HbA1c

Glycated Hemoglobin
Latex turbidimetry

Quantitative determination of glycated hemoglobin (HbA1c) in B B

CALCULATIONS
human blood UHbAU1BU c concentration (%)
IVD Plot (ABB) obtained against the HbA1B1c concentration of each calibrator (1 to 4 Level). HbAB1c
percentage in the sample is calculated by interpolation of its absorbance (AB) in the calibration
Store 2 - 8ºC. curve.
PRINCIPLE OF THE METHOD QUALITY CONTROL
This method utilizes the interaction of antigen and antibody to directly determine the HbA1c HbAB1c Control (ref: 43106) is recommended to monitor the performance of manual and
in whole blood. Total hemoglobin and HbAB1c have the same unspecific absorption rate to automated assay procedures. Controls require hemolysis pretreatment after being
latex particles. When mouse antihuman HbAB1c monoclonal antibody is added (R2), latex- reconstituted.
HbA1c-mouse anti human HbAB1c antibody complex is formed. Agglutination is formed when Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions if
goat anti-mouse IgG polyclonal antibody interacts with the monoclonal antibody. The amount controls do not meet the acceptable tolerances.
of agglutination is proportional to the amount of HbA1c absorbed on to the surface of latex
particles. The amount of agglutination is measured as absorbance. The HbAB1c value is REFERENCE VALUES11
obtained from a calibration curve. Recommended Values: less than 6% for a non-diabetic, less than 7% for glycemic control of
a person with diabetes.
CLINICAL SIGNIFICANCE P Each laboratory should establish its own expected values. In using Hemoglobin A1c to
Throughout the circulatory life of the red cell, Hemoglobin A1c is formed continuously by the monitor diabetic patients, results should be interpreted individually. That is, the patient
adduction of glucose to the N-terminal of the hemoglobin beta chain. This process, which is should be monitored against him or herself. There is a 3-4 week time lag before Hemoglobin
non-enzymatic, reflects the average exposure of hemoglobin to glucose over an extended A1c reflects changes in blood glucose level.
period. In a classical study, Trivelli et al1 showed Hemoglobin AB1c in diabetic subjects to be
elevated 2-3 fold over the levels found in normal individuals. Several investigators have PERFORMANCE CHARACTERISTICS
recommended that Hemoglobin A1c serve as an indicator of metabolic control of the diabetic, Measuring range: From detection limit of 2% to linearity limit of 16%.
since Hemoglobin A1c levels approach normal values for diabetics in metabolic control.2,3,4 Precision:
Hemoglobin A1c has been defined operationally as the “fast fraction” hemoglobins (Hb1A, Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
A1B, A1c) that elute first during column chromatography with cation-exchange resins. The Mean (%) 5,95 12,15 5,97 12,21
non-glycosylated hemoglobin, which consists of the bulk of the hemoglobin has been
SD 0,19 0,18 0,14 0,15
designated HbA0. The present procedure utilizes an antigen and antibody reaction to directly
CV (%) 3,20 1,47 2,31 1,24
determine the concentration of the HbAB1c.
Sensitivity: 1% = 0,056 (A)
REAGENTS Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show differences when
compared with other commercial reagent (x). The results obtained using 40 samples were
R1 Latex 0,13%, Buffer, stabilizer. the following:
Mouse anti-human HbA1c monoclonal antibody 0,05mg/ml, Correlation coefficient (r)2 0,995
R2 goat anti-mouse IgG polyclonal antibody 0,08mg/dl, Buffer, Regression equation: y= 0,989x -0,047
stabilizers. The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.

