Understanding PCR A Practical Bench Top Guide

1st Edition Maddocks download

https://ebookmeta.com/product/understanding-pcr-a-practical-
bench-top-guide-1st-edition-maddocks/

Download more ebook from https://ebookmeta.com

Understanding PCR
A Practical Bench-Top Guide

Sarah Maddocks
Cardiff Metropolitan University, United Kingdom

Rowena Jenkins
Cardiff Metropolitan University, United Kingdom

AMSTERDAM l BOSTON l HEIDELBERG l LONDON

NEW YORK l OXFORD l PARIS l SAN DIEGO
SAN FRANCISCO l SINGAPORE l SYDNEY l TOKYO
Academic Press is an imprint of Elsevier
Academic Press is an imprint of Elsevier
125 London Wall, London EC2Y 5AS, United Kingdom
525 B Street, Suite 1800, San Diego, CA 92101-4495, United States
50 Hampshire Street, 5th Floor, Cambridge, MA 02139, United States
The Boulevard, Langford Lane, Kidlington, Oxford OX5 1GB, United Kingdom

Copyright Ó 2017 Elsevier Inc. All rights reserved.

No part of this publication may be reproduced or transmitted in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying, recording, or any information storage
and retrieval system, without permission in writing from the publisher. Details on how to
seek permission, further information about the Publisher’s permissions policies and our
arrangements with organizations such as the Copyright Clearance Center and the Copyright
Licensing Agency, can be found at our website: www.elsevier.com/permissions.

This book and the individual contributions contained in it are protected under copyright by
the Publisher (other than as may be noted herein).

Notices
Knowledge and best practice in this field are constantly changing. As new research and
experience broaden our understanding, changes in research methods, professional practices,
or medical treatment may become necessary.

Practitioners and researchers may always rely on their own experience and knowledge in
evaluating and using any information, methods, compounds, or experiments described
herein. In using such information or methods they should be mindful of their own safety and
the safety of others, including parties for whom they have a professional responsibility.

To the fullest extent of the law, neither the Publisher nor the authors, contributors, or editors,
assume any liability for any injury and/or damage to persons or property as a matter of
products liability, negligence or otherwise, or from any use or operation of any methods,
products, instructions, or ideas contained in the material herein.

Library of Congress Cataloging-in-Publication Data

A catalog record for this book is available from the Library of Congress

British Library Cataloguing-in-Publication Data

A catalogue record for this book is available from the British Library

ISBN: 978-0-12-802683-0

For information on all Academic Press publications

visit our website at https://www.elsevier.com

Publisher: Sara Tenney

Acquisition Editor: Jill Leonard
Editorial Project Manager: Fenton Coulthurst
Production Project Manager: Lucı́a Pérez
Designer: Mark Rogers

Typeset by TNQ Books and Journals

Author Biographies

Sarah E. Maddocks is a lecturer of Microbiology at Cardiff Metropolitan

University, the United Kingdom. She received a PhD from the University of
Reading in 2005 and worked on bacterial virulence before embarking upon
investigations into the hostepathogen relationship during infection. Her main
research interests involve the study of wound colonization, bacterial persis-
tence, and the shift from colonization to infection.
Rowena Jenkins is a lecturer in Microbiology at Cardiff Metropolitan Uni-
versity, from which she received her MSc in Biomedical Science and Medical
Microbiology and PhD, and a fellow of the Higher Education Academy. Her
main research has focused on the antimicrobial effects of Manuka honey on
potentially pathogenic microorganisms in health care and wound management.
Cellular morphology, physiology, biofilm prevention/disruption, adhesion/in-
vasion, virulence expression, and proteomic/genetic expression profiles of
organisms such as MRSA and Pseudomonas aeruginosa have been studied in
response to varying treatments with honey. The data generated by these in vitro
studies help reveal how antimicrobial agents might be applied in clinical
settings. Rowena is also exploring how novel antimicrobial agents can
potentiate antibiotics already in use but whose effectiveness is now challenged
by antimicrobial resistance.

ix
Chapter 1

Things to Consider Before

Preparing to Undertake Your
First Polymerase Chain
Reaction
ABSTRACT
This chapter provides practical advice on what needs to be addressed before under-
taking polymerase chain reaction (PCR). From keeping the workspace nuclease free to
recipes and shopping lists; information that is vital know and understand before putting
on a lab coat and entering the lab, is described. The reader is guided through the
practical aspects of preparing to undertake PCR with examples of reagents provided as
well as a list of common manufacturers of PCR reagents. Safety considerations are
discussed and thought is given to equipment and reagents that will be required for
analysis of the first PCR reaction.

1.1 INTRODUCTION
So, you have decided to tackle the polymerase chain reaction (PCR); this is an
extremely powerful technique that will enable you to amplify fragments of
DNA. PCR is also incredibly versatile, and once you have mastered the basics,
you will be able to apply the techniques you have learned to a host of mo-
lecular techniques including genetic profiling, detection, gene expression, and
genetic modification. The world of PCR can be overwhelming, from deciding
on your primer design, to where to buy your polymerase. It is therefore
important that you understand the fundamental requirements necessary to
prepare and carry out PCR, to avoid months of frustration or results you can
not even begin to comprehend.
There are a number of factors to consider when planning to undertake PCR
for the first time, and if these are addressed prior to putting on your lab coat
and picking up your pipette, then the whole process will run much more
smoothly, meaning you are more likely to be successful. Such considerations
include aspects of safety, preparation of reagents, and consideration of reaction
parameters and organization of your work area. This chapter will describe

Understanding PCR. http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-802683-0.00001-0

Copyright © 2017 Elsevier Inc. All rights reserved. 1
2 Understanding PCR

some of the considerations you need to address before heading into the lab; it
is a good idea to equip yourself with a pen whilst reading through this chapter
so that you can begin to plan your first PCR.

1.2 BASIC LABORATORY PREPARATION

Saying that it is important to work in a clean, organized, and orderly manner
might seem obvious but is imperative for successful PCR. PCR is a powerful
procedure in which small quantities of DNA are amplified; the success of
PCR can be affected by the presence of contaminants from the environment
or due to poor handling of reagents, or PCR inhibitors which are often
inherently present as a consequence of DNA preparation. Working in an area
that is free from possible sources of contamination or potential inhibitors is
therefore paramount. So first, ensure that your bench is free from clutter,
including left over experiments, reagents, used gloves, or plastics, to name a
few, that could contaminate your reaction. It is usually good practice to wipe
over your bench with a standard disinfectant or 70% ethanol before you
begindyou could also wipe the barrel of the pipettes you will use. Often
people use filter tips for PCR to prevent anything that might be in the barrel
of the pipette from being inadvertently introduced into the reaction. Some-
times, people use a dedicated “PCR” set of pipettes, but this is not paramount
providing you are confident that yours are clean! You will be handling very
small amounts of often colorless liquid, so make sure that your pipettes are
calibrated to ensure precision. Most of your PCR reagents will need to be
kept on ice, so have an ice bucket to hand and also somewhere to dispose of
waste, such as used tips and tubes. It goes without saying that you will need
to wear a lab coat and gloves (the latter to avoid contamination of your work
by you and to protect you from harmful chemicals)dif you think you have
contaminated the gloves you are wearing and that you might transfer this to
your PCR, then change your gloves. Below is a photograph showing a bench
that is setup for PCR (Fig. 1.1). You will notice the sensible work flow,
bringing reagents in from the left, preparing the reaction in the central area of
the bench, and disposing of used tips or empty tubes into an appropriate jar
which is in easy reaching distance.
To ensure that you remember to add each reagent, it is usually a good idea
to write yourself a list (an example list of ingredients with hints and tips are
given below; volumes will be addressed later) of the ingredients you will add
to your PCR reaction and tick them off as you add them; this is also useful
when purchasing reagents so that you do not forget anything.
You will usually be setting up more than one reaction at a time if you are,
for example, testing a new set of primers, titrating the template material, or
preparing replicate reactions. In this case, it is usually a good idea to prepare a
master mix of ingredients in one 1.5 mL tube, i.e., for five reactions multiply
the volume of each reagent to add by 5, and then divide this up between the
 Planning for PCR Chapter j 1 3

FIGURE 1.1 A PCR workbench.

PCR tubes that you have. This avoids inaccuracies during pipetting, or
problems if reagents have not properly mixed.
When using the PCR recipe list, you will most likely still be planning your
PCR “on paper,” designing primers and reaction parametersdif you are using
a predesigned set of primers with known reaction parameters you can move
onto the wet work and skip to Chapter 3 which describes how to analyze the
results of the PCR reaction.

PCR Recipe List, Hints, and Tips

l Template DNA: Decide how you will obtain this; will you use a commer-
cially available kit or an “in-house” extraction? Check the concentration of
the template material using either by UV spectroscopy or by electrophoresis
with a quantitative molecular weight marker (see Chapter 3).
l Primers (forward and reverse): If you need to design primers, please turn to
Chapter 2 for guidance. A good start point for PCR is to begin by adding
100 pmol per reaction, but you can prepare a series of dilutions to find the
optimum concentration to work with. Primers usually arrive lyophilized,
and the company you purchased them from will tell you how to recon-
stitute them (see Chapter 2). Once you have reconstituted your primers,
make a working stock of 100 pmol/mL, and then you would not be
constantly dipping into you “master” stock).
4 Understanding PCR

l dNTPs: These are usually purchased individually or as a premixed prep-

aration containing equal quantities of all four bases. These are usually
available at stock concentration of 100 mM (but please check the infor-
mation from the manufacturer before use) which will be diluted upon
addition to the reaction.
l MgCl2/MgSO4: It is vital for PCR to work; it acts as an enzyme cofactor
and also impacts the specificity and stringency of primer annealing. Buffers
that are provided with commercially available PCR enzymes will often
include Mg2þ at an amount that will give a working concentration of
1.5 mM when diluted in the reaction. Some enzyme systems provide
Mg2þ-free buffers and a stock solution of MgCl2 or MgSO4 that is added
accordingly, this allows the user to prepare a concentration range of Mg2þ
as part of the optimization process.
l Reaction buffer: This is usually supplied with the enzyme as a 5 or 10
concentration that is diluted as you prepare the reaction; the reaction buffer
may or may not contain Mg2þ (see above).
l Nuclease-free water: Sometimes, this is provided with the enzyme but if
not can be purchased from a large number of suppliers or can be prepared
using nanopure water (see Section 1.3). It is advisable to keep nuclease-
free water in small aliquots to minimize problems associated with
contamination.
l Polymerase: There is a number of different polymerase available, the most
common is Taq. Polymerases with a number of different characteristics are
available and so that can be selected according to application. For example,
it is possible to buy “long polymerase” or “short polymerase” which as the
names suggest are optimized for amplification of short or long sequences.
Some enzymes have proof-reading activity and are good for cloning where
errors need to be minimized (see Chapter 2).
Once you have considered all of the above parameters, have designed your
primers and prepared your template material, it is a good idea to write a
reaction-specific “ingredient list” to pin up at your workstation so that you can
easily refer to it when preparing your reaction.

