Scribd
Upload
158 views25 pages

Penentuan Protein Menurut Kingsley / Metoda Biuret

This document describes the Kingsley method for determining serum protein levels using the Biuret reaction. It involves adding sodium sulfate to precipitate fibrinogen and globulins from serum samples. The samples and protein standards are then reacted with Biuret reagent, which produces a purple color in the presence of two or more peptide bonds. The absorbance is measured and used to calculate the total protein, albumin, and globulin levels based on a calibration curve of the protein standards. Dietyl ether is also added to remove lipids that could interfere with the color reaction. The document further explains the Biuret reaction and provides normal reference ranges.

Uploaded by

Daniel Victor
Copyright
© © All Rights Reserved
We take content rights seriously. If you suspect this is your content, claim it here.
Available Formats
Download as PPT, PDF, TXT or read online on Scribd
158 views25 pages

Penentuan Protein Menurut Kingsley / Metoda Biuret

This document describes the Kingsley method for determining serum protein levels using the Biuret reaction. It involves adding sodium sulfate to precipitate fibrinogen and globulins from serum samples. The samples and protein standards are then reacted with Biuret reagent, which produces a purple color in the presence of two or more peptide bonds. The absorbance is measured and used to calculate the total protein, albumin, and globulin levels based on a calibration curve of the protein standards. Dietyl ether is also added to remove lipids that could interfere with the color reaction. The document further explains the Biuret reaction and provides normal reference ranges.

Uploaded by

Daniel Victor
Copyright
© © All Rights Reserved
We take content rights seriously. If you suspect this is your content, claim it here.
Available Formats
Download as PPT, PDF, TXT or read online on Scribd
You are on page 1/ 25

PENENTUAN PROTEIN SERUM

MENURUT KINGSLEY / METODA


BIURET
7,5 ml Na2SO4 23 % / ½ jenuh
0,5 ml serum
vortex 5 detik ( cam-
pur pelan-pelan )
SISA
Ambil 2 ml
+
2
3 ml dietil eter
TP 1 2 campur , kocok kuat-
kuat , sekali-sekali
tutup dibuka kemudian
pusingkan 10 menit
3
7,5 ml H2O + 0,5 ml
Standard
1
1
5 3 Ambil 2 ml
4
S Ambil 2 ml A
B : Ambil 2 ml H2O 6
TP =TOTAL PROTEIN + 4 ml
A =ALBUMIN Reagen
S = STANDARD Biuret
B = BLANKO
Campur, tunggu 10 menit

Spektrofotometer : λ 560 nm

TP = ......... g/dl A = ............ g/dl


G = T P – A g/dl
Perhitungan

Bila H2O = 0
R TP – R B RA–RB
TP = X C S g/dl A= X C S g/dl
RS – R B Rs – R B
G = T P – A g/dl B = 2 ml H20 + 4 ml R. Biuret

Bila R B = 0
TP = R TP X C S g/dl A = RA X C S g/dl
RS RS
CS/RS = 15,4

TP = R TP X 15,4 g/dl A = R A X 15,4 g/dl


G = T P – A g/dl
1. Jelaskan prinsip penentuan prakti-
kum hari ini !

2. Jelaskan mengapa pada penentuan


protein ini digunakan serum bukan-
nya plasma darah ataupun “ whole
blood “ !

3. Dasar separasi protein praktikum ini


adalah “ salting out “ . Jelaskan
maksudnya !.
HARGA NORMAL
Total protein ( TP ) = 5 – 8 g/dl ( g% )

Albumin = 3,5 – 5,5 g/dl

Globulin = 1,5 – 3 g/dl


REAGEN BIURET :
CuSO4 & NaOH / KOH
OH UREA
CO - H2N – Cu – NH2CO NH2
NH HN C=O
CO - H2N-K K-NH2-CO NH2
OH OH
Terbentuk : Kupri potasium Biuret atau Biuret Potasium Kuprihidroksida
CO-NH2 Disebut Biuret karena reaksi ini positif untuk biuret atau biurea, tapi
ternyata reaksi ini positif juga bila terdapat 2 atau lebih ikatan peptida
N
dan 2 atau lebih gugus karbamil .
CO-NH2
2 gugus 2 ikatan peptida
karbamil
R1 R2 R3
NH2 C CONH C CONH C COOH 3 asam amino
H H H
REAKSI BIURET : POSITIF
NH2 UREA
1. Biurea C = O, S,NH,H2 NH2
NH C = O
C =O NH2
NH2
2. Bikarbamil CONH2 , S, NH, H2 KARBAMIL
N CONH2
CONH2

3. 2 ikatan peptida R1 R2 R3
= tripeptida NH2 C CONH C CONH C COOH
= 3 asam amino H H H
1 2 3
Reagen Biuret positif dengan
adanya minimal 2 ikatan peptida
R1 R2 R3
NH2 C CONH C CONH C COOH
H H H

