Get ebook downloads in full at ebookmeta.

com

MicroRNA Profiling Methods and Protocols 2nd

Edition Sweta Rani

https://ebookmeta.com/product/microrna-profiling-methods-
and-protocols-2nd-edition-sweta-rani-2/

OR CLICK BUTTON

DOWNLOAD NOW

Explore and download more ebook at https://ebookmeta.com

 Recommended digital products (PDF, EPUB, MOBI) that
you can download immediately if you are interested.

MicroRNA Profiling Methods and Protocols 2nd Edition Sweta

Rani

https://ebookmeta.com/product/microrna-profiling-methods-and-
protocols-2nd-edition-sweta-rani-2/

ebookmeta.com

Antibiotics Methods and Protocols 2nd Edition Peter Sass

https://ebookmeta.com/product/antibiotics-methods-and-protocols-2nd-
edition-peter-sass-2/

ebookmeta.com

Peroxisomes Methods and Protocols 2nd edition Michael

Schrader

https://ebookmeta.com/product/peroxisomes-methods-and-protocols-2nd-
edition-michael-schrader/

ebookmeta.com

The Whispering Dead 1st Edition David Mark

https://ebookmeta.com/product/the-whispering-dead-1st-edition-david-
mark/

ebookmeta.com
Multiplexed Imaging Eli Zamir

https://ebookmeta.com/product/multiplexed-imaging-eli-zamir/

ebookmeta.com

Transnational Social Mobilisation and Minority Rights

Identity Advocacy and Norms Routledge Studies in
Development and Society 1st Edition Corinne Lennox
https://ebookmeta.com/product/transnational-social-mobilisation-and-
minority-rights-identity-advocacy-and-norms-routledge-studies-in-
development-and-society-1st-edition-corinne-lennox/
ebookmeta.com

The Reel World Scoring for Pictures Television and Video

Games 3rd Edition Jeff Rona

https://ebookmeta.com/product/the-reel-world-scoring-for-pictures-
television-and-video-games-3rd-edition-jeff-rona/

ebookmeta.com

The Comintern and the Global South Global Designs Local

Encounters 1st Edition Anne Garland Mahler

https://ebookmeta.com/product/the-comintern-and-the-global-south-
global-designs-local-encounters-1st-edition-anne-garland-mahler/

ebookmeta.com

The Handbook of Natural Resources Second Edition Six

Volume Set Yeqiao Wang

https://ebookmeta.com/product/the-handbook-of-natural-resources-
second-edition-six-volume-set-yeqiao-wang/

ebookmeta.com
Disney Junior Mickey Friendship Tales Disney Books

https://ebookmeta.com/product/disney-junior-mickey-friendship-tales-
disney-books/

ebookmeta.com
Methods in
Molecular Biology 2595

Sweta Rani Editor

MicroRNA
Profiling
Methods and Protocols
Second Edition
METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY

Series Editor
John M. Walker
School of Life and Medical Sciences
University of Hertfordshire
Hatfield, Hertfordshire, UK

For further volumes:

http://www.springer.com/series/7651
For over 35 years, biological scientists have come to rely on the research protocols and
methodologies in the critically acclaimed Methods in Molecular Biology series. The series was
the first to introduce the step-by-step protocols approach that has become the standard in all
biomedical protocol publishing. Each protocol is provided in readily-reproducible step-by-
step fashion, opening with an introductory overview, a list of the materials and reagents
needed to complete the experiment, and followed by a detailed procedure that is supported
with a helpful notes section offering tips and tricks of the trade as well as troubleshooting
advice. These hallmark features were introduced by series editor Dr. John Walker and
constitute the key ingredient in each and every volume of the Methods in Molecular Biology
series. Tested and trusted, comprehensive and reliable, all protocols from the series are
indexed in PubMed.
 MicroRNA Profiling

Methods and Protocols

Second Edition

Edited by

Sweta Rani
Department of Science, South East Technological University, Waterford, Ireland
Editor
Sweta Rani
Department of Science
South East Technological University
Waterford, Ireland

ISSN 1064-3745 ISSN 1940-6029 (electronic)

Methods in Molecular Biology
ISBN 978-1-0716-2822-5 ISBN 978-1-0716-2823-2 (eBook)
https://doi.org/10.1007/978-1-0716-2823-2
© The Editor(s) (if applicable) and The Author(s), under exclusive license to Springer Science+Business Media, LLC, part
of Springer Nature 2023
This work is subject to copyright. All rights are solely and exclusively licensed by the Publisher, whether the whole or part
of the material is concerned, specifically the rights of translation, reprinting, reuse of illustrations, recitation,
broadcasting, reproduction on microfilms or in any other physical way, and transmission or information storage and
retrieval, electronic adaptation, computer software, or by similar or dissimilar methodology now known or hereafter
developed.
The use of general descriptive names, registered names, trademarks, service marks, etc. in this publication does not imply,
even in the absence of a specific statement, that such names are exempt from the relevant protective laws and regulations
and therefore free for general use.
The publisher, the authors, and the editors are safe to assume that the advice and information in this book are believed to
be true and accurate at the date of publication. Neither the publisher nor the authors or the editors give a warranty,
expressed or implied, with respect to the material contained herein or for any errors or omissions that may have been
made. The publisher remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and institutional affiliations.

This Humana imprint is published by the registered company Springer Science+Business Media, LLC, part of Springer
Nature.
The registered company address is: 1 New York Plaza, New York, NY 10004, U.S.A.
Preface

microRNAs (miRNAs) are small non-coding RNAs. miRNAs play a central role in regulat-
ing the expression of genes at the post-translation level. One miRNA can bind to multiple
mRNAs and have multiple binding sites regulating multiple targets and pathways. Dysre-
gulation of miRNAs is associated with several diseases and is a key regulator of several
biological processes. Expression of miRNAs can be detected in tissue specimens, biological
fluids, as well as cell lines and have a potential as biomarkers for therapeutical and medicinal
interventions.
This is the second edition of microRNA Profiling from the Methods in Molecular
Biology series. This book collates chapters contributed by experts in their respective fields.
It includes both classical techniques and newer approaches to isolate and profile miRNAs.
The chapters describe detailed step-by-step protocol and troubleshooting tips ensuring
successful experiment.
This volume includes chapters that comprehensively describe miRNA biogenesis and its
function in regulating progression of several diseases. The first few chapters describe
optimised protocol of isolating RNA from various samples including exosomes, serum
specimens and cell lines and determine the quality and quantity of RNA. 3D cell culture
allows the cells to interact with their surroundings in all the three dimensions. Two of the
chapters in this book describe the 3D techniques used to culture cells and ways to transfect
miRNAs.
Exosomes or extracellular vesicles (EVs) are secreted by almost all cell types and are one
of the mechanisms of intercellular communication. EVs are known to contain not only
RNAs, proteins, lipids and metabolites but also miRNAs. miRNAs encapsulated in these
EVs are protected from degradation by plasma ribonucleases. Circulating miRNAs hold
immense potential as diagnostic, prognostic and/or predictive biomarkers. Some of the
chapters compare and contrast various methods to profile exosomal miRNA.
The last two chapters include easy-to-follow protocol for analysing miRNA profiling
data, reducing technical difficulties. Galaxy software is used to analyse genomic data includ-
ing miRNA and miRDeep2 for identification and quantification of miRNA from sequencing
data. miRDeep-P2 can also be used for miRNA annotation in plants using deep
sequencing data.

Waterford, Ireland Sweta Rani

v
Contents

Preface . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . v
Contributors. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ix
1 miRNA Biogenesis and Regulation of Diseases: An Updated Overview . . . . . . . . 1
Anchal Vishnoi and Sweta Rani
2 Exosomal MicroRNA Profiling . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
Neda Rahimian, Javid Sadri Nahand, Michael R. Hamblin,
and Hamed Mirzaei
3 MicroRNA Expression Profiling Using Agilent One-Color Microarray . . . . . . . . 49
Carmela Dell’Aversana, Giulia Sgueglia, Nunzio Del Gaudio,
and Lucia Altucci
4 A Simple Method for Profiling and Analyzing MicroRNAs
from Small Volume Samples Using a qPCR-Based Platform . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
Aisling Leavy and Eva M. Jimenez-Mateos
5 Exosomal MicroRNAs: Comprehensive Methods from Exosome
Isolation to miRNA Extraction and Purity Analysis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
D’Agostino Erika, Muro Annamaria, Sgueglia Giulia,
Massaro Crescenzo, Dell’Aversana Carmela, and Altucci Lucia
6 Detection of MicroRNAs in Brain Slices Using In Situ Hybridization . . . . . . . . . 93
Sean Quinlan, Christine Henke, Gary P. Brennan,
David C. Henshall, and Eva M. Jimenez-Mateos
7 MicroRNA Profiling of Cell Lines and Xenografts by Quantitative
PCR: MicroRNA Expression Level Determination by qPCR . . . . . . . . . . . . . . . . . 101
Ariadna Boloix and Miguel F. Segura
8 Assessment of Basic Biological Functions Exerted by miRNAs . . . . . . . . . . . . . . . . 115
Ellen King, John Nolan, and Olga Piskareva
9 Serum MicroRNAs Profiling in Age-Related Macular Degeneration . . . . . . . . . . . 123
Hanan Elshelmani, David Keegan, and Sweta Rani
10 Exosomal MicroRNA Discovery in Age-Related Macular Degeneration . . . . . . . 137
Hanan Elshelmani and Sweta Rani
11 MicroRNA Profiling Using a PCR-Based Method . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159
Giuliana A. de Ferronato, Marcela B. Cerezetti, Alessandra Bridi,
Cibele M. Prado, Gislaine dos Santos, Natália M. Bastos,
Paola M. S. da Rosa, Juliana G. Ferst, and Juliano C. da Silveira
12 Guidelines on Designing MicroRNA Sponges: From Construction
to Stable Cell Line . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171
Manoela Marques Ortega and Hakim Bouamar
13 Evaluating Single-Nucleotide Variants in MicroRNA Targeting Sites
and Mature MicroRNA In Vitro Cell Culture by Luciferase
Reporter Gene Assays . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 185
Jéssica Silva dos Santos, Gabriel Alves Bonafé, Gustavo Jacob Lourenço,
and Manoela Marques Ortega
vii
viii Contents