1.3 MAINTAINING A NUCLEASE-FREE ENVIRONMENT

Nucleases are the nemesis of any successful PCR. These are found just about
everywhere and will rapidly degrade DNA, including primers, template DNA,
and your PCR product. PCR reagents are provided “nuclease free,” and it is
possible to buy additional nuclease-free reagents from most laboratory
suppliersdyou will find it useful to maintain a good stock of nuclease-free
water. It is a good idea to keep reagents in small quantities so that if they
should become contaminated, you can throw them away and start afresh. If
your budget does not stretch to cover the costs of buying nuclease-free water,
 Planning for PCR Chapter j 1 5

you can always prepare your own by autoclaving nanopure water. Again, it is
advisable to prepare small aliquots of between 10 mL and 20 mL for this
purpose. It is always the best to purchase things like reaction buffers for en-
zymes and magnesium solutions, and most of these will come with the enzyme
when you buy it (see Section 1.6 for where to buy reagents and supplies).
As mentioned previously, if possible, it is a good idea to use filter tips when
setting up PCR reactions to help you to maintain a nuclease-free environment;
these prevent aerosols associated with your pipettes from getting into your
PCR reaction and therefore contaminating it. These can be purchased from a
wide range of suppliers. DNase-free and RNAse-free PCR tubes can also be
purchased from numerous suppliers (see Section 1.6), these usually arrive in
large bags so it is a good idea to portion them out into smaller, sterile con-
tainers (if you prefer, you can autoclave them as you would any other
microcentrifuge tube). Because you can introduce nucleases to your working
environment, it is important that you always wear a lab coat and gloves when
handling any PCR reagents, more specifically ensure you wear a “fresh” pair
of gloves when beginning PCR work and that your lab coat is not filthy!
Unless you have a dedicated bench space that is only used for molecular
work, it is wise to clean your bench space before setting up your reaction;
you can use disinfectant or 70% ethanol to do this, but there are some
commercially available sprays that are specifically designed to remove nu-
cleases and can be used to surface treat benches and equipment such as pi-
pettes or PCR tube racks. Below is a recipe to prepare a solution that will do
this job; if you choose to make this solution ensure that it is prepared using
nanopure water and in a glass container, then sterilized by autoclave for
15 min at 121 C prior to use. Treat it as you would any other nuclease-free
reagent and prepare only small “working” volumes. If at any point you think
you might have contaminated your work space or equipment, it is advisable
to clean everything again as there is nothing more frustrating than running a
PCR to find later that there are problems associated with the presence of
nucleases or other contaminants.

Recipe for Surface Cleaner

Prepare 50 mL 10 M NaOH, and 5 mL 10% (w/v) SDS, add these to 445 mL
nanopure water, and autoclave for 15 min at 121 C. NaOH and SDS should be
handled wearing gloves; SDS should be weighed out in a well-ventilated area,
or wearing a face mask, as it is a respiratory irritant.

1.4 CONSIDERATION OF TIMESCALES

Generally speaking, when considering the time scale needed to set up your PCR,
it is best to overestimate the amount of time you think you will need. There is
nothing worse than running out of time when trying to prepare the reaction or
6 Understanding PCR

rushing and making mistakes. If you are using predesigned primers and pre-
optimized reaction parameters you can head straight into the lab and get started.
However, if this is not the case then there are a few more things to consider.
Depending on the gene you are investigating, you may need to find and
identify the gene sequence and design primer pairs (Chapter 2). If you are
using novel or newly designed primers, they may not work first timedthe
concentration, thermal cycling conditions, or other parameters might need
optimizing (see Chapter 2 for common problems and troubleshooting). You
might find cross-priming if you are looking for more than one gene at a time or
the primers you have designed may dimerize (Chapter 2).
You will need to prepare template DNA; this can be done using a com-
mercial kit or you can use your own “in-house” methods (Section 1.4). Either
way, this will take time, 30 min to a couple of hours with a commercial kit
(depending on the kit you use), or half to a full day, if using your own method.
After extracting the DNA, you will have to check its concentration and purity
(Chapter 3), and if there are problems at this stage, you might need to repeat
the extraction. Each of these adjustments could take a day or more of your
time so it is easy to see how, if everything does not run perfectly first time,
things might take longer than expected.
Something that people tend to forget to factor in is the delivery time for the
reagents. Depending on your ordering system and the supplier, sometimes
reagents can take a couple of weeks to arrive; it is always best to ask the
company when ordering to see if they can tell you the expected delivery time.
However, if you have everything in the lab and your template DNA was
successfully extracted, you should be able to perform a standard PCR and gel
analysis within a day.

1.5 GENERAL PROTOCOL FOR EXTRACTING DNA

This protocol is good for extracting DNA from eukaryotic cells that do not
have a cell wall, it can be adapted to extract DNA from any type of cell that
has a cell wall by the addition of specific enzymes (such as lysozyme for
bacteria) or by lysis using bead-beating. It is intended to be carried out on a
small scale using 1.5 mL microcentrifuge tubes. For lysing bacteria, can either
purchase a beadbeater or use a series of vortexing steps, as described here.
To lyse by vortex, first pellet the cells by centrifugation, discard the su-
pernatant and resuspend the pellet in lysis buffer, to this add a small amount of
0.1 mm glass beads (to a depth of 50e100 mL)dyou will need to sterilize
them by autoclave firstdthen vortex for 30 s, rest on ice for 30 s, vortex for
30 s 5e6 times and continue as per the protocol below.
Add 100 mL of lysis buffer to your sample (if you are not lysing by
beatbeating and/or vortex the sample is simply pelleted by centrifugation, and
the supernatant removed prior to addition of the lysis buffer; if you have
mechanically lysed the sample, do not add more lysis buffer) and resuspend
the material by pipetting.
 Planning for PCR Chapter j 1 7

Lysis Buffer Recipe (Prepare in PCR-Grade, Nuclease-Free Water)

50 mM TriseHCl (pH 8.5)
1 mM EDTA
0.5% SDS
Store at room temperature
Add 3 mL of a 1 mg/mL solution of RNase A to your sample and incubate
the sample for 10 min at 37 C
Next, add 200 mg proteinase K and incubate for a further 10 min at 37 C
You will need to heat inactivate the proteinase K by placing the samples at
95 C for 5 min
Next, cool the samples on ice for 5 min, centrifuge the samples using a
microcentrifuge, at maximum speed (usually 13 k rpm) for 5 min
Transfer the supernatant to a fresh microcentrifuge tube
Add one volume of phenol:chloroform:isoamyl alcohol (25:24:1; this can
be purchased as a preprepared mixture) and vortex the sample to mix
Centrifuge the tube at 2 k rpm for 5 min (repeat the centrifugation if two
distinct layers have not yet formed)
Remove the aqueous (top) layer and transfer it to a fresh microcentrifuge
tube
Add one volume of phenol:chloroform:isoamyl alcohol (25:24:1) to the
sample
Centrifuge for 5 min at 2 k rpm and remove the aqueous layer into a fresh
microcentrifuge tube
Add 0.1 volume of sodium acetate (3 M pH 5.5)
Add 1 mL 100% ethanol or isopropanol (ice cold; you can at this point
leave the sample at 20 C overnight) to precipitate the DNA
Centrifuge the samples at 13 k rpm for 30 min and pour away the ethanol/
isopropanoldblot the tube gently on some paper towels to ensure that any
residual solvent is removed
Wash the DNA pellet (you might not be able to see it, but you will have to
trust it is there!) by adding 750 mL 70% ethanol to the tube and centri-
fuging for 1 min at 13 k rpm
Pour away the ethanol and blot as before
Air dry the pellet by leaving the lid of the tube open, at room temperature
for 5e20 min
Resuspend the pellet in 50e100 mL TriseEDTA (TE) buffer

Recipe for TE buffer (Prepare Using PCR Grade, Nuclease-Free Water)

10 mM TriseHCl (pH, 7.5)
25 mM EDTA (pH, 8.0)
Once you have successfully extracted the template DNA you are ready to
analyze and quantify it (see Chapter 2).
8 Understanding PCR

1.6 WHAT REAGENTS YOU WILL NEED AND WHERE TO

BUY THEM
There are several essential reagents you will need to buy before you can run a
PCR reaction, and there are many suppliers available who can supply the
necessary reagents. The list below outlines the basics and serves as a tick-list
to ensure you have everything you need.

