dos mamíferos.
D. Glutationa (GSH)
A glutationa (γ−glutamilcisteinilglicina) é tripeptídeo contendo uma
sulfidrila. A glutationa (GSH) está envolvida na síntese do DNA e RNA, de
certos eicosanóides e de outras biomoléculas. Em muitos desses processos,
a GSH atua como agente redutor que mantêm os grupos sulfidrilicos das
enzimas e outras moléculas no estado reduzido. Além de proteger as
células das radiações, da toxicidade do oxigênio e de toxinas ambientais, a
GSH também promove o transporte de aminoácidos (ciclo γ−glutamil).
A GSH contribui para a proteção das células das toxinas ambientais. A
GSH reage com várias moléculas estranhas para formar conjugados de
GSH. A ligação desses substratos com a GSH, prepara-os para a excreção,
que pode ser espontânea ou catalisada pelas glutationa−S−transferases
(também conhecidas como ligandinas). Antes da excreção urinária, os GSH
conjugados são geralmente convertidos em ácidos mercaptúricos.
E. Biossíntese do grupo heme
O heme, uma das moléculas mais complexas sintetizadas pelos
mamíferos, tem um anel porfirínico contendo ferro. O heme é um
componente estrutural da hemoglobina, mioglobina e citocromos. A via
biossintética do heme é predominante no fígado, medula óssea, células
intestinais e em reticulócitos (células precursores de eritrócitos contendo
núcleo).
Na primeira etapa da síntese, a glicina se condensa com succinil-CoA,
formando o δ-aminolevulinato (ALA) em reação é catalisada pela
ALA−sintase que necessita de fosfato de piridoxal. É a etapa comprometida
da biossíntese de porfirinas. A ALA−sintase, uma enzima mitocondrial, é
inibida alostericamente pela hemina um derivado do heme contendo Fe+
.
Na etapa seguinte da síntese da porfirina, duas moléculas de ALA
condensam para formar porfobilinogênio. A forfobilinogênio-sintase, que
catalisa essa reação, é uma enzima contendo zinco extremamente sensível
ao envenenamento por metais pesados. A uroporfirinogênio I sintase
catalisa a condensação simétrica de quatro moléculas de porfobilinogênio.
Quando quatro moléculas de CO2 são removidas, catalisada pela
uroporfirinogênio−descarboxilase, o coproporfirinogênio é sintetizado. A

reação é seguida pela remoção de duas moléculas de CO2 adicionais,
formando assim, o protoporfirinogênio IX. A oxidação do grupos metilenos
do anel porfirínico produz a protoporfirina IX, o precursor direto do heme.
A etapa final da síntese do heme é a inserção de Fe2+
, uma reação que
ocorre espontaneamente mas é acelerada pela ferroquelatase.
A protoporfirina IX é também um precursor das clorofilas. Após a
incorporação de magnésio (Mg2+
), a enzima Mg-protoporfirina-
metilesterase catalisa a adição do grupo metila para formar Mg-
protoporfirina IX monometilester. Essa molécula é então convertida em
clorofila em várias reações induzidas pela luz.
F. Degradação do grupo heme
Com cerca de 120 dias de vida, as células vermelhas “envelhecem”
pelo esgotamento das enzimas eritrocitárias. Como conseqüência, elas são
removidas da circulação pelos macrófagos do sistema retículo endotelial
(baço, fígado e medula óssea) onde são degradadas. O ferro retorna ao
plasma e se liga à tranferrina. A globina é degradada em seus aminoácidos
componentes para posterior reutilização. A protoporfirina IX forma
bilirrubina.
A protoporfirina é oxidada à biliverdina – um pigmento verde escuro –
e monóxido de carbono (CO) pela heme−oxigenase. A biliverdina é
convertida em bilirrubina, um tetrapirrol insolúvel em soluções aquosas,
em reação catalisada pela biliverdina−redutase.
Bilirrubina
A bilirrubina produzida no SRE é apolar e insolúvel em água e é
transportada para o fígado via corrente circulatória ligada de maneira firme
mas reversível, à albumina.
A bilirrubina isolada da albumina entra na célula hepática e é
conjugada pela ação da uridina−difosfato−glicuronil−transferase (UDPGT)
com o ácido UDP−glicurônico para produzir o monoglicuronídio e o
diglicuronídio da bilirrubina (bilirrubuna conjugada). O derivado
conjugado, solúvel em água, é excretado do hepatócito na forma de bile e
constitui um dos pigmentos biliares. Devido a solubilidade em água, a
bilirrubina conjugada é encontrada em pequenas quantidades tanto no
plasma como na urina. No intestino grosso, a bilirrubina é degrada por
enzimas bacterianas para formar urobilinogênio.
A icterícia é a pigmentação amarela da pele, esclerótica e membranas
mucosas, resultante do acúmulo de bilirrubina ou de seus conjugados.
Torna-se evidente clinicamente quando as concentrações plasmáticas de
bilirrubina total excedem 3,0 mg/dL, apesar de graus menores também
N
H
C
CH2
CHCH3CH2
CH2
COOH
N
HH
C
H
H
HH
N
COOH
CH2
CH2CH3H3C
O
CH
CH2
C
H
N

terem significância clínica. A icterícia é o sinal mais precoce de uma série
de patologias hepáticas e biliares.
Resumo
1. Os organismos fixadores de nitrogênio convertem N2 em NH3 em reação
consumidora de ATP. O nitrato e nitrito pode também serem reduzidos a NH3.
2. A amônia é incoporada à glutamina pela ação da glutamina−sintetase.
3. A transaminase emprega um grupo prostético PLP para catalisar a
intrconversão reversível de α−aminoácidos e α−cetoácidos.
4. Os organismos variam grandemente em suas capacidades de sintetizar
aminoácidos. Alguns organismos (exemplo, plantas e alguns microorganismos)
podem produzir todas as moléculas de aminoácidos necessárias a partir da
fixação de nitrogênio. Os animais podem produzir somente alguns
aminoácidos. Os aminoácidos não essenciais são produzidos a partir de
moléculas precursoras, enquanto os aminoácidos essenciais devem ser obtidos
da dieta.
5. Nas reações de transaminação (uma das mais proeminentes dos aminoácidos),
novos aminoácidos são produzidos quando os grupos α-amino são transferidos
do doador α−aminoácido ao receptor α-cetoácido. Como as reações de
transaminação são reversíveis, elas atuam tanto na síntese como na degradação.
Os íons amônio ou o nitrogênio amida da glutamina podem ser diretamente
incorporados aos aminoácidos e, eventualmente, a outros metabólitos.
6. Os aminoácidos são classificados como cetogênicos ou glicogênicos com base
no destino de seus esqueletos carbonados se são convertidos em ácidos
graxos/corpos cetônicos ou glicose. Alguns aminoácidos são classificados tanto
cetogênicos como glicogênicos porque seus esqueletos carbonados são
precursores de gorduras e de carboidratos.
7. Os aminoácidos são precursores de muitas biomoléculas fisiologicamente
importantes. Muitos dos processos que sintetizam essas moléculas envolvem a
transferência de grupos de monocarbonos (exemplo, metila, metileno, metenil e
formil). A S-adenosilmetionina (SAM) e tetraidrofolato (THF) são os mais
importantes carreadores de grupos de um carbono.
8. Muitas moléculas derivadas dos aminoácidos incluem vários
neurotransmissores (exemplo, GABA, catecolaminas, serotonina, histamina e
óxido nítrico) e hormônios (exemplo, ácido indol acético). A glutationa é um
exemplo de derivado de aminoácido que exerce um papel essencial nas células.
O heme é um exemplo de um sistema complexo de anéis heterocíclicos
derivado da glicina e da succinil−CoA. A via biossintética que produz heme é
similar a uma que produz as clorofilas nas plantas.
9. A porfirina do heme é degradada para formar o produto de excreção, a
bilirrubina em um processo de biotransformação que envolve as enzimas heme
oxigenase e biliverdina-redutase e UDP−glicurosiltransferase. Após sofre
reações de conjugação, a bilirrubina é excretada como um componente da bile.
Referências
BROSNAN, J. T. Glutamate, at the interface between amino acid and carbohydrate
metabolism. J. Nutr., 130:988S-990S, 2000.
HORTON, H. R., MORAN, L. A., OCHS, R. S., RAWN, J. D., SCRIMGEOUR, K. G.
Principles of biochemistry. 3 ed. Upper Saddle River: Prentice Hall, 2002. p. 531-
67.
McKEE, T., McKEE, J.R. Biochemistry: The molecular basis of live. 3 ed. New York
: McGraw-Hill, 2003. p. 449-529.