14 Assessment of Cell Cytotoxicity in 3D Biomaterial Scaffolds

Following miRNA Transfection. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 203
Elizabeth Sainsbury, Lara Costard, Fergal J. O’Brien,
and Caroline M. Curtin
15 Evaluation of miRNA Expression in 3D In Vitro Scaffold-Based
Cancer Models . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 211
Catherine Murphy, Ciara Gallagher, and Olga Piskareva
16 Bioinformatics Analysis of miRNA Sequencing Data . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 225
Hrishikesh A. Lokhande
17 Plant MicroRNA Identification and Annotation Using Deep
Sequencing Data. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 239
Zheng Kuang, Yongxin Zhao, and Xiaozeng Yang

Index . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 251
Contributors

LUCIA ALTUCCI • Institute Experimental Endocrinology and Oncology ‘Gaetano Salvatore’

(IEOS)-National Research Council (CNR), Naples, Italy; Department of Precision
` degli studi della Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy;
Medicine, Universita
BIOGEM, Ariano Irpino, Italy
MURO ANNAMARIA • Department of Precision Medicine, Universita ` degli studi della
Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy; Università degli studi di Napoli “Federico
II”, Naples, Italy
NATÁLIA M. BASTOS • Department of Veterinary Medicine, College of Animal Sciences
and Food Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
ARIADNA BOLOIX • Group of Childhood Cancer and Blood Disorders, Hospital Universitari
Vall d’Hebron, Vall d’Hebron Institut de Recerca, VHIR, Universitat Autònoma de
Barcelona, Barcelona, Spain
GABRIEL ALVES BONAFÉ • Laboratory of Cell and Molecular Tumor Biology and Bioactive
Compounds, São Francisco University, Bragança Paulista, São Paulo, Brazil
HAKIM BOUAMAR • Department of Cellular and Structural Biology, University of Texas
Health Science Center at San Antonio, San Antonio, TX, USA
GARY P. BRENNAN • Discipline of Physiology, School of Medicine, Trinity College Dublin,
The University of Dublin, Dublin 2, Ireland
ALESSANDRA BRIDI • Department of Veterinary Medicine, College of Animal Sciences
and Food Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
DELL’AVERSANA CARMELA • Department of Precision Medicine, Universita ` degli studi della
Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy; Institute Experimental Endocrinology and
Oncology ‘Gaetano Salvatore’ (IEOS)-National Research Council (CNR), Naples, Italy
MARCELA B. CEREZETTI • Department of Veterinary Medicine, College of Animal Sciences
and Food Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
LARA COSTARD • Department of Anatomy & Regenerative Medicine, Tissue Engineering
Research Group (TERG), Royal College of Surgeons in Ireland (RCSI), Dublin, Ireland
MASSARO CRESCENZO • Department of Precision Medicine, Università degli studi della
Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy
CAROLINE M. CURTIN • Department of Anatomy & Regenerative Medicine, Tissue
Engineering Research Group (TERG), Royal College of Surgeons in Ireland (RCSI),
Dublin, Ireland; Trinity Centre for Biomedical Engineering (TCBE), Trinity College
Dublin (TCD), Dublin, Ireland; Advanced Materials and Bioengineering Research
Centre (AMBER), RCSI and TCD, Dublin, Ireland
PAOLA M. S. DA ROSA • Department of Veterinary Medicine, College of Animal Sciences and
Food Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
JULIANO C. DA SILVEIRA • Department of Veterinary Medicine, College of Animal Sciences
and Food Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
GIULIANA A. DE FERRONATO • Department of Veterinary Medicine, College of Animal
Sciences and Food Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
NUNZIO DEL GAUDIO • Department of Precision Medicine, Universita ` degli studi della
Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy

ix
x Contributors

CARMELA DELL’AVERSANA • Department of Precision Medicine, Universita ` degli studi della

Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy; Institute Experimental Endocrinology and
Oncology ‘Gaetano Salvatore’ (IEOS)-National Research Council (CNR), Naples, Italy
GISLAINE DOS SANTOS • Department of Veterinary Medicine, College of Animal Sciences
and Food Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
JÉSSICA SILVA DOS SANTOS • Laboratory of Cell and Molecular Tumor Biology and Bioactive
Compounds, São Francisco University, Bragança Paulista, São Paulo, Brazil
HANAN ELSHELMANI • Mater Vision Institute, The Mater Misericordiae University Hospital,
Dublin, Ireland; Zoology Department, School of Natural Sciences, Trinity College Dublin,
Dublin, Ireland
D’AGOSTINO ERIKA • Department of Precision Medicine, Università degli studi della
Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy
JULIANA G. FERST • Department of Veterinary Medicine, College of Animal Sciences and Food
Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
CIARA GALLAGHER • Department of Anatomy and Regenerative Medicine, Cancer
Bioengineering Group, RCSI University of Medicine and Health Sciences, Dublin, Ireland;
School of Pharmacy and Biomolecular Sciences, RCSI University of Medicine and Health
Sciences, Dublin, Ireland; Department of Anatomy and Regenerative Medicine, Tissue
Engineering Research Group, RCSI University of Medicine and Health Sciences, Dublin,
Ireland
SGUEGLIA GIULIA • Department of Precision Medicine, Università degli studi della
Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy
MICHAEL R. HAMBLIN • Laser Research Centre, Faculty of Health Science, University of
Johannesburg, Doornfontein, South Africa
CHRISTINE HENKE • Discipline of Physiology, School of Medicine, Trinity College Dublin,
The University of Dublin, Dublin 2, Ireland
DAVID C. HENSHALL • Discipline of Physiology, School of Medicine, Trinity College Dublin,
The University of Dublin, Dublin 2, Ireland
EVA M. JIMENEZ-MATEOS • Discipline of Physiology, School of Medicine, Trinity College
Dublin, The University of Dublin, Green College, Dublin, Ireland; Discipline of Physiology,
School of Medicine, Trinity College Dublin, The University of Dublin, Dublin 2, Ireland
DAVID KEEGAN • Mater Vision Institute, The Mater Misericordiae University Hospital,
Dublin, Ireland
ELLEN KING • Department of Anatomy and Regenerative Medicine, Cancer Bio-
Engineering Group, Royal College of Surgeons in Ireland, Dublin, Ireland; School of
Pharmacy and Biomolecular Sciences, Royal College of Surgeons in Ireland, Dublin,
Ireland
ZHENG KUANG • Beijing Agro-biotechnology Research Center, Beijing Key Laboratory
of Agricultural Genetic Resources and Biotechnology, Beijing Academy of Agriculture
and Forestry Sciences, Beijing, P.R. China
AISLING LEAVY • Discipline of Physiology, School of Medicine, Trinity College Dublin,
The University of Dublin, Green College, Dublin, Ireland
HRISHIKESH A. LOKHANDE • Brigham and Women’s Hospital, Boston, MA, USA
GUSTAVO JACOB LOURENÇO • Laboratory of Cancer Genetics, School of Medical Sciences,
University of Campinas, Campinas, São Paulo, Brazil
ALTUCCI LUCIA • Department of Precision Medicine, Universita ` degli studi della Campania
“Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy; BIOGEM, Ariano Irpino, Italy
 Contributors xi

HAMED MIRZAEI • Student Research Committee, Kashan University of Medical Sciences,

Kashan, Iran; Research Center for Biochemistry and Nutrition in Metabolic Diseases,
Institute for Basic Sciences, Kashan University of Medical Sciences, Kashan, Iran
CATHERINE MURPHY • Department of Anatomy and Regenerative Medicine, Cancer
Bioengineering Group, RCSI University of Medicine and Health Sciences, Dublin, Ireland;
School of Pharmacy and Biomolecular Sciences, RCSI University of Medicine and Health
Sciences, Dublin, Ireland; Department of Anatomy and Regenerative Medicine, Tissue
Engineering Research Group, RCSI University of Medicine and Health Sciences, Dublin,
Ireland
JAVID SADRI NAHAND • Infectious and Tropical Diseases Research Center, Tabriz University of
Medical Sciences, Tabriz, Iran
JOHN NOLAN • National Children’s Research Centre, Our Lady’s Children’s Hospital
Crumlin, Dublin, Ireland
FERGAL J. O’BRIEN • Department of Anatomy & Regenerative Medicine, Tissue Engineering
Research Group (TERG), Royal College of Surgeons in Ireland (RCSI), Dublin, Ireland;
Trinity Centre for Biomedical Engineering (TCBE), Trinity College Dublin (TCD),
Dublin, Ireland; Advanced Materials and Bioengineering Research Centre (AMBER),
RCSI and TCD, Dublin, Ireland
MANOELA MARQUES ORTEGA • Laboratory of Cell and Molecular Tumor Biology and
Bioactive Compounds, São Francisco University, Bragança Paulista, São Paulo, Brazil
OLGA PISKAREVA • Department of Anatomy and Regenerative Medicine, Cancer
Bioengineering Group, RCSI University of Medicine and Health Sciences, Dublin, Ireland;
School of Pharmacy and Biomolecular Sciences, RCSI University of Medicine and Health
Sciences, Dublin, Ireland; Department of Anatomy and Regenerative Medicine, Tissue
Engineering Research Group, RCSI University of Medicine and Health Sciences, Dublin,
Ireland; Advanced Materials and Bioengineering Research Centre (AMBER), RCSI and
TCD, Dublin, Ireland; National Children’s Research Centre, Our Lady’s Children’s
Hospital Crumlin, Dublin, Ireland
CIBELE M. PRADO • Department of Veterinary Medicine, College of Animal Sciences and
Food Engineering, University of São Paulo, Pirassununga, SP, Brazil
SEAN QUINLAN • Discipline of Physiology, School of Medicine, Trinity College Dublin,
The University of Dublin, Dublin 2, Ireland
NEDA RAHIMIAN • Endocrine Research Center, Institute of Endocrinology and Metabolism,
Iran University of Medical Sciences (IUMS), Tehran, Iran; Department of Internal
Medicine, School of Medicine, Firoozgar Hospital, Iran University of Medical Sciences,
Tehran, Iran
SWETA RANI • Department of Science, South East Technological University, Waterford,
Ireland
ELIZABETH SAINSBURY • Department of Anatomy & Regenerative Medicine, Tissue
Engineering Research Group (TERG), Royal College of Surgeons in Ireland (RCSI),
Dublin, Ireland
MIGUEL F. SEGURA • Group of Childhood Cancer and Blood Disorders, Hospital Universitari
Vall d’Hebron, Vall d’Hebron Institut de Recerca, VHIR, Universitat Autònoma de
Barcelona, Barcelona, Spain
GIULIA SGUEGLIA • Department of Precision Medicine, Università degli studi della
Campania “Luigi Vanvitelli”, Naples, Italy
ANCHAL VISHNOI • Department of Biophysics, University of Delhi, New Delhi, India
xii Contributors