Reagent Checklist
For PCR:
DNA extraction kit (if using)
Glass beads (if not using a kit)
Lysis buffer (if not using a kit)
RNAse A, proteinase K (if not using a kit)
Phenol:chloroform:isoamyl alcohol (25:24:1; pH, 7.5e8 for DNA)
Ethanol (100% and 70%)
Sodium acetate (3 M; pH, 5.5dcan be purchased or made)
Polymerase enzymes and associated buffers (usually supplied as
enzyme þ tube of concentrated reaction buffer þ Mg2þ solution)
Primers (purchased as lyophilized powder you will need to reconstitute)
dNTPs (mixed or individually)
Nuclease-free water (or use nanopure water)
Reaction tubes (normally nuclease-free PCR tubes)
Filter tips
All of these reagents can be purchased from numerous suppliers; it is
usually the best to see if anyone else has been working with PCR within your
department, as there may be a preferred supplier. It is also always worth
speaking to a few companies, to see which have the best deals on the products
you are interested in. Some (but by no means all) of the companies you are
likely to come across when shopping for these reagents are given below. Each
will have their own regional website depending on the country you are in; you
can link through to these from the webpages in the following list:
Bio-Raddwww.biorad.com
Sigmadwww.sigmaaldritch.com
Qiagendwww.qiagen.com
Thermo Scientificdwww.thermoscientificbio.com
Promegadwww.promega.com
GE Healthcare Lifesciencesdhttp://www.gelifesciences.com
Life Technologiesdhttp://www.lifetechnologies.com
Biolinedwww.bioline.com
 Planning for PCR Chapter j 1 9

1.7 SAFETY CONSIDERATIONS

It is of the utmost importance to consider the risks being taken when con-
ducting any experiment, and it is no different with PCR. Basic safety protocols
for your laboratory should be followed but in addition to this the material
safety data sheet for every reagent you are using should be studied and you
should be aware of how to safely store, use, and dispose of each reagent as
well as the appropriate action to take should accidental spillage occur. It is
always the best to label your reagents clearly with their identity if you have
made aliquots into new containers, and the correct hazard labels should be
attached to them in case anyone else has to deal with a spill. As such, it is
imperative to handle all reagents wearing a lab coat, safety glasses, and gloves.
You should also prepare a risk assessment containing each reagent you are
using and display at your workstation for easy access.

SUMMARY
With the exception of your primer pairs, you will by now have designed,
prepared, and ordered all of the things you need to undertake your first PCR
and will also have your template DNA ready to usedthis can be stored at
either 4 C (short term) or 20 C (long term). In the next chapter, you will
learn how to design primer pairs and analyze (quantify and assess purity) the
template DNA and PCR product.
Chapter 2

Designing and Ordering Your

Polymerase Chain Reaction
Primers
ABSTRACT
This chapter provides practical advice on designing polymerase chain reaction primers
and optimizing them. From using databases to identify genes and ordering primers, the
reader is guided through the practical aspects of primer design and the common pitfalls.
Guidance on how to test a new pair of primers is given along with a trouble-shooting
guide.

2.1 INTRODUCTION
In order to amplify a gene of interest you need to know the gene sequence so
that you can design primers. Primers are short sequences of DNA that are
designed to be complementary to regions of your gene of interest; the area of
DNA sequence in between the primers is the part that is amplified by poly-
merase chain reaction (PCR) and is referred to as the amplicon or PCR
product. If your primers are not correctly designed, you can run into problems
such as mispriming (where the primer binds to the wrong bit of DNA), mul-
tiple priming (where the primer binds many regions of DNA) or no priming at
all (if the primers, for example, form a secondary structure rather than
annealing to your template DNA).
Once you have designed and ordered your primers you must handle and
store them correctly as they can degrade fairly quickly. Short pieces of DNA
are ideal targets for DNases which can be inadvertently introduced into your
primer stock. So always make sure you handle your primers in a “clean” way
(as described in Chapter 1), wearing gloves, and using filter tips. Prepare a
working stock of the primers (see Section 2.10) and store the master stock,
relatively untouched.
This chapter will guide you through the basic parameters for primer design,
handling, and preparation; by the end of it you should be able to confidently
design PCR primers pairs that work!

Understanding PCR. http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-802683-0.00002-2

Copyright © 2017 Elsevier Inc. All rights reserved. 11
12 Understanding PCR

2.2 CHOOSING A “TEMPLATE”

Before you can begin to design your primers you need to identify the target
gene or piece of DNA that you wish to amplify. Since the sequence of your
primers is fundamental to their success, where possible use gene sequence
from organisms that have had their genome fully sequenced, if not, it is
possible to identify DNA sequence for primer design using partially complete
genome sequence or contigs, which you can find on online databases (see
Section 2.3).
Decide the overall aim of your PCR; you might want to amplify just a short
sequence (try not to choose a target that is less than 100 bp), an entire gene, an
intergenic sequence, or several operonic genes (for prokaryotes). Very long
stretches of DNA (of 10 kb or above) can be difficult to amplify, but enzymes
exist that are specific for long PCR amplicons (see Chapter 1). With this in
mind, you must decide where your amplicon will begin and end, so essentially
the size of your amplicon. As a general rule of thumb, if you are trying to
amplify a whole gene it is a good idea to begin at the start codon and end at the
stop codon (Fig. 2.1), you might need to adjust the primer sites by a few base
pairs to account for annealing temperatures (see Section 2.7), but it is at least a

FIGURE 2.1 Gene sequence showing primers designed to prime at the beginning and end of the
gene, thus amplifying the entire gene.
 Primer Parameters Chapter j 2 13

start. On this figure, the start and stop codon are highlighted in bold, and the
selected primer sequence is highlighted in yellow. If you are not amplifying an
entire gene, decide the length of your required amplicon and pick an area that
you would like to be your forward primer and another that will be your reverse
primerdyou will invariably make adjustment to this initial choice, but again,
this gives you something to start with.
The GþC content of the genome you are working with can cause problems
for primer design. An “ideal” organism will have a typical GþC ratio of about
50%. Organisms with high GþC ratios mean that you can end up with primers
that have very high annealing temperatures. Try to avoid regions of DNA that
are highly repetitive or have runs of any one basedthis can be tricky if you are
attempting to amplify an intergenic region of sequence. If the odds are stacked
against you in terms of the sequence you have to work with, then design the
best primer pair that you can and then adjust your PCR parameters to maxi-
mize your chances of success (see Section 2.12 for common problems and
troubleshooting).

2.3 FINDING GENE SEQUENCES USING ONLINE

DATABASES
This is all very well, but how exactly do you find the sequence you want to
work with? There are a number of online databases you can use. If you are
lucky, there might be a designated genome database for the organism you are
interested in, for example, for Pseudomonas aeruginosa, the database www.
pseudomonas.com is very useful. Alternatively, the NCBI database is a good
place to look (www.ncbi.nlm.nih.gov). This section of the chapter will assume
that there are no specific databases and will guide you through how to use the
NCBI database to find DNA or gene sequence.
On the NCBI homepage (Fig. 2.2), select “DNA & RNA” from the blue
menu on the left-hand side of the screen. From the list of databases that appear,
select “Genbank”. Genbank is the National Institute of Health genetic
sequence database, which provides an annotated collection of all DNA se-
quences that are currently publicly available. You have the option of searching
Genbank using “Entrez Nucleotide” or basic local alignment search tool
(BLAST), depending on the information that you have regarding the sequence
you wish to amplify.
If you have a sequence identifier, i.e., an annotated gene name or locus
number, you can type it into the search box in nucleotide. If you have a
nucleotide sequence but not annotation, you can use BLAST. For nucleotide,
simply type the gene name or locus number into the search box (Fig. 2.3) and
click search. It is often helpful to put additional information in here to narrow
the results, such as the name of the organisms and the subspecies or strain, e.g.,
Escherichia coli K12 fur (the bacterial name, its strain designation, and the
name of the gene of interest).
Exploring the Variety of Random
Documents with Different Content
der Anatomie des Marinos veranstaltete und
insbesondere in seinen Leistungen auf dem Gebiete
der Muskel- und Nervenanatomie daran anknüpfte.
Marinos stand in Beziehung zu Kointos (Quintus),
welcher Lykos aus Makedonien, Numisianos (in
Korinth) und Satyros (in Pergamon) zu Schülern
hatte; Schüler des Numisianos war wieder Pelops in
Smyrna. Von diesen Anatomen haben sich Lykos und
Pelops um die Muskellehre verdient gemacht;
diesem Zweige widmete sich auch Ailianos d. J.
ganz besonders.
Von den Alexandrinern des 2. Jahrhunderts wären
die Anatomen Herakleianos und Julianos zu
erwähnen.
Ueber alle diese Forscher erhalten wir nur
Andeutungen aus den Werken jenes großen Arztes,
der das Wissen und Können seiner Zeitgenossen und
Vorgänger aufsog, um die Medizin auf eine dauernde
Grundlage zu stellen, aus den Werken Galens.
 Galenos.
[←]

M o tt o:
Die Schriften des Hippokrates gaben
das Muster, wie der Mensch die Welt
anschauen und das Gesehene, ohne
sich selbst hineinzumischen,
überliefern sollte.
————————————
Der Verstand mischte sich indessen
auch in die Sache, alles sollte auf
klare Begriffe gebracht und in
logischer Form dargelegt werden,
damit jedes Vorurteil beseitigt und
aller Aberglaube zerstört werde.
Goethe.

