TOTAL PROTEIN

(BIURET) REAGENT

PERFORMANCE
INTENDED USE ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT PROVIDED: Linearity:
For the in vitro quantitative determination of Total Protein concentration in serum. 1. A clinical chemistry analyzer capable maintaining constant temperature (37°C), and When run as recommended the assay is linear from 0.1 – 15.0 g/dL.
measuring absorbance at 540nm.
SUMMARY AND EXPLANATION 1 2. Iron-free deionized water and related equipment, e.g.: pipettes Method Comparison:
Total Protein test system is a device intended to measure total protein (s) in serum or 3. Analyzer specific consumables, e.g.: sample cups Studies performed between this procedure and another procedure based on the same
plasma. Measurements obtained by this device are used in the diagnosis and treatment of 4. Control and Calibrator materials, such as those provided by JAS Diagnostics. principle yielded the following results:
a variety of diseases involving the liver, kidney, or bone marrow as well as other Number of sample pairs: 57
metabolic or nutritional disorders. ASSAY PROCEDURE Range of samples: 1.6 – 13.7 (g/dL)
These instructions are to be used as a general guideline for adapting to select automated Correlation Coefficient: 0.9960
METHODOLOGY
The color reaction of protein molecules with cupric ions, known as the Biuret color reaction, has been instruments. Refer to your specific JAS instrument application instructions available Slope: 1.067
known since 1878. Since the Riegler 2 publicatlons of 1914, several attempts have been made to stabilize the upon request. Intercept: 0.01 (g/dL)
3,4
cupric ions in the alkaline reagent. Kingsley, modified the procedure. In 1939 and 1942 to include the
use of sodium potassium tartrate as a complexing agent. This procedure was later modified by System Parameters Precision:
Weichselbaum5 and Gornall6. The present method is based on these modifications. Total Protein Within Run Level 1 Level 2 Level 3
Principle
TEMPERATURE: 37°C Mean (g/dL) 4.65 7.45 13.60
Alkali WAVELENGTH: 540 nm S.D. (g/dL) 0.03 0.05 0.10
Protein + Cu++ Colored Complex DIRECTION: Increase C.V. (%) 0.7 0.7 0.8
SAMPLE / RGT RATIO: 1 : 50
Protein in serum forms a blue colored complex when reacted with cupric ions in an alkaline solution. The Total Level 1 Level 2 Level 3
e.g. Sample Vol. 0.02 mL (20L)
intensity of the violet color is proportional to the amount of protein present when compared to a solution
with known protein concentration. Reagent Vol. 1.0 mL S.D. (g/dL) 0.05 0.09 0.15
REACTION TIME: 5 Min C.V. (%) 1.1 1.1 1.1
REAGENT COMPOSITION
Active Ingredients Concentrations Procedure Notes Sensitivity:
Sodium Hydroxide 600mM 1. Final color is stable for 60 minutes at room temperature. A calibration factor of approximately 37.45 obtained, which is equivalent to a sensitivity
Cupric Sulfate 12mM 2. Serums with values above 15.0 g/dL should be diluted 1:1 with 0.9% saline, and the of 0.027 Abs per g/dL.
Potassium Sodium Tartrate 32mM final answer multiplied by two.
Potassium Iodide 30mM 3. The reagent and sample volumes may be altered proportionally to accommodate Limit of Detection:
pH 13.5 +/- 0.2 at 2-25˚C various instrument requirements. The limit of detection was found to be 0.1 g/dL.
Precautions
1. This reagent is for in vitro diagnostic use only. Calculation * NOTE: Performance established on the Synchron CX.
2. Avoid Ingestion. DO NOT PIPETTE BY MOUTH. In case of ingestion drink large Abs = Absorbance
amounts of water and seek medical attention quickly.
3. Avoid contact with skin and eyes. The reagent contains sodium hydroxide which is Abs. of unknown x conc. of std. = total protein (g/dL)
corrosive. In case of contact with skin, flush with water. For eyes, seek medical Abs. of standard REFERENCES
attention. 1. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, W.B.