R3 (Hemolysis reagent) Water and stabilizers INTERFERENCES

1. Bilirubin to 50 mg/dL, ascorbic acid to 50 mg/dL, triglycerides to 2000 mg/dL,
Ref: 43105 HbAB1c CALIBRATOR. (4 levels). carbamylated Hb to 7,5 mmol/L and acetylated Hb to 5,0 mmol/L do not interfere in this
Optional
Ref: 43106 HbAB1Bc CONTROL. (2 levels). assay.
2. It has been reported that results may be inconsistent in patients who have the following
PRECAUTIONS
conditions: opiate addiction, lead-poisoning, alcoholism, ingest large doses of aspirin.6,
All human specimens should be regarded as potentially biohazardous. Therefore, universal 7, 8, 9
precautions should be used in specimen handling (gloves, lab garments, avoid aerosol
3. It has been reported that elevated levels of HbF may lead to underestimation of HA 1c
production, etc.).
and, that uremia does not interfere with HbAB1c determination by immunoassay.10 It has
been reported that labile intermediates (Schiff base) are not detected and therefore, do
PREPARATION
not interfere with HbAB1c determination by immunoassay.5
R1, R2 and R3 are ready to use. Mix gently before use.
4. It has been determined that Hemoglobin variants HbA 2, HbC and HbS do not interfere
with this method.
STORAGE AND STABILITY
5. Other very rare variants of hemoglobin (e.g. HbE) have not been assessed.
All the components of the kit are stable until the expiration date on the label when stored
tightly closed at 2-8ºC and contaminations are prevented during their use. Reagents should
NOTES
not be left inside the analyzer after use, they must be stored refrigerated at 2-8ºC. Latex may
1. In order to avoid contamination, it is recommended to use disposable material.
sediment. Mix reagents gently before use. Do not use reagents over the expiration date.
R1 and R2 are stable for at least one month after opening stored at 2-8°C. 2. Use clean disposable pipette for its dispensation.
Reagent deterioration: Alterations in the physical appearance of the reagents or values of 3. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
control materials outside of the manufacturer’s acceptable range may be an indication of
reagent instability. BIBLIOGRAPHY
1. Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971).
ADDITIONAL EQUIPMENT 2. Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978).
- Thermostatic bath at 37ºC. 3. Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop, P.M., J.
- Spectrophotometer or photometer thermostatable at 37ºC with a 660 nm filter. Clin. Endocrinol. Metab. 44, 859 (1977).
- General laboratory equipment (Note 1) 4. Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978).
5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders Company,
SAMPLES p.794-795 (1999).
Special preparation of the patient is unnecessary. Fasting specimens are not required. No 6. Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982).
special additives or preservatives other than anticoagulants are required. Collect venous 7. Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986).
blood with EDTA using aseptic technique. HbAB1c in whole blood collected with EDTA is 8. Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981).
stable for one week at 2-8°C5. 9. Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983).
To determine HbA1c, a hemolysate must be prepared for each sample: 10. Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
1. Dispense 1 mL Hemolysis Reagent into tubes labeled: Calibrator, Control, Patients, 11. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position
etc. Note: Plastic or glass tubes of appropriate size are acceptable. Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).
2. Place 20 µL of well mixed whole blood into the appropriately labeled lyse reagent tube.
Mix. PACKAGING
3. Allow to stand for 5 minutes or until complete lysis is evident. Hemolysates may be
Cont. Ref. 43099 Ref: 43100 Ref: 43101
stored up to 10 days at 2-8°C.
R1: 1x15 mL 1 x 30 mL 1 x 90 mL
PROCEDURE
R2: 1x5 mL 1 x 10 mL 1 x 30 mL
1. Assay conditions:
Wavelength: 660 nm (600 - 660) R3 : 1x60 mL 1 x 125 mL 4 x 125 mL
Temperature: 37ºC
Cuvette ligth path: 1 cm
2. Adjust the instrument to zero with distilled water.
3. Pipette into a cuvette: (Note 2)
R1 (µL) 360
CalibratorP or sample (µL) 10
4. Mix and incubate 5 minutes.
5. Pippete into the cuvette:
R2 (µL) 120
6. Mix and read the absorbance after 5 minutes (ABB) of the R2 addition.

TLIS50-I 22/01/21 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: [email protected]
 HbA1c