XIAOZENG YANG • Beijing Agro-biotechnology Research Center, Beijing Key Laboratory

of Agricultural Genetic Resources and Biotechnology, Beijing Academy of Agriculture
and Forestry Sciences, Beijing, P.R. China
YONGXIN ZHAO • Beijing Agro-biotechnology Research Center, Beijing Key Laboratory
of Agricultural Genetic Resources and Biotechnology, Beijing Academy of Agriculture
and Forestry Sciences, Beijing, P.R. China
 Chapter 1

miRNA Biogenesis and Regulation of Diseases:

An Updated Overview
Anchal Vishnoi and Sweta Rani

Abstract
MicroRNAs (miRNAs) are small RNA molecules, with their role in gene silencing and translational
repression by binding to the target mRNAs. Since it was discovered in 1993, miRNA is found in all
eukaryotic cells conserved across the species. miRNA-size molecules are also known to be found in
prokaryotes. Regulation of miRNAs is extensively studied for their role in biological processes as well as
in development and progression of various human diseases including neurodegenerative diseases, cardio-
vascular disease, and cancer. miRNA-based therapy has a promising application, and with a good delivery
system, miRNA therapeutics can potentially be a success. miRNAs and EVs have potential therapeutic and
prognostic application in a range of disease models. This chapter summarizes miRNA biogenesis and
explores their potential roles in a variety of diseases. miRNAs hold huge potential for diagnostic and
prognostic biomarkers and as predictors of drug response.

Key words miRNA, Neurodegenerative diseases, Cardiovascular disease, Cancer, Extracellular vesicle

1 Introduction

1.1 MicroRNAs MicroRNA (miRNA) was first observed in Caenorhabditis elegans

(miRNAs) [1] and is the most abundant small RNA [2]. It has now been
detected in nearly all animal model systems, and their numbers
largely correlate with the complexity of the organism [3]. Humans
have approximately 2000 annotated miRNA genes, and the total
number of microRNA loci annotated is 24, 521 loci in 206 species
[4]. The human genome consists of large number of miRNA genes
accounting for 1–5% of all predicted human genes [5], and mam-
malian miRNAs are known to regulate approximately 30% of all
protein-coding genes [6]. As multiple miRNAs target the same
mRNA, there is no linear correlation between miRNA and
mRNA expression [7]. Ambros and Ruvkun were the first to dis-
cover miRNA in 1993. Lin-4 was the first miRNA to be discovered
in C. elegans [1, 8]. In 2000 a second miRNA was discovered called

Sweta Rani (ed.), MicroRNA Profiling: Methods and Protocols,

Methods in Molecular Biology, vol. 2595, https://doi.org/10.1007/978-1-0716-2823-2_1,
© The Author(s), under exclusive license to Springer Science+Business Media, LLC, part of Springer Nature 2023

1
2 Anchal Vishnoi and Sweta Rani

let-7 and found to be conserved across the species [9]. This finding
boosted the miRNA discovery studies, and soon many more miR-
NAs were found in C. elegans, Drosophila melanogaster, and human
genomes [10–12].
miRNAs are small non-coding RNAs, single-stranded RNA
molecules of approximately 21–23 nucleotides in length. miRNA
has a uridine at their 5′-end and partially complementary to the
3′-end untranslated regions of the messenger RNA (mRNA).
miRNA recruits Argonaute (AGO) protein complex to a comple-
mentary target mRNA, which results in translation repression or
degradation or deadenylation of the mRNA [13].

2 miRNA Biogenesis

2.1 Transcription of The miRNA biogenesis in humans follows a two-step process with
miRNA nuclear and cytoplasmic cleavage event. In the nucleus, the miR-
NAs are transcribed as a long transcript called pri-miRNA, either by
their own promoters or by sharing promoters of their host gene
[14]. Transcription factors bind to the transcription start site, and
enhancers facilitate the binding of RNA polymerase [15]. For the
majority of miRNA, among the two RNA polymerase RNA pol II
and RNA pol III, RNA pol II is thought to be responsible for the
pri-miRNA transcription (Fig. 1a). The preference for RNA pol II
is evident by the length of pri-miRNA, which is more than 1 kb
longer than the pol III transcript. Also, pri-miRNA contains
sequences of uridine residues, which terminates pol III transcrip-
tion. These all support the preference of pol II for transcription of
pri-miRNA though there is exception, transcription of miR-142 by
RNA pol III [16]. In addition to the abovementioned features, the
transcriptional start sites are located far away from the genes, and
promoters contain features typical of RNA pol II [17]. The tran-
scriptional regulation of miRNA sometimes follow feedback loop
where positive or negative regulation of miRNA downregulates or
amplifies their own expression [18].
miRNAs which reside in introns are known as mirtrons. Mir-
trons’ presence is widespread in Drosophila, C. elegans, vertebrates,
and plants [19]. The transcription, primarily for mirtrons, takes
place independent of the host gene (Fig. 1a).

2.2 Formation of Pre- The nuclear cleavage of the pri-miRNA is carried out by Drosha
miRNA RNase III endonuclease (Fig. 1a (2)). Drosha RNase III endonu-
clease cleaves both strands of the stem at sites near the base of the
primary stem loop releasing 60–70 nt stem loop intermediate,
called miRNA precursor, or the pre-miRNA. Only that,
pri-miRNA matures into functional miRNA that has a flexible
terminal loop (≥10 bp) and 5′ phosphate and ~2 nt 3′ single-
stranded RNA overhangs. It is mediated via RNase III
 miRNA Biogenesis and Regulation of Diseases: An Updated Overview 3

Animal miRNA Plant miRNA

Mirtrons Gene in
miRNA Gene in Genic Region
Intergenic Region

c c c c
1
1 RNA Pol II
Mirtrons bypass Pri-miRNA
2 Drosha 2 DCL1
Drosha pathway
Pre-miRNA OR
3
Nulceus Rna GTP/Exporns 5 DCL1 Dicer like
3
Acvity
Cytoplasm Nucleus
4 Dicer HASTY 4
miRNA:miRNA* complex
Cytoplasm
5 5
Loaded in RISC complex
c c

6 Helicase Acivity 6

c c
7

A Target mRNA B

Fig. 1 miRNA biogenesis in (a) animal and (b) plant. (1) RNA pol II responsible for the pri-miRNA transcription.
(2) Drosha RNase III endonuclease cleaves pri-miRNA near the base of the primary stem loop. In plants, DCL1
has a similar function as Drosha. (3). The pre-miRNA transported into the cytoplasm (4). Pre-miRNA
maturation in the cytoplasm is carried out by RNase III endonuclease Dicer (5). The helicase domain
recognizes the loop region and cleaves both the strands (6). Short RNA fragment called miRNA (7). miRNA
binds to their target mRNA and negatively regulates its expression

endonuclease Drosha and the double-stranded RNA-binding pro-

tein DiGeorge syndrome critical region gene 8 (DGCR8) also
known as pasha [14]. The pre- miRNA has a staggered cut with
5′ phosphate and 3′ 2 nucleotide overhang [20]. The mirtrons are
exception and bypass the Drosha pathway releasing the precursor
splicing [21] (Fig. 1a). This pre-miRNA is transported into the
cytoplasm through the interaction of exportin-5 and Ran-GTP
[22] (Fig. 1a (3)).