DIPEPTIDA : 2 asam amino = 1 ikatan peptida


TRIPEPTIDA : 3 asam amino = 2 ikatan peptida
POLIPEPTIDA lebih besar daripada 10 asam amino
PROTEIN lebih besar dari 100 asam amino
whole blood
1. Sel darah: eritrosit, leukosit, trombosit
2. Plasma darah

Plasma darah
90% - air
10% - albumin, globulin, fibrinogen, enzim,
hormon, glukosa, asam amino, lipid,
vitamin, O2, CO2, elektrolit, urea ,
faktor2 pembekuan darah

SERUM DARAH :
tanpa fibrinogen dan faktor pembekuan
darah. Hanya ada albumin dan globulin
1. Penentuan kadar protein serum menurut KINGSLEY
berguna untuk :
1. mengetahui status gizi
2. membantu menegakkan diagnosis

2. A. Na2SO4 1/3 jenuh mengendapkan fibrinogen

B Na2SO4 1/2 jenuh


( Na2SO4 23 % ) mengendapkan
( NH4 )2 SO4 ½ jenuh fibrinogen dan globulin
Kalau hanya mengukur TP ( Protein Total )
tidak perlu menambahkan Na2SO4 23 %
( ½ jenuh )

C. Na2SO4 jenuh mengendapkan fibrinogen, globulin


dan albumin
BIRU
BIRU
3. PROTEIN + CuSO4 + BASA UNGU /
NaOH / KOH VIOLET

1 1. dietil eter , lipid dan Na2SO4 23 %


4. 2. globulin
3. albumin dan Na2SO4 23 %

5. Guna dietil eter :


1. menggumpalkan globulin
2. menghilangkan kekeruhan oleh karena lipid
REAGENS BIURET
1 . GIES : CuSO4 3% dan KOH 10%
CuSO4 peka terhadap autoreduksi

2. WEICHSELBAUM : K-NA tartrat ( stabilisator, Cu+2O tak


terbentuk )
CuSO4.5H2O , NaOH
KJ ( mencegah autoreduksi )

3. GORNAL, BARDAWILL, DAVID : K-Na tartrat, CuSO4 dan


NaOH 10%

4. WELKER : CuSO4 1% dan NaOH 40%


PENURUNAN KADAR ALBUMIN
PLASMA ( HIPOALBUMINEMIA )

1. KEHILANGAN ALBUMIN : Kebocoran albumin di ginjal pada


penyakit nefritis, sindroma nefrotik.
2. PASOKAN PROTEIN YANG INADEKUAT : T.B.C, keganasan,
gangguan pencernaan protein, gangguan penyerapan asam amino,
penurunan intake protein.
3. GANGGUAN SINTESIS : sirosis hati
4. KATABOLISME PROTEIN MENINGKAT : Diabetes mellitus yang
berat, tirotoksikosis
5. HAMIL DAN LAKTASI
6. PENGENCERAN PLASMA / KEHILANGAN PROTEIN : sesudah
perdarahan hebat, dehidrasi berat, luka bakar hebat
7. KELAINAN GENETIK
SEPARASI PROTEIN
1. FRAKSINASI : Garam ( salt ) dan Pelarut ( solvent )
Salting out : Presipitasi protein oleh Na2SO4 / ( NH4)2SO4
Tiap protein berbeda sifat pengendapannya
2. ELEKTROFORESIS : Pergerakan molekul di medan listrik. Adanya
perbedaan kecepatan migrasi partikel bermuatan pada medan listrik
Kecepatan migrasi tergantung pada : muatan, ukuran dan bentuk
molekul yang terlibat .
3. ULTRACENTRIFUGE : Variasi masa dan bentuk molekul .
Protein dengan BM besar akan mengendap paling cepat
4. KROMATOGRAFI : Perbedaan pola pergerakan antara fase gerak
dan fase diam untuk memisahkan komponen (berupa molekul) yang
berada pada larutan. Molekul yang terlarut dalam fase gerak, akan
melewati kolom /kertas yang merupakan fase diam . Adanya
perbedaan ukuran, bentuk, muatan molekul dan kelarutan
partikel : kecepatan pergerakan akan berbeda .
5. ANALISIS IMMUNOKIMIA : Penentuan immunologi yang didasari pada
pengikatan dengan spesifisitas tinggi antara antigen dan antibodi
a

sample application

Paper electrophoresis
fibrinogen

prealbumin
NORMAL
Chronic liver disease
Beta–gamma bridge

Nephrotic
syndrome
Paper chromatography
STOOL
CHROMATOGRAPHY

Karbohidrat Laktosa Feses


ENZYME IMMUNO ASSAY( E.I.A )
Ag-E + Ab AgE-Ab AgE bebas + S
Ag + Ab AgAb WARNA

Absorbance

Standard / Ag
RADIO IMMUNO ASSAY

Ag* + Ab Ag* E
( * label radioaktif )

S / Ag + Ab S / Ag Ab

Ab : TERBATAS
S : STANDARD
Ag : SAMPEL
Absorbance R.I.A
CALIBRATION CURVE

Standard / Ag

You might also like