Hemoglobina Glicosilada
Turbidimetría Látex

Determinación cuantitativa de la hemoglobina glicosilada (HbA1c) en B B

CALCULOS
sangre humana UCConcentración HbAUBU1CBUc (%)
IVD Representar la absorbancia (A) obtenida frente a las concentraciones de HbA 1c de cada
Conservar a 2 - 8ºC. Calibrador (del 1 al 4). El porcentaje de HbA1c en la muestra se calcula por interpolación de
su absorbancia (A) en la curva de calibración.
PRINCIPIO DEL MÉTODO
Este método utiliza la interacción de antígeno y anticuerpo para determinar directamente CONTROL DE CALIDAD
HbA1c en sangre total. La hemoglobina total y HbA1c tienen la misma absorción inespecífica Se recomienda utilizar sueros control para controlar los ensayos tanto en procedimiento
para las partículas de látex. Cuando se añade el anticuerpo monoclonal anti-HbA1c (ratón) manual como en automático. Spinreact dispone de sueros control HbA1c (Ref: 43106). Los
(R2), se forma el complejo latex- HbA1c- anticuerpo HbA1c de ratón. Se produce aglutinación Controles, una vez reconstituidos, precisan de un tratamiento hemolizante antes de
cuando el anticuerpo policlonal IgG de cabra anti-ratón interacciona con el anticuerpo su uso.
monoclonal. La cantidad de aglutinación es proporcional a la cantidad de HbA 1c absorbida Cada laboratorio debería establecer su propio Control de Calidad y establecer correcciones
en la superficie de las partículas de látex. La cantidad de aglutinación se mide como en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias exigidas.
absorbancia. El valor de HbA1c se obtiene de la curva de calibración.
VALORES DE REFERENCIA11
Valores recomendados: inferior a 6% para no-diabéticos, inferior a 7% para control glicémico
SIGNIFICADO CLÍNICO
de persona con diabetes.
A lo largo de la vida circulatoria de los hematíes, se forma continuamente hemoglobina A1c,
Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. En el
por la adición de glucosa al grupo N- terminal de la cadena beta de la hemoglobina. Este
uso de Hemoglobina A1c para el control de pacientes diabéticos, los resultados se deben
proceso, que es no –enzimático, refleja la exposición media de hemoglobina a glucosa
interpretar individualmente. Significa que el paciente se debe controlar frente a él mismo.
durante un periodo prolongado. En un estudio clásico, Trivelli et al1 mostró que la
Hay un intervalo de tiempo de 3-4 semanas antes que Hemoglobina A1c refleje cambios en
Hemoglobin A1c se incrementa 2-3 veces en individuos con diabetes en comparación con
el nivel de glucosa en sangre.
individuos normales. Varios investigadores han recomendado que Hemoglobina A1c sirve
como indicador del control metabólico de diabéticos, ya que los niveles de Hemoglobina A1C
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
alcanzan valores normales para diabéticos en control metabólico. 2,3,4
Rango de medida: Desde el límite de detección de 2% hasta el límite de linealidad de 16%.
La Hemoglobina A1C se ha definido como la ‘fracción rápida’ de hemoglobina (Hb1A, A1B,
Precisión:
A1c) que eluye la primera en una cromatografía de columna con resinas de intercambio
Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
catiónico. La hemoglobina no-glicosilada, que consiste en la mayor parte de hemoglobina,
se ha designado como HbA0. Este procedimiento utiliza una reacción antígeno-anticuerpo Media (%) 5,95 12,15 5,97 12,21
para determinar directamente la concentración de HbA1c. SD 0,19 0,18 0,14 0,15
CV (%) 3,20 1,47 2,31 1,24
Sensibilidad analítica: 1% = 0,056 (A)
REACTIVOS
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
R1 Latex 0,13%, Tampón, estabilizante. significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Los resultados obtenidos con 40 muestras fueron los siguientes:
Anticuerpo monoclonal anti-HbA1c (ratón) 0,05 mg/mL,
Coeficiente de correlación (r)2: 0,995
R2 anticuerpo policlonal IgG de cabra anti-ratón 0,08 mg/dL,
Ecuación de la recta de regresión: y=0,989x - 0,047
tampón, estabilizantes.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
R3 (Reactivo hemolizante) Agua y estabilizantes
INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES
Ref: 43105 HbAB1Bc CALIBRADOR (4 niveles). 1. Bilirrubina hasta 50 mg/dL, ácido ascórbico hasta 50 mg/dL, triglicéridos hasta 2000
Opcional
Ref: 43106 HbAB1Bc CONTROL. (2 niveles) mg/dL, Hb carbamilada hasta 7,5 mmol/L y Hb acetilada hasta 5,0 mmol/L no interfieren