Ermattet durch jahrhundertelanges Streben, das

oft im Kreise verlief, ersehnte die griechische Medizin
endlich ein abschließendes System, welches den
gleich Steinblöcken zerstreut umherliegenden
Erfahrungs- und Denkstoff zu einem einheitlichen
Baue vereinigen und den Aerzten jene apodiktische
Sicherheit gewähren sollte, die der Heilkunst des
Orients schon in grauer Vorzeit eigen war.
 Einheit der Krankheitsauffassung und Sicherheit
in der ärztlichen Praxis war freilich schon einmal
erzielt worden im - Hippokratismus, welcher die
Versöhnung aller vorausgegangenen Richtungen
bedeutete: der naiven Empirie und der rationell-
spekulativen Naturphilosophie, der koischen
Prognostik und der knidischen Lokaldiagnostik. Aber
das hippokratische Durchschauen des Einzelfalls, die
individualisierende Behandlung mittels Beobachtung
aller reaktiven Vorgänge des Organismus, war nur
die Gabe weniger auserlesener Aerzte, die sich an
genialem Künstlerblick, an gewissenhafter, gänzlich
unbefangener Naturauffassung dem
unvergleichlichen Koer näherten - die überwiegende
Mehrzahl verlangte nach einem kürzeren Wege,
der die Kunst zur erlernbaren Technik
gestaltete, die Therapie des Einzelfalles als
logische Konsequenz aus gegebenen
allgemeinen Prämissen ableitete. Dazu war
vor allem die Zerlegung der hippokratischen
„Physis“ in ihre konstituierenden Elemente
nötig, d. h. die Erforschung der physiologisch-
pathologischen Vorgänge. Versagte diese, so warf
man sich wieder der Empirie in die Arme.
 Von diesem Gesichtspunkte betrachtet, wird die
chaotische Zerklüftung verständlich, wie sie die
griechische Medizin nach Hippokrates mit ihren
mannigfachen Doktrinen und Sekten zeigt; in diesem
Lichte gewinnen die vielfach verschlungenen,
scheinbar oft abirrenden Wege ihren Sinn. In höherer
Potenz kehren eben alle Richtungen, welche
Hippokrates in seiner Person verknüpft hatte, sofort
nach ihm wieder, um sich in selbständiger
Ausgestaltung bis zur krassesten Einseitigkeit
fortzuentwickeln.
Die halb spekulative, halb rationelle ärztliche
Naturphilosophie wird zum Dogmatismus, der
sich teils auf humorale Hypothesen und das
Korrespondenzsystem der Qualitäten, teils auf
anatomisch-physiologische Tatsachen stützt.
Auf dem Boden Alexandriens zweigen von ihm zwei
Sekten ab: die mehr auf die klinische
Beobachtung Wert legenden Herophileer und die
den anatomischen Gedanken, die (knidische)
Lokaldiagnose pflegenden Erasistrateer. Da
beide das rationalistische Ideal, d. h. die logische
Ableitung der Therapie aus der Krankheitslehre nicht
verwirklichen, so erhebt sich in geläuterter Form der
Empirismus, um neuerdings zu imponierender
Bedeutung anzuwachsen. Der echte Hippokratismus
ist verschwunden, aber das anatomisch-
physiologische Wissen, die Zahl der
Krankheitsbilder, der Heilschatz hat sich
vermehrt und im Wettstreit der Sekten gewinnt die
Aetiologie, die Diagnostik und die
medizinische Logik nicht unerhebliche
Verfeinerung.
In Rom dauerten die alten Sekten teils allmählich
erstarrend weiter, teils erfuhren sie neue
Differenzierungen, wobei der von Asklepiades
gegebene Impuls zur gründlichen Reform der
Krankheitstheorie und Therapie wie ein Ferment
wirkte. Der Bithynier verflüchtigte die von
Erasistratos erweckte Solidarpathologie zum
Atomismus und brachte die schon von den
Gymnasten gepflegte, von den Hippokratikern
mit weiser Beschränkung angewendete
physikalisch-diätetische Behandlungsweise
zum Gipfel einseitigster Entfaltung. Doch verstand er
auch die seltene Kunst, den Dogmatismus der
Theorie mit der Individualisierung in der Praxis zu
vereinigen. Seine Nachfolger, die Methodiker,
konnten mit den Anhängern des humoralen
Dogmatismus deshalb rivalisieren und neben den
zahlreichen Empirikern siegreich das Feld behaupten,
weil sie einen Mittelweg einschlugen, der einen
Kompromiß zwischen der rationellen und der
empirischen Richtung darstellte. Ihre solidare
Krankheitslehre verlor sich nicht in spitzfindige
Subtilitäten über die fernsten Ursachen, sondern
blieb bei der Beobachtung gemeinsamer
Krankheitszustände (Strictum, Laxum) stehen,
ihre Therapie zog alle Hilfsmittel der Empirie heran,
unterwarf aber die Anwendung derselben
festgesetzten Indikationen, sie berücksichtigte
zwar in erster Linie den allgemeinen Zustand,
vernachlässigte aber dabei die Topika keineswegs
(allgemeine und Lokaltherapie). Wertvoll war es,
daß diese Schule den Quantitätsbegriff in die
Pathologie und Therapie einführte (Herauf- und
Herabstimmen der Körperkräfte durch quantitativ
graduierte Heilverfahren) - gegenüber der
dogmatischen Lehre von den Säftequalitäten
und von den spezifisch wirkenden
Organmitteln. Unbefriedigt von der bisherigen
Entwicklung suchte die pneumatische Schule den
Dogmatismus zu verfeinern, indem sie, im Anschluß
an die Stoa, die uralte Hypothese von der
„Lebensluft“ zu neuem Ansehen erhob und die
Lehre von den Krankheitsursachen dialektisch
zerfaserte. In der Praxis spielte es allerdings wenig
Rolle, ob man die Dyskrasien oder die Anomalien des
Pneuma als primäre Krankheitsursache ansah,
bedeutsam aber wurde es, daß man jetzt wieder
mehr im Geiste des Hippokratismus auf den
Allgemeinzustand, auf die Krankheitsstadien,
auf die individuellen Verhältnisse achten lernte
und die hygienisch-diätetischen Kuren gegenüber
den arzneilichen bevorzugte. Die
Pulsuntersuchung, mittels welcher man den Tonus
des Pneuma, d. h. den Kräftezustand, exakt zu
beurteilen versuchte, wurde freilich (ebenso wie die
Qualitätenlehre) noch subtiler, als dies einst durch
Herophilos geschah, ausgesponnen, doch gehört sie
immerhin zu den besten Leistungen der griechischen
Medizin. Entsprang die pneumatische Schule dem
humoralen Dogmatismus und stützte sie sich schon
gleich im Beginne stark auf die Methodiker
(Tonuslehre, diätetisch-physikalische Therapie u. a.),
so schrieb sie, auf ihrem Höhepunkt angelangt, offen
den Eklektizismus auf ihr Banner.
Die Krankheitstheorie beherrschte zwar
vorwiegend das Interesse der führenden Geister,
aber im stillen machten inzwischen doch auch die
medizinischen Hilfswissenschaften: Anatomie,
Physiologie, Arzneimittellehre und die
therapeutischen Zweige, namentlich die Chirurgie,
nicht unbedeutende Fortschritte.
Alle diese Bestrebungen und Leistungen lagen im
Grunde in den hippokratischen Schriften angedeutet
und vorgezeichnet; von Hippokrates ausgehend
divergierten sie nach allen Richtungen. Die einseitige
Entwicklung hatte einzelne Gedanken oft bis zur
Hypertrophie entfaltet, der Umkreis der
Realkenntnisse war auf manchen Gebieten
beträchtlich erweitert worden, aber es fehlte das
umschlingende Band, es mangelte der
Konzentrationspunkt, der die mächtigen
Strahlenbündel des medizinischen Denkens wieder
vereinigte. Nicht von einer Sekte, nicht von einer
Schule, sondern nur von einem tatkräftigen, scharf
denkenden, allseitig ausgebildeten Manne, der das
gesamte Wissen und Können literarisch in sich
aufzunehmen und kritisch zu verarbeiten verstand,
durfte man einen befriedigenden Ausweg aus dem
Wirrsal der Strömungen erhoffen. Im 2. Jahrhundert
n. Chr. ging ein solcher führender Geist aus dem
Lande hervor, welches die Wiege der griechischen
(und damit der europäischen) Kulturmedizin gewesen
und welches der antiken Welt die meisten
bedeutenderen Aerzte geschenkt hatte, aus
Kleinasien[16]. Es war der, nach Hippokrates als
größter Arzt des Altertums gefeierte Galenos. In
ihm erreichte die griechische Medizin nicht
nur ihren zweiten Höhepunkt, sondern ihren
erkenntnistheoretischen Abschluß, und im
Grunde bedeutet die ganze vorausgegangene
Entwicklung nichts anderes als den
gewaltigen geistigen Prozeß, welcher unter
den mannigfaltigsten Umwandlungen die
hippokratische Heilkunst in die galenische
Heilwissenschaft hinüberführte.
Galen wurde um 130 n. Chr. zu Pergamos
geboren, in der einstigen Attalidenstadt, welche sich
auch in Römerzeiten hohen Ansehens als Pflegestätte
der Kunst und Wissenschaft, als Kultort des
Asklepios erfreute.
Die erste Erziehung empfing er von seinem Vater,
dem wohlhabenden Architekten Nikon, welcher, in
mathematisch-naturwissenschaftlichen Fächern,
außerdem auch in der Philosophie sehr bewandert,
den bildsamen Geist des Knaben schon früh in die
gleiche Richtung lenkte. Mit scharfer Logik vereinigte
übrigens Nikon gleich anderen mathematisch
begabten Männern einen wundersamen Zug von
Mystik, der sich insbesondere in seiner
Traumgläubigkeit aussprach.
Die frühere Ansicht, daß 131 als Geburtsjahr
anzunehmen sei, ist aufgegeben worden, doch schwanken die
gegenwärtigen Annahmen zwischen 130, 129 und 128. — Seit
der Regierung des Antoninus Pius begann eine n e u e
G l a n ze p o c h e d e r t h e u rg i s c h e n H e i l k u n s t i n d e n
A s k l e p i o s t e m p e l n. Die Liebhaberei dieses Kaisers für alle
Wahrsagerkünste und namentlich für die Gesundheitsorakel
— in seiner Vaterstadt Lanuvium befand sich das
Schlangenorakel der Juno Sospita oder Hygiea - gab das
Signal, d a ß ü b e ra l l , w o a l t e Te m p e l d e s H e i l g o tt e s
vo r h a n d e n wa re n , d e r A s k l e p i o s d i e n s t n a c h l a n g e r
E r s t a r r u n g n e u b e l e b t w u rd e (Prozessionen, Inkubation,
Gedächtnismünzen), und bald füllten sich die verlassenen
Hallen der Heiligtümer zu Epidauros, Kos, Tralles, Pe rg a m o s
etc. mit hilfesuchenden Kranken. In Pergamos, wo während
der Jugendzeit Galens der berühmte Tempel des Zeus-
Asklepios erbaut wurde, scheint zwischen der rationellen
ärztlichen Wissenschaft und der Priestermedizin das beste
Einvernehmen bestanden zu haben.
Galen nennt seinen Vater, an dem er mit
schwärmerischer Liebe hing, nie ohne Ehrfurcht. Ganz anders
schildert er dagegen die Mutter. „Ich hatte,“ so sagt er, „das
große Glück, einen leidenschaftslosen, gerechten, braven und
menschenfreundlichen Vater zu besitzen, dagegen eine
Mutter von so jähzorniger Art, daß sie mitunter ihre Mägde
biß, fortwährend schrie und mit dem Vater zankte, schlimmer
als Xanthippe mit Sokrates.“ Nikon nannte wahrscheinlich, im
Glauben an den Spruch Nomina sunt omina, den Sprößling
Γαληνός, was so viel wie der Ruhige, Friedliche bezeichnet,
 doch das cholerische Temperament der Mutter erbte sich im
Sohne fort, wie die Schreibart des großen Arztes allzuoft
deutlich beweist.