NELSON, D. L., COX, M. M. Lehninger: Princípios de bioquímica. 3 ed. São Paulo :
Sarvier, 2002. p. 639-81.
VOET, D., VOET, J.G., PRATT, C.W. Fundamentos de bioquímica. Porto Alegre :
Artmed, 2000. p. 562-610.
Informações adicionais
Metabolic Pathways of Biochemistry: http://www.gwu.edu/~mpb/
The Medical Biochemistry Page: http://www.indstate.edu/thcme/mwking/home.html
Biochemistry (Moskow): http://www.protein.bio.msu.su/biokhimiya/

VALTER T. MOTTA
BIOQUÍMICA BÁSICA
Regulação do
Metabolismo
Energético
Capítulo
12

343
12
Regulação do Metabolismo
Energético
Objetivos
1. Compreender as estratégias intracelulares de regulação do metabolismo.
2. Discutir o controle extracelular do metabolismo em relação a influência
hormonal sobre o metabolismo celular.
3. Discutir a produção e o papel dos segundos mensageiros na transdução de
sinal.
4. Discutir o mecanismo de ação dos hormônios hidrofóbicos.
A operação simultânea das vias anabólicas (síntese) e catabólicas
(degradação) seria improdutiva e impraticável termodinamicamente.
As diferenças existentes entre os processos sintéticos e degradativos
são coordenados para facilitar a regulação das vias. O controle do
metabolismo é realizado no interior da célula (controle intracelular)
ou por estímulos externos à célula (controle extracelular).
12.1 Controle intracelular do metabolismo
A regulação das vias metabólicas deve ser considerada em termos
das características de cada reação constituinte. A partir do
conhecimento das concentrações intracelulares dos substrato(s) e
produto(s) de uma reação, é possível calcular a relação
[produto]/[substrato] e comparar o resultado obtido com o valor
estabelecido para a constante de equilíbrio (K′eq) da reação.
Distinguem-se dois casos:
1. Reações próximas do equilíbrio. Os componentes da reação
quando presentes em concentrações próximas das concentrações de
equilíbrio, o valor da relação [produto]/[substrato] é próxima ao K′eq
e, portanto, valores de ∆G′ são próximos de zero. São reações não
sujeitas a regulação e rapidamente leva substratos e produtos à
concentração de equilíbrio. Tais reações são facilmente revertidas por
mudanças das concentrações de produtos e/ou reagentes. Mudanças
nas concentrações dos substratos produzem rápida e concomitante
alteração nos níveis do produto até que o equilíbrio seja atingido. Do

mesmo modo, quando os produtos estiverem em excesso, a reação
ocorrerá na direção inversa até que as concentrações de equilíbrio
sejam atingidas. A velocidade dessas reações é regulada pela
concentração relativa de substratos e de produtos.
2. Reações longe do equilíbrio. O valor da relação
[produto]/[substrato] apresenta-se distante da K′eq e a ∆G′ é grande
(reações irreversíveis). A atividade da enzima é baixa e não permite
que o equilíbrio seja atingido. Conseqüentemente, os substratos
acumulam-se enquanto a quantidade de produto é reduzida devido à
transformação do mesmo pela enzima seguinte na via. Mudanças na
atividade da enzima (ex.: interações alostéricas) podem modificar a
velocidade da reação e, assim, alterar o fluxo metabólico (velocidade
de escoamento) por meio de uma via que pode variar em resposta às
necessidades metabólicas do organismo. Muitas reações que operam
longe do equilíbrio são irreversíveis (exergônicas) e determinam a
velocidade de toda a via metabólica. São chamadas etapas limitantes
da reação. As enzimas que catalisam reações longe do equilíbrio
estão sujeitas a regulação por diversos mecanismos.
A. Mecanismos de controle de vias metabólicas
A conservação dos recursos celulares e o controle dos fluxos
metabólicos são realizados por diferentes estratégias. Baseiam-se em
mecanismos de controle da atividade e concentração das enzimas:
1. Controle alostérico. Os efetores alostéricos negativos ou
positivos ligam-se a sítios alostéricos que catalisam etapas chaves
das vias metabólicas (reações essencialmente irreversíveis). Os
efetores (moduladores) podem ser substratos, produtos ou co-
enzimas (ver Capítulo 3: Enzimas).
2. Ciclos de substratos. São úteis quando reações opostas de não-
equilíbrio – anabólicas ou catabólicas – envolvem o mesmo
intermediário mas seguem em direções opostas. Em ausência de
regulação, os dois metabólitos podem ser continuamente
produzidos. O fluxo através de tais ciclos do substrato permite a
regulação recíproca por diferentes enzimas alostéricas que
catalisam a reação direta e a reação oposta. Os ciclos do substrato
determinam a direção e a amplitude das alterações no fluxo
metabólico em função das modificações nas concentrações dos
efetores alostéricos.
3. Ciclos de interconversões enzimáticas (modificações covalentes).
Realizam a “sintonia-fina” do fluxo de vias metabólicas. As
enzimas envolvidas podem existir sob duas formas, fosforiladas e
A B C D E P
E1 E2 E3 E4 E5
A B C D E P
E1 E2 E3 E4 E5

12 Regulação do metabolismo energético • 345
não−fosforiladas. A conversão de uma forma em outra, envolve a
modificação covalente da enzima. Em pH fisiológico, o grupo
fosfato é portador de duas cargas negativas e a fosforilação
resulta na introdução de grupo carregado que induz novos
arranjos na estrutura protéica da enzima. A modificação
conformacional pode ser revertida por defosforilação. A
fosforilação e a defosforilação protéica é realizada por cinases e
fosfatases em reações de não-equilíbrio reguladas por efetores
alostéricos.
4. Disponibilidade de substratos. É um mecanismo que controla
muitas vias metabólicas. O controle opera em vários níveis
celulares:
− A membrana plasmática regula a entrada de nutrientes. Alguns
hormônios podem ser necessários para efetuar a captação de
certos nutrientes, exemplo, a insulina promove a entrada de
glicose nas células-alvo.
− As membranas intracelulares controlam a velocidade de entrada
de metabólitos em um compartimento em particular. O fluxo
metabólico pode ser controlado limitando a concentração de
substrato, exemplo, a velocidade de entrada da acil−CoA na
matriz mitocondrial modula a velocidade da β−oxidação dos
ácidos graxos.
− A atividade metabólica de outras vias pode influenciar a
atividade enzimática. O ciclo do ácido cítrico pode ser inibido
pela utilização de acetil-CoA e oxaloacetato em outras vias.
5. Estado energético. As vias anabólicas podem ser reguladas pela
disponibilidade de energia (ATP) para conduzir as reações
endergônicas. Assim, as vias catabólicas (reações exergônicas)
operam em resposta as demandas por energia para aos processos
biossintéticos (reações endergônicas) em reações acopladas
baseadas no efeito somatório da energia livre.
6. Alterações nas concentrações de enzimas chaves. É um
mecanismo que envolve modificações na velocidade de síntese ou
de degradação de enzimas chaves em resposta às necessidades
metabólicas. Altas concentrações de substrato podem induzir à
síntese de novas moléculas de enzima, em fenômeno conhecido
como indução enzimática. No início, a indução enzimática ocorre
no fígado e envolve a transcrição do gene específico codificador
da enzima seguido pela tradução do mRNA para gerar moléculas
adicionais da enzima. De modo inverso, a presença do produto
final de uma via pode interromper a síntese da enzima necessária
para a sua produção, um evento chamado repressão enzimática. A
molécula do repressor (produto final), inibe a síntese da enzima
pertinente pelo bloqueio da transcrição do gene. O resultado é um
declínio progressivo na concentração da enzima por meio de
processos celulares degradativos normais. As velocidades de
síntese e degradação de muitas enzimas reguladoras são alteradas
por hormônios.