PRECAUCIONES en el ensayo.
Todas las muestras humanas se deben tratar como potencialmente biopeligrosas. Por tanto 2. Los resultados pueden ser inconsistentes en pacientes con las siguientes condiciones:
se deben usar las precauciones universales de tratamiento de muestras (guantes, adicción de opiáceos, envenenamiento por plomo, alcoholismo, grandes ingestas de
vestimenta de laboratorio, evitar producción de aerosoles, etc.) aspirina..6, 7, 8, 9
3. Se ha demostrado que valores elevados de HbF pueden conducir a una infravaloración
PREPARACION de HA1c, y que la uremia no interfiere con la determinación de HbA1c por
R1, R2 y R3 están listos para su uso. Mezclar suavemente antes de usar. inmunoensayo.10 También se ha demostrado que intermedios lábiles (base Schiff) no
son detectados y no interfieren con la determinación de HbA1C por inmunoensayo.5
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD 4. Se ha determinado que las variantes de Hemoglobina HbA2, HbC y HbS no interfieren
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el con este método.
envase cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, y se evita la contaminación 5. No se han evaluado otras variantes raras de hemoglobina (ej. HbE).
durante su uso. No deben dejarse los reactivos dentro del analizador después de su uso;
conservar refrigerados a 2-8ºC. El látex puede sedimentar. Agitar suavemente los reactivos NOTAS
antes de usar. 1. Para evitar la contaminación, se recomienda el uso de material desechable.
No utilizar reactivos que hayan sobrepasado la fecha de caducidad. 2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
R1 y R2 una vez abiertos son estables durante al menos 1 mes si se conservan a 2-8ºC. 3. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este reactivo
Indicadores de deterioro de los reactivos: Alteraciones en el aspecto físico de los en distintos analizadores.
reactivos o valores de los controles fuera del rango establecido.
BIBLIOGRAFIA
MATERIAL ADICIONAL 1. Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971).
- Baño de agua a 37ºC. 2. Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978).
- Espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a 37ºC para lecturas a 660 nm. 3. Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop, P.M., J.
- Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 1). Clin. Endocrinol. Metab. 44, 859 (1977).
4. Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978).
MUESTRAS 5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders Company,
No es necesaria una preparación especial del paciente, ni condiciones de alimentación p.794-795 (1999).
específicas. No se requiere de otros aditivos ni conservantes especiales aparte de 6. Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982).
anticoagulantes. Recoger la sangre venosa con EDTA usando técnicas asépticas. HbA1c 7. Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986).
en sangre total recogida con EDTA es estable durante 1 semana a 2-8ºC.5 8. Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981).
Para determinar HbA1c, se debe preparar un hemolizado para cada muestra: 9. Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983).
1. Dispensar 1 mL de Reactivo hemolizante en tubos etiquetados: Calibrador, Control, 10. Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
pacientes, etc. Nota: Son válidos tubos de plástico o vidrio de tamaño apropiado. 11. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position
2. Colocar 20 µL de sangre total bien mezclada en el tubo correctamente etiquetado. Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).
Mezclar.
3. Dejar reposar durante 5 minutos o hasta que sea evidente la lisis completa. Los PRESENTACIÓN
hemolizados se pueden conservar durante 10 días a 2-8°C. Cont. Ref. 43099 Ref: 43100 Ref: 43101
PROCEDIMIENTO R1: 1x15 mL 1 x 30 mL 1 x 90 mL
1. Condiciones de ensayo: R2: 1x5 mL 1 x 10 mL 1 x 30 mL
Longitud de onda: 660 nm (600 – 660)
Temperatura: 37ºC R3 : 1x60 mL 1 x 125 mL 4 x 125 mL
Paso de luz de la cubeta: 1 cm
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta (Nota 2).
R1 (µL) 360
Calibrador o muestra (µL) 10
4. Mezclar e incubar 5 minutos.
5. Pipetear en la misma cubeta:
R2 (µL) 120
6. Mezclar y leer la absorbancia (A) a los 5 minutos de la adición del Reactivo R2.