Nach vollendetem 14. Jahre lernte Galen bei

verschiedenen Lehrern seiner Vaterstadt die
Ideengänge der Stoa und Platonik, der
peripatetischen und epikureischen Philosophie
kennen. Er empfand für die philosophischen Studien
die größte Neigung und wollte sie ausschließlich
fortsetzen; doch ein Traum seines Vaters, der als
Inspiration des Asklepios angesehen wurde,
veranlaßte den 17jährigen Jüngling, den
eingeschlagenen Weg zu ändern und sich fortan
vorzugsweise der Medizin zu widmen - ein Entschluß,
welcher für diese selbst wohl am bedeutsamsten
werden sollte! Mathematisch-naturwissenschaftlich
vorgebildet, in der Logik und Dialektik trefflich geübt,
wurde er Schüler von ärztlichen Meistern ganz
verschiedener Richtung, des Anatomen Satyros, des
Hippokratikers Stratonikos, des Empirikers Aischrion
u. a. - so wie er früher, ohne einem einzigen Systeme
zu folgen, die widersprechenden Lehrmeinungen der
führenden philosophischen Denker zur selbständigen
Verarbeitung in sich aufgenommen hatte. Der junge
Mediziner benützte in Pergamos jede Gelegenheit,
um interessante Krankheitsfälle zu beobachten, er
hielt mit seinem kritischen Urteil sogar gegenüber
den Autoritäten nicht zurück und bereicherte seine
praktischen Kenntnisse zuweilen auch durch
volksmedizinische Heilarten.
Galen hat in seinen Schriften so viel biographisches Detail
hinterlassen, daß man sich über seinen Studiengang und
seine späteren Erlebnisse in der Praxis daraus ziemlich genau
unterrichten kann. - Pergamos gewährte durch sein
Asklepieion, zu dem zahllose Kranke pilgerten, die günstigste
Gelegenheit zu medizinischen Beobachtungen. Unter anderem
sah Galen viele Fälle während einer Karbunkelepidemie (die
Bloßlegung der tieferen Teile durch die Geschwüre war sehr
instruktiv für das anatomisch-chirurgische Studium), und er
berichtet, daß sein Lehrer Stratonikos veraltete Ulcera
glücklich zu behandeln verstand. Charakteristisch bleibt es,
daß er die Wunderkuren des Asklepios - auf dessen
Weisungen zu achten er stets vorgab - naiv-gläubig hinnahm
und mehrere der göttlichen Heilungen (z. B. eines Falles von
chronischem Seitenstechen) unter seinen
Jugenderinnerungen später anführte. Auch sonst berichtet er
aus dieser Zeit manche Wundergeschichten und rühmt es
seiner Heimat fälschlich nach, daß man dort, angeregt durch
zufällige Erfahrungen, zuerst auf das Viperngift als Heilmittel
gegen Lepra u. a. aufmerksam wurde.

Nach dem Tode des Vaters verließ Galen die

Heimat, um an den vornehmsten Pflegestätten der
Medizin und auf Reisen eine höhere ärztliche
Ausbildung und allgemeine Kenntnisse (z. B.
philosophische und linguistische) zu erlangen. In
Smyrna hörte er Pelops, der sich insbesonders
durch Untersuchungen über Muskelanatomie
auszeichnete, dort erweiterte er auch in Gesellschaft
der tüchtigsten Aerzte seine Erfahrungen, z. B. über
Nervenleiden und chirurgische Affektionen, und
setzte seine philosophischen Studien fort. Der
Aufenthalt in Korinth wurde wegen des Verkehrs mit
dem Anatomen Numisianos belehrend. Auf der
Reise durch Kleinasien und Palästina vermehrte er
seine naturhistorisch-pharmakologischen Kenntnisse
durch Autopsie. Mit den höchsten Erwartungen aber
zog er nach Alexandreia, wo die Osteologie und
Zergliederungskunst am besten zu studieren war, und
der Zusammenfluß von Kranken aller Länder dem
Wißbegierigen eine Fülle von klinischen
Erscheinungen darbot, wo es unter der Menge von
Aerzten Vertreter der verschiedensten Richtungen
gab. Tatsächlich dankte Galen der alexandrinischen
Schule und der eigenen Beobachtung
außerordentlich viel; er nennt Herakleianos und
den Methodiker Julianos als Lehrer, spricht sich aber
über die Vorlesungen des letzteren höchst ungünstig
aus. Zu diesem Urteil mag nicht wenig der Umstand
beigetragen haben, daß der Erwähnte polemisch
gegen die Aphorismen des Hippokrates aufzutreten
wagte und hierdurch die Empfindungen, welche
Galen für den großen Koer schon früh hegte und bei
verschiedenen Hippokrates-Kommentatoren
(Satyros, Pelops, Numisianos) kennen gelernt
hatte, tief verletzte.
Nach 9jähriger Wanderschaft finden wir den
Pergamener wieder in der Heimat. Es scheint ihm ein
bedeutender Ruf vorangegangen zu sein, denn schon
war er durch einige anatomisch-physiologische
Abhandlungen bekannt geworden, und mehrmals
hatte der junge Arzt seine besondere Geschicklichkeit
bewiesen; zudem kamen ihm jetzt die guten
Beziehungen zur Priesterschaft zu gute. Und so
wurde er denn nach Vollendung des 28.
Lebensjahres von dem Oberpriester, dem die
Abhaltung der sommerlichen Festspiele oblag, zum
Gladiatorenarzt ernannt - eine Stellung, die er vier
Jahre mit Erfolg bekleidete.
Galen verfaßte schon vor 151 n. Chr. eine für Hebammen
bestimmte Anatomie des Uterus, eine Diagnostik der
Augenkrankheiten, drei Bücher über die Bewegung der Lunge
und die Schrift über die ärztliche Erfahrung (Polemik zwischen
Pelops und dem Empiriker Philippos).
Noch im reifen Mannesalter legt er großen Wert auf die
Erfahrungen, welche er in seiner Jugend an sich und anderen
gemacht hatte. Wiederholt war er zur Herbstzeit infolge
unmäßigen Obstgenusses bedenklich erkrankt, in seinem 28.
Jahre drohte ihm angeblich aus gleicher Ursache die Gefahr
 eines inneren Abszesses, so daß er dem Obst ganz zu
entsagen beschloß. Die damalige Heilung schrieb er nur der
Gnade des A s k l e p i o s zu, als dessen Diener er sich fortan
erklärte. Einige Male machte er verschiedene Fieber durch -
dies wurde mit einem Schlage anders, seitdem er sich einer
rationellen Lebensweise nach seinem eigenen diätetischen
Systeme befleißigte. In Alexandreia erwarb er reiche
Erfahrung über die Wirkung der Nahrungsmittel, des Klimas u.
a., auch heilte er einen Studienfreund, der infolge des
Genusses unreifer Datteln erkrankt war, in Pergamos kurierte
er mehrere Patienten nach eigener Methode, ein Halsleiden
durch ein aus grünen Nußschalen bereitetes Mittel, einen
Leberschmerz durch Venäsektion zwischen Daumen und
Zeigefinger etc., auch sammelte er Material, um über die
Lehre von den kritischen Tagen klar zu werden.
Als Gladiatorenarzt hatte er zwar vorwiegend mit
Chirurgie zu tun, wobei er angeblich neue Methoden ersann
(z. B. bei Schwerverwundeten Befeuchtung der Verbände mit
Rotwein, um Entzündung zu vermeiden, Behandlungsweise
von Sehnenverletzungen), aber mit offenem Blick verwertete
er auch geeignete Fälle zur Vertiefung seines anatomisch-
physiologischen Wissens und sorgfältig nützte er die an
Athleten gemachten Beobachtungen für die Diätetik und die
Lehre von der Heilgymnastik aus.