12.2 Controle extracelular do metabolismo
As membranas plasmáticas das células contêm receptores
específicos que permitem que a célula responda a estímulos químicos
externos que não podem atravessar a membrana. Nos organismos
multicelulares os estímulos são:
• Hormônios. São mensageiros químicos sintetizados pelas
glândulas endócrinas e transportados pela corrente sangüínea aos
locais de ação, que costumam ser distantes do ponto de origem do
hormônio.
• Neurotransmissores. São moléculas liberadas pelas células
nervosas que atuam como sinais químicos para alterar o
comportamento de células vizinhas.
• Fatores de crescimento. São proteínas que regulam a proliferação
celular.
A. Hormônios
As atividades metabólicas intracelulares são coordenadas em
algum grau por mensageiros químicos conhecidos por hormônios. A
síntese e secreção de muitos hormônios são reguladas por complexos
mecanismos de cascata e controlados em última análise, pelo sistema
nervoso central. Os hormônios são produzidos por células
especializadas (sistema endócrino) e transportados pelo sangue para
ajustar a atividade fisiológica das células-alvo. Muitos hormônios
modificam as funções celulares por alterações na atividade ou
concentração de enzimas. As principais hormônios envolvidos no
metabolismo energético são:
• Hormônios polipeptídicos. Existe uma grande variedade de
hormônios polipeptídicos, como por exemplo, os hormônios
hipotalâmicos e hormônios hipofisários. De grande interesse para
o metabolismo energético são os hormônios insulina e glucagon.
A expressão, hormônios polipeptídicos envolvem também fatores
de crescimento e citocinas.
• Hormônios derivados de aminoácidos. Principalmente tirosina e
fenilalanina. Exemplos, a adrenalina (ou epinefrina) sintetizada
na medula adrenal e a tiroxina (T4) e triiodotironina (T3)
produzidas pela tireóide.
• Hormônios esteróides. São hormônios sintetizados a partir do
colesterol. Formam duas classes: os hormônios sexuais e
progestacionais e os hormônios adrenais.
Os hormônios polipeptídicos e alguns hormônios derivados de
aminoácidos, tais como a adrenalina, são solúveis em água
(hidrofílicos), mas insolúveis em lipídeos e, portanto, não atravessam
as membranas plasmáticas das células. Não penetram nas células-
alvo, mas interagem com receptores específicos presentes na
superfície celular para desencadear respostas intracelulares. As ações
no interior das células são mediadas por moléculas de baixo peso
molecular denominadas segundos mensageiros (a molécula de
hormônio é o primeiro mensageiro).

Os hormônios esteróides e tireoideanos (tiroxina e
triiodotironina) atuam por diferentes mecanismos. Após difusão para
dentro das células-alvo, se ligam a proteínas receptoras específicas no
citoplasma e se movem para o interior do núcleo onde se unem a
sítios específicos do DNA. Alteram a transcrição gênica e, assim, a
síntese protéica.
B. Transdução de sinal
A transdução de sinal é a capacidade da célula em responder aos
sinais extracelulares por meio de um conjunto de proteínas que
reconhecem o sinal hormonal, transmitem o sinal para o interior da
célula e medeiam alterações da atividade enzimática e da expressão
gênica.
As vias de transdução de sinal variam grandemente em seus
detalhes moleculares, no entanto, certos elementos são semelhantes:
1. Os receptores localizados na superfície das células reconhecem as
características estruturais do ligante (moléculas extracelulares). O
ligante pode ser um fator de crescimento ou um hormônio
peptídico, um neurotransmissor ou uma molécula odorante. A
ligação do receptor a seu ligante é altamente específica,
envolvendo interações hidrofóbicas ou interações eletrostáticas.
2. Os receptores são proteínas transmembrana que se comunicam
tanto com o exterior como com o interior da célula. A ligação do
ligante altera a conformação da molécula do receptor,
transmitindo assim, o sinal através da membrana.
3. Alterações conformacionais podem modificar as interações do
receptor com outras proteínas ou podem estimular a própria
atividade catalítica. Por exemplo, alguns receptores são enzimas
enquanto outros são canais iônicos que abrem ou fecham em
resposta a ligação do ligante.
4. A ligação do ligante ao receptor inicia uma série de eventos que
ocorrem em cascata com cada componente da via de sinalização
ativando a seguinte. Essas etapas servem para amplificar o sinal
inicial. Muitas vias sinalizadoras envolvem proteínas−cinases,
enzimas que transferem o grupo fosforil do ATP para um
substrato polipeptídico. As cinases são de dois tipos: as tirosina-
cinases transferem um grupo fosforil para o grupo OH de uma
cadeia lateral da Tyr. As Ser/Thr-cinases transferem o grupo para
a cadeia lateral da Ser ou Thr.
5. Vias sinalizadoras constituídas por enzimas que geram sinais
intracelulares chamados segundos mensageiros (para distinguir
do primeiro mensageiro ou extracelular). Os segundos
mensageiros incluem íons cálcio e derivados nucleotídicos e
lipídicos, que difundem por alguma distância no citosol celular.
Os movimentos dos segundos mensageiros ou outros
O PO2
3CH2
Fosfo-Tyr
O PO2
3CH2
Fosfo-Ser
O PO2
3CH2
CH3
Fosfo-Thr

componentes da via sinalizadora podem ser necessários para que
um sinal extracelular promova alterações em vias metabólicas
cujas enzimas estão localizadas longe da superfície celular ou no
interior de organelas. Se a via sinalizadora altera a expressão
gênica, o sinal deve viajar até o núcleo, onde é reconhecido por
mecanismos de importação nuclear. Os mais importantes
segundos mensageiros são: AMP cíclico (AMPc), GMP cíclico
(GMPc), 1,2−diacilglicerol (DAG), inositol−1,4,5−trifosfato (IP3)
e Ca2+
.
Figura 12.1
Mecanismos gerais de transdução de sinal através da membrana plasmática
da célula.
6. Via de sinalização com chave liga/desliga. O mesmo sinal que
inicia uma resposta intracelular pode também ativar um
mecanismo de redução da resposta. Por exemplo, a ativação de
uma proteína-cinase muitas vezes desencadeia a ativação de uma
fosfatase, uma enzima que remove o grupo fosforil e assim,
restabelece os componentes sinalizadores ao seu estado de
repouso. Esse mecanismo tende a limitar tanto a extensão como a
duração dos efeitos de um hormônio.
D. Ação da insulina
Logo após uma refeição, a concentração da glicose sangüínea
pode aumentar em cerca de 8 mM, em relação à concentração normal
de 3,6–5,6 mM. O aumento da glicose circulante desencadeia a
liberação do hormônio insulina.
A insulina é um hormônio polipeptídico de 51 aminoácidos,
secretado pelas células β das ilhotas pancreáticas (Langerhans), que
promove a utilização da glicose, a síntese de proteínas e a formação e
o armazenamento de triacilgliceróis. As principais ações metabólicas
da insulina são:
• Músculo e outros tecidos. Promovem o transporte da glicose para
o interior das células, estimulam a síntese do glicogênio e
suprimem a degradação do glicogênio.
Estímulo externo
(Primeiro mensageiro)
Transdutor
Efetor
enzimático
Segundo mensageiro
Efetores citoplasmáticos e nucleares
Resposta celular
Membrana
plasmática
Receptor de
membrana