TLIS50-E 22/01/21 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: [email protected]
 HbA1c

Hémoglobine glycosylée
Turbidimétrie Latex

Détermination quantitative de l'hémoglobine glycosylée (HbA1c) dans B B

4. Mélanger et incuber pendant 5 minutes à température ambiante.
le sang humain 5. Pipeter dans la même cuvette :
R2 (µL) 120
IVD
6. Mélanger et lire l'absorbance (A) 5 minutes après l'ajout du Réactif R2.
Conserver à 2 - 8 ºC CALCULS
UCConcentration HbAUBU1cC (%)
PRINCIPE DE LA MÉTHODE Représenter l'absorbance (A) obtenue par rapport aux concentrations de HbA1c de chaque
Cette méthode utilise l'interaction entre l'antigène et l'anticorps, afin de déterminer directement Calibrateur (du 1 au 4). Le pourcentage de HbA1c dans l'échantillon est calculé par interpolation
la HbA1c totale dans le sang. L'hémoglobine totale et la HbA1c ont la même absorption non de son absorbance (A) dans la cuve d'étalonnage.
spécifique pour les particules de latex. En cas d'ajout de l'anticorps monoclonal anti-
HbA1c(souris) (R2), un complexe latex - HbA1c - anticorps HbA1c de souris est formé. Une CONTRÔLE DE QUALITÉ
agglutination a lieu lorsque l'anticorps polyclonal IgG de chèvre anti-souris interagit avec Il est recommandé d'utiliser des sérums de contrôle pour contrôler les essais aussi bien lors
l'anticorps monoclonal. La quantité d'agglutination est proportionnelle à la quantité de HbA1c de procédure manuel qu'automatique, Spinreact dispose de sérums de contrôles HbA1c (Réf :
absorbée sur la surface des particules de latex. La quantité d'agglutination est mesurée comme 43106). Les Contrôles, une fois reconstitués, requièrent un traitement hémolysant avant
absorbance. La valeur de HbA1c est obtenue à partir de la courbe d'étalonnage. leur utilisation.
Chaque laboratoire doit établir son propre Contrôle de Qualité et des corrections en cas de
SIGNIFICATION CLINIQUE non-conformité des contrôles en termes de tolérances exigées.
Tout au long de la vie circulatoire des hématies, de l'hémoglobine A 1c est continuellement
formée en ajoutant du glucose au groupe N-extrême de la chaîne bêta de l'hémoglobine. Ce VALEURS DE RÉFÉRENCE11
processus, qui n’est pas enzymatique, reflète l'exposition moyenne de l'hémoglobine au Valeurs recommandées : inférieure à 6 % pour non-diabétiques, inférieure à 7 % pour contrôle
glucose au cours d'une période prolongée. Dans une étude classique, Trivelli et al1 a montré glycémique de personnes diabétiques.
que l'hémoglobine A1c augmente de 2-3 fois chez les individus diabétiques par rapport aux Chaque laboratoire devrait établir ses propres valeurs de référence. En cas d'utilisation
individus normaux. Plusieurs chercheurs ont recommandé que l'hémoglobine A1c serve d'hémoglobine A1c pour le contrôle de patients diabétiques, les résultats doivent être
d'indicateur du contrôle métabolique de diabétiques, étant donné que les niveaux individuellement interprétés. Ceci signifie que le patient doit être contrôlé par rapport à ses
d'hémoglobine A1c atteignent des valeurs normales chez les diabétiques sous contrôle propres valeurs. Il existe un intervalle de temps de 3-4 semaines avant que l'hémoglobine A1c
métabolique. 2.3.4 ne reflète des variations du niveau de glucose dans le sang.
L'hémoglobine A1c a été définie comme la « fraction rapide » d'hémoglobine (Hb1A, A1B, A1c)
éluée la première dans une chromatographie sur colonne avec des résines échangeuses de CARACTÉRISTIQUES DE LA MÉTHODE
cations. L'hémoglobine non glycosylée, qui représente la plus grande part d'hémoglobine, est Gamme de mesures: Depuis la limite de détection de 2% jusqu’à la limite de linéarité de 16%.
désignée comme HbA0. Cette procédure utilise une réaction antigène-anticorps, afin de Précision:
déterminer directement la concentration de HbA1c. Intra-série (n= 20) Inter-série (n= 20)
Moyenne (mg/dL) 5,95 12,15 5,97 12,21
RÉACTIFS SD 0,19 0,18 0,14 0,15
R1 Latex 0,13 %, Tampon, stabilisant. CV (%) 3,20 1,47 2,31 1,24
Sensibilité analytique: 1 % = 0,056 A.
Anticorps monoclonal anti-HbA1c (souris) 0,05 mg/mL, Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences systématiques
R2 anticorps polyclonal IgG de chèvre anti-souris 0,08 mg/dL, significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs commerciaux (x).
tampon, stabilisants. Les résultats obtenus avec 40 échantillons ont été les suivants:
R3 (Réactif hémolysant) Eau et stabilisants Coefficient de corrélation (r)2: 0,995.