Im Bewußtsein seines reichen Könnens, von

brennendem Ehrgeiz erfüllt und sehnsüchtig nach
einem größeren Wirkungskreise Verlangen tragend,
verließ Galen neuerdings die Vaterstadt, wo gerade
ein Aufstand ausgebrochen war, um in Rom sein
Glück zu wagen; von der Uebersiedelung nach Rom
versprach er sich mit Recht eine beträchtliche
Erweiterung seiner ärztlichen Erfahrungen. (Er stellte
in dieser Beziehung einen Vergleich an zwischen der
Riesenstadt und den kleinen Städten, in denen
Hippokrates forschte.) Schon gleich beim Eintritt
durch einige Landsleute gefördert, gelang es ihm
sehr rasch, nicht nur festen Fuß zu fassen, sondern
durch überraschende Diagnosen, durch unerwartete
Heilerfolge, welche mit der bisherigen
Behandlungsweise oft im grellsten Widerspruch
standen, Aufsehen zu erregen und sich einen Namen
zu machen. Wie einst bei Asklepiades, so währte es
auch bei Galen nicht lange, da erfreute er sich der
Gunst geistvoller und vornehmer Persönlichkeiten,
und noch höher wuchs sein Ruhm, als er vor der
Elite der römischen Gesellschaft Vorträge über Bau
und Leistung des Körpers in ansprechender Form zu
halten begann. Zu seinen Freunden zählten die
Philosophen Eudemos und Alexander von Damaskus,
und bewundernd hingen an dem Gefeierten der
Konsular Boethus, der spätere Stadtpräfekt Sergius,
M. Civica Barbarus, der Oheim des Kaisers Lucius
Verus, und der Schwiegersohn Marc Aurels, Cn.
Claudius Severus -- Männer von größtem Ansehen
und Einfluß. Doch der Pergamener ging weder in
seiner oft einträglichen Praxis noch in dilettantischer
Rhetorik auf, sondern arbeitete wissenschaftlich ernst
und unaufhaltsam weiter, und gerade während dieser
Epoche entstanden mehrere der bedeutendsten,
umfangreichsten anatomisch-physiologischen Werke.
Die großen Erfolge, welche Galen in Rom als
Praktiker, Forscher und Lehrer erzielte, fanden aber
bald in manchen betrübenden Eindrücken und
Erlebnissen ihr Gegengewicht. Das sittliche Niveau
der bunt zusammengewürfelten, ungleich
ausgebildeten, in Sekten zerfallenen römischen
Aerzteschaft war gewiß, wie aus der
zeitgenössischen Literatur ersichtlich ist, ein sehr
niederes; entsprechend dem ganzen Zeitcharakter
bekämpfte man sich teils in wenig maßvollem Ton,
teils mit den vergifteten Waffen der Intrige;
schonungslos deckte einer die Schwächen des
anderen vor dem Forum des Publikums auf, einzig
allein bemüht, selbst mit den unlautersten Mitteln
das eigene Renommee zu heben. Man kann sich
ausmalen, mit welch scheelen Blicken das wachsende
Ansehen des neuen Ankömmlings verfolgt wurde, der
allzurasch seine Konkurrenten durch überragende
Leistungen überholte. Aber der Neid mußte geradezu
zur Mißgunst, zum offenen Hasse ausarten, als der
Pergamener, unleugbar von großer Eitelkeit und
Selbstbewunderung erfüllt, in Wort und Schrift, in
Vorträgen wie am Krankenbette seine Ueberlegenheit
in hochfahrendem Ton zur Schau trug, mit
verletzendem Spotte die Blößen der Gegner aller
Welt offenbarte, die herrschenden Schulen
(Erasistrateer, Methodiker) lächerlich machte und
nicht selten auch selbst mit nichts weniger als
einwandsfreien Mitteln um die Gunst des Publikums
buhlte, ja dieses zum Richter aufrief.
Gestützt wahrscheinlich auf Tagebuchaufzeichnungen
schildert Galen später in weitschweifiger und von Eigenlob
triefender Darstellung die Kurerfolge und diagnostischen
Kunststücke während der ersten römischen Jahre. Man
ersieht daraus, daß er sich oft, wo die reine Wissenschaft ihn
im Stiche ließ, durch schlaue Berücksichtigung zufälliger
Umstände zu helfen wußte, daß er mit tiefer
Menschenkenntnis dort suggestiv zu wirken verstand, wo der
Arzneischatz versagte. „Oftmals,“ so spricht er zu seinen
Schülern, „bietet uns der Zufall die Hand zur Berühmtheit,
aber die meisten wissen aus Unkenntnis daraus keinen
Nutzen zu ziehen.“ Wer den ärztlichen Beruf ausübt und
erfahren hat, wie oft zufällige Umstände zur Diagnose führen,
wie vorteilhaft und zum Wohle des Patienten namentlich eine
verdeckte Suggestion wirkt, wird nicht vorschnell das
Vorgehen Galens als Scharlatanerie verdammen -- einen
abstoßenden Eindruck macht es aber für unser heutiges
Empfinden, daß der große Arzt sich gar zu viel auf diese Seite
seines Könnens zu gute tut, alles pomphaft aufbauscht und
mit ätzendem Spott seine weniger klugen und weniger
glücklichen Kollegen oft in unwürdigster Weise übergießt, ja
seine wissenschaftlichen Abhandlungen unter fortwährendem
Selbstlob geradezu pro domo schreibt. Freilich ist hierbei in
Anschlag zu bringen, daß die scharfen Aeußerungen Galens
mindestens teilweise sehr begründet waren und im Rahmen
der Zeit auch milder zu beurteilen sind, ferner, daß ihm keiner
der damaligen Aerzte an medizinischem Wissen und
vielseitiger Ausbildung gleichkam. Typisch ist schon die erste
Krankengeschichte, welche den berühmten Landsmann des
Pergameners, den Peripatetiker Eudemos betrifft, bei
welchem Galen das Aufhören einer Quartana genau auf den
Tag voraussagte; hier wird den römischen Aerzten nicht nur
Neid wegen der richtig gestellten Prognose, sondern
Gewinnsucht, Schurkerei und Bosheit vorgeworfen. In der
Darstellung eines anderen Falles, wo eine anfallsweise
auftretende Melancholie beseitigt wurde, werden die
angesehensten Kollegen als töricht, unwissend und frech
gescholten u. s. w. Ein Beispiel für die kluge Benützung von
zufälligen Umständen für die Diagnosenstellung bildet die
Untersuchung eines leberkranken sizilischen Arztes, wobei
Galen auf alles achtete, was im Krankenzimmer einen Schluß
auf die Art des Leidens zuließ, sich aber den Anschein gab, als
habe er alles aus dem Pulse erkannt. Mit dem gewissen
savoir-faire wußte er unter anderem auch an einem der
Söhne und an der Frau des Boethos eine „Wunderkur“ zu
vollziehen — die ihm nicht weniger als 400 Goldstücke (10000
Kronen) eintrug, und selbstgefällig erzählt er mehrere Fälle,
wo er scharfsinnig die psychische Ursache scheinbar schwerer
Erkrankungen erriet; sehr günstig für sein Renommee war in
dieser Hinsicht insbesondere die Behandlung einer
vornehmen Römerin, der Frau des Justus, bei welcher er die
Schlaflosigkeit auf unglückliche Liebe (zu dem Tänzer
Pylades) zurückführen konnte. Das Verhältnis zu den Kollegen
war unter solchen Umständen — die Schuld lag gewiß an
beiden Teilen — bald getrübt. Und charakteristischerweise
hält sich Galen in seiner Isolierung an die Laien. „Sie hätten
doch wenigstens gesunden Menschenverstand, der jenen
‚Sophistenʻ abgeht, während ihm die Aerzte, ‚jene
 Menschenklasseʻ, wegen seiner glänzenden Erfolge nur Haß
und Unverstand entgegenbrächten.“ Man kann sich vorstellen,
welchen Neid der Glückliche erregte, als zu seinen
öffentlichen Vorträgen über Physiologie, bei welchen auch
Vivisektionen an Böcken und Schweinen vorgenommen
wurden, die Leute von Rang und Bildung förmlich
hinströmten. Schon im ersten Jahre seines Aufenthalts in Rom
beschloß er bei Krankenbesuchen nur das Nötigste zu
sprechen und öffentlich nicht wieder aufzutreten, ja er
wünscht sich, angewidert von dem Treiben der Großstadt,
wieder in die Provinz zurück.
Mag man aber über den Charakter Galens, wie immer,
denken, d a s versöhnt doch mit allen seinen aus dem wenig
bescheidenen Zeitgeist erklärlichen Schwächen, daß der
gesuchte Praktiker inmitten des geräuschvollen Lebens die
Energie besaß, Werke zu schaffen, welche seinen dauernden
Nachruhm begründet haben. So schrieb er damals die ersten
sechs Bücher der „Lehrmeinungen des Hippokrates und
Platon“, das erste Buch „über den Nutzen der Körperteile“, die
Abhandlungen über die Knochen, über die Venen und
Arterien, über die Nerven. Manches andere aus der
literarischen Tätigkeit dieser Lebensepoche ist verloren
gegangen: zwei Bücher über anatomisches Präparieren, zwei
Bücher über die Ursachen des Atmens, vier Bücher über die
Stimme, sechs Bücher über die Anatomie des Hippokrates,
drei Bücher über die Anatomie des Erasistratos, zwei Bücher
über Vivisektionen, ein Buch über die Sektion toter Tiere, eine
Abhandlung über die Schädlichkeiten des Aderlasses.

Nach eigener Angabe von den Intrigen der Feinde

das Schlimmste befürchtend — es soll vorgekommen
sein, daß man den glücklichen Konkurrenten
meuchlings beiseite schaffte — verließ Galen die mit
so großer Erwartung betretene Hauptstadt nach
ungefähr 4jährigem Aufenthalt im Jahre 166 im
geheimen, ohne Abschied zu nehmen, wie ein
Flüchtling. Es bleibt immerhin merkwürdig, daß die
schleunige Abreise in einem Augenblick erfolgte, da
ihm durch das Eingreifen seiner mächtigen Gönner
der längst ersehnte Zutritt zum kaiserlichen Hofe
unmittelbar bevorstand — unter solchem Schutze
war doch nichts mehr zu befürchten —, und noch
eigentümlicher berührt es, daß Galen von Rom
gerade in jenem Augenblick fortzog, da sich mit
Riesenschritten jene Seuche näherte, welche wie ein
Strom des Unheils das Reich überschwemmte und in
seinen Grundfesten zum Wanken brachte — die
„Pest“. Es kann dem großen Arzte der Vorwurf nicht
erspart bleiben, daß er unter diesen Umständen an
seinem Platze hätte ausharren müssen, mochten
auch eingebildete oder wirkliche Gefahren drohen!
Die sogenannte „Pest“ des Antonin oder Galen wurde aus
Syrien durch die römischen Heere verschleppt und dehnte
sich allmählich über ganz Europa aus. In Rom brach sie im
Jahre 166 n. Chr. aus. Die außerordentliche Kontagiosität der
Seuche wird von allen zeitgenössischen Berichten
hervorgehoben. Es scheint sich um verschiedenartige
gleichzeitig auftretende Krankheitsprozesse gehandelt zu
haben; die Schilderungen weisen vorwiegend auf blattern-
und ruhrähnliche Affektionen hin, doch mangeln uns
zureichende Anhaltspunkte für die sichere Beurteilung. Die
„Pest“ begann 165 n. Chr., forderte unzählige Opfer und
 dauerte mindestens 15 Jahre fort. Galen gedenkt der Seuche
in mehreren seiner Schriften.