• Adipócitos. Ativa a lipase lipoprotéica extracelular, aumenta o
nível da acetil−CoA−carboxilase e estimula a síntese de
triacilgliceróis.
Uma vez liberada para o sangue, a insulina liga-se aos receptores
de insulina na superfície das células dos músculos e outros tecidos. O
receptor de insulina é um membro de uma família de receptores de
superfície celular que se ligam a vários polipeptídeos, por exemplo,
EGF (fator de crescimento epidérmico), PDGF (fator de crescimento
derivado de plaquetas) e IGF−I (fator de crescimento semelhante à
insulina). Apesar das diferenças estruturais existentes entre os
membros do grupo, eles possuem algumas características em comum:
(1) um domínio externo que interage com ligantes extracelulares
específicos, (2) um segmento transmembrana e (3) um domínio
catalítico citoplasmático com atividade tirosina−cinase. Quando um
ligante (por exemplo, a insulina) interage com o domínio externo,
uma mudança conformacional na proteína receptora ativa o domínio
tirosina−cinase. A tirosina-cinase ativa inicia uma cascata de
fosforilação que provoca a autofosforilação do domínio
tirosina−cinase.
O receptor de insulina é uma glicoproteína transmembrana
composta por estrutura quaternária (αβ)2. Duas grandes subunidades
α (135 kD) são extracelulares, onde se liga a insulina. Cada
subunidade β (95 kD) em sua porção intracelular, contém um
segmento transmembrana e domínios com atividade de
tirosina−cinase. Na ausência do hormônio, os dois domínios
intracelulares das subunidades β estão separados. A ligação da
insulina desencadeia uma modificação conformacional no receptor
que junta os domínios. Cada domínio intracelular da subunidade β é
uma tirosina−cinase que promove a autofosforilação. A
tirosina−cinase também fosforila um ou mais resíduos de tirosina em
outras proteínas, incluindo a IRS−1 (substrato−1 do receptor de
insulina) que desencadeia eventos adicionais na célula.
A ligação da insulina às subunidades α ativa a tirosina−cinase do
receptor e causa a fosforilação em cascata que modula várias
proteínas intracelulares. Por exemplo, a insulina ligada inibe a lipase
sensível a hormônios nos adipócitos. Aparentemente, isso ocorre pela
ativação de uma fosfatase que defosforila a lipase. Além disso, vários
estudos sugerem que segundos mensageiros também são empregados,
por exemplo, o inositol monofosfato ou 1,2−diacilglicerol (DAG), na
ativação da proteína−cinase C.
A ligação de insulina inicia uma cascata de fosforilação que induz
a transferência de várias proteínas para a superfície celular. Exemplos
dessas moléculas incluem certas isoformas dos transportadores de
glicose e os receptores de LDL e IGF−II. O movimento das moléculas
para a membrana plasmática na fase pós−absortiva do ciclo
jejum−alimentado, promove a captação de nutrientes pela célula e
sinais promotores do crescimento.
Componentes adicionais das vias de transdução de sinal contêm
uma região conhecida como domínio SH2 formada por uma cadeia
lateral de Arg que interage com os grupos fosfo-Tyr do receptor e
com outras proteínas. Essas interações permitem que a ligação de um
hormônio altere a atividade de várias proteínas intracelulares. Em um

caso, uma porção do receptor é clivada por uma protease e viaja até o
núcleo, onde modula a transcrição gênica.
Insulina altera os processos metabólicos
Somente as células que possuem receptores para a insulina
respondem ao hormônio e, o tipo de resposta, varia para cada tipo de
célula. Nos tecidos insulina-responsivos como os músculos e o tecido
adiposo, a insulina estimula fortemente o transporte de glicose para o
interior das células. A Vmax para o transporte da glicose aumenta, não
porque a insulina altera a atividade catalítica intrínsica do
transportador, mas porque a insulina aumenta o número de
transportadores da superfície celular. Esses transportadores
denominados GLUT4 (transportador de glicose isoforma 4) para
distinguir de outras proteínas transportadoras de glicose, são
estimulados nas membranas de vesículas intracelulares. Quando a
insulina se liga à célula, a vesícula funde-se com a membrana
plasmática. Essa translocação do transportadores para a superfície
celular aumenta a velocidade pela qual a glicose entra na célula. A
GLUT4 é um transportador passivo, que opera de forma similar ao
transportador de glicose nos eritrócitos. Quando o estímulo insulínico
é removido, os transportadores retornam para as vesículas
intracelulares por endocitose.
Figura 12.2
Efeito da insulina sobre o GLUT4. A insulina estimula a fusão da
microvesícula com a proteína transportadora de glicose GLUT4 aumentando
o número de transportadores de glicose na membrana plasmática.
A insulina estimula a captação de ácidos graxos e glicose.
Quando o hormônio se liga ao seu receptor no tecido adiposo, ocorre
a ativação da proteína extracelular lipase lipoprotéica, que remove os
ácidos graxos das lipoproteínas circulantes para serem captados e
armazenados nos adipócitos.
A ligação da insulina em seus receptores na superfície celular
também modula as enzimas do metabolismo do glicogênio. O
metabolismo do glicogênio é caracterizado pelo equilíbrio entre a
síntese e a degradação do glicogênio. A síntese é realizada pela
enzima glicogênio-sintase, que adiciona unidades de glicose aos
terminais de um polímero de glicogênio (ver Capítulo 6).
A glicogênio-fosforilase mobiliza resíduos de glicose do
glicogênio por fosforólise (clivagem pela adição de um grupo fosfato
em lugar de água) para a glicólise. A insulina participa indiretamente
da regulação da glicogênio−sintase e da glicogênio−fosforilase. O
GLUT 4
Microvesícula
com GLUT 4
Insulina

receptor tirosina−cinase para a insulina ativa outras proteínas,
incluindo fosfatases que defosforilam (ativam) a glicogênio−sintase e
defosforilam (desativam) a glicogênio−fosfarilase. Isso resulta na
aceleração da síntese do glicogênio enquanto a velocidade da
glicogenólise diminui. De fato, as múltiplas cinases e fosfatases
interagem com as enzimas do metabolismo do glicogênio para
produzir uma sintonia fina na regulação que, ao final, é controlada
por sinais introduzidos por hormônios extracelulares.
Quadro 12.1 Efeitos metabólicos do diabetes
A característica fundamental do diabetes não-tratado é
a hiperglicemia crônica (elevadas taxas de glicose no
sangue). A perda de sensibilidade pelos tecidos à insulina
promove a falta de captação de glicose. O metabolismo
responde como se não existisse glicose disponível, de tal
modo que a gliconeogênese aumenta produzindo maior
hiperglicemia. A glicose circulante em altas concentrações
participa da glicação não-enzimática das proteínas. Esse
processo é lento, mas as proteínas glicadas podem
gradualmente acumular e danificar tecidos provocando, por
exemplo, doença arterial coronária, retinopatia, nefropatia,
catarata e neuropatia.
A lesão tecidual também pode resultar de efeitos
metabólicos da hiperglicemia. Como os músculos e o tecido
adiposo são incapazes de aumentar a captação de glicose
em resposta à insulina, a glicose penetra em outros tecidos.
No interior dessas células, a aldose-redutase catalisa a
conversão da glicose em sorbitol:
Glicose + NADPH → sorbitol + NADP
+
Como a aldose-redutase tem um Km elevado para a
glicose (ao redor de 100 mM), a velocidade da reação é
normalmente muito lenta. No entanto, sob condições
hiperglicêmicas, o sorbitol acumula e pode alterar o
equilíbrio osmótico da célula que modifica a função renal e
desencadeia a precipitação de proteínas em outros tecidos.
A agregação das proteínas no cristalino leva à catarata. Os
neurônios e as células que revestem os vasos sangüíneos
também podem ser lesados, aumentando a probabilidade de
neuropatias e problemas circulatórios que em casos severos
resultam em infarto do miocárdio, derrames ou amputação
das extremidades.
O diabetes é também uma desordem do metabolismo
das gorduras, pois a insulina normalmente estimula a
síntese de triacilglicerol e suprime a lipólise nos adipócitos.
O diabetes não-controlado tende a metabolizar os ácidos
graxos em lugar dos carboidratos, o que resulta na produção
de corpos cetônicos. O excesso de produção de corpos
cetônicos leva a cetoacidose diabética.
No diabetes, o organismo acredita estar em jejum.
Paradoxalmente, cerca de 80% dos pacientes com diabetes
tipo 2 são obesos. A obesidade – particularmente com grandes
depósitos abdominais – está fortemente correlacionada com o
desenvolvimento da doença. Isso se deve ao aumento dos
níveis de ácidos graxos circulantes que podem interferir no
metabolismo de outros combustíveis metabólicos, os
carboidratos. Desse modo, as células empregam menos
glicose como combustível. Como resposta, as células β do
pâncreas deveriam aumentar a produção de insulina (alguns
tipos de diabetes tipo 2 apresentam elevados teores de
insulina) no entanto, eventualmente ela está reduzida.
O tecido adiposo exerce um papel ativo no
desenvolvimeto de diabetes do tipo 2. Os adipócitos não são
depósitos inertes de gordura mas sintetizam ativamente
hormônios peptídicos e esteróides, que atuam em outros
órgãos incluindo o cérebro. Por exemplo, os adipócitos
secretam leptina, um hormônio que ajuda a regular o apetite e
contribui no desenvolvimento da obesidade.
Os adipócitos também produzem dois hormônios, fator de
necrose tumoral α (TNF−α) e resistina. O hormônio protéico
resistina pode explicar como a obesidade se relaciona ao
diabetes tipo 2. Em pessoas obesas, os adipócitos produzem
níveis aumentados de resistina que atuam prejudicando o
funcionamento dos receptores de insulina que existem na
célula. Assim, as células deixam de responder à insulina
quando existe muita resistina no sangue. Deste modo, as
pessoas obesas têm mais resistina e, como conseqüência,
respondem pior à insulina, desenvolvendo diabetes.
Certos fármacos empregados para tratar o diabetes tipo 2
parecem diminuir a quantidade de resistina secretada pelos
adipócitos. No entanto, o papel da resistina sob condições
normais (não-diabéticos) permanece obscura.
C. Ação do glucagon e das catecolaminas
Algumas horas após uma refeição, a glicose da dieta foi captada
pelas células e consumida como combustível, armazenada como
glicogênio ou convertida em ácidos graxos para ser utilizada a longo
prazo. A partir desse momento, o fígado inicia a mobilização da
glicose para manter a concentração da glicose sangüínea constante.
Essa fase do metabolismo não mais é regulada pela insulina mas por
outros hormônios, principalmente o glucagon e as catecolaminas
(adrenalina e noradrenalina).