Equation de la Coubre de régression: y=0,989x – 0,047.
Réf : 43105 HbA1c CALIBRATEUR. (4 niveaux)
En option Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur employé.
Réf : 43106 HbA1c CONTRÔLE. (4 niveaux)
INTERFÉRENCES ET LIMITATIONS
PRÉCAUTIONS 1. La bilirubine jusqu'à 50 mg/dL l'acide ascorbique jusqu'à 50 mg/dL, les triglycérides
Tous les échantillons humains doivent être traités comme potentiellement biodangereux. Il faut jusqu'à 2000 mg/dL, la Hb carbamylée jusqu'à 7,5 mmol/L et la Hb acétylée jusqu'à 5,0
donc utiliser les précautions universelles de traitement d'échantillons (gants, vêtements de mmol/L n'interfèrent pas dans l'essai.
laboratoire, éviter la production d'aérosols, etc.). 2. Les résultats peuvent être incohérents chez des patients avec les conditions suivantes :
dépendance aux opiacés, empoisonnement au plomb, alcoolisme, fortes ingestions
PRÉPARATION
d'aspirine.6, 7, 8, 9
R1, R2 et R3 sont prêts à être utilisés. Mélanger doucement avant utilisation.
3. Il a été démontré que des valeurs élevées de HbF peuvent conduire à une sous-estimation
de HbA1cet que l'urémie n'interfère pas dans la détermination de HbA1c par
CONSERVATION ET STABILITÉ
Tous les composants du kit sont stables jusqu'à la date d'expiration indiquée sur l'emballage, immunoessai.10 Il a également été démontré que des intermédiaires labiles (base de
Schiff) ne sont pas détectés et n'interfèrent pas dans la détermination de HbA1c par
lorsque les flacons sont maintenus bien fermés à 2-8 ºC, et en évitant leur contamination lors
de leur utilisation. Les réactifs ne doivent pas être laissés à l'intérieur de l'analyseur après immunoessai.5
utilisation; conserver au réfrigérateur à 2-8 ° C. Le latex peut sédimenter. Agitez doucement 4. Il a été déterminé que les variantes d'hémoglobine HbA2, HbC et HbS n'interfèrent pas
les réactifs avant utilisation. Ne pas utiliser de réactifs après leur date d'expiration. par cette méthode.
5. D'autres variantes rares d'hémoglobine (ex. HbE) n'ont pas été évaluées-
R1 et R2, une fois ouverts, sont stables pendant au moins 1 mois s'ils sont conservés à 2-8ºC.
Indicateurs de détérioration des réactifs : Altérations de l'aspect physique des réactifs ou
valeurs de contrôle hors de la plage établie. REMARQUES
1. Afin d'éviter toute contamination, l'utilisation du matériel jetable est recommandée.
MATÉRIEL SUPPLÉMENTAIRE 2. Utilisez la pipette jetable propre pour la dispensation.
- Bain-marie à 37 ºC. 3. SPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de ce réactif dans
- Spectrophotomètre ou photomètre avec cuvette thermostatable à 37 ºC pour lectures à 660 différents analyseurs.
nm.
- Équipement habituel de laboratoire(Remarque 1). BIBLIOGRAPHIE
1. Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971).
ÉCHANTILLONS 2. Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978).
Aucune préparation particulière du patient ni de conditions spécifiques d'alimentation ne sont 3. Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop, P.M., J.
nécessaires. Aucun additif ni conservateurs particuliers ne sont requis, à l'exception Clin. Endocrinol. Metab. 44, 859 (1977).
d'anticoagulants. Prélever le sang veineux avec de l'EDTA en utilisant des techniques 4. Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978).
aseptiques. L'hémoglobine HbA1c dans le sang totale recueillie avec de l'EDTA est stable 5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders Company,
pendant une semaine à 2-8ºC.5 p.794-795 (1999).
Pour déterminer la HbA1c, il faut préparer un hémolysât pour chaque échantillon : 6. Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982).
1. Distribuer 1 ml de Réactif hémolysant dans des tubes étiquetés : Calibrateur, Contrôle, 7. Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986).
patients, etc. Remarque : Les tubes en plastique ou en verre de taille appropriée sont 8. Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981).
valides. 9. Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983).
2. Placer 20 µL de sang total bien mélangé dans un tube correctement étiqueté. Mélanger. 10. Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
3. Laisser reposer pendant 5 minutes ou jusqu'à ce que la lyse complète soit évidente. Les 11. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position
hémolysâts peuvent être conservés pendant 10 jours à 2-8 °C. Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).