Die Rückreise in die Heimat zog sich lange hin, da

Galen in verschiedenen Gegenden zu
Studienzwecken kürzer oder länger verweilte. So
lernte er z. B. in Kampanien den ausgezeichneten
Luft- und Milchkurort Tabiae kennen, besuchte auf
Cypern das Kupferbergwerk, nahm aus den dortigen
Minen große Mengen heilkräftiger Erze mit und
sammelte in Palästina Gileadbalsam, am Toten Meere
Asphalt, in Phönizien einheimische und indische
Drogen. In Pergamos war ihm nur ein kurzer
Aufenthalt vergönnt, denn inzwischen durch ihre
Umgebung auf den großen Arzt aufmerksam
gemacht, beriefen ihn die beiden Kaiser Lucius Verus
und Marcus Aurelius Antoninus brieflich von Aquileia
aus, wo sie während der Vorbereitung zum
Markomannenkriege verweilten, zu sich. Galen kam
dem Befehle anscheinend nach einigem Zögern nach,
reiste über Lemnos durch Thrakien und Makedonien
und traf im Winter 168/9 in Aquileia ein. Der erneute
Ausbruch der „Pest“, welcher das Heer dezimierte,
nötigte die Kaiser, mit geringer Bedeckung nach Rom
zu flüchten, unterwegs erlag Verus der Seuche. Marc
Aurel forderte Galen, der ihm nach Rom gefolgt war,
auf, ihn auf dem Feldzug gegen die Markomannen zu
begleiten, doch (angeblich durch einen Traum, in
dem ihm Asklepios erschien, gewarnt) wußte es der
Pergamener durchzusetzen, daß der edle Herrscher
auf seine Begleitung verzichtete und ihn statt dessen
mit der ärztlichen Beaufsichtigung des jungen
Commodus betraute. Die Tätigkeit am Hofe nahm
jedenfalls so wenig Zeit in Anspruch, daß sich Galen
den wissenschaftlichen Arbeiten ungestört widmen
und im Zeitraum von 169-180 (Todesjahr des Marc
Aurel) die meisten seiner umfangreichen und
grundlegenden Schriften abfassen konnte.
Nach dem Tode des Leibarztes Demetrios, welcher
während des Markomannenkrieges starb, ernannte Marc Aurel
den Galen noch von der Donau her zu dessen Nachfolger;
hauptsächlich bestand seine Tätigkeit in der Bereitung des
beliebten Theriaks, von dem der Kaiser aus prophylaktischen
Gründen täglich zu nehmen pflegte (in einer seiner
Konstitution entsprechenden Zusammensetzung). Die
zahlreichen Ingredienzien des Wundermittels mußten in
vorzüglicher Qualität aus den verschiedensten Ländern
herbeigeschafft werden. Bald nach Rückkunft des Kaisers
(Ende 176) vollzog Galen an Marc Aurel eine Kur, auf welche
er sich viel zu gute tat. Er findet selbst seine Diagnose
„wirklich wunderbar“ und erzählt die Episode in seiner
gewöhnlichen, deklamatorischen und prahlerischen Weise.
Der Kaiser litt seit mehreren Tagen an einer akuten mit Fieber
und schmerzhaften Entleerungen einhergehenden Affektion,
welche die Leibärzte für einen fieberhaften Paroxysmus
hielten und mit Abführmitteln behandelt hatten. „Hierauf,“
berichtet Galen, „berief man mich ebenfalls im Palaste zu
übernachten; es kam jemand mich zu rufen, als eben die
Lampen angezündet waren, auf kaiserlichen Befehl. Drei
hatten ihn in der Frühe und um die 8. Stunde gesehen, zwei
ihm den Puls gefühlt, und allen schien es der Anfang eines
Anfalls zu sein. Ich aber stand schweigend; da blickte mich
der Kaiser an und fragte zuerst, warum ich ihm nicht wie die
anderen den Puls gefühlt hätte. Ich entgegnete: ‚Zwei taten
dies schon und haben wahrscheinlich schon während der
Reise mit dir die Eigentümlichkeit deines Pulses kennen
gelernt; deshalb, meine ich, erkennen sie besser den
gegenwärtigen Zustandʻ. Als ich dies gesagt, forderte er mich
auf, ihn zu fühlen, und da mir der Puls auch bei
Berücksichtigung des Alters und der Konstitution von dem
abzuweichen schien, der einen Fieberanfall bezeichnet,
erklärte ich, es sei keiner zu befürchten, sondern der Magen
werde von der eingenommenen Nahrung bedrückt, die von
der Ausscheidung verschleimt wäre. Diese Diagnose
veranlaßte sein Lob, und er sagte wörtlich dreimal
hintereinander: ‚Das ist's, gerade das ist's, was du sagtest; ich
fühle ja, daß mir die kältere Nahrung Beschwerde machtʻ.
Darauf fragte er, was zu tun sei. Ich antwortete ihm frei
heraus, wenn ein anderer der Patient wäre, so würde ich ihm
nach meiner Gewohnheit Wein mit Pfeffer gegeben haben.
‚Bei euch Herrschern aber pflegen die Aerzte die
unbedenklichsten Heilmittel zu gebrauchen; so genügt es
Wolle mit warmem Nardenbalsam getränkt auf den
Magenmund zu legen.ʻ Er sagte, auch sonst sei er gewöhnt,
wenn er einmal über den Magen zu klagen habe, warmen
Nardenbalsam auf Purpurwolle gestrichen aufzulegen, und
befahl dem Peitholaos dies zu tun und mich zu entlassen. Als
dieser ihn aufgelegt hatte, und seine Füße erwärmt worden
waren durch Massieren mit warmen Händen, forderte er
Sabinerwein, warf Pfeffer hinein und trank, und zu Peitholaos
sagte er nun nach dem Trinken, er hätte nun einen Arzt und
zwar einen sehr freimütigen, worauf er fortwährend über
 mich äußerte, von den Aerzten sei ich der erste und von den
Philosophen der einzige; er hatte es ja schon mit vielen
versucht, nicht allein geldgierigen, sondern auch ehr- und
ruhmsüchtigen, neidischen und bösartigen. Wie ich nun schon
erwähnte, glaube ich keine andere Untersuchung gemacht zu
haben, die bewundernswerter wäre als diese ...“

Unter den nachfolgenden Herrschern scheinen

seine Beziehungen zum Hofe loser gewesen zu sein,
doch rühmt sich Galen in einer unter Septimius
Severus abgefaßten Schrift, daß er bei allen Kaisern
der Reihe nach in hohem Ansehen gestanden habe.
Der Wissenschaft völlig hingegeben, bis ins Alter
rastlos schriftstellerisch tätig, schon von der Mitwelt
verehrt und für die Nachwelt schaffend, starb Galen
201 n. Chr. Wo er die letzten Lebensjahre zubrachte,
ob in Rom oder in Pergamos, ist unbekannt.
Das Schrifttum Galens ist ein beispiellos
umfangreiches und dabei zugleich
vielseitiges; es bezog sich nicht ausschließlich auf
die Medizin, sondern betraf nebstdem auch
Philosophie, Philologie und Rhetorik. Die
Ausarbeitung der Schriften ist eine ungleichmäßige,
indem nur an einen Teil die letzte Feile gelegt ist,
während andere bloß Entwürfe darstellen; manche
besitzen einen sehr bedeutenden Umfang, andere
sind bloß fragmentarische Abhandlungen; dem Inhalt
nach sind es teils Kommentare und Kompilationen,
teils Streitschriften und didaktische Werke; der Stil ist
zumeist deklamatorisch, weitschweifig und
stellenweise unklar. Da schon bei Lebzeiten Galens
Unterschiebungen vorkamen, so verfaßte er selbst
eine Uebersicht und eine Anleitung zum Studium
seiner Werke — beide sind erhalten und geben uns
die wichtigsten Anhaltspunkte, doch schrieb er
nachher noch mehrere Werke. Die chronologische
Reihenfolge konnte neuerdings annähernd bestimmt
werden, jedenfalls ist es deutlich erkennbar, daß
Galen in seinen medizinischen Schriften mit
anatomisch-physiologischen Themen begann und
später, in dem Maße als seine Erfahrung wuchs,
sukzessive von der Pathologie zur Therapie aufstieg.
Von den nichtmedizinischen sind nur ganz dürftige
Reste vorhanden, von den medizinischen ist eine
sehr beträchtliche Zahl verloren gegangen
(hauptsächlich bei einer Feuersbrunst, welche kurz
vor dem Tode des Commodus den Friedenstempel in
Asche legte und auch die ἀποθήκη, wo Galenos seine
Handschriften verwahrt hatte, zerstörte), vieles liegt
noch unediert (besonders in arabischen und
hebräischen Uebersetzungen) im Staube der
Bibliotheken, anderseits sind zahlreiche auf den
Namen des Pergameners lautende Abhandlungen
unecht oder mindestens zweifelhaft.
Von der schriftstellerischen Fruchtbarkeit des
Pergameners gebe folgendes Verzeichnis eine Vorstellung,
wiewohl es nur den größten Teil der a u f u n s
g e ko m m e n e n und zur Medizin in Beziehung stehenden
Werke und Abhandlungen aufführt. Die wichtigsten
Gesamtausgaben sind: die A l d i n a, Venet. 1525, die ed.
B a s i l e e n s i s, Basil. 1538 (beide griechisch); die ed.
J u n t i n a, Venet. 1541 (mit 9 Neuauflagen), die F ro b e n i a n a,
zuerst Basil. 1542 (beide lateinisch); die ed. C h a r t e r i a n a
mit lateinischer Uebersetzung herausgegeben von R. Chartier,
Paris 1638 bis 1679; endlich (die gewöhnlich benützte) von C.
G. K ü h n, Leipzig 1821-1833, 22 Bände.
Eine modernen Ansprüchen genügende Gesamtausgabe
fehlt. Mehrere Schriften vereinigt erschienen in der Bibl.
Teubner unter dem Titel Cl. G. scripta minora rec. Marquardt,
I. Müller, Helmreich, I Lips. 1884, II 1891, III 1893. Einen
noch heute brauchbaren Auszug aus den gesamten Schriften
machte Lacuna: Epitome operum Galeni, Basil. 1551 u. ö.
περὶ τῆς τάξεῶς των ἰδίων βιβλίων = de ordine librorum
suorum = von Ordnung der eigenen Schriften. Neueste
Ausgabe in Galeni Scripta minora ed. Iwan v. Müller,
Marquardt und Helmreich, Bibl. Teubner, Lips. II.
περὶ τῶν ἰδίων βιβλίων = de libris propiis = über die
eigenen Schriften. Neueste Ausgabe l. c.