O glucagon, um hormônio peptídico com 29 resíduos de
aminoácidos, é sintetizado e liberado pelas células α das ilhotas
pancreáticas quando a concentração da glicose sangüínea começa a
cair abaixo de 5 mM. De modo diferente da insulina, o glucagon
estimula o fígado para liberar a glicose produzida pela glicogenólise
e gliconeogênese, e estimula a lipólise no tecido adiposo para liberar
os ácidos graxos para a circulação. As células musculares não
apresentam receptores para o glucagon e, portanto, não responde ao
hormônio.
Apesar dos mecanismos de transdução de sinais diferirem um
pouco, as catecolaminas promovem os mesmos efeitos gerais que o
glucagon. Por exemplo, o estímulo da adrenalina sobre as células
musculares ativa a glicogenólise, que disponibiliza mais glicose para
a contração muscular. As catecolaminas são derivadas da tirosina e
sintetizadas pelo sistema nervoso central como neurotransmissores ou
pela medula adrenal como hormônios. As ações das catecolaminas são
mediadas por duas classes de receptores na superfície celular, os
receptores α−adrenérgicos e os β−adrenérgicos.
Os receptores do glucagon e os receptores adrenérgicos, tais
como, o receptor β−adrenérgico, são glicoproteínas transmembranas
que possuem sete α−hélices transmembranas (receptores
serpenteantes). Esses receptores possuem uma extremidade
N−terminal extracelular que contém o local de ligação do hormônio
(sete seqüências de 20−25 resíduos hidrofóbicos cada) que formam
três alças extracelulares e três alças intracelulares além de uma
porção no lado citosólico da membrana plasmática na qual a proteína
G particular se liga. Os receptores do glucagon e das catecolaminas
não são tirosina−cinases, mas a ligação desses hormônios
desencadeiam alterações conformacionais que afetam a porção
intracelular da proteína. Acredita-se que esses receptores atuam como
proteínas alostéricas que alternam entre duas conformações, em
resposta ao ligante ligado.
Proteínas G: mediadores intracelulares
No interior das células, uma proteína trimérica conhecida como
proteína G interage com a porção intracelular de receptores. As
proteínas G são assim chamadas por que ligam GDP e GTP. Os três
tipos de subunidades da proteína G são designadas α, β e γ. Na forma
inativa, a proteína G existe como um trímero ligado a GDP pela
subunidade α. A ligação de um ligante a um receptor apropriado
desencadeia uma alteração conformacional da proteína G, que é
provavelmente mediada por uma extensão C-terminal da subunidade
α. Como resultado, a subunidade α libera a GDP e, em seguida, liga a
GTP em seu lugar. O terceiro grupo fosfato da GTP não é facilmente
acomodado no trímero αβγ, de tal modo que a subunidade α se
dissocia dos componentes βγ, que permanecem fortemente ligados
como um dímero. Uma vez dissociados, tanto a subunidade αGTP
como o dímero βγ tornam-se ativos; ou seja, eles interagem com
componentes celulares na via de transdução de sinal.
A atividade sinalizadora da proteína G está limitada pela
atividade da GTPase intrínsica da subunidade α, que hidrolisa GTP a
GDP + Pi. A hidrólise do GTP permite que as três subunidades da

proteína G retornem à sua conformação original (αGDPβγ) (Figura
12.2).
Figura 12.2
Ciclo da proteína G. O trímero αβγ, com o GDP ligado a subunidade α, é
inativo. A ligação do ligante ao receptor associado com a proteína G
desencadeia modificações conformacionais que causam a substituição do
GDP pelo GTP e a subunidade α se dissocia do dímero βγ. As duas porções
da proteína G são ativas na via de sinalização. A atividade da GTPase do
subunidade α retorna a proteína G a sua forma trimérica inativa.
O nucleotídeo GDP ligado à proteína G trimérica dissocia com
uma velocidade basal de cerca de 10−5
s−1
, o que significa que a
ativação fisiológica da proteína G (a liberação de GDP e a ligação de
GTP) pode levar horas. In vivo, a troca de GDP pelo GTP ocorre em
menos de um segundo pela ajuda de proteínas conhecidas como GEFs
(guanine nucleotide exchange factors). De modo similar, a velocidade
catalítica GTPase é muitas vezes aumentada por proteínas acessórias
conhecidas como GAPs (GTPase activating proteins), que
impulsionam a atividade da GTPase de cerca de 2−4 min−1
para,
aproximadamente, 102
−103
min−1
.
Via adenilil−ciclase
As subunidades separadas αGTP e βγ exercem diferentes efeitos
sobre as proteínas celulares. Por exemplo, a subunidade αGTP liga e
ativa alostericamente a enzima adenilil−ciclase, uma proteína integral
presente na superfície interna da membrana que catalisa a síntese de
AMP cíclico (AMPc) a partir de ATP:
GDP GTP
GTP
Ativo
GDP
GDP
Inativo
Inativo
H O2
Atividade
GTPase
Pi
Complexo
hormônio-receptor

O sítio catalítico da adenilil−ciclase inclui duas cadeias laterais
Asp também como íons metálicos (provavelmente Mg2+
) que
coordena com os dois resíduos Asp e os grupos fosfato do ATP.
O AMPc é um segundo mensageiro, uma substância pequena e
altamente solúvel que pode livremente difundir na célula. O AMPc
ativa uma Ser/Thr cinase chamada proteína−cinase A. Na ausência de
AMPc, essa cinase é um tetrâmero inativo formado por duas
subunidades reguladoras (R) e duas catalíticas (C)
Consequentemente, o nível de segundo memsageiro AMPc
determina o nível de atividade da proteína-cinase A. O sinal AMPc (e
portanto, a atividade da proteína-cinase A) é desligado pela ação da
fosfodiesterase que converte o AMPc em AMP:
Um dos alvos intracelulares da proteína−cinase A é a
fosforilase−cinase, a enzima que fosforila (desativa) a
glicogênio−sintase e fosforila (ativa) a glicogênio-fosforilase. Os
eventos sinalizadores explicam como hormônios como o glucagon e
adrenalina, que desencadeiam a produção de AMPc, promovem a
glicogenólise e inibem a síntese do glicogênio. Embora a
fosforilase−cinase seja ativado pela proteína−cinase A, ela só é
ativada ao máximo quando os íons Ca2+
estão presentes como
resultado de outras vias sinalizadoras (ver adiante).
H
HO
O
H
H
H
OH
O P O P O P O H C
O
2
O
O O
NH2
O
O
ATP
N
N
N
NH
H
H
O
H
H
H
OH
NH2
N
N
N
NH
H
H
C
2
O
P
O
O
O
AMP-cíclico (AMPc)
PPi
Adenilil-ciclase
H
HO
O
H
H
H
OH
O P O H C2
NH2
O
O
AMP
N
N
N
NH
H
H
O
H
H
H
OH
NH2
N
N
N
NH
H
H
C
2
O
P
O
O
O
AMPc
H O2
Fosfodiesterase