PROCÉDURE PRÉSENTATION
1. Conditions d'essai: Cont.. Réf. 43099 Réf : 43100 Réf : 43101
Longueur d'onde: 660 nm (600 – 660) R1 : 1x15 mL 1 x 30 mL 1 x 90 mL
Température : 37 ºC R2 : 1x5 mL 1 x 10 mL 1 x 30 mL
Passage de lumière de la cuvette. 1 cm R3 : 1x60 mL 1 x 125 mL 4 x 125 mL
2. Ajuster le spectrophotomètre à zéro par rapport à l'eau distillée.
3. Pipeter dans une cuvette: (Remarque 2)
R1 (µL) 360
Calibrateur ou échantillon (µL) 10

TLIS50-F 22/01/21 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) ESPAGNE
Tél. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: [email protected]
 HbA1c

Hemoglobina Glicosilada
Turbidimetria Látex

Determinação quantitativa da hemoglobina glicosilada (HbA1c) em B B

5. Pipetear na mesma cuba:
sangue humano R2 (µL) 120
IVD 6. Misturar e ler a absorbência (A2) depois de 5 minutos de adicionar o reativo R2.
Conservar a 2 - 8ºC.
CÁLCULOS
PRINCIPIO DO MÉTODO UCConcentracão HbA1c (%)
Este método utiliza a interação de antigénio e anticorpo para determinar diretamente HbA1c Representar a absorbência (A) obtida perante as concentrações de HbA1c de cada
em sangue total. A hemoglobina total e HbA1c têm a mesma absorção inespecífica para as Calibrador (do 1 ao 4). A concentração de HbA1c na amostra calcula-se por interpolação
partículas de látex. Quando se acrescenta o anticorpo monoclonal anti- HbA1c (rato) (R2), da sua absorbência (A) na curva de calibração.
forma-se o complexo latex- HbA1c - anticorpo HbA1c de rato. Produz-se aglutinação quando
o anticorpo policlonalIgG de cabra anti-rato interage com o anticorpo monoclonal. A CONTROLO DE QUALIDADE
quantidade de aglutinação é proporcional à quantidade de HbA1c absorvida na superfície Recomenda-se utilizar soros controlo para controlar os ensaios tanto em procedimento
das partículas de látex. A quantidade de aglutinação mede-se como absorbência. O valor manual como em automático. Spinreact dispõe de soros controlo HbA1c (Ref:43106). Os
de HbA1c é obtido da curva de calibração. Controlos, uma vez reconstituídos, precisam de um tratamento hemolizante antes do
seu uso.
SIGNIFICADO CLÍNICO Cada laboratório deveria estabelecer o seu próprio Controlo de Qualidade e determinar
Ao longo da vida circulatória dos hematias, forma-se continuamente hemoglobina A1c, pela correções no caso de que os controlos não cumpram as tolerâncias exigidas.
adição de glucose ao grupo N- terminal da cadeia beta da hemoglobina. Este processo, que
VALORES DE REFERÊNCIA11
é não–enzimático, reflete a exposição média de hemoglobina a glucose durante um período
Valores recomendados: inferior a 6% para não-diabéticos, inferior a 7% para controlo
prolongado. Num estudo clássico, Trivelliet al1 mostrou que a Hemoglobina A1c aumenta
glicémico de pessoa com diabetes.
2-3 vezes em indivíduos com diabetes em comparação com indivíduos normais. Vários
É recomendável que cada laboratório estabeleça os seus próprios valores de referência. No
investigadores recomendaram que a Hemoglobina A1c serve como indicador do controlo
uso de Hemoglobina A1c para o controlo de pacientes diabéticos, os resultados devem ser
metabólico de diabéticos, já que os níveis de Hemoglobina A1c alcançam valores normais
interpretados individualmente. Significa que o paciente se deve controlar perante si mesmo.
para diabéticos em controlo metabólico.2,3,4
Há um intervalo de tempo de 3-4 semanas antes que Hemoglobina A1c mostre mudanças
A Hemoglobina A1c foi definida como a ‘fração rápida’ de hemoglobina (Hb1A, A1B, A1c) que
no nível de glicose no sangue.
elui a primeira numa cromatografia de coluna com resinas de intercambio catiónico. A
hemoglobina não-glicosilada, que consiste na maior parte de hemoglobina, foi designada
CARACTERÍSTICAS DO MÉTODO
como HbA0. Este procedimento utiliza uma reação antígeno-anticorpo para determinar
Intervalo de medição: Do limite de detecção de 2% até ao limite de linearidade de 16%
diretamente a concentração de HbA1c .
Precisão:
Intra-ensaios (n=20) Inter-ensaios (n=20)
REATIVOS Média (mg/dL) 5,95 12,15 5,97 12,21
R1 Latex 0,13%, Tampão, estabilizante. SD 0,19 0,18 0,14 0,15
CV (%) 3,20 1,47 2,31 1,24
Anticorpo monoclonal anti-HbA1c (rato) 0,05 mg/mL,
Sensibilidade analítica: 1 % = 0,056 (A).
R2 anticorpo policlonalIgG de cabra anti-rato 0,08 mg/dL,
Exactidão: Os resultados obtidos utilizando reagentes SPINREACT (y) não demonstraram
tampão, estabilizantes.
diferenças sistemáticas quando comparados com outros reagentes comerciais (x).
R3 (Reativo hemolizante) Água e estabilizantes Os resultados obtidos com 40 amostras foram os seguintes:
Coeficiente de correlação (r)2: 0,995.
Ref: 43105 HbA1c CALIBRADOR (4 níveis). Equação de regressão: y=0,989x - 0,047.
Opcional:
Ref: 43106 HbA1c CONTROL (4 níveis). Os resultados das características de desempenho dependem do analisador utilizado.
PRECAUÇÕES
Todas as amostras humanas devem tratar-se como potencialmente bioperigosas. Portanto, INTERFERÊNCIAS E LIMITAÇÕES
devem ser usadas as precauções universais de tratamento de amostras (luvas, vestimenta 1. Bilirrubina até 50 mg/dL, ácido ascórbico até 50 mg/dL, triglicéridos até 2000 mg/dL,
de laboratório, evitar produção de aerossois, etc.) Hbcarbamilada até 7,5 mmol/L e Hb acetilada até 5,0 mmol/L não interferem no ensaio.
2. Este ensaio não deve utilizar-se como único elemento para o diagnóstico de diabetes
PREPARAÇÃO mellitus. Devem ser considerados também outros testes para estabelecer um correto
R1, R2 e R3 estão prontos para o seu uso. Misturar suavemente antes de usar. diagnóstico.
3. As amostras de pacientes devem avaliar-se sempre usando curva de calibração.
CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE 4. Os resultados podem ser inconsistentes em pacientes com as seguintes condições:
Todos os componentes do kit são estáveis até à data de validade quando se mantêm os adição de opiáceos, envenenamento por chumbo, alcoolismo, grandes ingestões de
recipientes bem fechados a 2-8ºC, e se evita a contaminação durante o seu uso. Os aspirina.6, 7, 8, 9
reagentes não devem ser deixados dentro do analisador após o uso; mantenha refrigerado 5. Demonstrou-se que valores elevados de HbF podem levar a uma infra valoração de
a 2-8ºC. O látex pode sedimentar. Agite suavemente os reagentes antes de usar. HA1c, e que a uremia não interfere com a determinação de HbA1c por imunoensaio.10
Não utilizar reativos que tenham passado a data de validade. Também se demonstrou que intermédios lábeis (base Schiff) não são detetados e não
Depois de abertos, R1 e R2 são estáveis durante pelo menos 1 mês caso se se conservem interferem com a determinação de HbA1c por imunoensaio.5
a 2-8ºC. 6. Determinou-se que as variantes de Hemoglobina HbA2, HbC e HbS não interferem
Indicadores de deterioração dos reativos: Alterações no aspeto físico dos reativos ou com este método.
valores dos controlos fora do intervalo estabelecido. 7. Não foram avaliadas outras variantes raras de hemoglobina (ex. HbE).