Example: Saunders, Philadelphia, p, 692 (1986).
REAGENT PREPARATION Absorbance of unknown = 0.350 2. Riegier, E., Anal. Chem. 53:242 (1914).
Reagent is supplied ready to use. Absorbance of standard = 0.400 3. Kingsley, G.R., J. Biol. Chem. 131:197 (1939).
Concentration of standard = 8 g/dL 4. Kingsley, G.R., J. Lab. Clin. Med. 27:840 (1942).
REAGENT STORAGE 5. Weichselbaum, T., Amer. J. Clin. Path. 16:40
Store reagent at room temperature (15-25˚C). Then: (1946).
0.350 x 8 = 7.00 g/dL 6. Gornall, A., et al, J. Biol. Chem. 177:752 (1949).
REAGENT DETERIORATION 0.400 7. Henry, R.J., et al, Clinical Chemistry: Principals and Technics, Harper & Row, New
The reagent should be a clear pale blue solution. Turbidity or the presence of a black York, p. 415 (1974),
precipitate indicates reagent deterioration and should not be used. Limitations 8. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
1. Samples with values above 15.0 g/dL should be diluted 1:1 with 0.9% saline, re-run 9. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B. Saunders, Philadelphia, p,
SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE and result multiplied by two. 299 (1976).
1. Unhemolyzed serum is the specimen of choice. 2. The Biuret procedure is not sensitive at low ranges (<1g/dL). Do not use for urine or
2. Gross hemolysis will cause elevated results because of the released hemoglobin as spinal fluid.
well as the increase in background color. JAS Diagnostics, Inc.
3. Lipemic sera may cause elevated results. CALIBRATION 14100 NW 57th Court Miami Lakes Florida 33014
4. Samples with bromosulfophthaleln (BSP) will result in falsely elevated results. 9 Use an aqueous Total protein standard or an appropriate serum calibrator. Refer to Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
5. Protein in serum is stable for one week at room temperature (18 - 25°C) and for at appropriate instrument operator manual for recommended clibrator interval. www.jasdiagnostics.com
least one month refrigerated (2 – 8°C) when guarded against evaporation. 7
QUALITY CONTROL
INTERFERENCES The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with known Total
Studies to determine the level of interference for hemoglobin, bilirubin, and lipernia were Protein values. Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
carried out, the following results were obtained: Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
Hemoglobin: No significant interference ( 10%) from hemoglobin up to 100 mg/dL. Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
Bilirubin:No significant interference ( 10%) from bilirubin up to 20.0 mg/dL. EXPECTED VALUES9 Email: [email protected]
Lipemia: No significant interference (+10%) from lipemia up to 196 mg/dL measured 6.2 – 8.5 g/dL
as triglycerides. 1. The effect of posture, when blood is drawn, varies with the individual but recumbent
Young, 8 et al has reviewed a number of drugs and substances that may affect protein values are usually lower than ambulatory. Differences may be as much as 1.2 g/dL.
concentrations. 2. It is strongly recommended that each laboratory establish its own normal range.

PI:TPT2.JS04 REV:10/19/09
 PROTEINA TOTAL

LIMITACIONES:
EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO PERO NO INCLUIDO: 1. La muestra con valor mayor a 15.0 g/dL debe ser diluida 1:1 con 0.9% solución
1. Analizador de química clínica capaz de mantener temperatura de 37°C constante salina y ensayada nuevamente. El resultado final debe ser multiplicado por dos.
y medir absorbancia a 540 NM. 2. El procedimiento Biuret no es sensible a rangos tan bajos como <1 g/dL. No se
2. Agua desionizada y equipo relacionado, ejemplo, Pipetas, puntas, tubos, etc. recomienda usar para orina o fluido espinal.