Os receptores com sete hélices transmembranas, modificam a sua
conformação em resposta ao estímulo externo a, assim, ativam as
proteínas G. Esses receptores são responsáveis pela transmissão de
informações provenientes de diferentes sinais.
A estimulação da adenilil-ciclase pela proteína G é de curta
duração, pois a subunidade Gα é também uma GTPase que hidrolisa o
GTP a GDP + Pi. Em função da ação da GTPase da subunidade Gα, a
atividade da adenilil-ciclase depende da estimulação hormonal
contínua, cessando em ausência do hormônio. Isso é fundamental para
o segundo mensageiro que uma vez gerado deve ser desativado
rapidamente.
As proteínas alvo afetados pelo AMPc dependem do tipo de
célula. Além disso, vários hormônios podem ativar a mesma proteína
G. Portanto, diferentes hormônios podem realizar o mesmo efeito. Por
exemplo, em células hepáticas a degradação do glicogênio pode ser
iniciada tanto pela adrenalina como pelo glucagon.
Além das proteínas G que ativam a adenilil−ciclase, existem
proteínas G inibitórias que promovem a redução dos níveis de AMPc
por ligação em diferentes sítios da proteína adenilil−ciclase. Assim, o
mesmo hormônio pode criar efeitos estimuladores pela ligação a um
dos receptores mas também pode causar inibição por ligação a outro
tipo de receptor. Outras proteínas G ativam a AMPc fosfodiesterase,
produzindo efeitos similares nos processos dependentes de AMPc.
Consequentemente, a resposta celular a um sinal hormonal não
depende somente da presença do receptor apropriado, mas também se
a proteína G associada está na forma ativada ou inibitória. Como um
único tipo de hormônio pode ativar dois tipos de proteína G, o
sistema sinalizador pode ser ativo somente por curtos períodos antes
de ser desativado.
Glucagon/Adrenalina
Receptor
proteína G
Proteína G
Adenilato
ciclase
AMPc
Proteína
cinase A
Fosforilase
cinase
Glicogênio
sintase
Inibe
Glicogênio
sintase
Glicogênio
fosforilase
Promove
glicogenolise
Figura 12.3
Resumo da regulação da glicogênio-
sintase e da glicogênio-fosforilase

Figura 12.4
Sistema de sinalização da adenilil-ciclase. A ligação do hormônio ao receptor RS
promove sua ligação à proteína G estimuladora (GS) que estimula a troca de GDP por
GTP na sua subunidade GSα. Outros hormônios podem se ligar ao receptor inibitório (Ri)
que está acoplado à adenilil−ciclase pela proteína G inibitória (Gi). A GS ativa a
adenilil−ciclase, enquanto a Gi inibe-a. O AMPc ativa a proteína-cinase A, resultando na
fosforilação das proteínas celulares.
As proteínas G participam de outras vias de sinalização
Via guanilil- ciclase
Um dos importantes alvos das proteínas G é a guanilil−ciclase,
enzima que catalisa a transformação de trifosfato de guanosina (GTP)
em GMP cíclico (GMPc), um segundo mensageiro. Apesar da síntese
de GMP cíclico ocorrer em quase todos os tecidos animais, seu papel
no metabolismo celular ainda não foi plenamente esclarecido. Duas
guanilil−ciclase estão envolvidas na transdução de sinal. Uma está
ligada à membrana e atua como receptora de hormônio. A outra é uma
enzima citoplasmática.
Rs Ri
( )+
Adenilil
ciclase
Hormônio
estimulador
Hormônio
inibidor
Gs
Gi
GDPGDP GTP GTP
GiGs
GDP GTP
PPi
ATP
AMPc
5 -AMP´Proteína
cinase A
(inativa)
Proteína
cinase A
(ativa)
GDPGTP
Proteína-OH Proteína
Fosfodiesterase
P
Resposta
celular

1. Guanilil−ciclase ligada à membrana. Dois tipos de moléculas
ativam a guanilil−ciclase ligada à membrana: o fator natriurético
atrial e a enterotoxina bacteriana.
• Fator natriurético atrial (FNA). É um peptídeo liberado das
células atriais cardíacas em resposta ao volume de sangue. O
efeito fisiológico do FNA é reduzir a pressão sangüínea via
vasodilatação e diurese (aumento da excreção urinária) por meio
do GMPc. O GMPc citosólico ativa a fosforilação da enzima
proteína-cinase G. O papel dessa enzima na mediação dos efeitos
do FNA ainda não foi esclarecido. O FNA ativa a guanilil−ciclase
em vários tipos de células. Por exemplo, nos túbulos coletores
renais, a síntese de GMPc estimulada pelo FNA, aumenta a
excreção renal do Na+
e água.
• Enterotoxina bacteriana. A ligação da enterotoxina (produzida
por várias espécies de bactérias) à guanilil−ciclase encontrada na
membrana plasmática das células intestinais causa diarréia. Por
exemplo, determinadas linhagens de E. coli produzem uma
enterotoxina termolábil (proteína semelhante à toxina da cólera).
A interação da enterotoxina ao receptor plasmático do enterócito
ligado a guanilil−ciclase desencadeia a excessiva secreção de
eletrólitos e água no lúmen do intestino delgado.
2. Guanilil−ciclase citoplasmática. A guanilil−ciclase
citoplasmática possui um grupo prostético heme. A enzima é ativada
pelo Ca2+
, assim qualquer aumento do Ca2+
citoplasmático promove a
síntese de GMPc. Essa guanilil−ciclase é ativada pelo óxido nítrico
(NO). Algumas evidências sugerem que a ligação do NO ao grupo
heme ativa a enzima. Em vários tipos de células (exemplo, células do
músculo liso), a GMPc estimula o funcionamento dos canais de íons.
Sistema do fosfoinositídeo e cálcio
O sistema do fosfoinositídeo media a ação de hormônios, de
fatores de crescimento e de outros ligantes. A adrenalina liga-se a um
receptor conhecido como receptor α−adrenérgico que faz parte do
sistema fosfoinositídeo que também é formado por um receptor com
sete segmentos transmembrânicos, uma proteína G e uma proteína-
cinase específica. A proteína G associada com o receptor
α−adrenérgico ativa a enzima celular fosfolipase C ligada à
membrana plasmática. A enzima ativa catalisa a clivagem do
fosfatidilinositol−4,5−difosfato (PIP2) para formar dois segundos
mensageiros: o 1,2−diacilglicerol (DAG) e o inositol−1,4,5−trifosfato
(IP3).