2.3 Maturation of The pre-miRNA maturation in the cytoplasm is further carried out
Pre-miRNA in by RNase III endonuclease Dicer (Fig. 1a (4)). It recognizes the 5′
Cytoplasm phosphate and 3′ overhang approximately at the two helical turn
away from the base and cut the double strand. The cleavage sepa-
rates the loop structure, and the imperfect double strand is known
as miRNA:miRNA* complex. miRNA is a mature miRNA, whereas
miRNA* is the opposing arm of the miRNA. This complex is short-
lived as revealed by cloning of the miRNA [23, 24].
The Dicer is characterized by the presence of helicase, a PAZ
domain, double-stranded RNA binding domain, and a RNAIII
domain. The PAZ domain recognizes the 3′ overhang [25]. The
helicase domain recognized the loop region, and the two RNAIII
Other documents randomly have
different content
entsprechenden Dienerschaft begleiten. Ihr Jahrgehalt ist bestimmt
und wird Ihnen seiner Zeit stets ausgezahlt werden.«
»Verbannt, verbannt und meiner Freiheit beraubt!« rief Sidonie,
von dem Vernommenen tief erschüttert.
»O, meine arme Freundin, hofftest Du Besseres?« fragte Aurelie
mit feuchtem Auge Sidonie anschauend.
»Ich glaubte ein Recht auf ein milderes Urtheil zu besitzen. Doch
es sei; ich will mich deshalb nicht beklagen, da ich in solcher Weise
mit meinem theuern Freunde leiden kann. Ja, ich will diese
Verbannung mit Freuden begrüßen, wenn Römer seiner Haft nicht
entlassen werden sollte. Und ich fürchte, es wird so sein. Geht man
so hart mit mir um, so wird man noch schlimmer mit ihm verfahren.
So wird er nicht allein leiden,« sprach Sidonie, von Liebe und
Hochgefühl erglüht. »O, ich hatte es mir anders gedacht,« fuhr sie
darauf fort; »ich habe gehofft, daß mir mit der Trennung der Ehe
auch meine Freiheit gewährt werden würde und ich diesem Lande
für immer entfliehen könnte. Ich vergaß, daß ich eine entehrende
Strafe erleiden mußte, um der Welt meine Schuld zu bezeichnen.
Darum Verbannung, Verbannung nach einem verödeten Schloß.«
»Wenigstens gewährt Dir dieselbe den Vortheil, dem Hofe
entfliehen zu können,« bemerkte Aurelie.
»Gewiß, gewiß, und den darf ich nach dem Erfahrenen in der That
nicht gering anschlagen. Wir werden uns dort eine neue Heimath
gründen, welche Liebe und Freundschaft verschönen wird. Dort
werde ich mit noch größerer Sorgfalt meinen Mutterpflichten
genügen können, dort wird sich mein Kind, unberührt von der
entsittlichenden Hofluft, rein und schön entfalten können, und ich
vermag der Welt dereinst einen guten Menschen zuzuführen. O, das
ist ein großer, sehr großer Vortheil, dieser Gedanke thut dem Herzen
wohl!« endete Sidonie und drückte ihre Tochter an sich.
»Und Deine Verbannung kann und darf nicht allzu lange währen,«
fiel Aurelie ein.
»Ein paar Jahre vielleicht. O, die Zeit geht in der Einförmigkeit
rasch dahin, ich fürchte sie nicht. Was mir die Verbannung jedoch
schmerzlicher macht, ist der Gedanke, daß meine Tochter später
davon zu leiden haben wird, sobald meine Schuldlosigkeit nicht
anerkannt wird. Ob dies jemals geschehen wird, ich wage es unter
den obwaltenden Umständen nicht zu hoffen. Und wenn dies auch
erfolgen sollte; die Welt glaubt so gern das Ueble, und selbst der
dem Schuldlosen angehaftete Makel wird so schwer verwischt, trotz
der Erkenntniß, wie ungerecht derselbe ist. Doch Alles, Alles und
noch Schlimmeres würde ich mit Freuden ertragen, wüßte ich den
Freund erst frei und seiner entehrenden Fesseln ledig.«
»Vielleicht, daß Deine Verbannung seine Lage erleichtert und Dein
Wunsch erfüllt wird,« bemerkte Aurelie.
Sidonie schüttelte das Haupt.
»Es wird nicht geschehen, ich weiß es nur zu wohl. Der Fürst
begnügt sich niemals mit halben Maßregeln, sobald es darauf
ankommt, der Welt gegenüber sein Ansehen zu behaupten. Darum
wird er den Grafen auch strenger als mich bestrafen, wie er es
bereits gethan hat, obwol seine Maßnahmen ungerecht und von dem
Adel nichts weniger als gebilligt werden. Doch, Du weißt, der Fürst
ist unbeugsam, so bald es seinen Zwecken gilt.«
»Und möchtest Du den Fürsten nicht um eine Milderung des
Urtheils ersuchen?« fragte Aurelie.
»Niemals, meine theure Freundin! Er soll weder eine Bitte, noch
einen Vorwurf von mir vernehmen! Ueberdies bin ich von der
Fruchtlosigkeit meiner Bemühungen überzeugt, die höchstens
seinen Triumph über mich erhöhen würden. Nach diesem Urtheil
sind wir für immer von einander geschieden,« entgegnete Sidonie
mit bestimmtem Ton und fügte nach kurzem Sinnen, Aurelien die
Hand hinreichend, hinzu: »Vergieb mir, meine Theure, wenn ich
bisher nur meiner Interessen gedachte und es vergessen konnte,
daß meine Verbannung Dein geliebtes Haupt trifft, indem sie Dich in
eine menschenleere Einsamkeit fesselt. O, wie viele der reinsten
Opfer hast Du mir schon gebracht, die ich wohl zu schätzen, jedoch
nicht durch mein Thun entsprechend zu würdigen vermag. O, wende
Dich auch jetzt nicht von mir, denn ohne Dich vermöchte ich das
Leben nicht zu ertragen!« Und sie umschlang weinend die Freundin.
 »Warum Deine Bitte, Geliebte? Du kennst mein Herz und weißt,
daß Deine Freuden und Leiden auch die meinen sind und es stets
bleiben werden. Kein Wort also hierüber mehr,« entgegnete Aurelie
voll Güte und edler Hingebung.
Stumm drückten sich die Freundinnen die Hände.
»Die Besorgniß ergreift mich, ob man mir Deine Begleitung auch
gestatten wird,« bemerkte Sidonie nach kurzer Pause.
»Warum sollte man das nicht, da mein Aufenthalt bei Dir
unmöglich ihre Interessen gefährden kann?«
»Möchte es so sein! Doch überzeugen wir uns, ob in dem
Urtheilsspruch irgend etwas darüber bestimmt ist,« entgegnete
Sidonie.
Aurelie ergriff in Folge dessen das Schreiben und trug es laut vor;
doch enthielt dasselbe in der angegebenen Bezeichnung nichts.
»Gott sei Dank, so ist meine Besorgniß unbegründet gewesen,«
sprach Sidonie, welche dem Vortrage mit ängstlicher Spannung
zugehört hatte, indem sie froh aufathmete.
»Hier ist noch eine Bemerkung von des Fürsten Hand, die der
Sentenz später beigefügt zu sein scheint,« bemerkte Aurelie, das
Auge darauf gerichtet.
»Wahrscheinlich noch irgend eine Bestimmung über mich,«
entgegnete Sidonie und fragte alsdann: »Wie lautet sie?«
Aurelie hatte kaum mit raschem Blick des Fürsten Worte
überflogen und deren Sinn erfaßt, als sie erbleichend und bestürzt
einen leisen Schrei ausstieß.
»Was erschreckt Dich?!« fragte Sidonie.
»O, meine arme, arme Freundin!« rief Aurelie in Thränen
ausbrechend, indem sie die Prinzessin umschlang.
»Um Gott, sage, was Dich bewegt!« rief Sidonie in gesteigerter
Besorgniß.
 »Lies seine Worte,« entgegnete Aurelie leise und deutete auf
diese hin.
Zitternd vor angstvoller Erregung that Sidonie das; in dem
nächsten Augenblick entfiel das Blatt ihren Händen, und mit dem
Ausruf: »Mein Kind, mein Kind!« schlang sie hastig die Arme um ihre
sich an sie schmiegende Tochter und drückte diese unter einem
hervor stürzenden Thränenstrom innig und fest an sich, indem sie ihr
Antlitz auf deren Locken sinken ließ und diese mit Küssen bedeckte.
Es trat eine kurze Stille ein, die nur das Weinen der Frauen
unterbrach.
Das Kind blickte besorgt zu der Mutter auf und fragte:
»Warum weint chère mama?«
»Weil sie mich von Dir trennen, Dich mir für immer nehmen
wollen!« fiel Sidonie fassungslos ein, das Kind noch heftiger
küssend.
»Ich soll nicht bei Mama bleiben?«
»Sie werden Dich fremden, lieblosen Händen übergeben und Dich
zu einer höfischen Puppe bilden, Dein weiches Herz verhärten für
das Gute und Edle und die Reinheit Deiner Seele trüben. Und ich
soll fern, fern von Dir sein, Dich nicht mehr behüten dürfen vor den
Gefahren, die Dich hier umlauern. O, mein Gott, mein Gott! Das
vermag ich nicht!«
Und sie neigte auf's Neue das Antlitz auf ihres Kindes Haupt und
weinte heftig.
Es war so, wie Sidonie sagte. Der Fürst hatte unter die richterliche
Sentenz die Bemerkung hinzu gefügt, daß auf das ausdrückliche
Verlangen des Prinzen und in Anbetracht der die Schuld der
Prinzessin begründenden Momente er im Einverständniß mit seinem
Neffen die Bestimmung getroffen, daß Sidoniens Tochter dem
Prinzen verbleiben sollte. Die obwaltenden Umstände boten dem
Letzteren dazu ein scheinbares Recht. Welche unendliche Kränkung
darin für Sidonie lag, darf kaum bemerkt werden. Denn was wol
dürfte eine Mutter mehr und tiefer verletzen, als wenn man sie nicht
für würdig erachtet, ihr einziges Kind und Tochter obenein selbst
erziehen und sich an ihrer Entwicklung erfreuen zu dürfen. Ueber
ihrem Schmerz blieb Sidonien die Erkenntniß dieses über sie
verhängten Schimpfes noch fern, da sie lediglich der einzige
Gedanke, sich von ihrem Kinde für immer trennen zu sollen,
beherrschte.
Aurelie gewann zuerst Fassung.
»Das kann und darf nicht geschehen!« rief sie mit ungewöhnlicher
Energie. »Diese Bestimmung muß der Fürst zurück nehmen, denn
sie ist mehr als hart, sie ist grausam.«
»Ich erkenne darin des Prinzen Rache; der Fürst allein würde sich
nie dazu verstanden haben,« bemerkte. Sidonie.
»War der Fürst schwach genug, dem Verlangen seines Neffen
nachzugeben, so bleibt ihm doch immer die Gewalt, diese
Bestimmung zurück zu nehmen.«
»Ich zweifle, daß er sich dazu bewegen lassen dürfte, und
erinnere Dich an das Recht des Prinzen, als Vater seines Kindes
über dieses zu bestimmen. Ob ihm dies vor dem Sittengesetz
zuerkannt werden darf, ist eine andere Frage, die hier nicht in
Betracht kommt. Doch ich weiß, nicht die Liebe zu seiner Tochter,
sondern sein Haß gegen mich haben ihn dazu bewogen, und der
Fürst ging vielleicht um so leichter auf seinen Willen ein, da derselbe
seinen Zwecken dient. Hält man mich nicht für würdig, meine Tochter
zu behalten, so muß ich der Welt noch schuldvoller erscheinen, und
das will man ja eben.«
»Der Fürst wird Deiner Forderung, Deinen Vorstellungen und
Bitten nicht widerstehen. Er ist Dir einst gewogen gewesen, er wird
auch jetzt Mitleid mit Deinem Kummer haben. Sein Herz kann nicht
so ganz verhärtet sein, um durch Deine Thränen nicht gerührt zu
werden.«
Sidonie schüttelte wehmüthig das Haupt.
»Dein liebevolles Herz vermag nicht die ganze Größe der
Selbstsucht zu erfassen, die den Fürsten beherrscht. Vielleicht ist er
mir einst wirklich zugeneigt gewesen; davon kann jedoch nicht mehr
die Rede sein, nachdem ich ihm gegenüber meinen Charakter und
Willen zu behaupten wagte. Meine frühere Unterredung mit ihm hat
mir sein kaltes, liebloses Herz gezeigt. O, wie leer ist dasselbe, und
wie ist es lediglich die Selbstsucht, welche sich eng mit dem
Interesse des Staates verknüpft und die von ihm getroffenen
Bestimmungen erzeugt. O, wie arm an Freuden, wie traurig ist sein
Dasein trotz seines mächtigen Geistes, da in seinem Herzen nicht
der Quell strömt, der allein dem Leben Werth und Annehmlichkeit
verleiht!«
»Was gedenkst Du zu thun? Wirst Du zu ihm gehen?« fragte
Aurelie nach einer kurzen Pause.
»Ich werde es und will den Himmel bitten, daß er meinen Worten
Kraft verleiht, sein Herz zu rühren. Vor Allem aber will ich bedacht
sein, mich an einen Gedanken zu gewöhnen, der mir allen
Lebensmuth und die erforderliche Stärke raubt, das Schmerzliche zu
ertragen und den Stolz der Unschuld meinen Feinden gegenüber zu
behaupten. Dies ist eine Pflicht, die mir nicht nur gegen mich selbst,
sondern auch gegen meinen unglücklichen Freund auferlegt ist. O,
ich weiß wol, es werden harte, sehr harte Zeiten für mich kommen;
ich will, ich darf ihnen nicht erliegen, so viel Kummer sie mir auch
bringen. Ihm, ihm, dem edeln, geliebten Manne bin ich es schuldig,
der mir das Glück seines Lebens zum Opfer brachte. Vergelten will
und muß ich es ihm mit der ganzen Hingabe meiner vollsten Liebe,
und darum will ich mich ihm erhalten, damit sein Dasein nicht in
einem Schmerz-Accord ausklingt und er nicht mit dem Wort des
Vorwurfs, sondern der Liebe auf den Lippen das Leben aushaucht.
Ob mir dies gelingen, ob und wann die Zeit kommen wird, in der
mein Leben mit dem seinen zusammen pulsen darf, wer vermag das
heute zu bestimmen? — Vielleicht naht uns der bleiche Engel des
ewigen Friedens früher, als wir ahnen; ach, das Leben ist ja so kurz
und hinfällig! Vielleicht wird mein Wunsch erst dann erfüllt, wenn die
Jahre die Lebenskraft und Freudigkeit zerstört und den Geist
ermüdet haben, und ich ihm statt der Jugend nur ein in Kummer
schnell gewelktes Alter bringen kann, und sich in meinen Zügen
dann nichts mehr von dem widerspiegelt, was sein Herz einst
erfreute. Wie schnell verblühen wir!« Sie schwieg und schaute voll
Wehmuth sinnend vor sich hin. »Doch warum fürchte ich das
Uebelste, warum sorge ich des Vergänglichen?!« bemerkte sie nach
kurzer Pause. »Was wäre die Liebe, wenn sie von äußeren
Vorzügen abhinge! O, ich erkenne, wie sich selbst in diesem
Augenblick die allgemeinste Schwäche meines Geschlechts, die
Eitelkeit, geltend zu machen bestrebt. Doch nein, nein, nicht
Eitelkeit, sondern die Liebe zeugt meinen Kummer. Weil ich ihn von
Herzen liebe, will ich ihm auch gefallen; dieser Trieb ist ja natürlich
und nothwendig. Und Römer liebt ja überdies nicht die äußeren
Reize, er liebt die Seele, die unvergängliche, und besitze ich auch
nicht die Macht, den Körper vor der Hinfälligkeit zu schützen, so will
ich doch bedacht sein, meine Seele davor zu bewahren und sie
seiner würdig zu erhalten, damit er einst aus dem gefalteten Antlitz,
aus dem matten, entfärbten Augenstern sie dennoch erkennt und
sich an ihr erfreut. O, glaube mir, die Liebe ist sehr geschickt, die
Erinnerungen vergangenen Lebens zu bewahren; habe ich dies
doch in meinen Leidensjahren so ganz erkannt.«
Ein stiller Tag ging über die Freundinnen hin, während dessen sie
nur wenige Worte mit einander wechselten, von Kummer und
Sorgen erfüllt. Was auch hätten sie sich unter den obwaltenden
Umständen mittheilen sollen. Vor Allem mußte Sidonie Fassung
gewinnen, um sich für die so wichtige Unterredung mit dem Fürsten
vorbereiten zu können. Darüber mußten einige Tage dahin gehen;
denn Sidonie war zu tief gebeugt und zu wenig von Hoffnung für das
Gelingen ihres Vorhabens erfüllt, um früher die erforderliche Kraft zu
gewinnen.
Als ihr dies jedoch nach zwei Tagen gelungen war, sandte sie ein
Billet mit der Bitte an den Fürsten ab, ihr eine Audienz zu bewilligen.
Erwartungsvoll harrte sie seiner Antwort entgegen.
 Achtes Kapitel.