USO: 3. Consumibles específicos para el analizador ejemplo, copillas de muestras, celdas VALORES ESPERADOS: 8
Reactivo usado para la determinación cuantitativa “in Vitro” de Proteína Total en de reacción. 6.2– 8.5 g/dL
muestras de suero humano. 4. Sueros control Nivel 1 y 2, como el proporcionado por JAS 1. El efecto de la postura, al momento de toma de muestra, varia con el individuo,
pero los valores de pacientes que se encuentran reclinados son usualmente
RESUMEN: PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO: menores que los ambulatorios. Pueden encontrarse diferencias de hasta 1.2 g/dL
La prueba de ensayo de Proteína Total es usada para medir Proteína Total en suero y Procedimiento para uso manual. 2. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal.
plasma. Las medidas obtenidas por este ensayo son usadas en el diagnostico y 1) El reactivo está listo para su uso.
tratamiento de una variedad de enfermedades que involucran al hígado, riñones y la 2) Identificar perfectamente los tubos de prueba, tanto para controles, estándar y DESEMPEÑO:
medula ósea así como otros desordenes metabólicos o nutricionales. muestras desconocidas. Linealidad.
3) Coloque 1000 µL de reactivo en cada tubo de prueba e incubar a 37ºC. Cuando se trabaja de acuerdo a las recomendaciones de la prueba, el ensayo es lineal de
MÉTODO: 4) Agregar 20 µL de estándar, muestra problema y/o suero control a su 0.1 – 15.0 g/dL
La reacción color de moléculas de proteína con iones cúpricos, conocidos como reacción color Biuret, se correspondiente tubo de prueba. Mezclar mientras se mantiene constante la
conoce desde 1878. Desde la publicaciones de Riegler1 en 1914, varios intentos para estabilizar los iones
cúprico en reactivo alcalino han sido realizados. Kingsley2,3 modificó este procedimiento en 1939 y 1942 temperatura. COMPARACIÓN DEL MÉTODO:
para incluir el uso de tartrato sodio potasio como un agente complejo. Este procedimiento fue mas tarde 5) Incubar todos los tubos a 37ºC. durante 5 minutos. Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios realizados entre este
modificado por Weichselbaum4 y Gornall5. El presente método es basado en estas modificaciones. 6) Ajustar a cero el espectrofotómetro con blanco de reactivo a 540 NM. procedimiento y uno similar:
7) Leer y registrar la absorbancia exactamente a los 5 minutos después de la N: 57
PRINCIPIO: adición de la muestra, tome la absorbancia del estándar y controles de la Rango de muestra: 1.6 – 13.7 (g/dL)
Proteína + Cu++ Álcali Complejo Color misma forma. Coeficiente de Correlación 0.9960
Nota 1: Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente Pendiente 1.067
para adaptarlos a los requisitos de varios instrumentos. Intersección 0.01 g/dL
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO:
Ingredientes Activos Concentración Procedimiento automatizado. Precisión:
Hidróxido de Sodio 600mM
Sulfato de cobre 12mM Para este procedimiento siga las instrucciones contenidas en el manual de operación del Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Tartratosodio de potasio 32mM analizador. Se encuentran disponibles a petición las aplicaciones de los reactivos JAS Promedio (g/dL) 4.65 7.45 13.60
Yoduro de potasio 30mM para los analizadores más comunes. S.D. (g/dL) 0.03 0.05 0.10
pH 13.5 + 0.2 a 25°C C.V.(%) 0.7 0.7 0.8
Estas instrucciones son utilizadas como una guía general para la adaptación al
PRECAUCIONES: instrumento automatizado disponible por el usuario. Entre Series: Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
1. Este reactivo es solo para uso de diagnostico “in vitro”. S.D. (g/dL) 0.05 0.09 0.15
2. Evite ingestión. No pipetear con la boca. En caso de ingestión tome abundante PARÁMETROS: C.V.(%) 1.1 1.1 1.1
agua y busque atención médica rápidamente. Proteína Total
3. Evite contacto con la piel y ojos. Este reactivo contiene hidróxido de sodio el Temperatura de incubación: 37°C. Sensitividad:
cual es corrosivo. Si ocurre contacto con la piel, lave las áreas afectadas con Longitud de Onda 540 NM. Un factor de calibración aproximado de 37.45 obtenido, lo cual es equivalente a una
abundante agua. Si ocurre contacto con los ojos, busque atención médica Tipo de Ensayo: Punto Final sensitividad de 0.027 Abs por g/dL.