MATERIAL ADICIONAL NOTAS

- Banho de água a 37ºC. 1. Afin d'éviter tout contamination, l'utilisation du matériel jetable est recommandée
- Espetrofotómetro ou fotómetro com cuba termostatizável a 37ºC para leituras a 660 nm. 2. Utilizar pontas de pipeta descartáveis limpas para a sua dispensação.
- Equipamento habitual de laboratorio.(Nota 1) 3. A SPINREACT dispõe de instruções detalhadas para a aplicação deste reagente
em diferentes analisadores.
AMOSTRAS BIBLIOGRAFIA
Não é necessária uma preparação especial do paciente, nem condições de alimentação 1. Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971).
específicas. Não requerem outros aditivos nem conservantes especiais além de 2. Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978).
anticoagulantes. Recolher o sangue venoso com EDTA usando técnicas asséticas. HbA1c 3. Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop, P.M., J.
em sangue total recolhido com EDTA é estável durante uma semana a 2-8°C.5 Clin. Endocrinol. Metab. 08008005000
Para determinar HbA1c, deve preparar-se um hemolizado para cada amostra: 4. Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978).
1. Dispensar 1 mL de Reactivohemolizante em tubos etiquetados: Calibrador, Controlo, 5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders Company,
pacientes, etc. Nota: São válidos tubos de plástico ou vidro de tamanho apropriado. p.794-795 (1999).
2. Colocar 20 µL de sangue total bem misturado no tubo corretamente etiquetado. 6. Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982).
Misturar. 7. Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986).
3. Deixar repousar durante 5 minutos ou até que seja evidente a lises completa. Os 8. Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981).
hemolizados podem conservar-se durante 10 dias a 2-8°C. 9. Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983).
PROCEDIMENTO 10. Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
1. Condições do ensaio: 11. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position
Comprimento de onda: 660 nm (600 – 660) Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).
Temperatura: - 37ºC
Passagem de luz da cuba: 1 cm APRESENTAÇÃO
2. Ajustar o espetrofotómetro a zero perante água destilada. Cont. Ref. 43099 Ref: 43100 Ref: 43101
3. Pipetear numa cuba: (Nota 2) R1: 1x15 mL 1 x 30 mL 1 x 90 mL
R1 (µL) 360 R2: 1x5 mL 1 x 10 mL 1 x 30 mL
Calibrador ou amostra (µL) 10 R3: 1x60 mL 1 x 125 mL 4 x 125 mL
4. Misturar e incubar 5 minutos.

TLIS50-P 22/01/21 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: [email protected]