O PIP2 está presente em pequenas quantidades mas pode ser
sintetizado a partir do fosfatidilinositol−4−fosfato (PIP) que, por sua
vez, é produzido a partir do fosfatidilinositol (PI) por fosforilação
específica.
1. Diacilglicerol (DAC). O 1,2−diacilglicerol é um segundo
mensageiro lipossolúvel que permanece na membrana plasmática e
ativa a proteína−cinase C (PKC). Foram identificadas várias
proteínas−cinase C. Dependendo da célula, a proteína−cinase C
ativada fosforila enzimas reguladoras específicas ativando-as ou
inativando-as. São conhecidas no mínimo 11 diferentes isoformas de
proteínas−cinases C presentes em diferentes tecidos.
Em baixas concentrações de íons Ca2+
e em ausência de DG, as
PCKs são inativas. A ligação da DG causa uma alteração
conformacional que aumenta a afinidade das PCKs pelos íons Ca2+
e
DG. Ao ligar-se à membrana plasmática, a isoenzima torna-se ativada.
2. Inositol−1,4,5−trifosfato (IP3). O inositol−1,4,5−trifosfato é
hidrossolúvel e se difunde desde a membrana através do citoplasma
para interagir com receptores específicos do retículo endoplasmático
onde se liga a um canal de transporte de Ca2+
abrindo-o e liberando
o Ca2+
para o citosol. O efluxo dos íons cálcio dos depósitos no
retículo endoplasmático induz uma modificação conformacional no
receptor IP3 que causa a abertura dos canais íons Ca2+
da membrana
plasmática e, assim, desencadeia vários processos celulares. O
principal receptor protéico para os íons Ca2+
é a calmodulina – uma
proteína que se liga ao Ca2+
. Os complexos cálcio−calmodulina são
capazes de mediar muitas reações reguladas pelo cálcio. De fato, a
calmodulina é a subunidade reguladora de algumas enzimas
(exemplo, a fosforilase-cinase, que converte a fosforilase b em
fosforilase a no metabolismo do glicogênio).
A transmissão do sinal é encerrada pela defosforilação do IP3 pela
ação hidrolítica da inositol−trifosfatase para formar
H O2OH
H
O
H
OPO
HO
H
H
3
H
2
OPO3
2
OH
H
O P
O
O
CH CH CH2 2
O
C O
R1
O
C O
R2
Fosfolipase C
OH
H
O PO
H
OPO
HO
H
H
3
H
2
OPO3
2
OH
H
3
2
OH
CH CH CH2 2
O
C O
R1
O
C O
R2
1,2-Diacilglicerol
Fosfatidilinositol-4,5-difosfato (PIP )2
Inositol-1,4,5-trifosfato (IP )3

inositol−1,4−bifosfato. Os íons Ca2+
podem retornar aos seus
estoques intracelulares pela ação de uma Ca2+
−ATPase às custas da
hidrólise de ATP.
Figura 12.5
Sistema de sinalização do fosfoinositídeo. A ligação do ligante a seu receptor
transmembrana R ativa a fosfolipase C (PLC) por meio da proteína Gq. A fosfolipase C
catalisa a hidrólise de PIP2 nos segundos mensageiros IP3 e diacilglicerol (DG). O IP3
hidrossolúvel difunde do citoplasma para o retículo endoplasmático onde estimula a
liberação do Ca
2+
que vai ativar, via calmodulina, numerosos processos celulares. O
diacilglicerol permanece associado à membrana, onde – juntamente como o Ca
2+
− ativa a
proteína−cinase C (PKC), que fosforila e modula muitas proteínas celulares.
R
Gq GDP GTP
Gq
GDP GTP
PLC DG
PKC
Ca2+
PIP2
Proteína P
Proteína-OH
Resposta
celular
Espaço extracelular
Ligante
IP
IP
3
2
IP
I
Fosfatases
Ca
Canal Ca
2+
2+
Lúmen
Retículo
endoplasmático
Resposta
celular

Figura 12.6
Visão geral da ação da adrenalina e glucagon no metabolismo do glicogênio.
PIP2 = fosfatidilinositol−4,5−bifosfato, IP3 = inositol−1,4,5−trifosfato, DG =
1,2−diacilglicerol
D. Hormônios esteróides e tireoideanos
Os mecanismos de transdução de sinal das moléculas de
hormônios hidrofóbicos resultam em modificações na expressão
gênica. Os hormônios esteróides e tireoideanos são moléculas
hidrofóbicas e lipossolúveis transportadas pelo sangue ligadas a
diferentes proteínas. Os transportadores de esteróides incluem a
globulina de ligação a corticoesteróides (CBG,
Adrenalina Glucagon
Receptor
de glucagon
Receptor
-adrenérgico
Receptor
-adrenérgico
Adenilato
ciclase
Adenilato
ciclase
ATPATP
cAMP
Glicogênio
G1P
UDP - glicose
Glicogênio
fosforilase
Glicogênio
sintase
UDP - glicose
pirofosforilase
DG
IP3
G6P
Glicose
Glicose
Fosfo-
lipase C
Ca2+
Ca2+
Fosfoglicomutase
Glicose-6-fosfatase
Retículo
endoplasmático
PIP2
Célula hepática

corticosteroid−binding globulin) ou transcortina, a globulina de
ligação a hormônios sexuais (SHBG, sex hormone binding globulin),
a proteína de ligação a andrógeno (BPP, androgen binding protein) e
a albumina. Os hormônios tireodeanos são transportados pela
globulina transportadora de tiroxina, pré−albumina transportadora de
tiroxina e albumina.
Ao atingir as células−alvo, as moléculas de hormônios
hidrofóbicos se dissociam de suas proteínas transportadoras e
difundem através das membranas plasmáticas para ligarem-se aos
receptores intracelulares específicos. O complexo hormônio−receptor
interage com fatores de transcrição alterando a expressão gênica e
afetando, assim, a síntese protéica. Enquanto os hormônios
polipeptídeos e as catecolaminas efetuam alterações rápidas (dentro
de segundos ou minutos) por meio de ativação ou inibição de enzimas
pré−existentes, a ação dos hormônios esteróides e tireoideanos é
observada em prazos mais longos (dias ou semanas).
A atividade dos hormônios hidrofóbicos é limitada nas células
eucarióticas pela presença de moléculas receptoras. Os hormônios
podem difundir para células não−alvo, mas em ausência de moléculas
receptoras apropriadas, não exercem suas atividades. Nos
tecidos−alvo, dependendo do tipo de hormônio envolvido, a interação
pode ocorrer no citoplasma (exemplo, glicocorticóides) ou no interior
do núcleo (exemplo, estrogênios, androgênios e hormônios
tireoideanos):
• Receptores glicocorticóides presentes principalmente no
citoplasma das células−alvo e complexados a proteínas que se
ligam ao DNA para a regulação da transcrição.
• Receptores do estradiol e progesterona são predominantemente
encontrados no núcleo.
• Receptores de homônios tireoideanos estão sempre ligados ao
DNA.
Os receptores hormonais intracelulares existem em níveis ao
redor de 100−10.000 moléculas por célula e apresentam grande
afinidade por seu ligante.
Dentro do núcleo, cada complexo hormônio esteróide−receptor
liga-se a segmentos específicos do DNA chamados elementos de
resposta a hormônios (HRE), cuja “seqüência de consenso” consiste
de duas seqüências de seis nucleotídeos separados por três
nucleotídeos (n). As seqüências de consenso no DNA de resposta aos
glicocorticóides e progesterona são:
AGAACAnnnTGTTCT
TCTTGTnnnACAAGA
Os dímeros receptores interagem com fatores de transcrição,
outras proteínas ligadoras de DNA e cofatores para afetar a
transcrição do gene−alvo no mRNA o qual serve como um modelo
para a síntese ribossômica das proteínas. Estima-se que cada tipo de
HRE pode influenciar a transcrição de 50−100 genes.
Conseqüentemente, a ligação de um complexo hormônio esteróide-
receptor a seu HRE induz alterações em larga escala na função
celular.