inmediatamente. Dirección: Creciente
Proporción: Muestra / reactivo 1:50 Limite bajo de medida:
ALMACENAJE DEL REACTIVO: Volumen de Muestra 20L El limite inferior de deteccion es 0.1 g/dL
1. Almacenar el reactivo a temperatura ambiente (de 15 a 25°C) Volumen de Reactivo 1.0 mL Nota: Estudios realizados en Synchron CX.
2. El reactivo es estable hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta. Tiempo de incubación: 5 minutos
REFERENCIAS:
DETERIORO DEL REACTIVO: NOTAS DEL PROCEDIMIENTO: 1. Riegier, E., anal. Chem. 53:242 (1914).
El reactivo es una solución azul claro. Turbidez o la presencia de precipitante negro 1) El color final es estable por 60 minutos a temperatura ambiente. 2. Kingsley, G.R., J. Biol. Chem. 131:197 (1939)
indica deterioro del reactivo por lo que no debe ser utilizado. 2) Sueros con valores sobre 15.0g-dL deben ser diluidos 1:1 con 0.9% solución 3. Kingsley, G.R., J. Lab. Clin. Med. 27:840 (1942)
salina, y el resultado final multiplicado por 2. 4. Weichselbaum, T., Amer. J. clin. Path. 16:40 (1946)
COLECCIÓN Y ALMACENAJE DE LA MUESTRA: 5. Gornall, A., et al, J. Biol. Chem. 177:752 (1949)
Debe usarse muestras NO hemolizadas. CÁLCULOS: 6. Henry, R.J. et al, Clinical Chemistry: Principals and Technics, Harper & Row,
Muestras hemolizadas pueden dar resultados altos falsos, porque libera hemoglobina así Abs. de la muestra New York p.415 (1974)
como aumenta el color del fondo. X Valor del Estándar (g/dL) = Proteína Total 7. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B. Saunders, Philadelphia,
Sueros lipémicos causan resultados elevados. Abs del Estándar p, 299 (1976).
Muestras con bromosulfonaftaleina (BSP) darán resultados falsos. 8
Proteína en suero es estable por 1 semana si es almacenado a temperatura ambiente (de Ejemplo: JAS Diagnostics, Inc.
18 a 25°C). Por un mes a (2 – 8°C) si es congelado y protegido contra evaporación. 6 Absorbancia de la muestra = 0.350 14100 NW 57th Court Miami Lakes Florida 33014
Absorbancia del Estándar = 0.400 Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
PREPARACIÓN DEL REACTIVO: Valor del Estándar = 8 g/dL www.jasdiagnostics.com
El reactivo está listo para usarse.
0.350 Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
INTERFERENCIA: x 8 = 7 g/dL Proteína Total
Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
Hemoglobina: No interferencia significativa (+10) de hemoglobina hasta 100 mg/dL. 0.400
Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
Bilirrubina: No interferencia significativa (+10) de bilirrubina hasta 20.0 mg/dL. Email: [email protected]
Lipemia: No interferencia significativa (+10) de lipemia bilirrubina hasta 196 mg/dL. CALIBRACIÓN:
Algunas drogas y substancias afectan las concentraciones de Colesterol. Ver Young, Se requiere calibración. Este ensayo requiere el uso de un estándar o Estándar apropiado
D.S.1Algunas drogas y substancias afectan los resultados de bilirrubina. Ver Young, et con valores conocidos de Proteína Total, tal como el Estándar de JAS
al.7
CONTROL DE CALIDAD:
La integridad de la reacción debe ser valorada con el uso de dos Sueros Control niveles 1
PI:TPT2.JS04 REV:10/19/09
y 2, con valores conocidos de Proteína Total.