Man hatte Römer nach einer von der Residenz sehr entfernten
Grenzfestung gebracht. Er ward daselbst mit größerer Strenge
behandelt als früher, und es wurden ihm nur innerhalb der
Festungswälle Spaziergänge gestattet. Die zu den letzteren
bestimmten Orte waren überdies der Art, daß er von ihnen aus
höchstens einen Blick auf Felder und Wälder gewann und es ihm
daher unmöglich war, sich mit der Gegend und der neben der
Festung gelegenen Stadt bekannt zu machen. Dennoch und obwol
er sich zu keiner Frage verstand, konnte es nicht lange ausbleiben,
daß er den Namen der Festung und der Stadt erfuhr und somit
erkannte, daß er nun auch von aller Verbindung mit seinen Freunden
getrennt war.
Von dem Bemühen des Fürsten überzeugt, seinen Aufenthalt so
viel als möglich der Welt zu verheimlichen, durfte er dies um so
sicherer voraussetzen.
Auf seine Vorstellung an den Fürsten war keine Antwort erfolgt,
und so blieb er in Ungewißheit, ob dieselbe in des Ersteren Hände
gelangt war, oder ob der Fürst eine solche für überflüssig erachtet
hatte.
Er war geneigt, das Letztere anzunehmen, als nach Ablauf von
ungefähr drei Wochen ihm der Commandant ein offenes Schreiben
mit der Bemerkung überreichte, daß dasselbe sein Urtheil enthalte,
wonach ihm zwei Jahre Haft zuerkannt worden wären. Ueber das
Vergehen, für das der Graf leiden sollte, war man fortgegangen und
hatte eben so wenig der Prinzessin in der Sentenz erwähnt. Dies
war auf den ausdrücklichen Befehl des Fürsten geschehen, der, wie
wir erfahren haben, über diese Angelegenheit strengste Discretion
beobachtet zu sehen wünschte.
Römer war das in hohem Grade angenehm, denn er würde durch
das Urtheil viel tiefer verletzt worden sein, hätte man Sidonie nicht in
solcher Weise geschont.
Schweigend empfing er den Urtheilsspruch, auf welchen er sich
längst vorbereitet hatte, nachdem der Fürst seine und seiner
Freunde Vorstellungen unberücksichtigt gelassen; aus dem ersteren
konnte er jedoch auch mit Bestimmtheit auf Sidoniens Verurtheilung
schließen, und es drängte sich ihm die beunruhigende Frage auf,
welcher Art dieselbe sein könnte.
O, wie beglückt hätte er sich gefühlt, wäre es ihm vergönnt
gewesen, für sie zu leiden und alles Ungemach von ihr zu nehmen;
doch es sollte nicht sein. Was ihn tröstete, war die Ueberzeugung
von der Rücksicht, welche der Fürst der Prinzessin zu beobachten
sich durch die Umstände genöthigt sehen würde. Man durfte sie
nicht hart strafen; so hoffte, so erwartete er es mit Sicherheit, ohne
zu ahnen, wie sehr er sich täuschte. Nach des Fürsten Befehl sollte
er in der Festung verbleiben.
Der Commandant, wahrscheinlich mit den des Grafen Haft
bedingenden Vorgängen gekannt, erzeigte ihm viel Wohlwollen, und
wenn er Römer auch keine besonderen Freiheiten gestatten durfte,
so lud er ihn doch öfter zu sich ein und verplauderte alsdann einige
Stunden mit ihm.
Seitdem Römer den Urtheilsspruch empfangen hatte, wurde
niemals ein Wort hierüber zwischen ihnen gewechselt. Der Graf
vermied dies absichtlich, und der Commandant hatte bald erkannt,
daß eine jede derartige Erinnerung einem Manne von Römer's
Charakter nur unangenehm sein müßte.
In trüber Einförmigkeit ging dem Grafen die Zeit dahin. Keine
Nachricht von seinen Lieben kam ihm zu; ein Beweis für ihn, daß
man seinen Aufenthalt nicht kennen mußte, wenn er nicht annehmen
wollte, ihm würden die ersteren von dem Commandanten
vorenthalten.
Es kam ihm jetzt seine Neigung für wissenschaftliche Studien sehr
zu statten, denen er sich fortan mit Eifer hingab und worin ihn die
Freundlichkeit des Commandanten unterstützte, der die Besorgung
der von Römer gewünschten Bücher etc. veranlaßte. Aber, so
angenehm dem Letzteren auch eine solche Beschäftigung war,
welche seinen Geist nährte und die schmerzlichen Gedanken von
ihm fern hielt, kamen doch viele, viele trübe Tage über ihn, in
welchen er der kummervollen Erinnerung unterlag und sich die
Sehnsucht nach Freiheit und dem Wiedersehen seiner Lieben mit
großer Gewalt geltend machte. Wie in Sidonien erhoben sich auch in
ihm unablässig die Fragen, was er von der Zukunft erwarten durfte
und ob, wenn seine Haft endete, die Geliebte frei und es ihr gestattet
sein würde, ihm anzugehören. Er glaubte dies hoffen zu dürfen, da
er die Trennung ihrer Ehe mit Bestimmtheit voraussetzte, und diese
Hoffnung war zu süß und beglückend, um ihm seine Haft nicht
weniger peinigend zu machen.
Um wie viel mehr würde sein edles Herz gelitten haben, wäre ihm
Sidoniens Geschick und die Härte bekannt gewesen, mit welcher
man ihr begegnete, hätte er geahnt, welche Seelenkämpfe sie in
derselben Zeit zu bestehen hatte, in welcher er, von seinen
Voraussetzungen getäuscht, ihr Loos mild und erträglich wähnte.
Auf Sidoniens an den Fürsten gerichtete Bitte um eine
Unterredung hatte ihr dieser geantwortet, daß sein Befinden sie zu
empfangen verhindere und er es ihr daher überlassen müsse, ihm
ihre Wünsche schriftlich zu bezeichnen. Wie schmerzlich sie
dadurch betroffen werden mußte, darf im Hinblick auf das hohe
Interesse, das für sie auf dem Spiel stand, kaum bemerkt werden.
Ihre Unruhe und Besorgniß steigerten sich um so mehr, da sie sich
sagen mußte, daß der Fürst sein Befinden lediglich als Vorwand zur
Ablehnung ihrer Bitte benutzte; denn wie sie erfahren hatte, war
dasselbe ziemlich gut. Er wollte sie also nicht sprechen und fühlte
daher auch nicht die Pflicht, die geringste Rücksicht auf ihren
Kummer zu nehmen. Dadurch zum schriftlichen Verkehr mit ihm
genöthigt, zögerte sie nicht, ihm in den flehendsten Ausdrücken um
Zurücknahme der getroffenen Bestimmung hinsichts ihres Kindes zu
bitten. Die heißeste Liebe zu diesem hatte ihr die Worte eingegeben,
denen der Schmerz über ihr so unverdientes und hartes Geschick
um so mehr Kraft und Nachdruck verlieh. Wiederholt hatte sie sich
dieserhalb mit Aurelien berathen, um die Fassung des Briefes in der
wirksamsten Weise zu ermöglichen, und das Schreiben alsdann
unter bangen und heißen Wünschen einer guten Wirkung
abgesandt.
Unruhvoll harrte sie der so wichtigen Antwort in der Hoffnung
entgegen, dieselbe vielleicht schon an dem nächsten Tage zu
erhalten und durch deren Inhalt beglückt zu werden.
Wie sehr sah sie sich getäuscht!
Tag um Tag ging dahin, ohne daß ihr Wunsch erfüllt wurde. O, wie
tief, wie schmerzlich litt die Arme darunter, und mit welcher
Aengstlichkeit war sie bedacht, die ihr zu dem Verkehr mit ihrem jetzt
doppelt theuern Kinde noch gegönnten Stunden so ganz
auszugenießen. Sie trennte sich von demselben fast gar nicht mehr
und ließ sogar dessen Bettchen in ihr Schlafcabinet bringen, um sich
auch selbst noch in der Nacht ihrer Nähe erfreuen zu können, indem
sie den Athemzügen der Schlummernden lauschte.
Nach fünf langen und bangen Tagen und Nächten erst erhielt sie
des Fürsten Antwort, die sie mit ängstlicher Hast erbrach und
alsdann durchflog. Sie enthielt nur wenige und in gemessenem Ton
gehaltene Worte, die ihr armes Herz durchkälteten und ihr die letzte
Hoffnung, ihren Wunsch erfüllt zu sehen, raubten.
Der Fürst lehnte ihre Bitte mit der Bemerkung ab, den durchaus
gerechtfertigten Ansprüchen des Prinzen nicht entgegen treten zu
dürfen, indem er sie zugleich an die vermehrten Rechte zu den
getroffenen Maßnahmen erinnerte, welche demselben unter den
obwaltenden Umständen zuständen. Außer diesem nur kurzen
Bescheid hatte der Fürst weder ein Wort des Trostes noch des
Rathes hinzugefügt, und Sidonie erkannte daraus nur zu wohl, daß
jedes weitere schriftliche Wort vergeblich sein würde. Zwar hatte der
Fürst darauf hingedeutet, daß in diesem Fall lediglich des Prinzen
Verlangen seinen Entscheid bestimmt hätte, und sie dadurch
gleichsam auf diesen hingewiesen: was aber konnte ihr das in ihrer
Lage nutzen? Den Prinzen mit einer Bitte angehen, würde eben so
wenig gefruchtet haben, selbst wenn sie sich auch zu einem sie so
tief verletzenden Schritt verstanden haben würde.
So blieb ihr nur die Ergebung in das Unabänderliche. In dieser
Erkenntniß bereitete sie sich auf die Trennung vor, von der Hoffnung
gestärkt, daß es ihr jedenfalls gestattet sein würde, ihre Tochter
später ab und zu zu sehen, und daß vielleicht die Zukunft des
Fürsten und Prinzen Herz milder stimmen könnte.
Mit der ihr eigenthümlichen Seelenkraft war sie bemüht, ihre
Gefühle zu beherrschen; doch wenn ihr dies auch zum Theil gelang,
füllten sich ihre Augen doch häufig unwillkürlich mit Thränen,
besonders wenn ihr Blick auf der lieblichen Tochter ruhte, die ohne
Ahnung von der Mutter Weh harmlos sie umspielte und den süßen