Schriften deontologischen, medizin-

philosophischen und polemischen Inhalts:
 π. αἱρἐσεων τοῖς εἰσαγομένοις = de sectis ad eos, qui
introducuntur = über die Sekten, an Anfänger. Neueste
Ausgabe in Script. minor. III.
π. τῆς ἀρίοτης αιρέσεως = de optima secta = von der
besten Sekte.
π. τῆς ἀρίοτης διδασκαλίας = de optima doctrina = von
der besten Lehrmethode. Neueste kritische Ausgabe in Galeni
Scripta minora I.
ὁτι ὁ ᾰριστὁς ὶατρὸς καὶ φιλόσοφος = quod optimus
medicus sit quoque philosophus = der beste Arzt ist zugleich
Philosoph. Neueste Ausgabe in Galeni Scripta minora II.
προτρεπτικος λόγος ἐπὶ τὰς τέχνας = oratio suasoria ad
artes = Aufforderung zum Studium der freien Künste (der auf
die Medizin gerichtete Teil ist verloren gegangen). Neueste
Ausgabe. Scripta minora I. Georg Kaibel, Berl. 1894.
περὶ συστάσεως ὶατρικῆς = de constitutione artis medicae
= vom Wesen der ärztlichen Kunst.
ὁτι ταῖς τοῦ σώματος κράσεσιν αί τῆς ψυχῆς δυνάμεις
ἑπονται = quod animi mores corporis temperamenta
sequantur = der Charakter richtet sich nach den körperlichen
Temperamenten. Neueste Ausgabe in Scriptor. minor. II.
περὶ τῶν ἰδίων ἑκάστω παθῶν καὶ ἁμαρτηματων τῆς
διαγνώσεως = de propriorum animi cujusque affectuum et
vitiorum diagnosi et curatione = Erkenntnis und Heilung der
jedem einzelnen eigentümlichen Leidenschaften und Fehler.
Neueste kritische Ausgabe in Galeni Scripta minora I.
πρὸς τα ὑπὸ Ἰουλιανοῦ ἀντειρημένα τοῖς Ἱπποκράτους
ἀφορισμοῖς = gegen die Widersprüche des Julianos wider die
Aphorismen des Hippokrates.
περὶ τῆς ὶατρικῆς ἐμπειριας = Dialog über die ärztliche
Erfahrung (gegen die Empiriker gerichtet). 1901 wurde der
zufällig aufgefundene Originaltext (Fragment) in den Sitzgber.
d. phil.-histor. Klasse der kgl. preuß. Akad. d. Wissensch.
veröffentlicht, während früher nur eine lateinische
Uebersetzung bekannt war.
ὑποτυπώσεις ἐμπείρικαί = de subfiguratione empirica =
von der Vorstellungsweise der Empiriker (nur in lateinischer
Uebersetzung erhalten). Bonnet, Diss., Bonn 1872.
De iis, quae medice scripta sunt in Platonis Timaeo = von
dem, was ärztlichen Inhaltes in Platons Timäos vorkommt.
Kommentarstücke, Daremberg, Fragments du commentaire
de Galien etc. Paris u. Leipz. 1848.
Von den philosophischen Schriften engeren Sinnes
kommen unter anderen auch für die medizinische Logik in
Betracht:
εἰσαγωγὴ διαλεκτική = Institutio logica = Einführung in
die Logik. Von Kalbfleisch herausgegeben, Leipz. 1896. Bibl.
Teubner.
περὶ ἀποδείξεως (nur in unbedeutenden Bruchstücken
und Zitaten erhalten) = de demonstratione = vom
wissenschaftlichen Beweis, Iwan v. Müller, über Galens Werk
v. w. Bew. München 1895.
π. τῶν ἑαυτῷ δοκούντων = eigene Lehrmeinungen (nur
in Fragmenten vorhanden); die erhaltene lateinische
Uebersetzung de sententiis wird ediert werden.
π. τῶν παρὰ τὴν λὲξιν σοφισμάτων = de captionibus
penes dictionem libellus. Ausgabe C. Gabler, Rostock 1903
(Dissert.).
ὁτι αἱ ποιότητες ἀσώματοι = quod qualitates incorporeae
sint = die Qualitäten sind unkörperlich (gegen die Stoiker
gerichtet).

Auf Hippokrates beziehen sich:

 Ἱπποκράτους γλωσσῶν ὲξήγη̈σις = Glossar zu
Hippokrates, und fünfzehn Kommentare zu den
hippokratischen Schriften: de fracturis, de articulis, aphorismi,
prognosticum, prorrhetica, de crisibus, de diebus criticis, de
victu in acutis, de victu salubri, de humoribus, de officina
medici, de aere aq. et loc. de natura hominis, de alimentis,
epidemiorum libri (zum Teil nur lateinisch und lückenhaft
erhalten).

Zur Anatomie und Physiologie.

περὶ χρείας τῶν ἐν ἀνθρώπου σώματι μορίων XVII = d e

u s u p a r t i u m c o r p o r i s h u m a n i l i b r i XVII = über den
Nutzen der Körperteile. Deutsche Uebersetzung von Nöldeke,
Oldenburg 1805, 1 Band; neueste kritische Ausgabe des 4.
Buches, griechisch von Helmreich, Augsburg 1886.
π. τῶν ἀνατομικῶν ἐγχειρήσεων XV = de anatomicis
administrationibus libri XV = über anatomisches Präparieren.
Griechisch sind nur die ersten 9 Bücher ganz erhalten, 10-15
sind in arabischer Uebersetzung vorhanden.
π. τῶν Ἱπποκράτους καὶ Πλάτωνος δογμάτων IX = de
Hippocratis et Platonis placitis libri IX = Lehrmeinungen des
Hippokrates und Platon (ed. Iwan v. Müller, I, Lips. 1874).
π. μήτρας ἀνατομῆς = de uteri dissectione =
Uterusanatomie.
π. μελαίνης χολῆς = de atra bile = die schwarze Galle
(vielleicht nicht echt).
π. φωνῆς IV = de voce et anhelitu (nur lateinisch
erhalten; der lat. Text ist wahrscheinlich nach einer
arabischen Uebertragung verfertigt worden).
π. τῶν ὸστων τοῖς εἰσαγομένοις = de ossibus ad tirones
= von den Knochen, für die Anfänger.
 π. φλεβῶν καὶ ἀρτηριῶν ἀνατομῆς = de venarum
arteriarumque dissectione = Anatomie der Blut- und
Schlagadern.
π. νεύρων ἀνατομῆς = de nervorum dissectione =
Nervenanatomie.
π. μυῶν κινήσεως II = de motu musculorum libri II =
Muskelbewegung.
π. τῶν τῆς ἀναπνοῆς αἰτιῶν = de causis respirationis =
von den Ursachen des Atmens.
π. τῶν καθʹ Ἱπποκρἀτην στοιχείων = de elementis
secundum Hippocratem = über die Elemente n. H. Neueste
kritische Ausgabe de elementis ex Hippocratis sententia libri
duo von Helmreich, Erlangen 1878.
π. κράσεων III = de temperamentis libri III = die
Mischungsverhältnisse. Neueste kritische Ausgabe von
Helmreich, Leipz. 1904.
π. φυσικῶν δυνάμεων III = de facultatibus naturalibus
libri III = natürliche Kräfte (Physiologie). Neueste Ausgabe,
G. Scripta minor III.
π. οὐσιας τῶν φυσικῶν δυνάμεων = de substantia
naturalium facultatum = vom Wesen der natürlichen Kräfte
(Fragment).
π. σπέρματος II = de semine libri II = über den Samen.
π. ὀσφρήσεως ὀργάνου = de instrumento odoratus =
Geruchsorgan.
π. μυῶν ἀνατομῆς = de musculorum dissectione =
Muskelanatomie.
π. χρείας ἀναπνοῆς = de usu respirationis = über den
Zweck der Atmung.
εἰ κατὰ φύσιν εν ἀρτηρίαις αἶμα περὶέρχεται = an in
arteriis natura sanguis contineatur = ob im natürlichen
Zustande Blut in den Arterien enthalten sei.
περὶ κυουμένων διαπλάσεως = de foetus formatione =
über die Bildung der Leibesfrucht.
π. έπταμήνων βρεφῶν = de septimestri partu = das
Siebenmonatskind.
An omnes partes animalis quod procreatur fiant simul =
ob alle Teile des Tieres bei der Erzeugung zugleich entstehen
(zweifelhafte Schrift, nur lateinisch veröffentlicht).

Zur Hygiene.

ὑγιεινά VI = de sanitate tuenda libri VI = von der

Erhaltung der Gesundheit.
περὶ ἀρίστης κατασκευῆς τοῦ σώματος ἡμῶν = de optima
corporis nostri constitutione = die beste Konstitution unseres
Körpers.
π. εὺεξίας = de bono habitu = Wohlbefinden.
π. ἐθῶν = de consuetudine = Gewohnheiten. Neueste
kritische Ausgabe in Scripta minora II.
πότερον ἰατρικῆς ῆ γυμναστικῆς ἐστι τὸ ὑγιεινόν = utrum
medicinae sit an gymnastices hygieine = ob die Lehre von der
Erhaltung der Gesundheit zur Medizin oder zur Gymnastik
gehöre. Neueste kritische Ausgabe, in Scripta minora III.
π. τοῦ διὰ τῆς σμικρᾶς σφαἰρας γυμνασίου = de parvae
pilae exercitio = von dem Spiel mit dem kleinen Ball. Neueste
Ausgabe, in Scripta minora I.

Pulslehre.