O estradiol liga-se ao complexo receptor−hsp (hsp: proteína de
choque térmico) fracamente associado com o núcleo. Após a
dissociação e a dimerização do receptor, o dímero receptor liga-se ao
HRE, cuja seqüência de consenso é:
AGGTCAnnnTGACCT
TCCAGTnnnACTGGA
Segue-se a transcrição e a síntese das proteínas.
Após entrar na célula, os hormônios tireoideanos ligam-se
temporariamente a proteínas específicas citoplasmáticas. As
moléculas dos hormônios migram para o núcleo e mitocôndria onde
interagem com receptores. No núcleo, a ligação dos hormônios
tireoideanos inicia a transcrição de genes que exercem papéis
fundamentais em vários processos celulares, como aqueles que
codificam o hormônio de crescimento e a (Na+
−K+
)−ATPase. Na
mitocôndria, os hormônios tireoideanos promovem o consumo de
oxigênio e o aumento da oxidação dos ácidos graxos.
E. Fatores de crescimento
A sobrevivência dos organismos multicelulares necessita que a
proliferação e a diferenciação celular seja rigorosamente controlada.
As condições que regulam esses processos não estão ainda
completamente esclarecidas. Entretanto, uma variedade de
polipeptídeos e proteínas hormônios−like, denominados fatores de
crescimento (ou citocinas), parecem regular o crescimento, a
diferenciação e a proliferação de várias células. Muitas vezes, a ação
de vários fatores de crescimento é necessária para promover respostas
celulares. Os fatores de crescimento diferem dos hormônios por
serem sintetizados em vários tipos de células e não somente nas
células endócrinas. Exemplos de fatores de crescimento em
mamíferos incluem o fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de
crescimento derivado das plaquetas (PDGF) e as somatomedinas.
Moléculas similares como as interleucinas, que promovem a
proliferação e diferenciação celular no sistema imune, também são
consideradas citocinas. Várias moléculas supressoras do crescimento
também foram caracterizadas. Os mecanismos pelos quais as citocinas
exercem seus efeitos ainda são motivos de estudo. Alguns aspectos da
ação das citocinas foram identificados e lembram aqueles observados
para os hormônios.
1. Fator de crescimento epidermal (EGF). É um mitógeno
(estimulador da divisão celular) para um grande número de células
epiteliais, como as epidérmicas e de revestimento gastrointestinal. O
EGF desencadeia a divisão celular quando se liga aos receptores EGF
da membrana plasmática, que são tirosinas−cinases estruturalmente
semelhantes aos receptores de insulina (ver acima).
2. Fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF). É
secretado pelas plaquetas sangüíneas durante o processo de
coagulação. Atuando com o EGF, o PDGF estimula o processo
mitogênico nos fibroblastos e em outras células vizinhas durante a
cura de ferimentos. O PDGF também promove a síntese de colágeno
nos fibroblastos.

3. Somatomedinas. São polipeptídeos que mediam as ações
promotoras de crescimento do GH (hormônio do crescimento).
Produzidas no fígado e em outros órgãos (exemplo, músculo,
fibroblasto, osso e rim) quando o GH se liga ao seu receptor na
superfície celular, as somatomedinas estimulam o crescimento animal.
As somatomedinas também promovem os mesmos processos
metabólicos realizados pela insulina (exemplo, transporte de glicose e
síntese de gorduras). Por essa razão, as duas somatomedinas
encontradas em humanos são chamadas fatores de crescimento I e II
semelhantes à insulina (IGF−I e IGF−II). Como outros fatores de
crescimento polipeptídicos, as somatomedinas desencadeiam
processos intracelulares pela ligação a receptores na superfície
celular. Os receptores da somatomedina são tirosina−cinases.
4. Interleucina−2 (IL−2). É uma grupo de citocinas – pequenas
proteínas liberadas por várias células do organismo, normalmente em
resposta a um estímulo ativador – que regulam o sistema imune além
de promover o crescimento e a diferenciação celular. A IL−2 é
derivada de linfócitos T auxiliares que causa proliferação dos
linfócitos T e linfócitos B ativados. As células são também
estimuladas a produzir receptores de IL−2. A união da IL−2 aos
receptores deflagra a divisão celular para a produção de numerosas
células T idênticas. Esse processo, também como outros aspectos da
resposta imune, continua até que o antígeno seja eliminado do corpo.
O fármaco imunossupressor ciclosporina A inibe a produção de IL−2
suprimindo respostas indesejáveis, tais como a rejeição de enxertos.
5. Citocinas inibidoras do crescimento. Os interferons são uma
classe de pequenas citocinas protéicas e glicoproteínas, produzidas
pelas células T, pelos fibroblastos e por outras células em resposta a
infecções virais e outros estímulos biológicos e sintéticos. Os
interferons ligam-se a receptores específicos nas membranas
celulares; seus efeitos consistem em indução de enzimas, supressão
da proliferação celular, inibição da proliferação viral, intensificação
da atividade fagocítica dos macrófagos e aumento da atividade
citotóxica dos linfócitos T. Os interferons são divididos em cinco
grandes classes (alfa, beta, gama, tau e ômega) e várias subclasses.
Os fatores de necrose tumoral (TNF) são tóxicos para as células
tumorais. Tanto o TNF−α (produzido pelos leucócitos fagocíticos
antígeno−ativados) e o TNF−β (produzido por células T ativadas)
suprimem a divisão celular. Também exercem vários papéis na
regulação de vários processos de desenvolvimento.
12.3 Compartimentalização
Muitas vias anabólicas e catabólicas estão confinadas a diferentes
compartimentos celulares. Nas células hepáticas, a biossíntese dos
ácidos graxos a partir da acetil−CoA ocorre no citosol onde as
enzimas para a biossíntese e para a geração de NADPH estão
localizadas. A degradação dos ácidos graxos (β−oxidação) ocorre no
interior da mitocôndria onde as enzimas apropriadas e os processos
para a fosforilação oxidativa estão presentes. Assim, a biossíntese e a
degradação dos ácidos graxos ocorrem em diferentes compartimentos.

A realização de reações em compartimentos específicos (matriz
mitocondrial e citosol) requer mecanismos para transportar
substâncias através das membranas. Os dois mecanismos principais
de transporte são:
• Sistemas de transporte. Utilizam proteínas transportadoras
específicas que medeiam os movimentos transmembrana entre a
mitocôndria e citosol de pequenos íons inorgânicos, piruvato,
carnitina/acil−carnitina, citrato, aspartato, malato, adenina
nucleotídeo, citrulina e ornitina.
• Sistemas de lançadeiras (circuitos). Os grupos funcionais ou
átomos em lugar de moléculas, atravessam a membrana. O grupo
funcional é transferido para um composto que é transferido para
outro compartimento, ex.: lançadeira malato−aspartato em que os
elétrons do NADH citosólico são transportados para a
mitocôndria.
Resumo
1. Os hormônios são moléculas que transferem informações entre as
células. Para assegurar o controle do metabolismo, a síntese e a secreção
da maioria dos hormônios nos mamíferos são regulados por um complexo
mecanismo em cascata controlado pelo SNC. Além disso, o mecanismo
de retro-alimentação negativa controla com precisão a síntese de vários
hormônios.
2. Fatores de crescimento (ou citocinas) são polipeptídeos que regulam o
crescimento, a diferenciação e proliferação celular. Eles diferem dos
hormônios por serem produzidos por vários tipos de células em lugar de
células glandulares especializadas.
3. Os hormônios e fatores de crescimento transmitem sinais regulatórios
para as células−alvo por meio da ligação a receptores específicos.
Hormônios solúveis em água tipicamente se ligam a receptores na
superfície das células−alvo para produzir respostas no interior das
células. Eles alteram a atividade de várias enzimas e/ou mecanismos de
transporte.
4. Os segundos mensageiros AMPc, GMPc, IP3, DAG e Ca2+
muitas vezes
mediam a mensagem hormonal ou de fatores de crescimento.
5. O sistema de sinalização do AMPc consiste de um receptor, de uma
proteína G, da adenilil-ciclase e de uma proteína−cinase dependente de
AMPc.
6. No sistema do fosfoinositídeo, a ligação do hormônio provoca a hidrólise
do fosfatidil−4,5−difosfato (PIP2), produzindo inositol−1,4,5−trifosfato
(IP3), que abre canais de Ca2+
, e diacilglicerol (DG), que ativa a
proteína−cinase C.
7. De modo geral, os hormônios da tireóide e esteróides hidrofóbicos
ligam-se a receptores intracelulares. O complexo hormônio−receptor
subsequentemente liga-se a segmentos específicos de DNA chamados
elementos de resposta a um hormônio (HRE). A ligação de um complexo
hormônio−receptor a um HRE aumenta ou diminui a expressão de genes
específicos.
8. A insulina, sintetizada pelo pâncreas em resposta à glicose, liga-se ao
receptor tirosina−cinase. A resposta celular à insulina é a captação de
glicose e ácidos graxos.

Referências
CANTLEY, L.C. The phosphoinositide 3-kinase pathway. Science, 296:1655-7,
2002.
LEHNINGER, A. L. Princípios de bioquímica. 2 ed. São Paulo: Sarvier, 1995.
p. 269-96.
419-36.
Website: http://www.copewithcytokines.de/

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