Frohsinn ihrer Jugend offenbarte.
Es konnte jedoch nicht ausbleiben, daß sich Sidoniens
Seelenleiden in ihrem Aeußern zu erkennen gab. Die wenigen Tage
bis zu ihrer Abreise hatten sie so sehr verändert, daß sie ganz und
gar verfallen und um wenigstens zehn Jahre älter erschien. Auch
fühlte sie sich schwach und kraftlos, und vermochte sich nur mit
Anstrengung aufrecht zu erhalten und die ihr obliegenden
Anordnungen zu treffen; dennoch überwand sie dies Alles mit
Anwendung des festesten Willens und eingedenk ihres Vornehmens,
die Ruhe und Sammlung der Schuldlosigkeit zu zeigen. Sie bedurfte
dieser in hohem Grade, denn sie war willens, vor ihrer Abreise noch
den Prinzen und Fürsten zu sprechen. In diesem Verlangen glaubte
sie den Beweis zu liefern, daß sie nicht in dem Gefühl ihrer Schuld
schied, sondern nur als Leidende der über sie herrschenden Gewalt
wich. Auch war es ihre Absicht, dem Prinzen ihre Wünsche über die
fernere Erziehung ihrer Tochter zu erkennen zu geben. Sie besaß
ein Recht dazu und war weit entfernt, dasselbe aufzugeben, und
glaubte daher den Prinzen damit bekannt machen zu müssen, damit
er nicht etwa den Glauben hegte, sie wäre sich derselben nicht
bewußt oder hätte sie etwa in dem Bewußtsein ihres Vergehens,
oder durch die Verbannung eingeschüchtert, aufgegeben. Was sie
jedoch zu der Unterredung mit dem Fürsten trotz der erfahrenen
Unbill besonders veranlaßte, war die Hoffnung, daß es ihrem Worte
vielleicht gelingen dürfte, ihn zur Zurücknahme des Befehls hinsichts
ihrer Tochter zu veranlassen. Ihre Hoffnungen waren in dieser
Beziehung allerdings nur gering; die Liebe zu ihrem Kinde jedoch
viel zu groß, um nicht noch das Letzte zu wagen.
Kostete es ihr schon eine nicht geringe Ueberwindung, noch
einmal ihren Feinden Auge in Auge gegenüber zu stehen, deren
Gewalt sie unterlegen war, so war sie doch auch zugleich
entschlossen, sich selbst zu vergessen, um sich das geliebte Kind
zu retten, für dessen Besitz ihr kein Opfer zu schwer sein sollte.
Sie hatte gefürchtet, daß weder der Fürst noch der Prinz sich zu
einer Unterredung verstehen würden, und wurde daher sehr
angenehm überrascht, als ihr diese auf ihre schriftliche Bitte bewilligt
wurde. Sie wußte freilich nicht, daß dies nicht ohne Widerstreben
Seitens Beider geschehen war.
Zu der Unterredung war der Tag vor ihrer Abreise bezeichnet
worden. Wie eilig ging ihr die Zeit bis zu diesem Augenblick dahin, in
welchem sie sich vielleicht für eine lange Dauer von ihrem Kinde
trennen mußte, und mit welcher Aengstlichkeit war sie bedacht, für
Alles, was dessen Wohl betraf, zu sorgen. Was sie in ihrer
kummervollen Erregung noch aufrecht erhielt, war die freilich nur
schwache Hoffnung, des Fürsten Herz für ihre Wünsche gewinnen
zu können.
So nahte der bedeutsame Tag, und mit gewaltsamer
Ueberwindung aller sie bestürmenden widrigen Gefühle begab sie
sich zu dem Prinzen.
Derselbe empfing sie in einem der Staatsgemächer des Palais.
Ihr hinfälliges Aussehen und die sich in ihrem Wesen
abspiegelnde Resignation blieben nicht ohne Wirkung auf ihn und
schienen ihn zu veranlassen, auf einen in seiner Nähe befindlichen
Sessel zu deuten.
»Ich habe Ihnen nur wenige Worte zu sagen,« sprach Sidonie,
ohne sich niederzulassen, »und diese bezwecken die Erziehung
meiner Tochter.«
 »Dieselbe wird ihrem Range gemäß sein,« fiel der Prinz ein.
»Ich zweifle nicht daran und dies ist auch nicht die Veranlassung,
wenn ich Ihnen meine Wünsche in dieser Beziehung zu erkennen
gebe. Es ist ein anderer und wichtigerer Grund, der mich dazu
bestimmt. Ein Kind bedarf vor Allem der Elternliebe, in deren vollem
Genuß es sich wohl fühlt. Diese wird Isabelle entbehren müssen,
indem man sie fremden Händen übergiebt. Man wird vielleicht ihren
Geist ausbilden; des Kindes Herz bildet sich jedoch nur an einem
liebenden Herzen aus, und so erfüllt mich die Besorgniß, Isabelle
wird den Einflüssen ihrer Umgebung unterliegen. Sie haben es für
nothwendig erachtet, mir die Erfüllung meiner Mutterpflichten
unmöglich zu machen, um so mehr erwarte ich daher, daß Sie selbst
die Erziehung des Kindes überwachen und es mir gestatten werden,
Isabelle zu sehen und mich von dem Erfolg der ersteren zu
überzeugen.«
»Ich habe nichts dagegen; doch mache ich Ihnen bekannt, daß
Isabelle mit Ihnen zugleich den Hof verläßt, da ich sie zu meiner
Tante, der Herzogin Karoline, sende, woselbst sie fortan leben soll.«
Diese Nachricht erfreute Sidonie in hohem Grade; denn durch
diese Maßnahme wurde ihr Wunsch erfüllt und Isabelle den
Einflüssen des Hofes entzogen; auch war ihr die Herzogin als eine
sehr geachtete Dame bekannt.
»Sie erfüllen dadurch meinen Wunsch und ich billige diese
Anordnung gern,« entgegnete sie und fragte alsdann: »Ich hoffe,
daß es mir gestattet sein wird, mit meiner Tochter brieflich zu
verkehren?«
»Ich stelle das Ihrem Belieben anheim,« entgegnete der Prinz, wie
es schien bemüht, die ihn peinigende Unterredung zu enden.
»Wenn auch hiemit mein persönliches Interesse erledigt sein
dürfte, so drängt es mich doch, noch ein Wort an Sie zu richten,«
fuhr die Prinzessin nach kurzer Pause fort. »Daß man die Trennung
unserer Ehe als durch meine Schuld herbei geführt betrachtet, muß
ich hinnehmen, da der Schein gegen mich spricht und es Ihnen
beliebt hat, mich auf diesen hin zu verurtheilen. Ich würde die mir
auferlegte Strafe jedoch weniger verletzend fühlen, dürfte ich hoffen,
daß daraus ein Segen für das Land hervor ginge. Dem Unrecht ist
jedoch noch niemals Gutes entsprossen. Möchte sich in diesem Fall
meine Voraussetzung nicht bestätigen; ich wünsche dies zum Wohl
des Volkes, dem Sie bald ein Herrscher sein werden. Wol ist es eine
schöne und hohe Aufgabe, die Wohlfahrt von Millionen zu erzielen;
aber eben so furchtbar däucht mir auch das Schicksal des
Regenten, der in der zügellosen Hingabe an seine Leidenschaften
statt Liebe nur Haß und Verachtung säet und darum auch erntet.
Mögen Sie dessen eingedenk sein, und so leben Sie wohl!«
Sidonie hatte diese Worte fest und ruhig gesprochen, indem Sie
die Blicke eben so fest auf den Prinzen gerichtet hielt, der sie jedoch
nicht anschaute und ihr nur mit sichtlicher Ungeduld zuhörte. Mit
einer leichten, würdigen Verneigung verließ sie darauf das Zimmer.
Der Prinz schaute ihr voll Unmuth nach, der jedoch nicht allein
durch die von Sidonien an ihn gerichtete Mahnung an sein besseres
Selbst, sondern noch mehr durch das Gefühl der Achtung hervor
gerufen wurde, das ihr Verhalten in ihm erzeugt hatte. Dieses Gefühl
machte sich zum ersten Mal in ihm geltend, seit er Sidonie kannte.
Es lag eine so große Würde in ihrem Wesen und Benehmen, eine
ungesuchte Ueberlegenheit über ihn und ihre nichts weniger als
erfreulichen Verhältnisse, daß er unwillkürlich von dem Zweifel an
ihre Schuld ergriffen wurde.
Die guten Regungen gingen jedoch eben so rasch, als sie
entstanden waren, an seiner Seele vorüber, und sein Stolz und
Rachegefühl übten schnell ihre Wirkung wieder aus, und so steigerte
sich sein Unmuth bei dem Gedanken, daß Sidonie nicht als
demüthig Bittende, sondern im Vollgefühl ihrer Würde von ihm
geschieden war.
Mit einem hastig gemurmelten Wort, das wie »Närrin« klang,
kehrte er in sein Wohngemach zurück, und ein ihm von dem Baron
Mühlfels übergebener Brief von Marianen verschaffte ihm rasch
seine gute Laune wieder.
Sidonie eilte nach der Unterredung zu ihrer Tochter, die sie jetzt,
trotz der nahen Trennung, mit einem freudigeren Gefühl in die Arme
schloß, nachdem sie deren künftiges Geschick erfahren und
überdies die Gewißheit erhalten hatte, sie für die Folge sehen und
nach Belieben Nachricht von ihr erhalten zu können. Ihr däuchte nun
die Trennung weniger schmerzlich.
Aurelie überraschte sie dabei und theilte ihre Freude, nachdem sie
den guten Erfolg der Bemühungen vernommen hatte. Ihr edles Herz
wußte ja nur zu wohl, welchen großen Werth und Trost die Freundin
in der ihr gewährten Begünstigung fand und daß Sidonie ohne
dieselbe vielleicht in ihrem Schmerz und in ihrer Sehnsucht nach der
Tochter untergegangen wäre, trotz ihres Vornehmens, sich für diese
und den Grafen zu erhalten.
Unter den Beschäftigungen, welche die angekündigte nahe
Abreise des Kindes nothwendig machte, nahte dann die zu der
Audienz bei dem Fürsten bestimmte Stunde.
Durch die Unterredung mit dem Prinzen ein wenig ermuthigt, die
ihre Hoffnungen hinsichts des Gelingens ihrer Absicht gehoben
hatte, trat sie den Weg zu dem Fürsten an.
Man führte sie zu ihm, und sie fand ihn in einem Lehnsessel
ruhend, wozu ihn gichtische Schmerzen in den Füßen nöthigten. Der
Fürst erwiderte ihren Gruß mit kalter Höflichkeit, welche leider sehr
geeignet war, Sidoniens Fassung herab zu stimmen; dennoch
gewann sie rasch die erforderliche Sammlung.
»Ich habe es für meine Pflicht erachtet, Ihnen bei meinem
Scheiden ein Lebewohl zu sagen,« begann sie mit bewegter
Stimme, nachdem sie sich auf eine einladende Handbewegung des
Fürsten in seiner Nähe niedergelassen hatte.
»Ich bedaure, durch meine Leiden an Ihrem früheren Empfang
verhindert worden zu sein,« bemerkte der Fürst mit einer gewissen
Verlegenheit.
»Um so mehr danke ich Ihnen, mir denselben heute bewilligt zu
haben; es ist mir das ein Beweis, daß Sie selbst in dem Verurtheilten
noch immer den Menschen berücksichtigen.«
»Zweifelten Sie daran?« fragte der Fürst rasch.
 »Ich glaube Gründe dazu zu besitzen, denn es hat Ihnen nicht
gefallen, meine Muttergefühle zu beachten.«
»Die Wünsche des Prinzen waren in diesem Fall maßgebend,« fiel
der Fürst etwas erregt ein.
»Sie wären es gewesen, hätte der Prinz seiner Tochter seither die
Liebe eines Vaters bewiesen, denn nur die Liebe und Sorge
berechtigt zu dergleichen.«
»Ihre Tochter wird den besten Händen anvertraut werden,«
bemerkte der Fürst.
»Wer vermöchte einem Kinde die Mutter zu ersetzen? Ueberdies
übersah man, als diese Maßnahme beschlossen wurde, daß durch
dieselbe nicht nur ich, sondern auch das Kind schmerzlich getroffen
wurde.«
»Dieser Vorwurf fällt auf Sie zurück, da Sie selbst die Urheberin
dieses Arrangements sind.«
Sidonie wurde durch diese Erinnerung schmerzlich getroffen; ihr
ganzer Unmuth über die erfahrene ungerechte Strafe erwachte in ihr
und drängte sie, sich dem Fürsten gegenüber geltend zu machen;
doch die Liebe zu ihrem Kinde und der heiße Wunsch, sich dessen
Besitz sichern zu können, ließ sie ihre Empfindungen beherrschen
und nahm ihr das Wort von den Lippen.
Schweigend senkte sie das Haupt.
»Der über Sie gefällte Richterspruch bedingt die Trennung von
Ihrer Tochter,« fügte der Fürst hinzu. »Man hätte diese
Angelegenheit vielleicht in angenehmerer Weise für Sie ordnen
können, würden Sie mich nicht zu einem richterlichen Entscheid
genöthigt haben. Sie müssen nun auch die Folgen tragen.«
»Sie verlangten also ein Bekenntniß meiner Schuld? Durch eine
Unwahrheit sollte ich mich selbst verurtheilen? Wie, mein Fürst, d a s
verlangten, erwarteten Sie von mir?« fragte Sidonie mit edlem
Unwillen und fuhr nach kurzem Zögern fort: »Daß Sie das gethan
haben, giebt mir den Beweis, wie wenig Sie mit meinem Charakter
bekannt sind und wie fern Ihnen die Ueberzeugung lag, daß ich zur
Wahrung meiner Ehre zu den höchsten Opfern bereit war. Daß diese
Opfer so schmerzlich sein sollten, habe ich in dem Vertrauen zu
Ihrer Gerechtigkeitsliebe freilich nicht voraus gesehen.«
»Ich sehe mich außer Stande, irgend etwas für Sie zu thun,«
wandte der Fürst ein. »Die Erziehung Ihrer Tochter wird überdies
Ihre Ansprüche befriedigen. Die Herzogin ist eine Dame von Geist.«
»Ich will es hoffen; dennoch erinnere ich Sie, daß einem Kinde die
Mutter niemals ersetzt werden kann. Sie verstehen, begreifen mich
vielleicht nicht, mein Fürst; denn Ihnen ist das Vatergefühl fremd, da
Ihr Herz durch den Ton eines eigenen Kindes niemals ergriffen
worden ist. Ich wünschte, dem wäre so, Sie würden alsdann auch
die ganze Größe meines Schmerzes ermessen können, welche Sie
mir durch die Trennung von meiner Tochter bereiten.«
»Sie haben dies den Verhältnissen zuzuschreiben,« wandte der
Fürst ein.
»Ich habe mich in dieselben gefügt, ohne Klage, ohne eine
Beschwerde, und ich würde meine Verbannung mit einem weniger
vorwurfsvollen Gefühl hinnehmen, hätten Sie sich bewogen
gefunden, meine und meiner Tochter Empfindungen und natürliche
Forderungen zu berücksichtigen.«
»Sie scheinen ganz zu übersehen, daß man Ihre Tochter Ihren
Aufenthalt nicht theilen lassen darf; so etwas widerspräche dem
Gesetz.«
»O, mein Fürst, wie übel muß ein Gesetz sein, das den
Forderungen der Menschlichkeit widerspricht! Wird die Ehre meiner
Tochter gekränkt, indem sie die Verbannung ihrer Mutter theilt? Ich
glaube nicht. Ueberdies ist es bekannt, daß das Ansehen eines
Fürsten noch nie gelitten, dessen Menschlichkeit sich über das
Gesetz zu stellen wagte. Die Nachwelt nannte solche Fürsten gut
und edel, und so meine ich, dürfte die Wahl zwischen dem starren
Gesetz und der Milde nicht eben schwer sein.«
Der Fürst verrieth eine Bewegung, welche Sidoniens Worte in ihm
erzeugten; ihre Haltung und die Zeichen tiefen Seelenleidens hatten
überdies wie auf den Prinzen, so auch auf ihn bei ihrem Eintreten
einen tiefen Eindruck hervorgerufen, und so fühlte er sich fast
geneigt, auf ihre Vorstellungen einzugehen. Dies währte jedoch nur
wenige Augenblicke, alsdann machte sich sogleich das Bewußtsein
von der Nothwendigkeit, dem Gesetz jede wärmere Regung des
Herzens zu opfern, geltend, und er entgegnete nach kurzem
Ueberlegen:
»Es ist die Pflicht eines jeden Regenten, die Gesetze zu achten,
die er selbst gegeben hat.«
»Gewiß ist dem so, mein Fürst; es ist aber auch das schöne
Vorrecht der Regenten, die gegebenen Gesetze durch
Menschenliebe zu mildern. Was wäre ein Fürst, der nur das
verkörperte Gesetz darstellte? Dessen Sklave, weiter nichts. Sollten
Sie sich nicht ein höheres Ziel gesteckt haben? Ich hoffe es.«
Sidonie hätte ihre Worte nicht besser wählen können; dieselben
hatten die empfindlichste Stelle in des Fürsten Herzen berührt,
indem sie ihn zugleich zur Anerkennung der Wahrheit derselben
zwangen. Noch weniger ahnte sie, daß noch andere Umstände die
Wirkung ihrer Worte wesentlich erhöhten.
Unter dem empfangenen Eindruck schaute der Fürst einige
Augenblicke schweigend und gedankenvoll vor sich hin; kaum
jedoch fühlte er eine Anwandlung von nachgiebiger Schwäche, so
war er auch bedacht, sich in seinem Vorsatz zu behaupten, und sein
kalter, berechnender Verstand wies sogleich die Anwandlungen
milder Rücksicht von sich; jedoch wie es schien, nicht ohne einen
kurzen, heftigen Kampf.
Sidonien entging das nicht und ein beglückendes Gefühl zog in
der Voraussetzung durch ihr Herz, den Fürsten für ihren Wunsch
gewonnen zu haben. Sie sollte ihre Täuschung bald erkennen, denn
im Begriff, dem Fürsten das Glück zu bezeichnen, das er ihr durch
seine Milde schenkte, wehrte er ihrer Antwort durch eine
Handbewegung und bemerkte erregt:
»Kein Wort weiter über diesen Gegenstand! Ich wünsche nicht,
daß diejenigen Grundsätze, nach welchen ich die Bestimmungen
über Sie getroffen habe, einer weiteren Erörterung unterworfen
werden. Es würde zu nichts führen. Darum bitte ich, davon
abzubrechen.«
Sidonie erbleichte; sie erkannte, daß sie unter diesen
Verhältnissen auf nichts mehr zu hoffen hatte, da der Fürst jede
weitere Bitte bestimmt ablehnte.
Eine große Thräne rann über ihre bleiche Wange; der Fürst
bemerkte diesen Zeugen ihres tiefen Wehes nicht, denn er hielt die
Augen von ihr abgewandt, als ob er sich vor ihrem Anblick scheute.
Es trat eine kurze Pause ein, alsdann bemerkte Sidonie ruhig und
mit schmerzvollem Ton:
»Wol fühle ich, wie wenig angenehm Ihnen meine Worte sein
müssen, und ich bitte um Vergebung, wenn ich, ermuthigt durch
Mutterliebe und in dem Wahn, es könnte dieselbe einen wenn auch
nur schwachen Widerhall in Ihrem Herzen finden, Ihnen offen
meinen Schmerz, aber auch das Glück zeigte, das mir die
Gewährung meiner Bitte bereitet hätte. Doch ich will mich zufrieden
geben, da Sie mich auch dazu zwingen; aber, mein Fürst, bin ich
dazu auch genöthigt, so gestatten Sie mir doch, Sie zu erinnern,
welchen Namen die Welt dieser Maßnahme geben wird. Denn selbst
wenn mich auch die Menschen für schuldig erachteten, würden sie
dennoch nimmer die Trennung von meinem einzigen Kinde billigen.
Die Rechte der Mutter sind heilig, und wer dieselben in solcher
Weise zu schädigen wagt, verfällt dem Urtheil der Welt.«
»Sei es; ich kann dasselbe hinnehmen!« fiel der Fürst erregt ein.
»Nein, mein Fürst, nein! Flüchten Sie sich nicht hinter Ihr
fürstliches Ansehen; es schützt den Menschen in Ihnen nicht; nicht
den F ü r s t e n, sondern d i e s e n wird man verurtheilen. Denn über
allem Glanz, über aller Macht und Gewalt der Fürsten steht der
Mensch; man liebt und verehrt i h n, nicht die k a l t e f ü r s t l i c h e
G r ö ß e!«
Des Fürsten Antlitz zeigte ein bewegtes Mienenspiel, in welchem
sich die widerstreitendsten Empfindungen zu erkennen gaben; sein
Auge leuchtete rasch auf und verrieth eine ungewöhnliche